导读:本文包含了水解脱氯论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:百菌清水解脱氯酶(Chd),遗传稳定表达,液态发酵,固态发酵
水解脱氯论文文献综述
罗燕飞[1]（2017）在《稳定表达百菌清水解脱氯酶的制备及其在解除百菌清抑制生物质转化中的应用》一文中研究指出百菌清(又名四氯间苯二腈)是一种非内吸性广谱氯代苯腈类杀菌剂,由于其对农作物的真菌病害具有广谱性,现已成为世界上使用量最大的杀真菌剂之一。2016最新数据显示,我国百菌清产量达8000吨。百菌清是一种有毒的有机气农药,在自然环境中理化性质稳定,并且具有明显的蓄积性,其在土壤、水体及作物中的残留会导致农田土壤、农产品的污染和抑制生物质转化等问题,对生态环境、人类健康和食品安全造成影响。因此,受污染环境的修复及残留的消除逐渐引起人们的重视。本实验室前期分离到一株高效降解百菌清菌株Pseudomonassp.CTN-3并从中获得了百菌清水解脱气酶(Chd),其能够在没有任何辅因子的条件下,直接将百菌清水解为毒性低、水溶性大的产物羟基百菌清,为百菌清污染的修复提供良好的材料。因此,本论文对其展开研究:(1)利用同源重组方法将chd基因整合到枯草芽孢杆菌BacillussubtilisWB800染色体上,代替其原有的淀粉酶基因,在含壮观霉素(Spc)的百菌清平板上挑转化子WB800-chd,成功实现chd基因在枯草芽孢杆菌WB800中稳定的胞外分泌表达,解决了百菌清水解脱气酶(Chd)表达不稳定难题。(2)系统比较了ch 基因定位于质粒上的菌株WB800(pP43Chd)和染色体上的菌株WB800-chd的产酶发酵参数。由于枯草芽孢杆菌(Bacillussubtis)在30℃到37℃下都能生长,进行温度比较实验,发现菌株WB800-chd和WB800(pP43Chd)在37℃时比30℃时生物量增加了 13%。进一步在优化的最佳条件下,进行摇瓶发酵实验,分别获得菌株WB800(pP43Chd)和菌株WB800-chd的生长曲线、酶活曲线和稳定性数据。研究结果显示菌株WB800(pP43Chd)的最高酶活达到16.54U/L,而菌株WB800-chd的最高酶活为10.63U/L,相比较降低55%。但稳定性实验中菌株WB800-chd相对于菌株 WB800(pP43Chd)更稳定。(3)比较了菌株WB800-chd和WB800(pP43Chd)的发酵培养时间、残糖量、酶活和稳定性。菌株WB800(pP43Chd)在20h发酵周期内,葡萄糖含量利用了 96%,酶活最高达到22.30 U/L,稳定性从第一代的94%降至第六代的45%。而菌株WB800-chd发酵周期为27 h,发酵时间更长。葡萄糖含量由起始加入的50 g/L下降到0.04 g/L,利用了 99.8%;酶活最高达到13.00U/L,虽然相对酶活低,但稳定性从第一代的98%降到第六代的95%,相同条件比菌株WB800(pP43Chd)稳定性提高了 一倍。(4)研究酶制剂的保藏条件。结果显示超滤浓缩法保藏的酶制剂活性降低51%,直接冰箱保藏法和冷冻干燥保藏法分别降低了 70%和92%。因此,在两个月的保藏时间内,超滤浓缩法保藏效果最好,酶活比直接冰箱保藏法高43%,比冷冻干燥保藏法高出80%。(5)由于百菌清的残留不仅造成环境的污染也会导致生物质转化的效率降低,因此将发酵获得的百菌清水解脱氯酶Chd,用于解除百菌清对小麦秸秆酶解和固态发酵的影响。研究结果表明:当添加120 μng/mL的百菌清,对小麦秸秆纤维素酶和漆酶酶解的抑制最强,抑制率达到45%。添加60μ/g的Chd后,可显着消除百菌清的抑制作用,当百菌清浓度为120 μg/mL时抑制率下降到12%。同样,在固态发酵中,在百菌清浓度最高为50μg/mL时,抑制率达到35%,添加60μμl/g的Chd后抑制减小到8%。本研究制备的稳定表达的百菌清水解脱氯(Chd),能有效解除百菌清在生物质转化中的抑制效应,为百菌清污染环境的生物修复和生物质转化效率的提高提供有效途径。(本文来源于《南京农业大学》期刊2017-05-01）
孟超[2]（2015）在《百菌清水解脱氯酶（Chd）的枯草芽孢杆菌分泌表达、发酵优化及应用》一文中研究指出百菌清(四氯间苯二腈)是一种广谱氯代苯腈类杀菌剂,在农业生产中已使用30年之久,是世界上使用最广泛的杀真菌剂之一,在环境中较稳定、残效期长,且具有明显的蓄积毒性。百菌清的广泛使用及其难降解的特性使得其在温室大棚气体、蔬菜和水果中都可被检测到,其给人类健康和食品安全造成的严重威胁引起了广泛关注。百菌清污染的生物降解被认为是一种有效、安全可靠和无二次污染的方法,具有广泛应用前景。本实验室前期分离到一株高效降解百菌清的菌株Pseudomonas sp.CTN-3,其编码的新颖百菌清水解脱氯酶(Chd)无需其他辅因子就能将百菌清水解为毒性变小、水溶性变大的羟基百菌清。枯草芽孢杆菌由于其非致病性、分泌蛋白能力强和良好的发酵基础应用非常广泛,是一些重要工业酶制剂的生产菌株。本论文将利用含P43启动子功能片段和NprB基因信号肽编码序列,将chd基因整合到大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体PP43NMK中构建分泌表达载体pP43Chd,将其转化至枯草芽孢杆菌WB800的感受态中,成功实现chd基因在枯草芽孢杆菌WB800中的高效胞外分泌表达,解决了 Chd胞内表达而后续分离纯化难度高的难题。重组枯草杆菌WB800(pP43Chd)经液态发酵优化(包括单因素实验、Placket-Burman 实验和 Box-Behnken Design 实验),发酵产 Chd 酶活提高了 1.13 倍,达到14.50 U/1。获得最佳培养基配方为:蛋白胨30 g/l、葡萄糖50 g/1、酵母提取物39 g/1、磷酸氢二钾3 g/1、氯化钠3 g/1、硫酸镁3 g/l。最佳培养条件为:接种量10%、pH7.0、30ml/250ml的装液量、培养温度37℃、摇床转速175rpm、培养12h后加入20 mg/1的百菌清,发酵培养24 h后测酶活。重组枯草杆菌WB800(pP43Chd)经固态发酵优化后,发酵产Chd酶活提高了 2.82倍,达到85.60 U/kg干基质,获得固态发酵最佳培养基和培养条件为:小麦秆粉和麸皮各 2g、稻谷壳 1g,K2HPO4 0.4‰、MgSO40.2‰、蛋白胨5%、D-木糖 5%,含水量为60%,接种量为20%,固体基质颗粒大小>2.96 mm、堆料高度为3.3 cm、堆料密度为0.047g/cm3及孔隙度为84.86%时,37‰发酵36h。用最优液态发酵条件下发酵生产的Chd粗酶液对代表不同植物器官的六种蔬菜进行百菌清残留降解实验。结果表明Chd粗酶液对西红柿中百菌清的降解效果最好,百菌清的降解率接近100%,其次是莴苣和生菜,百菌清降解率分别为82%和67%左右,对蘑菇、花菜和胡萝卜中百菌清的降解率处于40%-55%之间。与此同时,酶促反应3 h后,从各种蔬菜洗脱到酶液中的百菌清也基本能完全被Chd降解,酶解反应2 h后残余Chd酶活还维持起始酶活的76%-86%之间。实验结果表明Chd粗酶液能有效去除百菌清污染的瓜果蔬菜表面的百菌清残留,在解决瓜果蔬菜中百菌清农药残留超标污染具有一定的应用前景。(本文来源于《南京农业大学》期刊2015-06-01）
陈宏宏[3]（2012）在《百菌清水解脱氯酶（Chd）的金属催化活性中心研究及酶的定向进化》一文中研究指出微生物编码的脱氯酶在氯代芳香族化合物的脱毒、降解方面起着关键作用,其脱氯催化机制是当前国际研究的热点。氯代芳香族化合物的脱氯方式主要有还原、巯基取代、氧化和水解,而关于水解脱氯酶的脱氯机制只有4-氯苯甲酸脱氯酶的报道,该酶系统需要3个独立酶的共同作用,且需要CoA和ATP。百菌清水解脱氯酶(Chd)是一个全新的、不依赖CoA和ATP的、能催化百菌清4位氯原子水解脱除的脱氯酶,也是第一个来源于金属β-内酰胺酶超家族的水解脱氯酶。Chd的催化机制不同于以前报道的脱氯酶,且其中的金属离子是维持其水解脱氯活性所必需的。Chd只能对百菌清的4位氯原子进行水解脱氯,而对其他氯代芳香族化合物没有脱氯效果。通过定向进化的方法可以提高Chd催化活性,甚至可以改变其底物特异性,还可为分子水平上研究Chd的催化活性位点提供帮助。通过加入金属整合剂邻菲罗啉,并透析酶液得到脱金属辅基酶(apo-Chd),再加入不同二价金属离子(Co2+,Cd2+,Mn2+,Ca2+,Zn2+,Mg2+,Hg2+,Cu2+,Ni2+,Cr2+和Fe2+)进行共培养,得到含不同二价金属离子的重组Chd。对重组酶的酶活力和酶学特性的研究结果表明Co2+-Chd的酶活比Zn2+-Chd的酶活提高了 20.3%;Cd2+-Chd和Mn2+-Chd的酶活比Zn2+-Chd酶活都有下降,分别为原来的91.6%和57%,该结果表明Chd中二价Zn2+活性中心可以被Co2+、Cd2+和Mn2+所取代。研究了重组酶的基本酶学特性。Co2+-Chd的Km值为 134μM,比Zn2+-Chd的Km值(149μM)略有减小;Cd2+-Chd和Mn2+-Chd的Km值分别为168uM和157uM,均高于Zn2+-Chd。说明了不同的金属离子替代后,改变了酶与底物的亲和力,从而改变了催化效率。对不同金属替代重组酶的最适温度、pH、热稳定性和酸碱耐受性的研究表明,Mn2+替代的酶的最适温度为50℃,和含Zn2+的野生型Chd一致,而Co2+和Cd2+替代的酶最适温度为下降为40℃。含Zn2+的野生型Chd在50℃时处理10min,相对酶活下降不足5%,处理1h后,相对酶活下降17%。而催化中心金属离子替换为Cd2+、Co2+、Mn2+时,50℃处理10min基本失活、且酶的pH活性范围较变窄,酸碱耐受性下降。从这些结果可以看出,Zn2+为Chd催化活性中心的最适配基,维持了Chd的高温下催化活性、热稳定性和酸碱稳定性。在本研究中,还利用电感耦合等离子体原子发射光谱仪(ICP-AES)精确测定了Chd中金属离子的含量,再根据蛋白质浓度核算出一个Chd分子中含有2.14个锌离子(Zn2+),显示Chd的包含一个双核(Zn2+-Zn2+)催化活性中心。利用3D LigandSite(http://www.sbg.bio.ic.ac.uk/3dligandsite/)在线软件,预测Chd 的金属配基结合位点。根据预测的结果,结合定点突变的方法,检测突变后酶活变化,证明Chd的金属配基结合位点由H128、H131、N230、D130和H271五个氨基酸残基组成。通过易错PCR方法,获得了 4个活力提高的Chd突变体,发现总共有7个氨基酸位点发生了突变,分别是 L109H、S303G、L48H、Q146R、N168Y、L243E 和 E249D。Chd突变体中活力最高的TB-1的比酶活为47.2 IU/μg,比原始酶活提高了 2.5倍。将活力提高的突变子用DNA shuffling的方法进行片段重组。经筛选得到酶活力进一步提高的突变体TB-5,其比酶活达到69.5 IU/μg,比原始菌株的18.9 IU/μg提高了 3.7倍。测序结果显示有3个氨基酸位点发生了突变,分别是Q146R、N168Y和S303G。突变体酶动力学参数测定结果表明,突变体TB-1和TB-5的Km变小,Kcat变大,说明突变体酶与底物的亲和力提高,从而提高了酶的催化效率。(本文来源于《南京农业大学》期刊2012-06-01）
王光利[4]（2010）在《百菌清降解菌株的分离、鉴定，水解脱氯酶的基因克隆、表达及酶的催化机制研究》一文中研究指出百菌清是一种广谱氯代芳香族杀真菌剂,是美国第二大类农业杀真菌剂,年使用量为5000吨,而我国百菌清年产量超过了8000吨。百菌清对于鱼、鸟和水生无脊椎动物具有高毒性,并且在生态系统中被广泛检测到,其造成的污染已经引起了广泛的关注。百菌清污染的生物修复被认为是一种有效、可靠和无二次污染的方法。因此,筛选高效降解百菌清的微生物菌种资源,探索其降解百菌清的作用机理,充分发挥其降解能力,具有重要的理论意义和应用价值。本研究的意义在于分离、筛选高效百菌清降解菌株,并对菌株在不同环境条件下降解百菌清的特性进行研究,以期为百菌清污染环境的修复提供科学依据；同时克隆百菌清的降解关键酶基因,进一步研究降解酶的特性、催化机制等,阐明氯代芳香族化合物的水解脱氯新机制。本文通过富集培养的方法,从百菌清污染的水样和土壤中分离到15株百菌清降解菌株,分别命名为CTN-1～CTN-15。对这15株百菌清降解菌株进行系统发育分析、染色体ERIC-PCR指纹图谱分析,结果显示这15株菌具有丰富的多样性。经生理生化鉴定和系统发育分析,15株菌株分别被鉴定为Ochrobactrum sp., Pseudoxanthomonas sp., Bordetella sp., Shinella sp., Caulobacter sp., Rhizobium sp., Pseudomonas sp.和Lysobacter sp等八个不同的属。根据细胞壁脂肪酸成份、极性酯、醌、G+C mol%、DNA-DNA杂交、生理生化、16S rRNA基因系统发育分析等,将Lysobacter sp. CTN-1鉴定为Lysobacter属中的一个新种,命名为瑞身溶球菌Lysobacter ruishenii sp. nov. CTN-1T(=DSM 22393T=CGMCC 1.10136T)。随机选取分属于不同属的8株百菌清降解菌株,比较了菌株对百菌清的降解能力,结果显示8株菌对百菌清的降解能力有很大差异,尤其是降解速率,从4-40 mg·1-1·d-1不等,分离自水样的5株菌的降解能力明显优于土壤中的3株菌。菌株CTN-3和CTN-14在液体培养基中降解速率最快,12 h几乎完全转化20 mg·1-1的百菌清。百菌清代谢途径研究表明15株菌降解百菌清的产物均为羟基百菌清。该研究结果为百菌清污染环境的生物修复提供了丰富的菌种资源。采用SDS高盐结合CTAB法从百菌清降解菌株Pseudomonas sp. CTN-3中提取高质量的染色体总DNA,用鸟枪法构建了总DNA的基因组文库。从大约15,000个转化子中筛选到2个具有百菌清脱氯活性的阳性克隆子1-10和2-1。用软件分析及亚克隆的方法,确定了编码百菌清脱氯酶(Chd)的1026 bp长结构基因chd,通过chd基因序列的Blast比对,发现在基因水平上无任何同源序列；在氨基酸水平上,发现其具有金属β-内酰胺酶超家族的一个假定保守区,并且与一些金属水解酶最高同源性也只有29%。例如,与来自Streptomyces coelicolor的环化酶具有29%%的同源性,与来自Stackebrandtia nassauensis依赖于锌的水解酶具有27%的同源性,与来自Candidatus Koribacter versatilis类-β-内酰胺酶具有24%的同源性。可见,克隆到的chd是一个全新的百菌清水解脱氯酶基因。二级结构预测显示Chd具有金属β-内酰胺酶的折迭特征,为p-折迭核心区被α-螺旋包围的αβ/βα叁明治折迭。而且,在Chd中也发现金属p-内酰胺酶最典型的特征标签His-X-His-X-Asp-His,有意思的是,第一个氨基酸是Ser而不是His。显示该酶是报道的第一个来源于金属β-内酰胺酶超家族的水解脱氯酶。根据确定的ORF,设计特异性引物,成功的从十五株降解菌株的基因组序列中扩增到百菌清水解脱氯酶结构基因,研究发现该结构基因大小从1002到1026 bp不等,十五株百菌清农药降解菌中的百菌清水解脱氯酶编码基因共有48处碱基位点有变化,其各亚型之间的同源性为99%左右。将百菌清脱氯酶结构基因连接到表达载体pET29a上,在E.coli BL21中实现了高效表达。通过MS/MS、NMR等多种方法进一步鉴定Chd转化百菌清的产物为4-羟基百菌清,并且证明Chd能在厌氧条件下进行百菌清的脱氯,表明Chd是一个水解脱氯酶而不是氧化酶,从而将Chd定义为一个新的氯代芳香族化合物的水解脱氯酶(EC3.8.1.12)。对百菌清水解脱氯酶的酶学特性进行了研究。建立了Chd的酶学反应体系：50 mMPBS (pH7.0),0.2mM百菌清,反应酶量50μl,50℃反应10 min,用3 ml二氯甲烷中止反应,立即测定OD232值。酶活力单位(U)定义为：在pH 7.0,温度50℃条件下,每分钟催化减少1μmol百菌清所需的酶量。Chd酶学特性研究显示,30℃到70℃,温度对酶活力的影响不大,其最适反应温度为50℃,从30℃开始至40℃相对活力仅下降12%,50℃时处理10 min,相对酶活下降不足5%,而处理1h后,相对酶活下降至18%,50℃到70℃的范围内,相对酶活迅速下降,60℃时基本失活。在pH为7.0时酶活力最高,在pH 6到pH 9的范围内Chd比较稳定,缓冲液中处理30 min后Chd的相对酶活力仍保持95%以上。稳定性在pH 7.0时最高。1.0mM Ag+、Al3、Hg2+、Mn2+、Fe2+、Fe3+; 10 mM表面活性剂SDS; 1 mM离子络合剂1,10-邻二氮杂菲；1 mM NBS,0.5mM DEPC强烈抑制了百菌清水解脱氯酶Chd的活性。1.0mM Cr3+、Co2+、Cu2+; 10mM Tween 80、Triton X-100、pCMB、PMSF、PAO和PGO对Chd有较强的抑制作用。而1 mM Zn2+, Ca2+, Ni2+, Mg2+, Li+、Ba2+; 10 mM金属螯合剂EDTA对Chd仅有程度轻微的抑制(抑制作用小于10%)。Chd水解百菌清的Km为0.112 mM, kcat值是207s-1,在最佳反应条件下的催化效率值为1.8土106 M-1·s-1,这些数据表明百菌清是Chd的良好底物。Chd的等电点约为4.13。Chd在自然状态下的分子量为33,886 Da,和单体酶的理论计算值基本一致,说明Chd可能是一个单体酶。对Chd催化百菌清脱氯的机制进行了初步研究。Chd能被1,10-邻二氮杂菲完全抑制,而随后补加Zn2+能恢复活力,证明Chd是一个金属酶。Chd能被DEPC完全抑制,羟胺处理后恢复活力,说明Chd活性位点存在组氨酸残基。Chd能被NBS完全抑制,但用4-羟基百菌清预处理后能防止Chd被NBS抑制,说明Chd活性位点存在色氨酸残基。通过对Chd催化活性位点的定点突变,初步研究了Chd可能的催化机制。与未突变的野生型Chd相比较,突变体H38Q、H271Q、H326Q、D67A、D215A、D244A、D264A、D323A、C25A、W219F、W227F、W282F、W324F、H283Q、S81T、T150、和E203V对酶活力没有显着影响,突变体H63Q和D337A对酶活力有部分影响(30%-50%),而突变体H128Q、H157Q、D45A、D130A、D184A、W241F、S126H和G208A的脱氯活力则完全消失,表明这些位点对酶的催化活性非常关键。(本文来源于《南京农业大学》期刊2010-04-01）
曾爱斌,汪丽娟,沈卓贤,官宝红[5]（2006）在《废水中四氯化碳的碱性水解脱氯研究》一文中研究指出以配制的四氯化碳废水和实际工业废水———甲基氯化物生产废水为处理对象,分别在小试和中试规模上研究碱性水解脱氯去除废水中的四氯化碳(CC l4),主要研究四氯化碳去除效果、重要的工艺参数,并研究其反应机理和动力学。实验表明:四氯化碳的去除率与反应时间、温度、pH、初始浓度等工艺条件有关。优化的工艺参数为:pH值11.5、温度85℃、反应时间30m in。四氯化碳水解机理表明:碱性条件对四氯化碳水解至关重要,碱性水解反应属于2级反应。不论是配制废水还是工业废水,废水中的四氯化碳去除效率可达70%~80%。结果表明碱性水解工艺处理四氯化碳废水是可行的。(本文来源于《沈阳农业大学学报》期刊2006年04期）
马师白,鲁军,高晋生[6]（2002）在《含氯有机废料PVC的热解、水解脱氯研究》一文中研究指出采用热解 ,水解两种方法对 PVC脱氯过程进行研究 ,结果表明热解 ,水解工艺可以有效地脱除 PVC中的氯 ,通过对两种脱氯工艺的对比研究 ,表明相同条件下水解脱氯效果明显高于热解工艺 ,具有良好的发展前景。通过对 PVC脱氯产物的分析表明 ,经过处理的 PVC残渣中氯含量显着降低 ,并且所得到的残渣具有较高的发热量 ,为进一步利用奠定良好基础。(本文来源于《化学世界》期刊2002年S1期）
马师白,鲁军,高晋生[7]（2002）在《聚氯乙烯(PVC)水解脱氯的研究》一文中研究指出采用高压反应釜 ,在过热水条件下对PVC脱氯过程进行研究 ,结果表明 ,水解工艺可以有效地脱除PVC中的氯 ,并就工艺条件对脱氯效果的影响进行讨论 ,适宜的工艺条件为 :反应温度 2 2 0℃ ,反应时间 2h ,初始压力 3 0MPa ,碱浓度 4 % .(本文来源于《环境化学》期刊2002年05期）
水解脱氯论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
百菌清(四氯间苯二腈)是一种广谱氯代苯腈类杀菌剂,在农业生产中已使用30年之久,是世界上使用最广泛的杀真菌剂之一,在环境中较稳定、残效期长,且具有明显的蓄积毒性。百菌清的广泛使用及其难降解的特性使得其在温室大棚气体、蔬菜和水果中都可被检测到,其给人类健康和食品安全造成的严重威胁引起了广泛关注。百菌清污染的生物降解被认为是一种有效、安全可靠和无二次污染的方法,具有广泛应用前景。本实验室前期分离到一株高效降解百菌清的菌株Pseudomonas sp.CTN-3,其编码的新颖百菌清水解脱氯酶(Chd)无需其他辅因子就能将百菌清水解为毒性变小、水溶性变大的羟基百菌清。枯草芽孢杆菌由于其非致病性、分泌蛋白能力强和良好的发酵基础应用非常广泛,是一些重要工业酶制剂的生产菌株。本论文将利用含P43启动子功能片段和NprB基因信号肽编码序列,将chd基因整合到大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体PP43NMK中构建分泌表达载体pP43Chd,将其转化至枯草芽孢杆菌WB800的感受态中,成功实现chd基因在枯草芽孢杆菌WB800中的高效胞外分泌表达,解决了 Chd胞内表达而后续分离纯化难度高的难题。重组枯草杆菌WB800(pP43Chd)经液态发酵优化(包括单因素实验、Placket-Burman 实验和 Box-Behnken Design 实验),发酵产 Chd 酶活提高了 1.13 倍,达到14.50 U/1。获得最佳培养基配方为:蛋白胨30 g/l、葡萄糖50 g/1、酵母提取物39 g/1、磷酸氢二钾3 g/1、氯化钠3 g/1、硫酸镁3 g/l。最佳培养条件为:接种量10%、pH7.0、30ml/250ml的装液量、培养温度37℃、摇床转速175rpm、培养12h后加入20 mg/1的百菌清,发酵培养24 h后测酶活。重组枯草杆菌WB800(pP43Chd)经固态发酵优化后,发酵产Chd酶活提高了 2.82倍,达到85.60 U/kg干基质,获得固态发酵最佳培养基和培养条件为:小麦秆粉和麸皮各 2g、稻谷壳 1g,K2HPO4 0.4‰、MgSO40.2‰、蛋白胨5%、D-木糖 5%,含水量为60%,接种量为20%,固体基质颗粒大小>2.96 mm、堆料高度为3.3 cm、堆料密度为0.047g/cm3及孔隙度为84.86%时,37‰发酵36h。用最优液态发酵条件下发酵生产的Chd粗酶液对代表不同植物器官的六种蔬菜进行百菌清残留降解实验。结果表明Chd粗酶液对西红柿中百菌清的降解效果最好,百菌清的降解率接近100%,其次是莴苣和生菜,百菌清降解率分别为82%和67%左右,对蘑菇、花菜和胡萝卜中百菌清的降解率处于40%-55%之间。与此同时,酶促反应3 h后,从各种蔬菜洗脱到酶液中的百菌清也基本能完全被Chd降解,酶解反应2 h后残余Chd酶活还维持起始酶活的76%-86%之间。实验结果表明Chd粗酶液能有效去除百菌清污染的瓜果蔬菜表面的百菌清残留,在解决瓜果蔬菜中百菌清农药残留超标污染具有一定的应用前景。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
水解脱氯论文参考文献
[1].罗燕飞.稳定表达百菌清水解脱氯酶的制备及其在解除百菌清抑制生物质转化中的应用[D].南京农业大学.2017
[2].孟超.百菌清水解脱氯酶（Chd）的枯草芽孢杆菌分泌表达、发酵优化及应用[D].南京农业大学.2015
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[5].曾爱斌,汪丽娟,沈卓贤,官宝红.废水中四氯化碳的碱性水解脱氯研究[J].沈阳农业大学学报.2006
[6].马师白,鲁军,高晋生.含氯有机废料PVC的热解、水解脱氯研究[J].化学世界.2002
[7].马师白,鲁军,高晋生.聚氯乙烯(PVC)水解脱氯的研究[J].环境化学.2002
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