导读:本文包含了内皮细胞功能障碍论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:线粒体功能障碍,凋亡蛋白,内皮细胞凋亡,TXNIP2
内皮细胞功能障碍论文文献综述
闫雅茹,张柳,林莹妮,李庆云[1]（2019）在《TXNIP2介导的线粒体功能障碍引起间歇性低氧下内皮细胞凋亡》一文中研究指出目的阻塞性睡眠呼吸暂停(Obstructive sleep apnea,OSA)是心血管疾病的独立危险因素,间歇低氧(Intermittent hypoxia, IH)所致内皮细胞损伤是OSAHS合并心血管疾病的始动环节。本研究应用间歇低氧(IH)处理雄性S-D大鼠及人脐静脉内皮细胞(HUVEC),探讨IH致血管内皮损伤情况及相关通路变化,为进一步研究OSAHS相关心血管疾病靶向治疗提供研究基础。方法 1)12只8周龄健康雄性SD大鼠常氧组和IH组(5%O2 40s～21%O260s, 8hr/d, 45d),每组6只,观察血清氧化应激指标,主动脉血管内皮层形态,血管壁纤维化、细胞凋亡及TXNIP蛋白表达情况。2)HUVEC分为常氧组、IH组(1%O2 5min与21%O25min交替处理)、常氧+TXNIP过表达组,IH+TXNIP敲低组,分别处理24h。应用流式细胞术检测细胞早期凋亡率和细胞ROS水平,CCK8实验观察细胞活力,透射电镜技术观察细胞线粒体超微结构变化。免疫荧光观察线粒体膜电位变化,western blotting方法观察线粒体依赖的凋亡蛋白释放情况。结果 1.与常氧组相比,IH组S-D大鼠血浆MDA水平升高,血浆NO水平降低,血管内皮排列紊乱,内膜层欠光整,血管内皮细胞凋亡增加,血管壁纤维化明显;2.与常氧组相比,IH处理HUVEC后,细胞活力逐渐降低,不同时间点(0h、8h、12h,24h)的细胞早期凋亡率分别为(1.51±0.60)%、(8.43±1.19)%、(20.91±1.27)%,(38.88±2.34)%(p<0.05);IH处理24h后,线粒体细胞色素C释放入细胞质(p<0.05),凋亡蛋白BAX/BCL-2, Cleaved caspase 3释放增加(p<0.05);3. IH处理24 h后,HUVEC线粒体来源的ROS水平显着高于常氧组,线粒体膜电位低于常氧组,电镜下线粒体肿胀,空泡化,给与线粒体保护剂Mito-TEMPO后,线粒体相关凋亡蛋白释放减少;4.IH处理24h后,TXNIP表达量增加,常氧+TXNIP2组可模拟IH下线粒体功能障碍及线粒体相关凋亡蛋白表达;5.IH+TXNIP2敲低组可减轻IH下线粒体功能障碍及线粒体相关凋亡蛋白表达。结论 IH可通过TXNIP2介导线粒体功能障碍,导致致线粒体依赖的凋亡蛋白释放,引起HUVEC的凋亡。(本文来源于《中国睡眠研究会第十一届全国学术年会论文汇编》期刊2019-10-25）
孙世甜,叶亮,付佳荣,侯云,张连双[2]（2019）在《硫丹通过诱导内质网应激介导了血管内皮细胞的炎症反应和功能障碍》一文中研究指出目的:环境中持久性有机污染物的暴露与心血管病关系密切。本研究拟探讨硫丹对血管内皮细胞炎症反应的影响及内质网应激机制。方法:采用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为研究对象,分为对照组,1μg/mL,5μg/mL,10μg/mL硫丹组和抑制剂组,硫丹组孵育不同浓度的硫丹24h,抑制剂组先孵育活性氧抑制剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC,3mmol/L)及内质网应激抑制剂STF-083010(10μmol/L)4h,再孵育硫丹24h。流式细胞术检测HUVEC ROS的平均荧光强度,透射电镜观察HUVEC的内质网变化,ELISA检测细胞上清液中白介素1-beta(IL-1β)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)及内皮素(endothelin1,ET-1)(本文来源于《2019全国呼吸毒理与卫生毒理学术研讨会论文集》期刊2019-10-25）
莫连芹,汪娟,黄栋,王予川[3]（2019）在《脓毒症患儿病情与血管内皮细胞功能障碍的相关性分析》一文中研究指出目的探讨脓毒症患儿病情与血管内皮细胞功能障碍的相关性。方法选择2017年5月至2018年1月在贵州省人民医院PICU及小儿外科入住24 h以上的脓毒症患儿68例为研究对象,根据患儿病情严重程度分为脓毒症组41例和脓毒性休克组27例;同期选择门诊健康体检者39例作为对照组。根据患儿预后分为存活组53例和死亡组15例;检测炎症指标[血白细胞计数(WBC)、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、降钙素原(PCT)]和内皮细胞损伤标志物[血浆内皮素1(ET-1)、血管性血友病因子(vWF)、可溶性血栓调节蛋白(sTM)]水平,分析组间炎症指标与内皮损伤标志物之间的相关性。结果 (1)随着脓毒症病情加重,CRP、IL-6、PCT、vWF、sTM、ET-1水平逐渐升高,组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);(2)脓毒症患儿死亡组与存活组间比较差异有统计学意义(P<0.05),具体表现为WBC在死亡组明显低于存活组,且与脓毒症患儿预后呈正相关。而vWF、sTM、ET-1在死亡组均明显高于存活组,且与脓毒症患儿预后呈显着负相关。结论脓毒症患儿病情、预后与血管内皮损伤密切相关。(本文来源于《中国中西医结合儿科学》期刊2019年01期）
Shen,Liu,Cong,Wei,Ning,Kang,Qilong,He,Junqing,Liang[4]（2019）在《中药通心络胶囊通过调节血管内皮功能和抑制小鼠白细胞——内皮细胞相互作用减轻缺血性卒中脑微循环障碍:双光子激光扫描显微镜研究》一文中研究指出目的探讨中药复方通心络胶囊对小鼠大脑中动脉永久阻断(pMCAO)术后脑微循环障碍的影响,并进一步探讨其机制。方法成年雄性C57BL/6J小鼠在pMCAO术后1、3、21小时口服通心络胶囊(3.0、1.5、0.75g·kg~(-1)·d~(-1))。术后6小时和24小时检查以下参数:神经功能缺损、梗死体积、BBB通透性、脑微血管结构、脑微循环(TPLSM成像)、血管活性因子和黏附分子。结果在pMCAO后6或24小时,通心络胶囊可改善神经功能缺损,减少梗死体积,减弱BBB破坏,保护脑微血管结构,增加脑毛细血管流速和体积流量,抑制白细胞—内皮细胞的相互作用,且治疗效果呈剂量依赖性。进一步研究表明,大剂量通心络胶囊可以调节PGI2、TXA2和ET-1的表达,抑制ICAM-1和P-选择素的表达。结论通心络胶囊通过调节内皮功能和抑制白细胞—内皮细胞相互作用减轻脑缺血损伤的微循环障碍。这些作用与调节PGI2、TXA2和ET-1的表达以及抑制ICAM-1和P-选择素的表达有关。(本文来源于《第十五届国际络病学大会论文集》期刊2019-02-22）
高爽,王臻楠,顾耘[5]（2018）在《血管内皮细胞功能障碍与动脉粥样硬化关系的研究进展》一文中研究指出血管内皮细胞损伤、内皮功能障碍是动脉粥样硬化的起始环节,其参与动脉粥样硬化的启动和进展过程。内皮功能障碍及形态学损伤引起白细胞-内皮细胞黏附、血管收缩、血小板聚集、氧化应激、平滑肌增殖及血栓形成。内皮细胞功能调节与多种相关因子之间的作用机制是复杂的,本文以内皮细胞功能障碍与动脉粥样硬化关系为切入点,综述血管内皮细胞功能与动脉粥样硬化发生发展的研究进展。(本文来源于《中西医结合心脑血管病杂志》期刊2018年20期）
刘颖,刘颜,王立立,华琦[6]（2018）在《血管内皮细胞功能障碍及修复与高血压关系探讨》一文中研究指出高血压已成为危害人类健康主要原因之一。其中,90%以上是原发性高血压,全世界每年因高血压及相关并发症而死亡人数达900万~([1])。血管内皮细胞是介于血管平滑肌和血液间的机械屏障,是许多活性物质的靶器官。其可分泌血管舒张因子和收缩因子,二者达到平衡可调节血管舒缩、促进纤溶系统与凝血平衡、抑制血小板聚集及炎性细胞黏附于血管内皮,调节血管平滑肌生长等。血管内皮功能障碍是由于临床各种病理情况,导致血管内皮细胞发生的功能异常。(本文来源于《中华老年心脑血管病杂志》期刊2018年07期）
杜智超,姜睿[7]（2018）在《血管外周脂肪组织与血管内皮细胞功能障碍的研究进展》一文中研究指出血管周围脂肪组织(perivascular adipose tissue PVAT)是一种血管支持组织。生理状态下PVAT通过分泌各种活性物质调节血管内皮细胞的功能,病理状态下与血管内皮细胞相互作用,可引起内皮细胞功能障碍。本文就PVAT与血管内皮细胞关系的研究进展做一综述。(本文来源于《西南医科大学学报》期刊2018年03期）
刘明明[8]（2018）在《内皮细胞mTORC1在血管舒张障碍及高血压中的功能与机制研究》一文中研究指出高血压(Hypertension)是一种慢性疾病状态,其主要表现为动脉血压持续升高。高血压是冠状动脉疾病、中风、心力衰竭、房颤、外周血管疾病、视力丧失、慢性肾病和痴呆的主要危险因素。血管内皮细胞通过自分泌和旁分泌方式维持血流动态平衡以及血管张力稳定,因此血管内细胞功能障碍与高血压密切相关。雷帕霉素(rapamycin)哺乳动物雷帕霉素受体复合物1(mammalian target of rapamycin complex 1,mTORC1)抑制剂,临床上常用为免疫抑制药物。然而长期服用雷帕霉素导致存在导致患者动脉血压升高的风险。近年来研究发现,雷帕霉素通过抑制mTORC1活性导致血管内皮细胞功能紊乱,但是其具体的致病机制尚不明确。本研究的目的:一方面为临床上雷帕霉素用药提供理论基础,另一方面揭示mTORC1对于维持内皮细胞功能的重要作用。EC-Raptor~(KD)(内皮细胞特异性敲低Raptor)小鼠和Raptor~(flox)(野生型)小鼠分别给予血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)缓释泵4周,采用尾压法(Tail-cuff法)测量小鼠动脉血压变化情况,发现EC-Raptor~(KD)小鼠收缩压(systolic blood pressure,SBP)、舒张压(diastolic blood pressure,DBP)和平均动脉压(mean blood pressure,MBP)均升高。AngⅡ处理4周后,与对照组小鼠相比EC-Raptor~(KD)小鼠心脏出现心肌间质细胞纤维化和血管周围纤维化。为了明确EC-Raptor~(KD)导致小鼠血压升高的具体机制,我们分别分离EC-Raptor~(KD)小鼠和Raptor~(flox)小鼠二级肠系膜动脉进行体外微血管张力实验,结果显示EC-Raptor~(KD)小鼠内皮细胞舒张功能障碍。花生四烯酸(Arachidonic acid,AA)经过环氧酶(Cyclooxygenase,COX)代谢通路产生多种调控内皮活性的物质,并且相关报道显示这些代谢产物参与调控动脉血压,比如PGI_2(prostaglandin I2)、PGE_2(prostaglandin E2)、PGF2a(prostaglandin F2a)作为内皮细胞依赖的血管舒张因子介导血管舒张。为了进一步证实mTORC1具体作用于COX-1或COX-2影响内皮细胞功能,因此我们在体外微动脉张力实验过程中使用COX-1,COX-2特异性抑制(SC560/NS-398)分别处理二级肠系膜动脉,结果表明mTORC1通过调控COX-2代谢通路导致血管舒张功能障碍。接下来,我们采用脂质代谢组学的方法分析EC-Raptor~(KD)小鼠和EC-Raptor~(flox)小鼠血浆花生四烯酸代谢产物的变化,显示EC-Raptor~(KD)小鼠COX代谢通路产物发生显着变化。为了证明是内皮细胞mTORC1功能障碍诱导血浆中COX通路代谢产物改变,我们采用RNA干扰技术敲低EC中mTORC1功能亚基Raptor,收取细胞培养液和细胞进行代谢组学分析,动物实验和细胞实验结果提示内皮细胞中mTORC1影响花生四烯酸代谢物PGE_2的合成。综上所述:本研究表明抑制内皮细胞mTORC1活性影响COX-2通路花生四烯酸代谢产物的改变,最终诱发内皮舒张功能障碍依赖的动脉血压升高。此机制研究为雷帕霉素具体用药提供了理论基础,为相关疾病的治疗提供了新的思路和潜在的靶点。(本文来源于《天津医科大学》期刊2018-05-01）
徐婷婷[9]（2018）在《同型半胱氨酸致内皮细胞线粒体功能障碍机制研究》一文中研究指出背景:心血管疾病严重威胁人类身体健康,已位列全球致死疾病之首。动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是众多心血管疾病共同的主要病理基础。内皮细胞是血管壁的重要组成部分,在调节血流、血小板激活、白细胞粘附等过程中发挥不可或缺的作用。当血管内皮细胞受损时,血管收缩和舒张平衡被打破,内皮功能受到影响。而内皮细胞功能障碍是多种心血管疾病发生过程中的始动因素或促进因素。因此,早期防治内皮功能障碍是预防和治疗心血管疾病的关键。同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)是心血管疾病特别是动脉粥样硬化的一个独立、重要的危险因子。Hcy是人体内甲硫氨酸代谢过程中产生的中间产物。空腹血浆中Hcy高于15μM被称为高同型半胱氨酸血症(Hyperhomocysteinemia,HHcy)。研究表明HHcy与血管内皮细胞损伤相关,可能与氧化应激、炎症应答、亚硝基化水平下调等方面有关,但具体机制仍不明确,因此继续寻找治疗Hcy引起心血管疾病,特别是动脉粥样硬化的靶点至关重要。线粒体不仅是细胞合成ATP的主要场所,还参与诸如钙稳态平衡、信号传导、自噬等诸多生物进程。研究发现在心血管疾病患者的内皮中,线粒体动态平衡发生改变。线粒体动态平衡的病理性变化与内皮细胞功能相关。目前鲜少报道Hcy致内皮细胞线粒体损伤及其与内皮功能障碍关联性的研究,因此急需深入探讨Hcy与内皮细胞线粒体损伤及相关机制,以期为心血管疾病的治疗提供研究靶点。Ca2+信号通过影响线粒体相关生物进程在细胞存活中扮演不可或缺的角色。Ca2+稳态失衡会引起细胞功能障碍以及代谢紊乱。线粒体-内质网偶联结构(Mitochondria-associated endoplasmic reticulum membranes,MAM)是线粒体外膜与内质网膜形成的紧密接触部位,是调节细胞中内质网与线粒体间Ca2+穿梭的核心场所。近年研究发现MAM结构在脂质合成、Ca2+信号传导、线粒体生物合成与动态变化、自噬、细胞存活等生物进程中发挥核心作用。MAM结构具有多种连接桥梁蛋白,如 PACS-2,Mfn2-Mfn1/2,IP3R-Grp75-VDAC 等。研究发现 PACS-2(phosphofurin acidic cluster sorting protein 2)在线粒体-内质网通讯、内质网稳态和细胞凋亡中发挥重要作用,参与维持MAM结构的完整性。Mfn2-Mfn1/2起线粒体-内质网物理连接作用,但是其正向或负向维持MAM结构仍处于争议之中。Grp75连接内质网膜蛋白IP3R和线粒体外膜蛋白VDAC,是内质网向线粒体释放Ca2+的重要通道。此外,在多种疾病中,如神经退行性疾病、代谢性疾病、肿瘤等,均发现MAM结构发生改变。迄今尚未见Hcy对内皮细胞MAM结构及线粒体Ca2+影响的研究,故MAM结构和Ca2+信号成为本课题的的研究重点,以期寻找Hcy致内皮损伤特别是线粒体损伤的靶点。因此,本文以血管内皮细胞为研究对象,旨在考察Hcy对线粒体功能的影响,并探索相关机制,着重探讨MAM结构及其中Ca2+信号在Hcy致内皮细胞线粒体损伤中的作用,为深入揭示Hcy致内皮受损的机制提供实验依据,以期为Hcy相关心血管疾病的治疗提供新思路。目的:探索Hcy对内皮细胞线粒体功能的影响及相关机制。方法:1.采用外源性Hcy处理人脐静脉内皮细胞EA.hy926细胞株。MTT法检测不同浓度Hcy处理内皮细胞24 h后的细胞活力,以及同一浓度Hcy处理内皮细胞不同时间的细胞活力,初期确定Hcy的作用浓度和时间。2.Westcm-blot考察Hcy处理内皮细胞后内皮损伤标志蛋白表达水平。总NO检测试剂盒检测细胞内总NO水平。3.透射电镜考察Hcy对内皮细胞亚细胞结构的影响。JC-1染色检测Hcy对内皮细胞线粒体膜电位的影响。ATP检测试剂盒考察Hcy对内皮细胞ATP含量的影响。DCFH-DA探针检测Hcy对内皮细胞ROS生成的影响。4.蛋白质免疫共沉淀考察Hcy对内皮细胞MAM结构中Grp75与IP3R、VDAC的相互作用影响,Western-blot检测Hcy对MAM连接蛋白PACS-2的表达影响。5.Western-blot检测Hcy对内皮细胞线粒体动态变化相关蛋白,凋亡相关蛋白以及自噬相关蛋白表达水平的影响。免疫荧光分别检测Hcy对内皮细胞线粒体分裂蛋白Drp1和线粒体自噬标志蛋白Parkin的线粒体转位影响。6.Rhod 2 AM探针标记线粒体Ca2+,流式细胞仪检测Hcy对内皮细胞线粒体Ca2+浓度的影响。7.IP3R抑制剂Xestospongin C(XeC)与Hcy共处理,考察IP3R介导的Ca2+信号在Hcy致内皮细胞线粒体动态平衡改变及线粒体自噬中的作用。结果:1.Hcy对EA.hy926内皮细胞造成浓度依赖性损伤:D,L-Hcy对EA.hy926内皮细胞活力的IC50为6.03 mM。不同浓度Hcy作用于内皮细胞24 h,细胞活力呈浓度依赖性减弱。Hcy以800μM浓度作用于内皮细胞3,6,12,24 h,细胞活力呈时间依赖性减弱。后期以200,400,800μM Hcy处理内皮细胞24 h展开研究。Western-blot结果显示与对照组相比,Hcy(800 μM)处理内皮细胞24h后,内皮细胞标志物CD31和VEGF表达显着减少,eNOS活性位点Ser1177磷酸化水平呈浓度依赖性下调,抑制性位点Thr495磷酸化水平上调,内皮收缩因子ET-1表达显着增加,且细胞内总NO水平下降。2.Hcy引起内皮细胞线粒体功能障碍及线粒体自噬激活,未激活内质网应激:透射电镜结果显示线粒体结构损伤程度随Hcy浓度依赖性加重。JC-1染色结果显示内皮细胞线粒体膜电位随Hcy浓度依赖性下降,ATP含量减少,ROS水平升高。对照组和Hcy处理组中,凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2比值以及细胞色素C无明显变化,表明Hcy未激活内皮细胞线粒体依赖的凋亡信号通路。进一步研究发现Hcy处理组内皮细胞中自噬体显着增加。Western-blot及免疫荧光结果显示Hcy引起内皮细胞自噬标志蛋白LC3 II型表达增加,线粒体自噬标志蛋白Parkin在线粒体膜上聚集。此外,透射电镜结果中观察到内质网形态无明显改变,且Western-blot结果显示Grp78和p-eIF2α(Ser51)表达量与对照组相比无明显变化,提示Hcy未引起内皮细胞内质网应激,Hcy对内皮细胞线粒体的损伤先于内质网。3.Hcy引起内皮细胞MAM结构增强以及线粒体Ca2+浓度增加:通过透射电镜观察到Hcy处理组内皮细胞中内质网与线粒体紧密接触部位的数量以及长度与对照组相比均显着增加,提示Hcy引起内皮细胞MAM结构增加。Western-blot结果显示Hcy处理内皮细胞后,MAM连接蛋白PACS-2的表达水平显着上调,Mfn2表达显着下调,Mfnl无明显变化。蛋白质免疫共沉淀结果显示MAM结构中Grp75与IP3R、VDAC的相互作用增强。Western-blot结果显示Hcy引起内皮细胞MCU表达水平增加,mNCX表达无明显变化。采用Rhod2AM探针标记线粒体Ca2+,流式细胞术以及荧光成像研究结果均显示.Hcy引起内皮细胞线粒体Ca2+浓度升高。进一步使用IP3R抑制剂Xestospongin C(XeC)抑制IP3R介导的Ca2+流,发现Hcy + XeC共处理组中,线粒体Ca2+浓度较Hcy处理组降低,表明Hcy引起线粒体Ca2+浓度升高,这可能与其致MAM结构中IP3R-Grp75-VDAC复合体形成增加有关。4.Hcy通过激活GSK3[3和改变线粒体Ca2+信号影响线粒体动态平衡:通过Western-blot考察线粒体分裂和融合相关蛋白,发现Hcy引起线粒体分裂-融合动态平衡紊乱,使线粒体融合减少,分裂增加,表现为线粒体融合蛋白Mfn2表达水平显着降低,Mfnl表达未受影响,线粒体分裂蛋白Drp1表达水平显着增加。进一步研究发现Hcy引起内皮细胞线粒体组分中p-mTOR(Ser2481)、p-Akt(Ser473)和p-GSK3β(Ser9)水平显着下调,GSK3β与Drp1相互作用增强,提示Hcy引起线粒体过度分裂与抑制mTORC2/Akt/GSK3β信号通路,激活GSK3β有关。此外,使用IP3R抑制剂XestosponginC(XeC)抑制IP3R介导的Ca2+流后发现Hcy+ XeC共处理组中,Drp1表达以及线粒体转位均显着减少,提示Hcy引起线粒体过度分裂还与线粒体Ca2+浓度增加有关。5.Hcy引起内皮细胞线粒体Ca2+升高参与线粒体功能障碍及线粒体自噬的发生:与Hcy处理组相比,Hcy+ XeC共处理组中,内皮细胞ATP水平和线粒体膜电位均有所增加,自噬标志蛋白LC3Ⅱ型表达下调,Parkin与线粒体外膜蛋白Tom20的共定位减弱,提示Hcy引起内皮细胞线粒体Ca2+升高参与线粒体自噬的发生。结论:1.Hcy致内皮细胞毒性过程中,对线粒体的损伤先于内质网。Hcy呈浓度依赖性引起线粒体功能障碍,表现为线粒体膜电位下降,ATP水平降低,ROS水平升高,但未激活线粒体依赖的细胞凋亡分子事件。2.Hcy上调MCU表达水平,不影响mNCX水平,导致线粒体Ca2+浓度升高,继而引起线粒体分裂增加,线粒体功能障碍,以及线粒体自噬的激活。Hcy导致的线粒体Ca2+浓度升高可能与其增强Grp75和IP3R、VDAC的相互作用,上调PACS-2的表达,引起内皮细胞MAM结构增强有关。此外,Hcy引起线粒体分裂过度还与抑制mTORC2/Akt/GSK3β信号通路,激活GSK3β有关。(本文来源于《浙江大学》期刊2018-04-01）
崔思远[10]（2018）在《硒蛋白S缓解肿瘤坏死因子-α诱导血管内皮细胞功能障碍的作用及机制》一文中研究指出背景:动脉粥样硬化(AS)是一种以脂质异常聚积动脉管壁为典型特征的病理学表现,其引发的心脑血管系统疾病正严重危害人类健康与生命。其中内皮功能障碍(ED)被认为是AS形成发展过程中启动环节之一,改善和预防内皮细胞功能紊乱一直是防治AS的探讨热点和研究难点。硒蛋白S(Sel S)是一种位于内质网膜上的单次跨膜蛋白,其组织分布广泛,在肝脏、脂肪、骨骼肌、肾脏、胰岛及血管等器官组织中均有表达。Sel S主要生物学功能包括调节内质网应激、抵抗氧化应激、调控炎症反应及参与糖脂代谢。在促炎症因子中,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是代谢性疾病及炎症性疾病中致ED关键影响因子之一,目前Sel S在血管内皮细胞功能紊乱中的作用尚不清楚,故本研究探讨Sel S对TNF-α诱导内皮功能紊乱的影响及其相关机制。方法:高脂饮食(HFD)喂养低密度脂蛋白受体基因敲除(LDLR KO)小鼠16周,免疫组化检测该小鼠主动脉含生长因子样模体粘液样激素样受体(EMR1,又称F4/80)、肿瘤坏死因子受体-1(TNFR-1)、磷酸化的核因子-κB p65(p-NF-κB p65)及Sel S表达水平;应用外源性重组人TNF-α及相关通路抑制剂处理人脐静脉内皮细胞(HUVECs),采用蛋白免疫印迹及实时定量聚合酶链式反应等方法观察TNF-α诱导HUVECs功能紊乱的情况并明确TNF-α诱导HUVECs功能紊乱的分子机制;应用DNA重组技术构建pc DNA3.1-Sel S重组质粒及RNA干扰技术构建Sel S特异性小干扰RNAs以调控内皮细胞Sel S表达,从而研究Sel S对TNF-α诱导血管内皮细胞功能紊乱的影响及相关机制。结果:HFD喂养的LDLR KO小鼠主动脉粥样硬化病变区炎性指标及Sel S表达升高:与普通饮食喂养小鼠相比,HFD喂养的LDLR KO小鼠主动脉粥样硬化病变区F4/80表达增多(0.11±0.01 vs 0.06±0.01,p<0.01)、TNFR-1表达增多(0.010±0.004 vs 0.003±0.003,p<0.01)、p-NF-κB p65表达增多(0.010±0.004 vs0.003±0.002,p<0.01)及Sel S表达增多(0.06±0.02 vs 0.010±0.004,p<0.01)。TNF-α诱导血管内皮细胞功能紊乱:与对照组比较,TNF-α组细胞存活率降低[(53.93±11.20)(%)vs(93.42±7.63)(%),p<0.01]、一氧化氮(NO)含量降低(1.07±0.22 mmol/ml vs 2.12±0.28 mmol/ml,p<0.01)、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)m RNA水平下降(0.56±0.11 vs 1.01±0.16,p<0.05)、e NOS蛋白表达减少(0.55±0.17 vs 2.17±0.23,p<0.01),而内皮素-1(ET-1)m RNA水平升高(6.45±1.06 vs 0.93±0.64,p<0.01)、活性氧自由基(ROS)产生增多(220.36±40.95vs 117.66±16.27,p<0.01)。与对照组比较,TNF-α组单核细胞粘附到内皮细胞数量增多(554±111.45 vs110±13.45,p<0.01)、细胞上清细胞间粘附分子-1(s ICAM-1)水平升高(56.97±8.12 pg/ml vs 12.23±4.43 pg/ml,p<0.01)、上清血管细胞粘附分子-1(s VCAM-1)水平升高(150.13±22.30 pg/ml vs 17.56±9.08 pg/ml,p<0.01),TNF-α组细胞ICAM-1 m RNA水平升高(12.31±2.01 vs 1.03±0.66,p<0.01)、VCAM-1m RNA水平升高(25.74±4.54 vs 0.90±0.63,p<0.01)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)m RNA水平升高(5.61±1.18 vs 0.97±0.21,p<0.01)、白介素-8(IL-8)m RNA水平升高(3.39±0.53 vs 1.07±0.22,p<0.01)、白介素-6(IL-6)m RNA水平升高(4.76±1.06 vs 1.00±0.49,p<0.01)、白介素-1β(IL-1β)m RNA水平升高(3.00±0.45vs 1.00±0.45,p<0.01)。TNF-α诱导血管内皮损伤与p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)和核因子-κB(NF-κB)通路激活的关系:与对照组比较,TNF-α组细胞p-p38 MAPK表达增多(1.23±0.27 vs 0.29±0.12,p<0.01)、下游磷酸化的原癌基因(p-c-jun)表达增多(0.85±0.15 vs 0.11±0.07,p<0.01),磷酸化的κB抑制蛋白α(p-IκBα)表达增多(0.87±0.14 vs 0.28±0.17,p<0.01)、磷酸化的IκBα激酶β(p-IKKβ)表达增多(0.61±0.13 vs 0.17±0.22,p<0.05)、胞核NF-κB p65表达增多(1.32±0.24vs 0.69±0.16,p<0.01),而胞浆NF-κB p65表达减少(0.39±0.17 vs 1.22±0.24,p<0.01)。与TNF-α组相比,应用p38 MAPK通路抑制剂(SB203580)后细胞ICAM-1蛋白表达减少(0.10±0.09 vs 0.95±0.17,p<0.01)、VCAM-1蛋白表达减少(0.59±0.24 vs 2.56±0.35,p<0.01)、IL-6 m RNA水平下降(2.66±0.74 vs5.24±0.96,p<0.01)、IL-1βm RNA水平下降(1.47±0.69 vs 3.29±0.69,p<0.01)、MCP-1 m RNA水平下降(2.33±0.83 vs 7.73±0.10,p<0.01)、IL-8 m RNA水平下降(1.30±0.23 vs 3.94±0.72,p<0.01),应用NF-κB通路抑制剂(S2882)后细胞ICAM-1蛋白表达减少(0.12±0.11 vs 0.95±0.17,p<0.01)、VCAM-1蛋白表达减少(0.08±0.09 vs 2.56±0.35,p<0.01),IL-6 m RNA水平下降(1.81±0.76 vs5.24±0.96,p<0.01)、IL-1βm RNA水平下降(1.19±0.66 vs 3.29±0.69,p<0.01)、MCP-1 m RNA水平下降(1.85±1.23 vs 7.73±0.10,p<0.01)、IL-8 m RNA水平下降(1.32±0.32 vs 3.94±0.72,p<0.01)。高表达Sel S在TNF-α诱导血管内皮损伤中的作用及其机制:与TNF-α+E-Vector组相比,TNF-α+pc-Sel S组细胞存活率升高[(81.76±1.47)(%)vs(51.37±11.30)(%),p<0.01]、NO含量增多(1.71±0.31 mmol/ml vs 1.08±0.26mmol/ml,p<0.01)、e NOS m RNA水平升高(0.81±0.10 vs 0.53±0.18,p<0.05)、e NOS蛋白表达增多(1.30±0.22 vs 0.50±1.06,p<0.01),而ET-1 m RNA水平下降(3.64±0.99 vs 6.65±1.05,p<0.01)、ROS释放减少(126.20±31.72 vs221.63±40.27,p<0.01)。与TNF-α+E-Vector组相比,TNF-α+pc-Sel S组单核细胞粘附到内皮细胞数量减少(297±105.87 vs 554±111.45,p<0.01)、s ICAM-1水平下降(32.11±10.17 pg/ml vs 57.66±17.61 pg/ml,p<0.01)、s VCAM-1水平下降(100.79±17.65 pg/ml vs 153.66±25.37 pg/ml,p<0.01),细胞ICAM-1 m RNA水平下降(5.34±2.40 vs 12.31±2.42,p<0.01)、VCAM-1 m RNA水平下降(14.60±4.61vs 26.41±4.56,p<0.01)、IL-6 m RNA水平下降(2.14±0.60 vs 4.83±0.98,p<0.01)、IL-1βm RNA水平下降(1.62±0.41 vs 2.98±0.42,p<0.01)、MCP-1 m RNA水平下降(2.18±0.75 vs 5.62±1.08,p<0.01)、IL-8 m RNA水平下降(1.34±0.50 vs3.27±0.82,p<0.01),细胞p-p38 MAPK表达减少(0.59±0.17 vs 3.27±0.82,p<0.01)、p-c-jun表达减少(0.33±0.11 vs 0.86±0.15,p<0.01)、p-IKKβ表达减少(0.10±0.01 vs 0.61±0.13,p<0.01)、p-IκBα表达减少(0.42±0.11 vs 0.87±0.14,p<0.01)、胞核NF-κB p65表达减少(0.38±0.20 vs 1.17±0.18,p<0.01),而细胞胞浆NF-κB p65表达增加(0.90±0.12 vs 0.25±0.15,p<0.01)。低表达Sel S在TNF-α诱导血管内皮损伤中的作用及其机制:与TNF-α+Neg.RNA组相比,TNF-α+Sel S si RNA组细胞存活率降低[(26.57±7.62)(%)vs(52.27±13.17)(%),p<0.01]、NO含量降低(0.46±0.15 mmol/ml vs1.02±0.23 mmol/ml,p<0.01)、e NOS m RNA水平下降(0.18±0.12 vs 0.52±0.15,p<0.01)、e NOS蛋白表达减少(0.08±0.07 vs 0.63±0.22,p<0.01),而ET-1 m RNA水平升高(9.35±1.03 vs 6.73±1.30,p<0.01)、ROS释放增多(352.20±31.82 vs211.84±41.46,p<0.01)。与TNF-α+Neg.RNA组相比,TNF-α+Sel S si RNA组单核细胞粘附到内皮细胞数量增多(1371±98.51 vs 554±102.69,p<0.01)、s ICAM-1水平升高(93.10±10.14 pg/ml vs 60.52±10.51 pg/ml,p<0.01)、s VCAM-1水平升高(276.73±20.06 pg/ml vs 164.00±18.62 pg/ml,p<0.01),细胞ICAM-1 m RNA水平升高(25.75±5.49 vs 12.43±4.73,p<0.01)、VCAM-1 m RNA水平升高(46.33±5.93 vs 25.42±7.74,p<0.01)、IL-6 m RNA水平升高(8.71±1.44 vs4.92±0.93,p<0.01)、IL-1βm RNA水平升高(6.26±0.87 vs 3.10±1.03,p<0.01)、MCP-1 m RNA水平升高(9.14±1.35 vs 5.32±1.57,p<0.01)、IL-8 m RNA水平升高(5.25±1.21 vs 3.03±0.80,p<0.01),细胞p-p38 MAPK表达增多(1.87±0.23 vs1.14±0.35,p<0.01)、p-c-jun表达增多(1.76±0.18 vs 1.15±0.30,p<0.01)、p-IKKβ表达增多(0.68±0.09 vs 0.20±0.05,p<0.01)、p-IκBα表达增多(1.20±0.27 vs0.82±0.08,p<0.05)、胞核NF-κB p65表达增多(1.42±0.17 vs 0.78±0.22,p<0.01),而细胞胞浆NF-κB p65表达减少(0.08±0.04 vs 0.63±0.20,p<0.01)。结论:HFD喂养的LDLR KO小鼠主动脉粥样硬化病变区Sel S表达增加,说明Sel S可能参与AS的反应进程。TNF-α引起血管内皮细胞功能紊乱并激活p38 MAPK和NF-κB信号通路,应用p38 MAPK通路抑制剂和NF-κB通路抑制剂后减轻TNF-α诱导的内皮损伤,说明TNF-α通过激活p38 MAPK和NF-κB信号通路诱导内皮细胞功能紊乱。高表达Sel S抑制TNF-α诱导的内皮损伤及p38 MAPK和NF-κB通路激活,低表达Sel S促进TNF-α诱导的内皮损伤及p38 MAPK和NF-κB通路激活,说明Sel S在TNF-α诱导的内皮损伤中发挥保护作用并且与其影响p38 MAPK和NF-κB信号通路的激活相关。Sel S可能成为防治血管内皮损伤研究的新靶点,尤其在以炎症反应贯穿始终、以内皮损伤为关键环节的AS中得以体现。(本文来源于《大连医科大学》期刊2018-02-01）
内皮细胞功能障碍论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:环境中持久性有机污染物的暴露与心血管病关系密切。本研究拟探讨硫丹对血管内皮细胞炎症反应的影响及内质网应激机制。方法:采用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为研究对象,分为对照组,1μg/mL,5μg/mL,10μg/mL硫丹组和抑制剂组,硫丹组孵育不同浓度的硫丹24h,抑制剂组先孵育活性氧抑制剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC,3mmol/L)及内质网应激抑制剂STF-083010(10μmol/L)4h,再孵育硫丹24h。流式细胞术检测HUVEC ROS的平均荧光强度,透射电镜观察HUVEC的内质网变化,ELISA检测细胞上清液中白介素1-beta(IL-1β)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)及内皮素(endothelin1,ET-1)
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
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