导读:本文包含了乙酸激酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:产酸克雷伯氏菌,λRed技术,乙酸激酶
乙酸激酶论文文献综述
叶广彬,郭睿,孙珊珊,修宝林,葛菁萍[1]（2018）在《λRed技术构建产酸克雷伯氏菌乙酸激酶基因缺失突变株》一文中研究指出乙酸是2,3-丁二醇典型代谢途径中的主要副产物之一,并对2,3-丁二醇的代谢产生影响。乙酸激酶(acetate kinase,ack)是乙酸生成途径中的关键酶,敲除ack基因,理论上可以阻断乙酸的产生,从而提高2,3-丁二醇的产量和得率。本文利用λRed技术构建乙酸激酶基因敲除重组质粒p T-LKR,通过酶切、纯化获得线性片段ack L-Kanr-ackR,将其电转化至Klebisella oxytoca HD79中,卡那霉素抗性筛选阳性转化子。结果表明,经PCR及测序验证K.oxytoca HD79乙酸激酶缺失工程菌株构建成功,为后续进一步提高2,3-丁二醇的产量和扩大菌株选择范围奠定基础。(本文来源于《黑龙江大学自然科学学报》期刊2018年03期）
赵春光,徐庆阳,张成林,陈宁[2]（2017）在《乙酸激酶编码基因缺失的L–色氨酸生产菌株的理性构建》一文中研究指出针对L–色氨酸生产菌株(Escherichia coli TRTH)发酵生产L–色氨酸过程中乙酸积累的问题,本文采用基因组学的方法证实了该菌株基因组上存在乙酸激酶编码基因ack A及tdc D的完整基因序列;并通过敲除ackA、tdcD构建出菌株TRTHA(TRTH,Δack A)、TRTHT(TRTH,Δtdc D)、TRTHAT(TRTH,Δack AΔtdc D),进而考察ack A或/和tdc D缺失对L–色氨酸发酵的影响.结果表明:基因ack A或/和tdc D的缺失会使得乙酸积累减少、菌体生物量及其L–色氨酸产量增加,但同时会造成谷氨酸积累量的增加;菌株TRTHA的生物量及L–色氨酸产量均高于TRTHT.利用TRTHAT菌株发酵生产L–色氨酸时,菌体生物量、L–色氨酸产量和糖酸转化率分别为47.48,g/L、40.52,g/L和15.44%,,较TRTH菌株分别提高了6.03%,、7.94%,及7.82%,;乙酸和谷氨酸积累量分别为1.41,g/L、8.58,g/L,较TRTH菌株分别降低了10.19%,、提高了12.15%,.由TRTH与TRTHAT菌株的代谢流分析得知,与出发菌株TRTH相比,TRTHAT菌株的乙酸合成代谢流降低了72.78%,谷氨酸合成代谢流提高了13.13%,,L–色氨酸合成代谢流是TRTH菌株的1.74倍.(本文来源于《天津科技大学学报》期刊2017年06期）
张明磊,武丽达,王希庆,陈光,王刚[3]（2016）在《基于pGhost4系统保加利亚乳杆菌乙酸激酶敲除载体的构建》一文中研究指出保加利亚乳杆菌凭借其微生物特性和效能优异等特点成为当下产乳酸最重要的微生物菌株之一。乙酸是保加利亚乳杆菌代谢乳酸最主要的副产物,它的大量生成降低葡萄糖的代谢利用率,并且消耗了能量。乙酸激酶是控制乙酸生成的关键酶,敲除乙酸激酶基因,理论上可以阻断戊糖磷酸途径中乙酸的生成,从而优化代谢途径提高葡萄糖代谢乳酸的利用率。研究以Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus ATCC 11842公布的乙酸激酶基因ack序列设计引物,以保加利亚乳杆菌基因组DNA为模板,PCR克隆出ack上下游片段,利用重迭PCR技术将上下游片段拼接在一起,并连入具有温敏性的p Ghost4载体。(本文来源于《吉林农业大学学报》期刊2016年05期）
董杰[4]（2016）在《丹参乙酸镁对钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ促大鼠血管重塑作用的影响》一文中研究指出目的:研究探讨丹参乙酸镁对Ca MKⅡδ促血管重塑作用的影响,抑制大鼠主动脉平滑肌细胞内Ca MKⅡ的表达水平,观察平滑肌细胞的增值、凋亡等生物学行为的变化,并探讨细胞内Ca MKIIδ与血管特异性mi RNAs(mi RNA-21、mi RNA-221、mi RNA-223、mi RNA-143、mi RNA-145)的关系。方法:以原代培养的雄性SD大鼠主动脉平滑肌细胞为研究对象,根据丹参乙酸镁溶液浓度的不同将细胞分为四个组:空白对照组、高浓度组(100μmol)、中浓度组(50μmol)、低浓度组(25μmol)。应用CCK-8方法检测细胞增殖活性的变化,应用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化,通过荧光定量PCR检测Ca MKIIδ及相应mi RNAs表达情况的改变。结果:(1)在丹参乙酸镁干预大鼠主动脉平滑肌细胞72h后,细胞内Ca MKIIδ的表达水平明显降低。结果显示,正常细胞与高、中、低不同浓度丹参乙酸镁干预的细胞相比,其表达明显下降(P<0.05)。(2)使用100μmol丹参乙酸镁干预平滑肌细胞72h后,细胞增殖活性受到明显抑制,与正常生长的细胞组相比,有显着性差异(P<0.05),中浓度组与低浓度组有不同程度的抑制趋势,但与空白对照组相比,无显着差异(P>0.05);丹参乙酸镁100μmol干预平滑肌细胞96h后,细胞增殖活性抑制明显(P<0.05),中浓度组及低浓度组有不同程度的抑制趋势,但无显着差异(P>0.05);100μmol丹参乙酸镁干预平滑肌细胞120h时,细胞细胞增殖活性受到明显抑制(P<0.05),50μmol丹参乙酸镁干预平滑肌细胞120h时(P<0.05),低浓度组有抑制趋势,但无显着差异(P>0.05)。(3)Transwell小室显微镜下细胞计数分别为112.0±2.1(正常细胞组),29.0±1.5(高浓度组),实验组相对于对照组迁移力明显下降(P<0.05)。(4)流式细胞仪结果显示各组细胞凋亡率分别为7.9%(正常细胞组),11.5%(低浓度组),13.5%(中浓度组),30.8%(高浓度组),经丹参乙酸镁干预后的平滑肌细胞凋亡率明显增加,并且抑制作用呈现浓度依赖性(7.9%vs11.5%;7.9%vs13.5%;7.9%vs30.8%)。(5)检测mi RNAs的表达变化,发现在抑制Ca MKIIδ后的血管平滑肌细胞中mi RNA-21表达下调(P<0.05),mi RNA-221、mi RNA-223表达有下降趋势,但与对照组相比,无显着差异(P>0.05),mi RNA-143、mi RNA-145的表达上调(P<0.01)。实验表明用丹参乙酸镁抑制Ca MKIIδ后,上述mi RNAs表达发生了相应变化,提示这些mi RNAs调控细胞增殖、迁移、凋亡,进而参与血管重塑的可能途径与Ca MKII密切相关。结论:丹参乙酸镁可以使细胞内Ca MKIIδ的表达水平降低,进而抑制细胞增殖及迁移,促进细胞凋亡,mi RNA-21等血管特异性mi RNAs可能是通过对Ca MKIIδ基因的调节,实现其促血管重塑的作用。研究证实在血管重塑形成中,Ca MKIIδ是mi RNA-21等血管特异性mi RNAs的重要靶基因之一。(本文来源于《山西省中医药研究院》期刊2016-03-01）
叶广彬,宋刚,凌宏志,葛菁萍,平文祥[5]（2015）在《Klebisella oxytoca HD79乙酸激酶部分基因(ack)的克隆与序列分析》一文中研究指出乙酸是2,3-丁二醇典型代谢途径中的主要副产物之一,它的大量生成能够造成环境p H值的改变并且抑制菌体的生长,并对2,3-丁二醇的代谢产生影响。乙酸激酶是乙酸生成的关键酶,敲除其相关基因,理论上可以减少乃至消除乙酸的产生,从而提高2,3-丁二醇的产量和得率。本研究根据Klebisella oxytoca KCTC1686和Klebisella oxytoca HD79乙酸激酶基因ack序列的相似性设计引物,以产酸克雷伯氏菌基因组DNA和质粒载体p T-ack为模板,利用PCR克隆得到了乙酸激酶部分基因ack,长度为856bp,无碱基缺失。ORF分析发现该部分基因没有完整的开放阅读框,但是全部位于Klebisella oxytoca KCTC1686 ack基因的开放阅读框内。结果表明该片段为Klebisella oxytoca HD79乙酸激酶部分基因序列,为后续构建产酸克雷伯氏菌乙酸激酶突变株奠定了基础。(本文来源于《中国农学通报》期刊2015年14期）
颜炳坤[6]（2014）在《联合葡萄糖激酶与乙酸激酶催化的ATP再生系统酶法合成葡萄糖-6-磷酸》一文中研究指出克隆大肠杆菌(Escherichia coli:E.coli)、热葡糖苷酶地芽孢杆菌(Geobacillus thermoglucosidasius:G. thermo)中的乙酸激酶(Ackase)基因ack、及葡萄糖激酶(Glkase)基因glk,并构建出四株重组菌株,分别命名为pACKE. pACKG、pGLKE和pGLKG.经IPTG诱导表达、SDS-PAGE分析可以看出,这四株重组菌均能表达出大量可溶性蛋白。经酶活分析,pACKE中Ackase活性为7.57U/mg、pACKG中Ackase活性为5.12U/mg. pGLKE中Glkase活性为10.12U/mg、pGLKG中Glkase活性为7.32U/mg。其中,37℃预处理后,pACKE中Ackase活性虽最高但热稳定性较差。42℃预处理后保加利亚乳杆菌来源Ackase和pACKG中Ackase的热稳定性较好。60℃预处理pACKG中Ackase保持较好的热稳定性。与破碎细胞相比完整细胞中的叁种来源Ackase的热稳定性均有所提高。另外,60℃预处理后pGLKG中Glkase热稳定性较好。利用上述构建的重组菌酶法合成葡萄糖-6-磷酸(G-6-P)。当10mM葡萄糖、20mM乙酰磷酸二钠、0.5mMATP、5mM磷酸盐缓冲液(pH7.0)、Ecoli来源4.856U Glkase和3.632U Ackase配成2mL反应液,37℃下反应1h,G-6-P的产率可达到97%。当改用G. thermo来源且经60℃预处理1h的4.856U Glkase和3.632U Ackase配成2mL反应液,37℃下反应1h,G-6-P的产率可达到79%。(本文来源于《华东理工大学》期刊2014-05-26）
张舟[7]（2014）在《明串珠菌乙酸激酶和葡聚糖蔗糖酶基因失活的研究》一文中研究指出明串珠菌（Leuconostoc）是腌菜、韩国泡菜和德国泡菜等发酵蔬菜中的优势菌株，也是美国FDA认可的GRAS菌，不生产内毒素，能分泌特异性胞外蛋白且没有降解蛋白活性，所以明串珠菌是表达外源蛋白的很好的候选菌，在食品工业中具有巨大的应用价值。本课题分别失活了明串珠菌的乙酸激酶基因ack和葡聚糖蔗糖酶基因dts，得到相应的基因失活菌株，再与出发菌株进行生理生化特性对比，从而研究碳代谢的变化规律，为基因工程育种奠定了基础。明串珠菌电转化的再现性差、效率稍低，因此本研究优化了电转化条件。以pCW4为载体，明串珠菌为受体菌，固定接菌量和氨苄浓度，优化了PBS溶液的pH、LiAc-DTT孵育时间、溶菌酶的量和孵育液中蔗糖浓度。利用MRS(含0.48μg/mL氨苄)培养明串珠菌(初始OD600为0.048)，OD600为0.5左右时收集菌体，用LiAc-DTT溶液(含100U/mL溶菌酶、0.5mol/L蔗糖)孵育20min，再用pH6.9的PBS洗涤和电转化，得到较高的转化率，为2.47×105CFU/μgDNA。为了揭示碳流和能量流在代谢网络中的走向，失活肠膜明串珠菌ack基因。运用PCR技术分别扩增ack的上、下游同源臂，构建具有四环素抗性标记的同源重组载体，导入到明串珠菌经两次交换，使肠膜明串珠菌的ack失活，并检测突变菌株与原始菌株的生理特性。PCR验证表明，突变菌株的扩增产物长度比原始菌株的大1200bp左右。与原始菌株相比，突变菌株的乙酸产量减少49.1%，乙醇产量增加8.3%，双乙酰产量减少16.3%。甘露醇在食品工业和医药工业中有广泛应用，肠膜明串珠菌可以转化蔗糖生产甘露醇、葡聚糖和其他产物。为了提高甘露醇的产量，本研究通过失活肠膜明串珠菌dts阻断了葡聚糖的合成途径并研究了dts失活对甘露醇生产的影响。本研究对编码葡聚糖蔗糖酶的基因dts进行了克隆和测序。利用重迭延伸技术将dts基因的上游和下游同源臂连接在一起，再连接到pUC19上，获得同源重组载体pUC19-dts。将其导入肠膜明串珠菌，经过双交换，失活肠膜明串珠菌的dts基因，获得了不含抗性标记的dts失活菌株。发酵实验检测结果显示突变菌株的葡聚糖产量降低28.8%，甘露醇产量提高15.3%。(本文来源于《河北工业大学》期刊2014-05-01）
刘春禹,郑桂彬,于静华[8]（2013）在《土槿皮乙酸B通过活性氧和有丝分裂原蛋白激酶诱导MCF-7细胞凋亡的研究》一文中研究指出土槿皮乙酸B(PAB)通过活性氧诱导肿瘤细胞MCF-7凋亡,同时也通过调控有丝分裂原蛋白激酶(MAPK)家族蛋白来调控凋亡,但活性氧和MAPK的关系还不清楚,本研究探讨活性氧和MAPK家族蛋白的关系。4μmol/L PAB在36h诱导细胞死亡,活性氧清除剂抑制PAB的作用,并降低PAB的抑制率;同时,PAB促进JNK磷酸化,抑制ERK的磷酸化,此作用被活性氧清除剂抑制。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2013年03期）
张红红[9]（2011）在《运动员乙二胺四乙酸抗凝血浆与血清尿素及肌酸激酶的检测比较》一文中研究指出目的对运动员乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝血浆与血清尿素(BUN)和肌酸激酶(CK)的检测值进行比较分析,为体育领域的生化测试工作提供参考。方法赛艇队运动员24名,根据教练员训练安排和监测计划,从中选择3次作为研究,即72人次。每次受试运动员采血前1d均休息调整,于次日晨安静、空腹状态下,无菌抽取肘静脉血1mL,一部分移入一次性EDTA抗凝管,颠倒充分混匀,检测血常规后,离心取血清;另一部分移入离心管,待自然凝固后离心取血清。同时用全自动生化分析仪测定BUN和CK值。测试两组运用SPSS StatisticsV17.0进行配对t检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果两组BUN和CK的检测结果差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 EDTA(EDTA-K2、EDTA-K3)抗凝血浆替代血清进行BUN、CK的检测是可行的,其可简化采血的过程和方式,有采血量少、运动员易于接受、速度快、节省器材等优点,值得推广。(本文来源于《检验医学与临床》期刊2011年23期）
逄晓阳,刑鑫,刘国文,王哲[10]（2010）在《用CODEHOP设计简并引物克隆反刍月形单胞菌K6乙酸激酶基因片段》一文中研究指出利用CODEHOP设计细菌乙酸激酶的简并引物,选用1对引物ACKSe以高效丙酸生成菌反刍月形单胞菌K6基因组DNA进行PCR,得到749 bp PCR产物,产物经pMD18-T载体克隆转化至DH5α大肠杆菌中,测序后经Blastx比对,此DNA产物与其他菌属来源的乙酸激酶蛋白序列具有相似性,所克隆的序列即为K6的乙酸激酶基因片段。用CODEHOP程序化设计的简并引物可信性强,阳性率高。该基因的成功克隆为丙酸生成菌K6乙酸代谢工程研究提供了依据。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2010年01期）
乙酸激酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
针对L–色氨酸生产菌株(Escherichia coli TRTH)发酵生产L–色氨酸过程中乙酸积累的问题,本文采用基因组学的方法证实了该菌株基因组上存在乙酸激酶编码基因ack A及tdc D的完整基因序列;并通过敲除ackA、tdcD构建出菌株TRTHA(TRTH,Δack A)、TRTHT(TRTH,Δtdc D)、TRTHAT(TRTH,Δack AΔtdc D),进而考察ack A或/和tdc D缺失对L–色氨酸发酵的影响.结果表明:基因ack A或/和tdc D的缺失会使得乙酸积累减少、菌体生物量及其L–色氨酸产量增加,但同时会造成谷氨酸积累量的增加;菌株TRTHA的生物量及L–色氨酸产量均高于TRTHT.利用TRTHAT菌株发酵生产L–色氨酸时,菌体生物量、L–色氨酸产量和糖酸转化率分别为47.48,g/L、40.52,g/L和15.44%,,较TRTH菌株分别提高了6.03%,、7.94%,及7.82%,;乙酸和谷氨酸积累量分别为1.41,g/L、8.58,g/L,较TRTH菌株分别降低了10.19%,、提高了12.15%,.由TRTH与TRTHAT菌株的代谢流分析得知,与出发菌株TRTH相比,TRTHAT菌株的乙酸合成代谢流降低了72.78%,谷氨酸合成代谢流提高了13.13%,,L–色氨酸合成代谢流是TRTH菌株的1.74倍.
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
乙酸激酶论文参考文献
[1].叶广彬,郭睿,孙珊珊,修宝林,葛菁萍.λRed技术构建产酸克雷伯氏菌乙酸激酶基因缺失突变株[J].黑龙江大学自然科学学报.2018
[2].赵春光,徐庆阳,张成林,陈宁.乙酸激酶编码基因缺失的L–色氨酸生产菌株的理性构建[J].天津科技大学学报.2017
[3].张明磊,武丽达,王希庆,陈光,王刚.基于pGhost4系统保加利亚乳杆菌乙酸激酶敲除载体的构建[J].吉林农业大学学报.2016
[4].董杰.丹参乙酸镁对钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ促大鼠血管重塑作用的影响[D].山西省中医药研究院.2016
[5].叶广彬,宋刚,凌宏志,葛菁萍,平文祥.KlebisellaoxytocaHD79乙酸激酶部分基因(ack)的克隆与序列分析[J].中国农学通报.2015
[6].颜炳坤.联合葡萄糖激酶与乙酸激酶催化的ATP再生系统酶法合成葡萄糖-6-磷酸[D].华东理工大学.2014
[7].张舟.明串珠菌乙酸激酶和葡聚糖蔗糖酶基因失活的研究[D].河北工业大学.2014
[8].刘春禹,郑桂彬,于静华.土槿皮乙酸B通过活性氧和有丝分裂原蛋白激酶诱导MCF-7细胞凋亡的研究[J].中国畜牧兽医.2013
[9].张红红.运动员乙二胺四乙酸抗凝血浆与血清尿素及肌酸激酶的检测比较[J].检验医学与临床.2011
[10].逄晓阳,刑鑫,刘国文,王哲.用CODEHOP设计简并引物克隆反刍月形单胞菌K6乙酸激酶基因片段[J].中国兽医学报.2010