导读:本文包含了酶切活性论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:鼻病毒,3C蛋白,表达,纯化
酶切活性论文文献综述
王莹,庞立丽,王慧敏,袁越,田婵[1]（2017）在《人A组和B组鼻病毒3C蛋白表达、纯化及酶切活性验证》一文中研究指出目的在大肠埃希菌中表达人A组和B组鼻病毒(rhinovirus,RV)3C蛋白,纯化后检测其酶切活性。方法分别将A组鼻病毒RV1B和B组鼻病毒RV6的3C蛋白编码基因克隆至原核表达载体p ET-30a中,构建重组原核表达质粒p ET-30a-1B-3C和p ET-30a-6-3C,转化至E.coli BL21感受态细胞中,IPTG诱导表达,表达产物经镍柱纯化。利用具有3C蛋白酶切位点的15VP1-6P蛋白,分析不同温度(4和37℃)下3C蛋白的酶切活性。结果原核表达的目的蛋白为带His标签的可溶性蛋白,RV1B-3C蛋白相对分子质量约25 000,RV6-3C蛋白相对分子质量约23 000,纯度可达约70%。RV1B-3C和RV6-3C蛋白对15VP1-6P蛋白均具有酶切作用,而且在4和37℃均有酶切活性。结论在大肠埃希菌中成功表达了具有酶切活性的A组和B组鼻病毒3C蛋白,为进一步研究鼻病毒的致病机制奠定了基础。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2017年05期）
李晓敏,任红艳,毕延震,刘西梅,郑新民[2]（2016）在《CRISPR/Cas9体外酶切检测猪生长抑素基因定点修饰靶点活性的研究》一文中研究指出本试验旨在通过CRISPR/Cas9体外酶切法检测猪生长抑素(SST)基因定点修饰靶点的活性。试验设计5个长20bp的单链导向RNA(sgRNA),即SST-sgRNA-g1、SST-sgRNA-g2、SST-sgRNA-g3、SST-sgRNA-g4和SST-sgRNA-g5。化学合成sgRNA寡核苷酸序列,将寡核苷酸序列连接到可同时表达Cas9和sgRNA的质粒中,挑选正确克隆的质粒作为模板进行体外转录形成SST-sgRNA。利用CRISPR/Cas9体外酶切含靶点的DNA片段,根据酶切条带的灰度换算成sgRNA活性。结果显示目的sgRNA寡核苷酸双链成功插入到质粒中且序列正确,以质粒为模板体外转录SST-sgRNA成功。靶位点经Cas9蛋白酶切后与标准sgRNA1和sgRNA2酶切活性作比较,确定靶点SST-sgRNA-g1、SST-sgRNA-g4和SST-sgRNA-g5活性较高,可为在细胞水平、胚胎水平做基因定点修饰提供依据。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2016年01期）
欧丽娟,刘宏伟[3]（2014）在《基于核酸外切酶酶切反应的纳米金比色法检测T4多聚核苷酸激酶活性》一文中研究指出建立了基于纳米金凝聚变色效应的检测T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)活性的方法。鉴于寡核苷酸链标记的纳米金能够稳定存在于一定浓度的盐离子缓冲溶液中,利用5'羟基修饰的发夹型探针作为金标探针,有T4 PNK存在时,金标探针5'羟基磷酸化,λ核酸外切酶被激活,酶切发夹型探针茎部双链DNA片段,接着在RecJf核酸外切酶作用下降解纳米金上修饰的残余的单链DNA,使得纳米金在一定盐离子浓度下团聚,溶液变成蓝紫色。结果表明,T4 PNK激酶检测的线性响应范围为0.5~4.0 U/mL,检测下限为0.24 U/mL。(本文来源于《分析试验室》期刊2014年06期）
刘沙[4]（2014）在《基于模拟酶切vMIP-II的CCR1受体拮抗多肽的设计与生物活性研究》一文中研究指出目的：以广谱趋化因子拮抗剂vMIP-II为研究基础，基于vMIP-II与趋化因子家族的结构相似性，利用生物信息学方法设计和筛选来源于vMIP-II的CCR1受体拮抗性多肽，并对其进行生物学活性研究。方法：运用基于结构的多重序列比对分析和蛋白酶模拟酶切等生物信息学方法，寻找vMIP-II结合CCR1的保守区和包含保守区的多肽片段，根据理化性质分析结果筛选合适的多肽片段进行化学合成。采用脂质体转染法，将重组质粒pcDNA4/TO-CCR1转染HEK293细胞，构建表达CCR1受体的HEK293/CCR1细胞系，作为多肽C18P的研究平台。通过[35S]GTPγS结合实验验证CCR1的受体功能以及检测多肽C18P激活受体的能力，趋化实验证明多肽C18P的趋化及趋化抑制作用，钙流实验评价多肽C18P对受体引发的细胞信号转导的阻断作用，配体受体结合实验测定多肽C18P对受体的亲和力，利用ELISA和荧光定量PCR从分子水平探究多肽C18P对内毒素（LPS）炎症细胞模型的影响。结果：（1）建立的HEK293/CCR1细胞系能高效表达CCR1，而且CCR1具有正常的受体功能，MIP-1α对CCR1的EC50为5.57ng/ml。（2）多肽C18P是利用生物信息学筛选到的来源于vMIP-II的CCR1的特异性拮抗剂，本身不具有趋化性，其抑制HCC-1、MIP-1α和RANTES引起的趋化运动的IC50分别为19.08ng/ml、21.27ng/ml和10.56ng/ml，并可基本阻断由HCC-1、MIP-1α和RANTES引起的钙离子内流。（3）配体受体实验结果表明，多肽C18P能完全抑制125I-MIP-1α与CCR1受体结合，其IC50为14.63ng/ml。当配体浓度达到100ng/ml时，其对125I-MIP-1α结合受体的抑制率均达到80%，对配体受体结合的IC50为15.09ng/ml。[35S]GTPγS结合实验进一步证明C18P是CCR1的拮抗剂，而非激动剂。（4）成功建立内毒素细胞炎症模型。ELISA法检测结果显示：与LPS组相比，低剂量（1.5ng/ml）的多肽C18P和地塞米松（DM）对细胞模型TNF-α、IL-6和IL-8的蛋白分泌没有明显的抑制作用；而中、高剂量（5ng/ml和15ng/ml）的多肽C18P和DM均对TNF-α、IL-6和IL-8的蛋白分泌具有明显的抑制作用。荧光定量PCR检测结果显示：多肽C18P组（15ng/ml）和DM对照组（15ng/ml）对TNF-α、IL-6和IL-8mRNA的表达具有显着的抑制作用。NO含量检测结果显示：低剂量（1.5ng/ml）的多肽C18P和DM对细胞模型NO的分泌没有明显的抑制作用，而中、高剂量（5ng/ml和15ng/ml）的多肽C18P和DM均对NO的分泌具有明显的抑制作用。结论：本研究证明来源于vMIP-II的多肽C18P是CCR1受体的特异性拮抗剂，能抑制细胞的趋化运动和钙离子内流，与受体有较好的亲和力并能阻碍配体激活受体G蛋白，且能抑制内毒素炎症细胞模型分泌炎性细胞因子，具有作为抗炎药物的研究前景。(本文来源于《暨南大学》期刊2014-05-01）
张平平,张凤,戴克胜[5]（2013）在《活性氧在血小板GPIbα酶切作用中的研究进展》一文中研究指出血小板膜糖蛋白(glycoprotein,GP)Ib-IX-V复合物受体在血小板执行止血功能中起着关键作用。当血管内皮细胞受到损伤(如动脉粥样硬化斑块破裂,感染,外伤等),血小板膜表面GPIbα与血管内皮细胞表面暴露的血管性血友病因子(vonWillebrand factor,vWF)识别并结合,启动血小板的粘附并形成血栓,起到止血作用。GPIbα还含有凝血酶、P选择素和Mac-1等多个蛋白的结合位点。因此,血小板GPIbα在参(本文来源于《血栓与止血学》期刊2013年03期）
陈丽敏,林楠,张静,朱元贵,陈晓春[6]（2011）在《人参皂苷Rg1通过NFκB调节β-分泌酶的活性减少APP酶切产物β-淀粉样蛋白的生成》一文中研究指出目的 Aβ的生成和聚集发生在AD的早期,并由此触发一系列复杂的病理生理过程,包括神经元退行性变、神经原纤维缠结的形成、细胞炎症反应、神经元丢失、最终导致认知障碍。淀粉样前体蛋白(Amyloid precursor protein,APP)在β-和Y-分泌酶作用下,通过淀粉源途径剪切形成Aβ,异常突变的APP直接影响了β-和Y-分泌酶对APP的剪切效率和产物,与Aβ异常增加有关。β-分泌酶是Aβ产生的限速酶,BACE1是最重要的β-分泌酶,BACE1的调节受多种因素影响,BACE1的启动子包含PPARY、NF-κB等转录因子结合位点。本研究旨在观察人参皂苷Rg1能否通过NF-κB调节β-分泌酶活性、影响N2a/APP695细胞Aβ的生成和代谢,从源头上缓解或/和减轻AD病人的神经病理改变。(本文来源于《2011全国老年痴呆与衰老相关疾病学术会议第叁届山东省神经内科医师（学术）论坛论文汇编》期刊2011-04-15）
曾维爱,李小一,邓正平,戴陈伟,罗经仁[7]（2010）在《斜纹夜蛾核多角体病毒郴州株的形态学、基因组酶切图谱及生物活性测定》一文中研究指出对斜纹夜蛾核多角体病毒(SpliNPV)郴州株的多角体形态进行了扫描电镜观察,多角体直径在1.5～2.5μm之间;多角体经切片后透射电镜观察,每个病毒囊膜内包被的核衣壳数为2～7个;提取SpliNPV郴州株和广州株的基因组进行限制性内切酶分析,两者的图谱比较近似;分别以不同浓度的两株SpliNPV病毒悬液感染3龄初斜纹夜蛾幼虫,其半致死浓度分别为1.8×106 OBs/mL和4.2×106 OBs/mL,两者在统计学上没有显着差异。(本文来源于《中国烟草科学》期刊2010年03期）
陈丽敏[8]（2009）在《人参皂苷Rg1通过PPARγ和NFκB调节β-分泌酶的活性减少APP酶切产物β-淀粉样蛋白的生成》一文中研究指出阿尔茨海默病(Alzheimer disease, AD)是一种与年龄密切相关的神经系统变性疾病。AD特征性的神经病理改变是脑组织细胞外神经炎性斑块(Neurite plaques, NP)和细胞内神经原纤维缠结(Neurofibrillary tangle, NFT)形成,以及神经元突触的丢失或神经元数量的减少。AD患者脑内Aβ1-40和Aβ1-42水平与其认知功能明显相关。异常突变的淀粉样前体蛋白(Amyloid precursor protein, APP)直接影响了β-和γ分泌酶对APP的剪切效率和产物,与Aβ异常增加有关。大多数的APP在α分泌酶作用下通过非淀粉源途径代谢,APP在β-和γ分泌酶作用下通过淀粉源途径剪切形成Aβ。β-分泌酶是Aβ产生的限速酶,BACE1是最重要的β-分泌酶,BACE1的调节受多种因素影响,BACE1的启动子包含PPARγ、NF-κB等转录因子结合位点。人参皂苷Rg1是人参具有代表性的单体成分。研究已经发现Rg1能显着改善多种动物模型的学习记忆能力。因此本课题观察人参皂苷Rg1能否通过影响Aβ的生成和代谢,从源头上缓解或/和减轻AD病人的神经病理改变。利用稳定表达突变型APP695的N2a细胞(N2a/APP695),通过ELISA检测Aβ观察人参皂苷Rg1是否影响Aβ生成,然后利用RT-PCR、蛋白免疫印迹、激光共聚焦显微镜等方法探讨人参皂苷Rg1对Aβ代谢有关的β-分泌酶及其上游转录因子的活性等方面的影响。研究结果如下:1、人参皂苷Rg1能降低N2a /APP695细胞外液Aβ1-40和Aβ1-42水平,而对APP蛋白表达水平没有明显的影响。2、2.5μM人参皂苷Rg1作用6-12h后,N2a/APP695细胞BACE1的mRNA和蛋白水平显着降低,同时β分泌酶产物β-CTF的蛋白水平降低,相反α分泌酶产物α-CTF的蛋白水平增加。3、人参皂苷Rg1作用后,N2a /APP695细胞PPARγ和NF-κB p65蛋白表达水平明显增加并诱导促进PPARγ和NF-κB的核转位。以上结果提示,人参皂苷Rg1能通过激活PPARγ和NF-κB,增加与BACE1启动子相应位点的结合,从而抑制BACE1的转录和翻译,降低其对APP酶切的活性,最终减少Aβ1-40和Aβ1-42生成。(本文来源于《福建医科大学》期刊2009-04-01）
郭爱云,王梁华,孙铭娟,焦豫良,任娜[9]（2008）在《以MMP酶切位点为连接臂构建Vasostatin和TRAIL的融合蛋白及其生物学活性分析》一文中研究指出以基质金属蛋白酶(MMP)酶切位点(PLGLWA)为连接臂,采用重组PCR技术获得血管形成抑制素(vasostatin,V)和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL,T)的融合蛋白质编码序列,将该融合编码序列插入原核表达载体pMAL-c2中,重组质粒转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,分别得到MBP-VT和MBP-TV融合蛋白,Amylose Resin亲和层析柱纯化.初步纯化的融合蛋白MBP-VT在体外内皮细胞增殖抑制实验、肿瘤细胞凋亡诱导实验中显示了明显的活性,而MBP-TV的作用不明显;体外酶切实验和培养肿瘤细胞上清酶切融合蛋白的免疫印迹分析,证实融合蛋白MBP-VT皆能被正确酶切.上述结果表明成功表达了融合蛋白VT,该融合蛋白具有双重抗肿瘤活性,并可在肿瘤高表达的MMP作用下裂解为V和T.(本文来源于《中国生物化学与分子生物学报》期刊2008年10期）
陈建国,郑连英[10]（2006）在《不同酶切方式制备的壳寡糖抑菌活性的研究》一文中研究指出壳寡糖可以抑制多种病原微生物的生长,其抑菌活性与其数均相对分子质量有密切关系.由专一性的壳聚糖混合酶、内切酶和外切酶降解制备3种不同数均相对分子质量的壳寡糖C-1、C-2和C-3样品,通过抑制生长速率的方法,研究了3种壳寡糖对几种常见植物病原菌的拮抗作用,并采用抑菌圈法测定了壳寡糖对植物病原菌的最低抑菌质量浓度.结果表明,C-1和C-2都有较好的抑菌活性,C-2的抑菌活性明显优于C-1,C-3基本上没有抑菌活性,反而促进了植物病原菌的生长.抑菌效果因壳聚糖酶的酶切方式、壳寡糖的质量浓度和供试菌种而异.(本文来源于《浙江大学学报(工学版)》期刊2006年11期）
酶切活性论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本试验旨在通过CRISPR/Cas9体外酶切法检测猪生长抑素(SST)基因定点修饰靶点的活性。试验设计5个长20bp的单链导向RNA(sgRNA),即SST-sgRNA-g1、SST-sgRNA-g2、SST-sgRNA-g3、SST-sgRNA-g4和SST-sgRNA-g5。化学合成sgRNA寡核苷酸序列,将寡核苷酸序列连接到可同时表达Cas9和sgRNA的质粒中,挑选正确克隆的质粒作为模板进行体外转录形成SST-sgRNA。利用CRISPR/Cas9体外酶切含靶点的DNA片段,根据酶切条带的灰度换算成sgRNA活性。结果显示目的sgRNA寡核苷酸双链成功插入到质粒中且序列正确,以质粒为模板体外转录SST-sgRNA成功。靶位点经Cas9蛋白酶切后与标准sgRNA1和sgRNA2酶切活性作比较,确定靶点SST-sgRNA-g1、SST-sgRNA-g4和SST-sgRNA-g5活性较高,可为在细胞水平、胚胎水平做基因定点修饰提供依据。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
酶切活性论文参考文献
[1].王莹,庞立丽,王慧敏,袁越,田婵.人A组和B组鼻病毒3C蛋白表达、纯化及酶切活性验证[J].中国生物制品学杂志.2017
[2].李晓敏,任红艳,毕延震,刘西梅,郑新民.CRISPR/Cas9体外酶切检测猪生长抑素基因定点修饰靶点活性的研究[J].中国畜牧兽医.2016
[3].欧丽娟,刘宏伟.基于核酸外切酶酶切反应的纳米金比色法检测T4多聚核苷酸激酶活性[J].分析试验室.2014
[4].刘沙.基于模拟酶切vMIP-II的CCR1受体拮抗多肽的设计与生物活性研究[D].暨南大学.2014
[5].张平平,张凤,戴克胜.活性氧在血小板GPIbα酶切作用中的研究进展[J].血栓与止血学.2013
[6].陈丽敏,林楠,张静,朱元贵,陈晓春.人参皂苷Rg1通过NFκB调节β-分泌酶的活性减少APP酶切产物β-淀粉样蛋白的生成[C].2011全国老年痴呆与衰老相关疾病学术会议第叁届山东省神经内科医师（学术）论坛论文汇编.2011
[7].曾维爱,李小一,邓正平,戴陈伟,罗经仁.斜纹夜蛾核多角体病毒郴州株的形态学、基因组酶切图谱及生物活性测定[J].中国烟草科学.2010
[8].陈丽敏.人参皂苷Rg1通过PPARγ和NFκB调节β-分泌酶的活性减少APP酶切产物β-淀粉样蛋白的生成[D].福建医科大学.2009
[9].郭爱云,王梁华,孙铭娟,焦豫良,任娜.以MMP酶切位点为连接臂构建Vasostatin和TRAIL的融合蛋白及其生物学活性分析[J].中国生物化学与分子生物学报.2008
[10].陈建国,郑连英.不同酶切方式制备的壳寡糖抑菌活性的研究[J].浙江大学学报(工学版).2006