导读:本文包含了永生化肿瘤论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:砷,HaCaT细胞,恶性转化,肿瘤干细胞
永生化肿瘤论文文献综述
杨桥樱[1]（2013）在《亚砷酸钠诱导人永生化角质形成细胞株HaCaT恶性转化及肿瘤干细胞标志物的表达及意义》一文中研究指出第一部分目的大量流行病学调查表明,长期摄入砷化物可引起多种癌症,其中最常见的是皮肤癌、肺癌和膀胱癌,因此,砷化物已被国际癌症协会确认为人类确定致癌物。本研究以低浓度NaAsO2慢性处理人永生化角质形成细胞株(HaCaT),建立砷诱导体外细胞恶性转化模型,为砷致癌的分子机制研究提供技术手段。方法1、细胞培养HaCaT细胞株在5%CO2、37℃条件下常规培养于完全培养基,隔日换液,待细胞进入对数生长期后,用胰蛋白酶-EDTA消化传代。2、确定诱导剂量采用MTT法测各种浓度NaAsO2对细胞增殖能力的影响,根据其结果确定诱导剂量。3、细胞处理根据MTT实验结果确定最佳诱导剂量为0.05ppm,配制2.0mM浓度的NaAsO2溶液,在每次细胞换液时按比例加入培养瓶中,以保证细胞长期暴露于0.05ppm的NaAsO2溶液中,同时设立对照组即Oppm进行同步培养和传代。4、细胞形态的观察细胞培养期间,在倒置显微镜下观察每代细胞形态的变化并采集图片。5、流式细胞术检测转化细胞的细胞周期选NaAsO2处理第0,15,25代叁组细胞测定细胞周期。6、细胞增殖能力测定收集Oppm和0.05ppm NaAsO2处理的对数生长期细胞,用MTT法测定其增殖能力。7、软琼脂集落形成实验0.6%Agar以0.5ml/每孔铺于24孔板,置37℃培养箱待用,取0.3%Agar与细胞悬液混匀,以0.5ml/每孔加入已铺好下层琼脂的24孔板,实验组与对照组均设置复孔,放置培养箱中培养,3周内每天观察细胞生长情况并采集图片。8、裸鼠皮下致瘤实验将NaAsO2处理第25代和第30代及对照组的的25代和第30代的HaCaT细胞按2×106/0.2ml密度注射于Balb/c裸鼠右侧腋窝皮下,定期观察肿瘤形成及将肿瘤组织取出,测量肿瘤体积并作组织切片、HE染色后进行病理学鉴定。结果1、低浓度NaAsO2慢性处理所致细胞生物学特性变化0.05ppmNaAsO2处理的HaCaT细胞传代培养.30代以后,细胞形态和生长方式均发生明显改变,增殖能力旺盛,倍增时间明显缩短。2、低浓度NaAsO2慢性处理所致细胞恶性转化和致瘤性0.05ppm NaAsO2所致恶性转化HaCaT细胞能在软琼脂培养基上形成集落,且能在裸鼠皮下形成肿瘤；肿瘤组织病理学切片显示：恶性转化HaCaT细胞形成低分化鳞癌。从而说明低浓度砷化物慢性处理可引起HaCaT细胞恶性转化并具有致瘤性。结论1、低浓度NaAsO2慢性处理可使HaCaT细胞生物学特性发生改变。2、低浓度NaAsO2慢性处理可引起HaCaT细胞发生恶性转化且具有致瘤性。第二部分目的：探讨肿瘤干细胞标志物CD44V6在亚砷酸钠诱导人永生化角质形成细胞HACAT转化过程中的表达及意义。方法：分别对第0,5,10,15,20,25,30代低浓度NaAsO2处理的HaCaT细胞和同期配对的对照组HaCaT细胞滴片及裸鼠成瘤组织切片进行荧光免疫组化染色；同时提取上述不同时间点两组细胞的总蛋白,利用蛋白印迹(Western blotting)等实验技术对可能存在的肿瘤干细胞标志物进行筛选。结果：长期低浓度NaAsO2处理的HaCaT细胞中,肿瘤干细胞标志物CD44v6蛋白含量有逐渐增加的表现；对照组CD44v6蛋白含量未发现明显变化。恶性转化的HaCaT细胞(第25代)其CD44v6蛋白含量比同期对照组HaCaT细胞(第25代)显着增加(P<0.05)。NaAsO2处理组HaCaT细胞在15代后,CD44v6阳性表达显着增加,定位于细胞膜,在25代和30代约有8%的阳性率。CD44v6在肿瘤组织细胞中阳性表达率约为50%(++)；而肿瘤外组织细胞未发现有CD44v6表达。结论：长期低水平砷暴露所致皮肤损伤或癌组织中可能存在及少数的具有自我更新能力、分化潜能的癌干细胞,而CD44v6是其潜在的特异性分子标志物。(本文来源于《广西医科大学》期刊2013-05-01）
冯帆,高旭东,陆荫英,张帆,王博[2]（2012）在《LINE-1 ORF-1p对肝脏肿瘤细胞系和肝源永生化细胞系增殖的调控作用》一文中研究指出目的研究反转座子LINE-1编码蛋白LINE-1 ORF-1p对肝脏肿瘤细胞系以及肝源永生化细胞系增殖能力的影响。方法构建针对LINE-1 ORF-1编码序列的siRNA表达载体(LINE-1 ORF-1p psilence2.1-U6-siRNA),转染肝脏肿瘤细胞系Bel-7402、SMMC-7721、HepG2和肝源永生化细胞系LO2。采用Western blotting检测LINE-1 ORF-1p siRNA表达载体对LINE-1 ORF-1编码蛋白LINE-1 ORF-1p表达的影响,采用MTT法检测LINE-1 ORF-1p表达受抑对细胞增殖的影响。结果在肝脏肿瘤细胞HepG2、Bel-7402、SMMC-7721和肝源永生化细胞LO2中,转染LINE-1 ORF-1p siRNA表达载体均能降低LINE-1 ORF-1p的表达水平,并从第3天起显着抑制前述细胞的增殖(P<0.05),其抑制率分别为63%、51%、40%、43%。结论抑制LINE-1 ORF-1p蛋白表达后可使肝脏肿瘤细胞系和永生化细胞系的增殖受抑。(本文来源于《解放军医学杂志》期刊2012年03期）
张晓娟,董坚[3]（2009）在《永生化树突状细胞与肿瘤研究进展》一文中研究指出树突状细胞(Dendritic Cell,DC)是生物体内免疫系统中抗原递呈细胞(Antigen Presenting Cell,APC),是机体对免疫原产生免疫应答的重要功能细胞之一。DC广泛存在于血液、淋巴、肝脾及皮肤等组织,能激活功能性淋巴细胞,诱(本文来源于《微循环学杂志》期刊2009年02期）
赵擎[4]（2007）在《人永生化肝细胞的基础研究及人肝肿瘤细胞系生物人工肝的临床试验研究》一文中研究指出背景及目的各种原因所致的肝衰竭严重威胁着人类健康，原位肝移植由于费用昂贵、供体短缺限制其在临床的应用。生物人工肝支持系统(Bioartificial liversupport system，BALSS)借助体外装置暂时替代肝脏功能，直至自体肝脏功能恢复或进行肝移植，是目前肝衰竭治疗研究的热点之一。肝细胞是生物人工肝支持系统的核心部分，从生物工程学角度讲，理想的用于生物人工肝的肝细胞要人源性、表型正常，容易获得和培养，能在体外迅速生长增殖至高密度，保持良好的分化状态，具有成熟肝细胞的所有生物代谢功能。但是人原代肝细胞存在体外培养条件苛刻、存活时间有限、增殖传代困难及来源短缺等问题。端粒(telomere)是位于真核细胞染色体末端，由富含鸟嘌呤核苷酸的DNA重复序列与端粒结合蛋白构成的蛋白-DNA复合体，对维持基因组完整性和功能稳定性有重要作用，细胞分裂过程中发生的端粒末端结构的变化与正常细胞衰老和永生化密切相关。端粒酶介导的端粒延长是细胞中端粒缩短的主要补偿机制，对正常细胞延长分裂代数起着重要作用。人端粒酶逆转录酶(Human Telomerase Reverse Transcriptase，hTERT)是端粒酶活性的主要决定因素。本研究克隆人hTERT的编码区全序列，选用绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein，GFP)作为目的基因表达标志物，构建hTERT真核表达质粒，并在细胞水平对所构建质粒的表达效能进行鉴定，为hTERT稳定转染细胞提供简单、快速的检测方法；同时探讨体外分离小块肝组织培养正常成人肝细胞的方法，为人肝脏细胞的永生化提供细胞材料；并且初步评价人肝肿瘤细胞系生物人工肝治疗重型肝炎肝衰竭患者的临床疗效和安全性。方法首先采用PCR方法扩增hTERT基因和GFP基因，再利用基因重组技术构建真核表达质粒VR1012-GFP-hTERT和pEGFP-C1-hTERT，筛选阳性克隆进行双酶切、聚合酶链反应和序列测定。将鉴定正确的重组质粒转染至HepG2细胞，在荧光显微镜下观察GFP的表达情况，然后收集转染后的细胞，提取核蛋白，用免疫印迹方法验证hTERT的表达强弱。收集外科手术切除的成人肝组织块，采用胰蛋白酶和胶原酶分离人肝细胞，并用普通培养和鼠尾胶原进行培养，观察分离培养效果。第二部分选择2006年6月至2007年4月在解放军302医院住院的重型肝炎肝衰竭的患者，采用2∶1随机、对照分组，其中12例接受血浆透析滤过(plasma diafiltration，PDF)和人肝肿瘤细胞系生物人工肝治疗，5例作为对照组仅接受PDF治疗，两组的内科治疗基本相同。治疗前后，以及随访过程中检测生命体征、肝功能、凝血功能、甲胎蛋白等。采用CHISS 2005统计软件进行统计学分析。结果1．重组质粒VR1012-GFP-hTERT和pEGFP-C1-hTERT的双酶切、聚合酶链反应鉴定和测序结果均与预期完全相符。2．转染HepG2细胞，荧光显微镜下观察hTERT和GFP的融合蛋白在细胞核内表达增强。免疫印迹结果显示，HepG2细胞转染pEGFP-C1-hTERT和VR1012-GFP-hTERT后，其hTERT表达水平较未转染组明显增强。3．用胶原酶消化法所获的的人原代肝细胞活性约80％，贴壁能力和生长状态相对较好，分离1.5×1.5×1.5cm大小的肝组织块可获得约(2-2.5)×10~7个肝细胞。4．人肝肿瘤细胞系生物人工肝治疗组的84天生存率高于对照组(83％vs 40％，P＜0.01)，两组的生存时间分别为84.58±1.56天vs 54.60±4.18天(P＞0.05)。COX比例风险模型分析可知，生物人工肝治疗是减少相对危险度延长生存时间的主要因素。生物人工肝治疗过程中，胆红素水平进行性下降。AST和AFP在治疗过程中一过性升高，随访84天未发现肿瘤发生的证据。结论1．成功构建了重组真核表达质粒VR1012-GFP-hTERT和pEGFP-C1-hTERT，为hTERT转染细胞提供简洁、快速、实时的检测方法。2．用胶原酶分离成人原代肝细胞的方法具有操作简单、所获得的肝细胞数量较多、活性较高、节省胶原酶用量的优点，为肝细胞永生化提供细胞材料。3．人肝肿瘤细胞系生物人工肝总体性能良好，能促进患者体力恢复，降低胆红素水平，提高近期生存率，同时近期安全性良好。(本文来源于《中国人民解放军军医进修学院》期刊2007-05-25）
宋立兵,廖雯婷,曾木圣,张玲[5]（2006）在《新的肿瘤标志物Bmi-1基因诱导正常鼻咽上皮细胞永生化》一文中研究指出癌基因Bmi-1能调节细胞的增殖以及肿瘤形成,它的过表达能使人成纤维细胞越过衰老阶段,并能诱导人乳腺上皮细胞永生化。本研究发现,与正常鼻咽上皮细胞相比较,Bmi-1在鼻咽癌细胞株中表达上调,免疫组化研究发现,Bmi-1在38．7％ (29／75)的鼻咽癌组织中高表达,并且其表达水平与鼻咽癌的预后密切相关;然而(本文来源于《中国细胞生物学学会医学细胞生物学学术大会论文集》期刊2006-05-01）
孙津民,李金钟,马丁[6]（2005）在《端粒酶在细胞永生化及肿瘤诊断中的作用》一文中研究指出端粒酶是一种新的肿瘤标记物,细胞永生化是细胞获得持续生长增殖能力的特性,永生化的细胞有无限增殖生长性,可长期传代。综观国内外的研究情况,端粒酶在肿瘤的诊断上尚有可观的价值,已成人类的研究热点,现已确知在85%的人肿瘤组织中发现了端粒酶活性的表达,因此,已把端粒酶作为肿瘤基因诊断的指标和治疗的新靶点。(本文来源于《职业与健康》期刊2005年08期）
张丰,李青,朱晓慧,赵一岭,马福成[7]（2005）在《DNA永生化链和肿瘤干细胞关系的初步研究》一文中研究指出目的:探讨DNA永生化链的分配方式与肿瘤干细胞之间的关系.方法:采用启动和促进两阶段化学诱癌方法在小鼠背部诱导皮肤肿瘤;用溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法检测DNA永生化链在发育期、成年期小鼠皮肤成体干细胞及皮肤肿瘤干细胞中的滞留时间;图像分析DNA含量方法检测肿瘤细胞倍体变化.结果:诱癌4mo后,40只小鼠中有17只背部分别长出1～3个皮肤肿瘤.BrdU阳性细胞变化情况检测显示,24h后发育期、成年期标记的小鼠皮肤上皮细胞和肿瘤组织的细胞均为阳性,阳性部位为细胞核;60d后发育期标记的小鼠皮肤上皮中仍有少数细胞为阳性,它们主要存在于毛囊的隆突部位(bulge),少数位于皮肤基底层.标记后30d检测成年期标记的小鼠皮肤上皮细胞,结果均为阴性.标记后30d检测肿瘤组织发现仍有少数细胞BrdU阳性,这些肿瘤细胞主要分布在肿瘤实质组织和间质组织的交界部位;标记后60d检测,肿瘤组织中不再有BrdU阳性细胞.图像分析DNA含量方法发现上述17例小鼠肿瘤都是非整倍体核型.结论:小鼠皮肤成体干细胞存在DNA永生化链,其在有丝分裂过程中发生非随机分配,肿瘤干细胞中可能存在DNA永生化链,其分配方式趋向随机分配.(本文来源于《第四军医大学学报》期刊2005年13期）
张蕾,刘彤华,刘鸿瑞,顾长芳[8]（2000）在《人乳头状瘤病毒16型E6E7肿瘤性转化人永生化支气管上皮细胞》一文中研究指出目的 探讨人乳头状瘤病毒 (HPV) 16型E6E7片段对人永生化支气管上皮细胞系TR细胞的作用。方法 将E6E7片段构建入逆转录病毒载体 ,导入TR细胞 ,观察生长特性和致瘤性的改变 ;并用免疫沉淀 (IP) Westernblot检测p2 7蛋白功能及FAK、桩蛋白数量及磷酸化状况。结果 嘌呤霉素抗药性克隆TR/E6E7有E6E7的存在和稳定表达 ;TR/E6E7细胞系细胞生长加快 ,软琼脂集落形成能力增强 ,并具有裸鼠致瘤性 ;TR/E6E7细胞中与cyclinE/CDK结合的p2 7数量减少 ,即cyclinE/CDK活性增强。结论 转染E6E7的TR细胞可在裸鼠体内产生肿瘤 ,说明HPV感染在肺癌的发生中起一定作用。E6E7加快细胞增殖可能与它减少p2 7和cyclinE/CDK结合有关(本文来源于《中华病理学杂志》期刊2000年05期）
林晨,邓友平,郑杰,付明,陈洁平[9]（2000）在《叁氧化二砷诱导人肿瘤细胞凋亡和G2+M期阻滞但引起人永生化宫颈上皮细胞G1期阻滞》一文中研究指出目的 研究 As2 O3引起肿瘤细胞凋亡和对细胞周期的影响。方法 采用 DNA凝胶电泳 ,流式细胞仪分析、RT- PCR和 Western免疫印迹等技术检测细胞凋亡的发生。结果 由 As2 O3诱导的人肺腺癌 GL C- 82、胃腺癌 MGC- 80 3和 SGC- 790 1、食管癌 Ec10 9、宫颈癌 He L a细胞凋亡前 ,细胞阻滞在 G2 +M期 ,上述细胞均表现为对c- myc基因的下行调节 ;但在导致永生化人宫颈上皮 HCE16 /3细胞凋亡之前 ,细胞却被阻滞在 G1期 ,对 c- m yc基因表达无影响。结论 As2 O3引起细胞凋亡与细胞周期阻滞有关 ,在肿瘤细胞和前恶变的 HCE16 /3细胞中阻滞的时期不同 ,这可能与 c- myc基因表达的改变与否有关(本文来源于《中国医学科学院学报》期刊2000年02期）
郑杰,张建民[10]（1999）在《HPVDNA永生化人宫颈上皮细胞的生长方式与宫颈上皮内肿瘤的比较》一文中研究指出目的：研究人乳头瘤病毒（HPV）DNA永生化人宫颈上皮细胞在器官培养的生长特点及将其与体内宫颈上皮内肿瘤（CIN）进行比较。方法：先用HPV16和18型DNA转染人宫颈上皮细胞，建立永生化的人宫颈上皮细胞株，再用胶原筏培养方法分析永生化人宫颈上皮细胞在器官培养的生长特点，将其与体内CIN的形态进行了比较。结果：人宫颈上皮细胞经HPV16和18DNA转染后，可以使其变成一种永生化细胞。细胞生物学研究显示永生化细胞是一种前恶性细胞。胶原筏培养显示水生化人宫颈上皮细胞的生长行为类似体内CIN。结论：HPV感染主要影响宫颈癌的发生的早期阶段。(本文来源于《临床与实验病理学杂志》期刊1999年06期）
永生化肿瘤论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的研究反转座子LINE-1编码蛋白LINE-1 ORF-1p对肝脏肿瘤细胞系以及肝源永生化细胞系增殖能力的影响。方法构建针对LINE-1 ORF-1编码序列的siRNA表达载体(LINE-1 ORF-1p psilence2.1-U6-siRNA),转染肝脏肿瘤细胞系Bel-7402、SMMC-7721、HepG2和肝源永生化细胞系LO2。采用Western blotting检测LINE-1 ORF-1p siRNA表达载体对LINE-1 ORF-1编码蛋白LINE-1 ORF-1p表达的影响,采用MTT法检测LINE-1 ORF-1p表达受抑对细胞增殖的影响。结果在肝脏肿瘤细胞HepG2、Bel-7402、SMMC-7721和肝源永生化细胞LO2中,转染LINE-1 ORF-1p siRNA表达载体均能降低LINE-1 ORF-1p的表达水平,并从第3天起显着抑制前述细胞的增殖(P<0.05),其抑制率分别为63%、51%、40%、43%。结论抑制LINE-1 ORF-1p蛋白表达后可使肝脏肿瘤细胞系和永生化细胞系的增殖受抑。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
永生化肿瘤论文参考文献
[1].杨桥樱.亚砷酸钠诱导人永生化角质形成细胞株HaCaT恶性转化及肿瘤干细胞标志物的表达及意义[D].广西医科大学.2013
[2].冯帆,高旭东,陆荫英,张帆,王博.LINE-1ORF-1p对肝脏肿瘤细胞系和肝源永生化细胞系增殖的调控作用[J].解放军医学杂志.2012
[3].张晓娟,董坚.永生化树突状细胞与肿瘤研究进展[J].微循环学杂志.2009
[4].赵擎.人永生化肝细胞的基础研究及人肝肿瘤细胞系生物人工肝的临床试验研究[D].中国人民解放军军医进修学院.2007
[5].宋立兵,廖雯婷,曾木圣,张玲.新的肿瘤标志物Bmi-1基因诱导正常鼻咽上皮细胞永生化[C].中国细胞生物学学会医学细胞生物学学术大会论文集.2006
[6].孙津民,李金钟,马丁.端粒酶在细胞永生化及肿瘤诊断中的作用[J].职业与健康.2005
[7].张丰,李青,朱晓慧,赵一岭,马福成.DNA永生化链和肿瘤干细胞关系的初步研究[J].第四军医大学学报.2005
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[9].林晨,邓友平,郑杰,付明,陈洁平.叁氧化二砷诱导人肿瘤细胞凋亡和G2+M期阻滞但引起人永生化宫颈上皮细胞G1期阻滞[J].中国医学科学院学报.2000
[10].郑杰,张建民.HPVDNA永生化人宫颈上皮细胞的生长方式与宫颈上皮内肿瘤的比较[J].临床与实验病理学杂志.1999