新疆巴州疾病预防控制中心新疆841000
摘要：目的：探讨腹泻患者中诺如病毒RT-PCR检验结果及曲线分析。方法：对巴州地区哨点医院巴州第一人民医院上送的腹泻病粪便标本中的诺如病毒，进行RT-PCR检验。结果：从2015年上送的241份腹泻患者粪便中，检测出33份诺如病毒GⅡ型阳性标本，检出率达13.69%；检测出2份诺如病毒GⅠ型阳性标本，检出率为0.83%。结论：新疆巴州地区腹泻患者中诺如病毒多为GⅡ型，阳性标本RT-PCR曲线应与阳性对照保持相似的“S”型曲线，在FAM通道和HEX通道峰值要大于2000。
关键词：腹泻；诺如病毒RT-PCR检验
诺如病毒检测是我们实验室根据今年新疆卫生厅、巴州卫生局相关文件精神在2015年新开展的一个项目，当前诺如病毒感染在感染性腹泻中所占比例逐年增高[1]，及时在本地区开展诺如病毒的检验工作是十分重要和必要的，我们实验室结合前期具备较好的艾滋病、麻疹、流感、手足口病等RT-PCR检验人员及仪器、技术储备，严格按照诺如病毒检测方法，经过内部人员比对，方法比对，平行双样等质控方法，探讨了腹泻患者中诺如病毒RT-PCR检验结果及曲线分析，具体如下。
1资料与方法
1.1一般资料2015年5月-10月，我们实验室对巴州地区哨点医院巴州第一人民医院上送的241份腹泻病粪便标本进行了诺如病毒RT-PCR检验。哨点医院上送标本为水样便或粘液便，密封装在便盒中，每份大于5g（ml），当天上午采集后，下午上送至我们实验室，并立即进行检测。
1.2方法
1.2.1检验材料病毒RNA/DNA提取试剂盒（苏州天隆生物科技有限公司），诺如病毒核酸测定试剂盒（上海之江生物科技股份有限公司）。
1.2.2检验仪器美国bio-rad伯乐170-9780iQ5MulticolorReal-TimePCRDetectionSystem。
1.2.3检验方法根据《新疆细菌性肠道传染病监测方案》标本采集和检测方法的要求，取黄豆颗粒大小粪便或100μl水样腹泻物置于1.5ml离心管中，加入400μl裂解、氯仿混合液，13000rpm离心15min备用。在病毒RNA/DNA提取试剂盒孔板的1、7列中分别加入20μl蛋白酶K、200μl样本上清液，进行核酸提取。吸取NV分型核酸荧光检测混合液、内部对照、RT-PCR酶的混合液20μl置于薄壁PCR反应管中，然后将已处理标本RNA、阳性对照品、DEPC-H2O各5μl分别加入薄壁PCR反应管中，立即进行PCR扩增反应。最后根据Ct值进行试验结果判断，样本低于检测限，报告为阴性；在FAM通道样本高于检测限，报告为诺如病毒GⅠⅡ型阳性；在HEX通道样本高于检测限，报告为诺如病毒GⅡ型阳性。[2]
2结果
从2015年哨点医院上送的241份腹泻患者粪便中，我们共检测出35份诺如病毒阳性标本，其中，检测中33份诺如病毒GⅡ型阳性标本，检出率达13.69%；检测出2份诺如病毒GⅠ型阳性标本，检出率为0.83%。在诺如病毒RT-PCR检验过程中，我们发现上海之江生物科技股份有限公司生产的诺如病毒核酸测定试剂盒中的阳性对照在FAM通道的峰值平均值为3000左右，在HEX通道的峰值平均值为4000左右；我们检测的2份诺如病毒GⅠ型阳性标本在FAM通道的峰值平均值为2500，33份诺如病毒GⅡ型阳性标本在HEX通道的峰值平均值为3200，并且与阳性对照保持相似的“S”型曲线。我们将阳性标本冻存于-20℃，上送至新疆疾控中心实验室进行了复核，上级实验室肯定了我们的结果。
3讨论
目前，诺如病毒是导致儿童和成年人急性胃肠炎的主要病原体[3]，我国腹泻患者中诺如病毒流行的主要基因型为GⅡ型[4]，这与我们检测的结果相一致。特别是近年来，诺如病毒是引起腹泻病爆发的主要因素之一，一些沿海经济较发达的城市也时有幼儿园、学校诺如病毒感染爆发的相关报道，甚至有些成年人也会发生。诺如病毒感染所引起的腹泻，感染性强、发病急、传播速度快，所以学校、托儿所等儿童聚集场所的教师、保育员等应密切关注儿童，如发现恶心、呕吐，应及时告知家长，要求家长带患儿及时就医诊治，医院也应及时上送腹泻标本至疾控中心进行确诊。在社会上，应加大预防诺如病毒感染的宣传力度，通过网络、报纸、电视等媒介，让人们认识诺如病毒，建立安全健康的饮食、饮水习惯。也要向群众宣传，虽然目前诺如病毒的报道比以前多了很多，但大家也不要过于紧张，诺如病毒感染属于自限性疾病，出现多次腹泻的症状，也不要简单吃几片氟哌酸、泻立停等药物止泻，目前还没有特效的抗病毒治疗药物，应该及时去医院进行对症治疗，再加上适当的自我护理，患者一般多数会在一个星期内自愈。每年10月到次年3月是诺如病毒感染爆发的高峰期，地县级疾控中心应加强诺如病毒感染疫情监测，及时发现出处置疫情，进一步加强检验监测设备的更新和人员的培训，以适应当前各种疾病检测的要求，为人民的健康生活保驾护航。
参考文献：
[1]张玉侠等.上海市部分地区儿童轮状病毒腹泻的分子流行病学调查[J].中华流行病学杂志，2010，31（1）：103-104
[2]张颖，张伟诺瓦克样病毒及其检测方法.食品与药品，2006年第8卷第09期
[3]GlassRI，ParasharUD，EstesMK.Norovirusgastroenteritis.NEnglJMed2009；361（18）：1776-1785
[4]余建兴等.中国27省（市、自治区）2009-2013年门诊腹泻病例诺如病毒流行特征分析
[5]金大智.运用实时荧光PCR和DNA芯片技术检测和鉴定食源性致病菌方法的研究[D].辽宁师范大学，2004年.