导读:本文包含了蛋白质克隆论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:蛋白质电泳,单克隆蛋白,报告标准化
蛋白质克隆论文文献综述
罗霞,陆捷,邓玲艳,程黎明[1]（2019）在《关于蛋白质电泳中单克隆蛋白定量及报告标准化的建议解读》一文中研究指出国际临床化学与检验医学联合会(International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine,IFCC)、美国病理家学会(the College of American Pathologists,CAP)和澳大利亚皇家病理学院质量保证计划(the Royal College of Pathologists of Australasia Quality Assurance Programs,RCPAQAP)的调查结果显示,实验室关于蛋白质电泳中单克隆蛋白定量和报告标准化势在必行。该文介绍了加拿大单克隆丙种球蛋白病工作组(Monoclonal Gammopathy Working Group,MGWG)和澳大利亚-新西兰蛋白质电泳报告标准化工作组关于单克隆蛋白术语、电泳检测技术、单克隆蛋白分离及定量中存在的若干问题、蛋白质电泳中存在的干扰以及报告标准化的建议,呼吁国内同行重视蛋白质电泳报告的标准化问题,提高蛋白质电泳报告质量,降低临床差错风险。(本文来源于《临床检验杂志》期刊2019年10期）
陈官菊,柴一秋,厉晓腊,方鸣,刘又高[2]（2019）在《蝉拟青霉类枯草杆菌蛋白酶基因的克隆及其序列和蛋白质分析》一文中研究指出蝉拟青霉是一种常见的昆虫病原真菌,被广泛应用于生物防治。本研究根据GenBank中已登录的淡紫拟青霉、粉拟青霉、球孢白僵菌和金龟子绿僵菌的类枯草杆菌蛋白酶基因序列的同源性比较,以它们高度保守的核苷酸序列设计一对引物,采用RT-PCR和3′/5′-RACE相结合的方法,从蝉拟青霉中克隆出完整的类枯草杆菌蛋白酶(subtilisin-like protease)cDNA基因序列。cDNA全序列为2 031 bp,该序列5′-端和3′-端的非编码序列长度分别为170 bp和262 bp,开放阅读框为1 599 bp,编码532个氨基酸,信号肽长度为18个氨基酸,前肽长度为133个氨基酸。该基因编码的蛋白序列与虫草棒束孢(Isaria farinosa)、球孢白僵菌(Beauveria bassiana)、蛹虫草(Cordyceps militaris)和哈茨木霉(Trichoderma harzianum)类枯草杆菌蛋白酶有较高的同源性,同源性分别为88%、88%、89%和71%。成熟蛋白具有典型的丝氨酸蛋白酶活性位点,同时有5个半胱氨酸,4个潜在的N-糖基化位点,位于细胞的液泡中与分泌途径相关,二级结构中以α-螺旋和无规则卷曲为主。(本文来源于《浙江农业学报》期刊2019年10期）
田敏,曲瑞丹,刘英杰,陈浩喆,林青楠[3]（2019）在《蛋白质谷氨酰胺酶成熟肽基因mpg原核表达及其多克隆抗体的制备》一文中研究指出蛋白质谷氨酰胺酶(Protein-glutaminase,简称PG)是一种新型蛋白质脱酰胺酶,在蛋白质改性领域具有广阔的应用前景。但是,目前关于蛋白质谷氨酰胺酶的测定方法主要是通过苯酚-次氯酸盐反应测定铵离子含量指示蛋白质谷氨酰胺酶的酶活,该方法精确度和灵敏度有限。因此,利用原核表达系统表达解朊金黄杆菌(Chryseobacterium proteolyticum)分泌的蛋白质谷氨酰胺酶成熟肽基因mpg,纯化后制备其多克隆抗体用于检测解朊金黄杆菌分泌的蛋白质谷氨酰胺酶的含量。首先以解朊金黄杆菌基因组为模板扩增出成熟肽基因mpg,将其与pET32a载体连接构建重组质粒pET32a-mpg,转化至大肠杆菌BL21(DE3)。在25℃条件下,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导6 h,目的蛋白表达量最高、呈可溶性蛋白。通过Ni-NTA柱纯化的重组蛋白mPG-His_6,将其作为抗原,免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。间接酶联免疫法检测其效价,所得抗体效价为1∶5 000。蛋白质免疫印迹实验结果说明,该多克隆抗体特异性良好。最后使用该多克隆抗体对解朊金黄杆菌的发酵上清液进行蛋白质免疫印迹反应,检测天然蛋白质谷氨酰胺酶,结果表明该抗体特异性良好,可用于检测解朊金黄杆菌分泌的蛋白质谷氨酰胺酶,为深入研究蛋白质谷氨酰胺酶的生物学功能、建立蛋白质谷氨酰胺酶高产菌株的高通量筛选方法奠定了基础。(本文来源于《工业微生物》期刊2019年05期）
刘国芳,刘晓志,高健,王志明[4]（2019）在《宿主细胞残留蛋白质对单克隆抗体药物质量影响及其质量控制》一文中研究指出以单克隆抗体药物(monoclonal antibodies,m Abs)为代表的生物制品药物销售在不断扩大,并呈现持续上升势头,m Abs的使用为疾病治疗提供了新策略。随着m Abs使用量增大,对产品质量提出了更高要求,随着宿主细胞表达m Abs水平的不断提高,宿主细胞蛋白(host cell proteins,HCP)含量也随之增加,上下游生产工艺面临不断挑战。HCP所含蛋白质异常复杂,虽然一些HCP可能会被降解,但残留HCP仍会引起药物临床使用中的不良反应,从而影响药物的安全性和有效性。酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunesorbent assays,ELISAs)是目前HCP检测的重要方法之一,ELISAs可以定量检测药物中总HCP含量,但存在局限性。对正在开发的包括LC-MS/MS在内的多种分析方法进行HCP检测,将为药物工艺过程开发和验证提供更多依据。讨论了以CHO(Chinese hamster ovary,中国仓鼠卵巢)细胞系为宿主的m Abs生产中,HCP的质量控制及检测分析方法的研究进展。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2019年10期）
[5]（2019）在《扬州大学严长杰团队 克隆了一个控制稻米蛋白质含量的关键基因》一文中研究指出近十几年来,稻米品质已成为一个十分重要的育种目标。蛋白质作为稻米胚乳的第二大组成部分,其含量的高低不仅决定了稻米的营养品质,而且也是影响稻米蒸煮食用品质的重要因素。因此,解析稻米蛋白质含量的遗传机理对有效调控稻米品质具有很大的促进作用。近日,Nature Communications杂志在线发表了扬州大学农学院严长杰教授研究团队题为Natural(本文来源于《湖北农业科学》期刊2019年09期）
张小丹,牛熙,许瑶,阮亦麒,李大鹏[6]（2019）在《猪蛋白质二硫化物异构酶A4基因克隆及密码子偏好性分析》一文中研究指出试验旨在研究猪蛋白质二硫化物异构酶(protein disulfide isomerase A4,PDIA4)基因的密码子使用特性及其与其他物种密码子使用的差异。试验以香猪子宫组织为试验材料,采用RT-PCR方法扩增获得猪PDIA4基因,参考从NCBI数据库中下载的18个不同物种PDIA4基因序列,对猪PDIA4基因的密码子使用特性及其与其他物种密码子的使用差异和进化关系进行分析,同时对猪PDIA4基因与4个模式生物密码子使用偏性进行比较。结果表明,猪PDIA4基因编码区长1 941 bp,共编码646个氨基酸。与NCBI数据库公布的野猪PDIA4基因(GenBank登录号:NM_001267834.1)的相似性达99%。猪PDIA4基因偏好使用G/C结尾的密码子,27种密码子为猪PDIA4基因的偏好密码子(RSCU>1),其中使用频率最高的前3个密码子分别为CTG(RSCU=3.69)、GCC(RSCU=2.31)和CGC(RSCU=2.29)。比较19个物种PDIA4基因发现,不同物种间PDIA4基因的有效密码子数(ENc)、密码子适应指数(CAI)、GC含量以及T、C、A、G、G+C在密码子第3位含量(T3s、C3s、A3s、G3s、GC3s)均存在差异,且密码子偏好以G/C结尾;聚类分析发现,基于CDS序列的系统进化树更符合19个物种的真实分类系统。在密码子使用频率上,猪PDIA4基因与小鼠基因组间密码子使用偏好程度更为接近,故小鼠更适合作为猪PDIA4基因的遗传转化和异源表达的受体系统。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2019年04期）
米超,赵艳宁,刘自刚,孙万仓,邹娅[7]（2019）在《白菜型冬油菜响应干旱胁迫差异蛋白质组学和HSC70-1基因克隆及表达分析》一文中研究指出为探索白菜型冬油菜抗旱机理,采用双向电泳结合液相色谱-质谱技术分析抗旱冬油菜品系DR-5差异蛋白质组变化,克隆其差异蛋白热激同源蛋白70(heat shock cognate protein 70)基因HSC70-1,研究干旱胁迫对白菜型冬油菜HSC70-1表达的影响。质谱鉴定出23个差异蛋白质,分别参与刺激响应(5)、糖/能量代谢(6)、脂代谢(2)、信号转导(1)、氨基酸/蛋白质代谢(2)、核酸代谢(1)、细胞骨架(1)、光合作用(2)、伴侣蛋白(3)。同源克隆得到1 911bp的HSC70-1基因完整开放阅读框,编码637个氨基酸残基。所编码的蛋白HSC70是稳定的疏水性蛋白质,含有HSP蛋白家族特有的核酸结合功能区及底物结合功能区,有5个活性口袋,氨基酸序列与白菜型油菜(Brassica rapa)HSC70氨基酸序列相似度达98%。实时荧光定量和半定量分析HSC70-1基因干旱胁迫下表达,发现HSC70-1在叶片中上调表达。本研究结果为冬油菜抗旱育种提供了理论基础。(本文来源于《中国油料作物学报》期刊2019年02期）
王淑燕,张霞,霍金龙,王配,霍海龙[8]（2018）在《版纳微型猪近交系PPP2CA克隆、表达及蛋白质功能生物信息学分析》一文中研究指出蛋白磷酸酶2A(protein phosphatases of the type 2A, PP2A)是一种广泛表达的丝氨酸/苏氨酸磷酸酶,介导蛋白质的去磷酸化从而调控多种关键信号通路的活性。该酶由催化亚基、结构亚基、调节亚基形成异源叁聚体复合物发挥作用。本研究借助GenBank中猪(Sus scrofa)及其他物种的蛋白磷酸酶2A催化亚基α(protein phosphatase 2A catalytic subunitα, PPP2CA) mRNA序列,设计特异引物扩增版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line, BMI)PPP2CA基因编码区序列,并对其进行表达和功能特性分析。应用qRT-PCR分析组织mRNA表达谱,并对编码的蛋白质序列进行生物信息学分析。扩增得到了BMI PPP2CA 930 bp (GenBank No. KU705627)的完整CDS序列,共编码309个氨基酸。与其他组织相比PPP2CA基因在尿道球腺和精囊腺中极显着高表达(P<0.01),在睾丸中表达量也相对较高,在肝、结肠、脾、肺、十二指肠、前列腺、肾、附睾及脑中中度表达;在胃、心、肌肉中表达水平极显着低于其他组织。PPP2CA蛋白质功能预测表明其存在1个保守结构域MPP_PP2A_PP4_PP6,存在4类功能活性位点,无跨膜螺旋结构,无信号肽序列,N末端和C末端均亲水,位于细胞质的概率是94.1%。二级结构预测表明该蛋白α-螺旋含量最高,是组成N端的主要结构,C端有一段无规则卷曲,多物种氨基酸序列比对结果显示,PPP2CA序列在不同物种间相似度很高,推测其在进化中高度保守,为深入研究PPP2CA基因在猪精子获能方面作用机制提供了资料基础。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2018年10期）
郭晓改[9]（2018）在《弓形虫假定TCP-1蛋白质的克隆表达及功能的初步研究》一文中研究指出背景:刚地弓形虫简称弓形虫(Toxoplasma gondii,T.gondii),是一种只寄生在有细胞核的细胞内,在世界各地均有发现的人兽共患寄生原虫。弓形虫能够感染几乎所有的恒温脊椎动物,包括人在内,人和动物被感染后可引起弓形虫病。该病不仅给畜牧业造成严重的经济损失,也给人类健康带来潜在的威胁。目前尚无特效疫苗和药物来预防或治疗该病。目的:本课题通过对弓形虫与唾液酸受体结合的全蛋白质组的初步分析,选取唾液酸结合蛋白质假定TCP-1进行后续研究。关于弓形虫假定TCP-1蛋白质的研究目前尚未见有任何报道。本研究对其是否与唾液酸结合进行了体外验证,从而探究弓形虫依赖唾液酸途径侵入宿主细胞的机理,为研制新的抗弓形虫药物提供新的方向。方法:纯化弓形虫RH株速殖子,Biozol法提取总RNA,反转录成cDNA后进行PCR扩增。回收目的片段,回收产物克隆至T载体中,转化至大肠杆菌感受态,提取质粒测序,测得的序列进行生物信息学分析。构建原核表达载体表达蛋白质,利用亲和层析法纯化重组蛋白质,SDS-PAGE和Western-blot验证纯化的重组蛋白质。HIS-TCP-1蛋白质与弗氏佐剂乳化,免疫SD大鼠和家兔制备多抗。利用多抗进行亚细胞定位及体外抑虫实验,并运用纯化的GST-TCP-1蛋白质进行功能分析。结果:RNA提取结果良好,成功扩增出TGME49_318410基因全长序列,生物信息学分析该蛋白质无信号肽和跨膜区,比较保守,抗原性较强。成功构建出原核表达载体(pGEX-4T-1-TCP-1和pET28a-TCP-1),小量诱导表达后经过SDS-PAGE发现蛋白质在上清中表达。成功纯化出两种不同标签重组蛋白质(HIS-TCP-1和GST-TCP-1),经SDS-PAGE和Western-lot验证蛋白质大小与预测大小一致,且比较纯净基本无其它杂蛋白。四次免疫实验动物后,ELISA方法检测抗体效价滴度达1:16,000。间接免疫荧光实验发现蛋白质主要分布在虫体胞浆内。该蛋白质与唾液酸结合,并且能够黏附到小鼠树突状细胞表面。不同浓度的抗体IgG均能够抑制虫体入侵宿主细胞。结论:假定TCP-1蛋白质抗原性强,主要定位虫体的胞浆内,能够与唾液酸结合,与小鼠DC细胞黏附,体外抑虫实验表明抗体能够阻断虫体入侵宿主细胞。(本文来源于《沈阳农业大学》期刊2018-06-01）
刘少伟,姜欢,王晓龙,李梦红,陈玉[10]（2018）在《兔抗破骨细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶多克隆抗体的制备和应用》一文中研究指出目的:采用已构建的pET28a-ΔPTP-oc重组质粒纯化重组蛋白,制备兔抗破骨细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶(PTP-oc)多克隆抗体并鉴定其性能。方法:将构建的pET28a-ΔPTP-oc重组质粒转化至BL21(DE3)中,应用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达。表达产物经过Q柱阴阳离子交换和Ni柱亲和层析获得纯化的PTP-oc重组蛋白,将纯化的重组蛋白作为抗原免疫家兔,获得PTP-oc多克隆抗体。采用间接ELISA法检测抗体效价,Western blotting法检测抗体的特异性。结果:成功纯化出PTP-oc重组蛋白。间接ELISA法检测,采用纯化诱导后的重组蛋白免疫家兔获得了兔抗PTP-oc多克隆抗体,多克隆抗体效价达1∶32 000以上,Western blotting法检测,所得多克隆抗体有较高的特异性。结论:成功纯化了PTP-oc重组蛋白,制备出PTP-oc多克隆抗体。(本文来源于《吉林大学学报(医学版)》期刊2018年03期）
蛋白质克隆论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
蝉拟青霉是一种常见的昆虫病原真菌,被广泛应用于生物防治。本研究根据GenBank中已登录的淡紫拟青霉、粉拟青霉、球孢白僵菌和金龟子绿僵菌的类枯草杆菌蛋白酶基因序列的同源性比较,以它们高度保守的核苷酸序列设计一对引物,采用RT-PCR和3′/5′-RACE相结合的方法,从蝉拟青霉中克隆出完整的类枯草杆菌蛋白酶(subtilisin-like protease)cDNA基因序列。cDNA全序列为2 031 bp,该序列5′-端和3′-端的非编码序列长度分别为170 bp和262 bp,开放阅读框为1 599 bp,编码532个氨基酸,信号肽长度为18个氨基酸,前肽长度为133个氨基酸。该基因编码的蛋白序列与虫草棒束孢(Isaria farinosa)、球孢白僵菌(Beauveria bassiana)、蛹虫草(Cordyceps militaris)和哈茨木霉(Trichoderma harzianum)类枯草杆菌蛋白酶有较高的同源性,同源性分别为88%、88%、89%和71%。成熟蛋白具有典型的丝氨酸蛋白酶活性位点,同时有5个半胱氨酸,4个潜在的N-糖基化位点,位于细胞的液泡中与分泌途径相关,二级结构中以α-螺旋和无规则卷曲为主。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
蛋白质克隆论文参考文献
[1].罗霞,陆捷,邓玲艳,程黎明.关于蛋白质电泳中单克隆蛋白定量及报告标准化的建议解读[J].临床检验杂志.2019
[2].陈官菊,柴一秋,厉晓腊,方鸣,刘又高.蝉拟青霉类枯草杆菌蛋白酶基因的克隆及其序列和蛋白质分析[J].浙江农业学报.2019
[3].田敏,曲瑞丹,刘英杰,陈浩喆,林青楠.蛋白质谷氨酰胺酶成熟肽基因mpg原核表达及其多克隆抗体的制备[J].工业微生物.2019
[4].刘国芳,刘晓志,高健,王志明.宿主细胞残留蛋白质对单克隆抗体药物质量影响及其质量控制[J].中国生物工程杂志.2019
[5]..扬州大学严长杰团队克隆了一个控制稻米蛋白质含量的关键基因[J].湖北农业科学.2019
[6].张小丹,牛熙,许瑶,阮亦麒,李大鹏.猪蛋白质二硫化物异构酶A4基因克隆及密码子偏好性分析[J].中国畜牧兽医.2019
[7].米超,赵艳宁,刘自刚,孙万仓,邹娅.白菜型冬油菜响应干旱胁迫差异蛋白质组学和HSC70-1基因克隆及表达分析[J].中国油料作物学报.2019
[8].王淑燕,张霞,霍金龙,王配,霍海龙.版纳微型猪近交系PPP2CA克隆、表达及蛋白质功能生物信息学分析[J].农业生物技术学报.2018
[9].郭晓改.弓形虫假定TCP-1蛋白质的克隆表达及功能的初步研究[D].沈阳农业大学.2018
[10].刘少伟,姜欢,王晓龙,李梦红,陈玉.兔抗破骨细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶多克隆抗体的制备和应用[J].吉林大学学报(医学版).2018