1广州市戒毒管理局医院检验科；2中国人民武装警察部队广东省总队医院检验科；
3中山大学附属第三医院耳鼻喉科
摘要：目的：建立欧蒙EB病毒VCA-IgAELISA试剂盒在华南地区的诊断临界值，使其符合华南地区鼻咽癌筛查和诊断的需要。方法：采用VCA-IgAELISA法对本院1500例正常人、279例鼻咽癌病人和30例非鼻咽癌头颈部肿瘤病人进行测定。结果：采用比值1.33作为欧蒙VCA-IgAELISA法诊断临界值时，该实验在华南地区的诊断特异性为91.1%，灵敏度为90.0%。结论：欧蒙VCA-IgAELISA试剂盒在华南地区的诊断临界值以1.33较为合适，对于不同地区应该制定适合本地区的诊断临界值。
关键词：鼻咽癌；EB病毒；cutoff值；VCA
鼻咽癌的发生存在人种和地区性差异，中国的华南地区鼻咽癌是比较常见的头颈部肿瘤【1】。
目前，针对EB病毒对于鼻咽癌的血清学检测方法很多：间接免疫荧光法，免疫酶法【3】，ELISA等。VCA-IgAELISA法是目前比较成熟和广泛使用的鼻咽癌早期筛查指标之一[4]。相对于之前的免疫酶法，ELISA具有更加客观，减少人力，便于质量控制等优点。但是，目前尚无针对各个不同地区参考值的研究，特别是没有适合鼻咽癌高发区的诊断临界值及参考范围。故VCA-IgAELISA法存在特异性或者灵敏度不高等缺点，而且一些VCA-IgAELISA法也存在结果间缺乏可比性的问题，不利于治疗后的观察。
我们拟建立VCA-IgAELISA试剂盒在华南地区合适的诊断临界值，采用欧蒙公司生产的VCA-IgAELISA法试剂盒，通过对1500例高发地区正常人的检测，制定出适合华南地区欧盟VCA-IgAELISA法的诊断临界值，
1资料与方法
1．1，血浆标本
正常对照标本收集2010年3-8月在中山大学肿瘤医院体检标本1500例，确诊治疗前鼻咽癌279例，非鼻咽癌头颈部肿瘤30例。标本男女比例为5：3，年龄20～78岁。
1.2，检测方法
VCA-IgAELISA法采用欧蒙公司生产的试剂盒，Thermo酶免仪读取OD值结果，标本OD值/标准品OD值计算出比值结果。
1.3，统计学处理
采用SPSS软件进行处理，绘制ROC曲线，同时进行正态分布检验，t检验和卡方检验，统计年龄和性别对结果的影响。
2结果
2.1根据欧蒙试剂盒提供的cut-off值计算，比值大于0.8为阳性，1500例正常人中，VCA-IgAELISA法阳性标本为279例（阳性率16.5%）。279例病人中VCA-IgAELISA法阳性标本为262例（阳性率93.9%），30例非NPC头颈部肿瘤病人中VCA-IgAELISA法阳性标本为25例（阳性率16.6%），
2.2根据1500例正常人和279例病人的比值结果绘制ROC曲线，采用比值1.33作为欧蒙VCA-IgAELISA法诊断临界值时，该实验的特异性91.1%，灵敏度90.0%，性别无统计学差异（P=0.998，>0.05）；年龄按mean值均无统计学差异（P>0.05）。
2.3采用1.33作为cutoff值，1500例正常人中阳性标本为74例（阳性率4.1%），279例病人中阳性标本为278例（阳性率92.5%），30例非NPC头颈部肿瘤病人中阳性标本为25例（阳性率16.6%）。
讨论
检测EB病毒相关抗原的抗体对鼻咽癌的筛查和动态追踪，对鼻咽癌的高危人群的早期发现、早期诊断和治疗具有重要的临床价值【4】。EB病毒VCA-IgA对鼻咽癌的诊断具较高敏感性，可作为鼻咽癌高危人群临床筛查的重要指标。【5-6】采用欧蒙试剂盒对血浆中的VCA-IgA抗体进行检测的操作简便，与免疫酶法等方法相比没有主观判断上的误差，能更客观的体现VCA-IgA抗体的强度。我们在临床检测时发现采用其提供的参考值对本地区的健康人群进行NPC筛查，其假阳性率较高，达到10%左右，容易给临床医生的诊断及下一步检查造成误导。我们针对华南地区是鼻咽癌高发区的特殊情况，采用欧蒙VCA-IgAELISA法，通过试剂盒中的标准血清使各个结果间具备可比性，展开了对本地区针对该方法的cutoff值研究。研究结果显示，欧蒙VCA-IgAELISA法的ROC曲线下面积为0.958（95%CI，0.943-0.973；P<0.0001），采用1.33作为欧蒙VCA-IgAELISA法试剂盒的cutoff值，该实验在华南地区的诊断特异性为91.1%，灵敏度为90.0%。比值1.33明显高于试剂盒提供的诊断比值0.8，可能由于人群地域及饮食的差异所引起；男性组血清EBVCA-IgA比值虽略高于女性组，但差异无统计学意义（P＞0.05）；随着年龄的增加，血清EBVCA-IgA比值虽有--趋势，但差异亦无统计学意义（P＞0.05），由此可见不同的性别、年龄对人群血清EBVCA-IgA比值无影响，故我们认为整个人群可以共用1.33作为参考值。通过与参考值为0.8时的结果比较，我们发现采用0.8或1.33作为cutoff值对NPC病人的诊断无明显差异，阳性率分别为93.9%和92.5%，但是对于正常人群的筛查，采用1.33作为cutoff值可明显降低实验的假阳性率（4.1%），明显低于cutoff值为0.8时的16.4%。若采用cutoff值为1.8作为临床NPC的诊断，其特异性可以达到95.8%，灵敏度为83.5%。因此，我们认为在不同的地区和试验室应制定相应的cutoff值。在华南地区宜采用诊断临界值比值为1.33，可以降低临床检测的假阳性率，且对其检测的特异性影响不大，有利于临床的筛查。而作为诊断试验时，可以采用1.8作为cutoff值，可以提高其诊断的特异性。
参考文献：
[1]TomokazuYoshizaki，MakotoIto，ShigekyukiMurono，Currentunderstandingandmanagementofnasopharyngealcarcinoma，AurisNasusLarynx.2011，ANL-1534：8.
[2]YiZ，YuxiL，ChunrenL，etal.Applicationofanimmunoenzymaticmethodandanimmunoautoradiographicmethodforamasssurveyofnasopharyngealcarcinoma.Intervirology，1980，13：1622168.
[3]阳茂春，陆爱英，李山等，免疫酶法与ELISA法检测EB病毒VCA-IgA的比较.标记免疫分析与临床，2009，16：2.
[4]DopaktaHD，SchuyW.CompactEpastein-BarrvirusdiagnosisbasedonadefinedantigenmixandspecificIgA.Res.Virol.147：53-66（1996）.
[5]谢国武，免疫酶法EBV-VCA-IgA对鼻咽癌早期诊断的意义.当代医学报.2007，06，118.