导读:本文包含了肿瘤细胞放射敏感性论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:程序性坏死,MLKL,放射治疗,表达谱芯片
肿瘤细胞放射敏感性论文文献综述
李崧[1]（2018）在《程序性坏死在辐射诱导的细胞死亡中的作用与肿瘤异质性对放射敏感性的影响》一文中研究指出放射治疗是盆腹腔肿瘤重要的治疗手段,放射治疗在快速发展的同时,仍面临着一些挑战。一方面,肿瘤周围健康组织不可避免地暴露于放射线下从而引起早期炎症反应,最终引起后期结构和功能的改变。另一方面,由于肿瘤异质性的存在,导致肿瘤对于放疗的敏感性存在异质性,在肿瘤放疗过程中,仍存在固有或获得性的放疗抵抗。电离辐射通过损伤细胞DNA引起细胞以多种形式死亡,其中辐射诱导的细胞程序性死亡机制当中,细胞凋亡被广泛研究。而细胞坏死长期以来被认为是一种细胞被动死亡的方式,最近的研究进展显示细胞中存在着控制坏死的专用分子通路而使得这一观点被重新审视。程序性细胞坏死(Necroptosis)是一种主动调节细胞坏死的机制,主要通过受体蛋白互作的两个蛋白激酶RIP1(receptor interacting protein kinase 1)和 RIP3 传递死亡信号,募集并磷酸化 MLKL(mixed lineage kinase domain-likeprotein)从而执行程序性细胞坏死。程序性坏死发生时细胞膜发生破裂,细胞内容物会释放到周围组织中,作为损伤相关分子模式被免疫系统识别从而产生炎症反应。然而程序性坏死是否参与辐射诱导的细胞死亡仍不清楚,进一步阐明辐射诱导的细胞程序性死亡机制能够为减轻放疗带来的副作用以及为肿瘤放疗增敏提供新的思路。本实验对程序性坏死是否参与辐射诱导的细胞死亡进行了探索。首先,我们将MLKL基因敲除的小鼠进行7Gy全身照射,观察MLKL的敲除对小鼠照射后生存率的影响,发现MLKL的敲除会使小鼠对照射更加敏感。观察记录照射后小鼠体重变化,检测脏器系数、血常规、组织病理和免疫组织化学等指标,我们发现MLKL敲除小鼠的脾脏、胸腺和肾脏在照射后损伤更加严重。其次,我们利用CRISPR-Cas9系统构建了 RIP1与MLKL敲除的小鼠黑色素瘤B16细胞系以及MLKL敲除的小鼠结肠癌MC38细胞系,进行照射后克隆形成的检测;以及在敲除MLKL的细胞系中加入zVAD-FMK联合照射,然而MLKL的敲除对于细胞的克隆形成率未产生显着影响。我们进行了体内实验的验证,发现MLKL基因对移植瘤的生长以及放射敏感性没有影响。最后,我们利用基因表达谱芯片(Microarray)的方法检测MLKL敲除后细胞差异化表达基因。我们筛选出了 Peli1基因,在B16细胞中敲除MLKL后Peli1的转录水平受到下调,并对该结果进行了 RT-qPCR和Western blot的验证。综合以上实验,我们推断,程序性坏死执行蛋白MLKL参与辐射诱导的细胞死亡,但其具体的作用机制仍需进一步探究。乳腺癌的异质性对其有效治疗提出了挑战,解决乳腺癌异质性的问题需要更加深入理解肿瘤发生和发展的机制。目前用于解释肿瘤内异质性的模型有肿瘤干细胞,克隆演进和肿瘤细胞去分化重编程。在本研究中,我们提出了一种新的模型用来解释肿瘤内异质性的形成,即癌症传播模型。我们发现被癌基因转化的乳腺癌细胞(MCF10A.NeuT)当与正常的乳腺上皮细胞(MCF10A)共培养时,能够将后者转化。转化后的MCF10A细胞表现出癌细胞的特性,包括增殖和迁移能力增强,顶端—基底极性的丧失以及形成紊乱的腺泡结构。与亲代细胞相比,转化的MCF10A细胞显示出不同的EMT特征。来自癌细胞的条件培养基也足以诱导正常细胞的癌性转化,癌细胞分泌的细胞因子可能参与该过程。我们使用细胞因子芯片进一步筛选并确定了 MCF10A.NeuT细胞与MCF10A细胞差异表达的细胞因子。此外,与MCF10A.NeuT细胞相比,转化的癌细胞对于放射治疗更加耐受。这些结果拓展了我们对癌症进展过程中异质性发展机制的理解,并且使用这种新的模型分析临床样本有助于我们在癌症干预过程中设计新的治疗方法。(本文来源于《北京协和医学院》期刊2018-05-01）
朱月红[2]（2018）在《RMP对肿瘤细胞放射敏感性的影响及其机制的初步研究》一文中研究指出目的:研究不同肿瘤细胞辐照敏感性的差异以及RMP对肿瘤细胞放射敏感性的影响,并对其中具体机制进行初步探讨。方法:1.CCK-8检测经不同剂量的~(60)Coγ射线辐照处理后,不同种类的肿瘤细胞的增殖情况,筛选出辐照敏感细胞株与辐照耐受株,同时确定后续实验中CCK-8实验的辐照剂量。2.克隆形成实验检测CNE-1、HEp-2及HepG2经不同剂量的~(60)Coγ射线辐照后克隆形成的情况。3.彗星电泳检测不同辐照敏感性的细胞株经~(60)Coγ射线辐照处理后DNA损伤修复情况。4.流式细胞术检测不同辐照敏感性的细胞株经~(60)Coγ射线辐照处理24 h、72 h后细胞凋亡情况。5.Western Blot检测不同辐照敏感性的细胞株辐照前后p-ATM、p65等损伤修复相关蛋白的表达。6.CCK-8检测不同敏感性的细胞株瞬时转染2μg RMP过表达质粒,经~(60)Coγ射线辐照处理后细胞的增殖情况。7.流式细胞术检测MCF-7细胞瞬时转染2μg RMP经~(60)Coγ射线辐照处理后细胞凋亡情况。8.通过裸鼠皮下移植瘤实验,检测辐照前后RMP对移植瘤生长的影响。9.HE染色检测移植瘤的生长状况。结果:1.CCK-8结果显示人鼻咽癌细胞株CNE-1及人喉癌细胞株HEp-2细胞株在10Gy辐照时增殖能力就明显受到抑制,在20 Gy、50 Gy时增殖能力抑制情况更为严重;而在肝癌细胞株HepG2、Hep3B及乳腺癌细胞株MCF-7中,辐照对细胞增殖的抑制作用并不明显;在肝癌细胞株Huh7及人肺癌细胞株A549中,辐照对细胞增殖的影响介于两者之间。2.在辐照剂量为2 Gy、4 Gy及6 Gy时,辐照耐受细胞株HepG2与两株辐照敏感细胞株CNE-1、HEp-2相比显着增高,有显着性差异(P<0.005)。3.彗星电泳结果显示在CNE-1、HEp-2和MDA-MB-231叁株细胞中,辐照后彗星电泳彗尾的OTM值较未辐照组明显增加;而在HepG2、Hep3B及MCF-7叁株细胞中彗星电泳彗尾的OTM值较未辐照组增加得并不明显。4.在辐照24 h后,辐照敏感株和辐照耐受株细胞的凋亡率较未辐照组无明显差异。在辐照72 h后,辐照敏感的鼻咽癌细胞株CNE-1及人喉癌细胞株HEp-2的凋亡率较未辐照组明显增高;而辐照耐受的细胞株凋亡率则相对较低。5.Western Blot结果显示,不同辐照敏感性的细胞受到辐照后都可以促进ATM磷酸化及p65磷酸化。6.在辐照敏感株CNE-1和HEp-2中,与对照组相比,过表达RMP可以显着增加其对辐照的耐受性(P<0.001);在辐照耐受株HepG2、MCF-7中,过表达RMP也可以增加其对辐照的耐受性,但无显着性差异。7.MCF-7中瞬时转染NC、RMPo及RMPi经辐照处理,与未辐照组相比NC组与RMPo组辐照前后凋亡率差异不明显,RMPi组辐照后凋亡率明显提高。8.裸鼠皮下移植瘤实验结果显示RMP过表达组移植瘤体积显着大于对照组,RMP干扰组移植瘤体积显着小于对照组。9.HE染色结果显示辐照后RMPo组肿瘤细胞明显增多,生长状况较对照组好;RMPi组肿瘤细胞密度较对照组明显降低,细胞生长情况较差。结论:1.筛选出CNE-1、HEp-2、MDA-MB-231叁株细胞为辐照敏感细胞株,HepG2、Hep3B及MCF-7叁株细胞为辐照耐受细胞株。2.不同辐照敏感性的肿瘤细胞中,辐照都可以激活的NFκB途径。3.RMP可以增加肿瘤细胞对辐照的耐受性,相反干扰RMP后增加肿瘤细胞的放射敏感性。4.RMP过表达可以促进移植瘤生长,增加移植瘤对辐照的耐受性。(本文来源于《苏州大学》期刊2018-04-01）
刘艳艳,孙颖川,李潜[3]（2017）在《不同肿瘤细胞内源性DNA双链断裂水平与放射敏感性参数SF2的相关性》一文中研究指出目的探讨不同肿瘤细胞内源性DNA双链断裂(DSBs)水平与放射敏感性参数SF2是否存在相关性。方法选取肺癌细胞系H1299、A549,乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-435s为研究对象。利用2 Gy射线照射后克隆形成实验检测不同细胞的放射敏感性指标SF2;通过实时荧光定量PCR方法测定不同细胞相对端粒长度变化;通过免疫荧光标记法标记不同肿瘤细胞γ-H2AX蛋白,检测不同细胞内源性DSBs损伤水平。通过统计学分析评价肿瘤细胞内源性DSBs与放射敏感性的关系。结果免疫荧光法标记γ-H2AX蛋白显示4种肿瘤细胞内源性DSBs水平肿瘤细胞除H1299与A549之间差异无统计学意义(P>0.05)外,其他任意两组之间差异均有统计学意义(P<0.05);4种肿瘤细胞的内源性DSBs水平与SF2、端粒长度的相关系数R分别为-0.95和-0.97,有统计学意义(P<0.05)。结论肿瘤细胞内源性DSBs可以作为一种预测肿瘤细胞放射敏感性的标志,它们之间的相关性可能与端粒部分参与了内源性DSBs产生和修复有关。(本文来源于《广东医学》期刊2017年22期）
张玉宇,王利波,赵钦,李戈,龚守良[4]（2016）在《肿瘤微环境与肿瘤细胞放射敏感性关系的研究进展》一文中研究指出肿瘤放射治疗(放疗)是肿瘤治疗的重要手段之一。然而,电离辐射等因素可改变肿瘤微环境,而其微环境对电离辐射产生抵抗性,降低肿瘤细胞的放射敏感性,这已成为肿瘤放疗的瓶颈、复发的根源。为此,本文主要综述肿瘤微环境中肿瘤细胞放射敏感性的差异、缺氧微环境诱导肿瘤细胞的辐射抗性、肿瘤细胞DNA损伤修复与放射敏感性、肿瘤基质和干细胞对放射敏感性的影响及肿瘤细胞凋亡和自噬与放射敏感性等方面内容,以加深对肿瘤微环境与肿瘤细胞放射敏感性之间关系的理解,并对辐射抗性的肿瘤细胞及其肿瘤干细胞采取可能的干预措施,达到有效治疗肿瘤的目的。(本文来源于《吉林大学学报(医学版)》期刊2016年05期）
徐召南,王舒煜,毕也,胡月,周丽佳[5]（2016）在《药物介导的自噬改变对肿瘤细胞放射敏感性的影响》一文中研究指出放射治疗诱导的自噬与导致细胞死亡的凋亡起到的作用不同,其具有既可以导致细胞死亡又可以保护细胞生存的双重性。自噬这一过程在放射治疗和辐射毒性中的抗肿瘤效应还不明确。一系列药物试验已经证实诱导或者抑制自噬,直接影响细胞毒性和放射治疗的效果,同时发生的目标性自噬和凋亡似乎进一步增强了放射治疗的抗肿瘤效应。本文就调节放射诱导的自噬在肿瘤细胞中作用的研究进展进行简要综述。(本文来源于《海南医学》期刊2016年13期）
沈月明[6]（2016）在《长链基因间非编码RNA-p21对乏氧肿瘤细胞放射敏感性的影响和机制研究》一文中研究指出目的:本研究通过建立稳定转染敲低长链基因间非编码RNA-p21(lincRNA-p21)的细胞株,探讨敲低lincRNA-p21对乏氧肿瘤细胞放射敏感性的影响及其机制。方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测人肝癌细胞SMMC7721和脑胶质瘤细胞U251MG经不同剂量X射线照射和乏氧(1%O2)培养不同时间后lincRNA-p21的表达。构建含lincRNA-p21 shRNA慢病毒载体,经慢病毒转染建立稳定敲低lincRNA-p21的SMMC7721和U251MG细胞株。MTT实验检测细胞增殖,流式细胞术检测乏氧和常氧肿瘤细胞周期和凋亡,划痕实验检测细胞迁移,克隆形成实验检测肿瘤细胞放射敏感性,MDC染色法和Western blot检测细胞自噬。结果:SMMC7721和U251MG细胞在2、4和6 Gy X射线照射后,lincRNA-p21表达随照射剂量增加逐渐升高。乏氧(1%O2)培养24和48 h,lincRNA-p21表达随培养时间递增。稳定转染lincRNA-p21 shRNA有效下调乏氧肿瘤细胞中lincRNA-p21表达。乏氧(1%O2)培养48 h,敲低lincRNA-p21细胞SMMC7721和U251MG发生G2/M期阻滞,细胞凋亡明显增加,抑制细胞增殖和迁移。相比较而言,常氧条件下敲低lincRNA-p21对人肝癌细胞和胶质瘤细胞增殖、周期、凋亡和迁移没有明显改变。敲低lincRNA-p21使乏氧肿瘤细胞中HIF-1α经泛素-蛋白酶体途径降解,GLUT1蛋白含量减少,并通过调控HIF-1/Akt/mTOR/P70通路抑制细胞自噬,提高乏氧肿瘤细胞放射敏感性,放射增敏比(SER)约为1.23、1.31。而常氧条件下敲低lincRNA-p21不改变肿瘤细胞放射敏感性。过表达HIF-1α增加了敲低lincRNA-p21乏氧肿瘤细胞自噬水平,降低了细胞放射敏感性。结论:辐射损伤及乏氧均可提高SMMC7721和U251MG细胞中lincRNA-p21表达。敲低lincRNA-p21抑制增殖和迁移,提高了乏氧肿瘤细胞放射敏感性,可能与其诱导乏氧肿瘤细胞周期阻滞和凋亡,引发HIF-1α蛋白降解,调控HIF-1/Akt/mTOR/P70通路抑制细胞自噬有关,可以作为放疗增敏靶点进一步研究。(本文来源于《苏州大学》期刊2016-04-01）
杨曦[7]（2016）在《乏氧诱导因子-1α抑制剂盐酸小檗碱和蜂毒肽对乏氧肿瘤细胞放射敏感性的影响及机制研究》一文中研究指出第一部分：乏氧诱导因子-1α抑制剂盐酸小檗碱对乏氧食管鳞癌细胞放射敏感性的影响及其机制研究目的：观察盐酸小檗碱对乏氧食管鳞癌细胞乏氧诱导因子-1α (hypoxia inducible factor-1α, HIF-1 α)及其下游靶基因血管内皮生成因子(vascμ lar endothelial growth factor, VEGF)的作用,体内外实验研究盐酸小檗碱对多个乏氧食管鳞癌放射敏感性的影响,探讨盐酸小檗碱增加放射线对乏氧食管鳞癌的敏感性机制。方法：选用2种食管鳞癌细胞株ECA109、TE13,研究梯度浓度及不同时间点下盐酸小檗碱处理肿瘤细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)观察盐酸小檗碱对食管鳞癌细胞作用；采用免疫荧光技术观察乏氧前后ECA109细胞HIF-1α表达情况,并观察高低浓度盐酸小檗碱作用后HIF-1α表达；应用蛋白免疫印迹法(Western-blot)测定高低浓度盐酸小檗碱处理后细胞HIF-1α、VEGF表达变化；分别给予常氧细胞、乏氧细胞、乏氧细胞联合不同浓度下盐酸小檗碱、顺铂阳性参照组6MV-X线照射处理后,平板克隆形成实验观察盐酸小檗碱对乏氧食管鳞癌放射敏感性的影响；采用流式细胞术检测AnnexinV-PI双染色后各组细胞凋亡率；构建裸鼠食管鳞癌ECA109移植瘤模型,设立对照组、单纯照射组、腹腔注射盐酸小檗碱组、腹腔注射盐酸小檗碱联合照射组,予照射组皮下移植瘤8Gy单次大剂量放疗,放疗14天后处死裸鼠,测量肿瘤体积,免疫组化法检测肿瘤内HIF-1α、VEGF表达情况。结果：盐酸小檗碱抑制食管鳞癌细胞ECA109和TE13的生长,具有时间以及剂量依赖性；通过单击多靶模型拟合曲线,可见不同浓度的盐酸小檗碱预处理乏氧食管鳞癌细胞24小时后,与照射组相比,增加乏氧食管鳞癌细胞的辐射损伤,盐酸小檗碱作用乏氧细胞照射组的细胞凋亡率增加,且成剂量依赖性；盐酸小檗碱作用于乏氧食管癌细胞时,可以使乏氧相关蛋白HIF-1α、VEGF的表达降低,并且呈现量效关系,且减少ECA109细胞内核内HIF-1α表达；盐酸小檗碱可显著抑制放疗后ECA109细胞移植瘤模型裸鼠皮下肿瘤生长,免疫组化显示盐酸小檗碱可降低移植瘤内HIF-1α、VEGF表达。结论：盐酸小檗碱降低乏氧食管鳞癌细胞HIF-1α及VEGF表达,增加乏氧食管鳞癌细胞放射敏感性；抑制食管鳞癌裸鼠移植瘤放疗后肿瘤组织生长。第二部分：乏氧诱导因子-1α抑制剂蜂毒肽对乏氧鼻咽癌细胞CNE-2放射敏感性的影响及其机制研究目的：观察蜂毒肽对乏氧鼻咽癌细胞CNE-2乏氧诱导因子-1α (hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α)及其下游靶基因血管内皮生成因子(vascμ lar endothelial growth factor, VEGF)的抑制情况,研究蜂毒肽对CNE-2细胞株放射敏感性的影响,探讨蜂毒肽增加乏氧鼻咽癌细胞放射敏感性的机制。方法：‘选用鼻咽癌细胞CNE-2进行研究,梯度浓度及不同时间点蜂毒肽处理肿瘤细胞后,采用CCK8法观察蜂毒肽对CNE-2细胞增殖能力的影响。应用蛋白免疫印迹法(Western-blot)测定不同浓度蜂毒肽处理后CNE-2细胞内HIF-1α、 VEGF表达变化；分别给予常氧细胞、乏氧细胞,乏氧细胞联合蜂毒肽、常氧细胞联合蜂毒肽6MV-X线照射处理后,平板克隆形成实验观察蜂毒肽对乏氧CNE-2细胞放射敏感性的影响；AnnexinV-PI双染色后采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率；构建裸鼠CNE-2移植瘤模型,设立对照组、单纯照射组、腹腔注射蜂毒肽组、腹腔注射蜂毒肽联合照射组,予照射组皮下移植瘤6Gy单次大剂量放疗,放疗14天后处死裸鼠,对移植瘤拍照并测量肿瘤体积。结果：蜂毒肽抑制CNE-2细胞生长,具有时间以及剂量依赖性；通过单击多靶模型拟合曲线,可见蜂毒肽对常氧和乏氧鼻咽癌细胞均有增敏作用,且在乏氧组增敏效果更为明显。相比于常氧细胞照射组,可以显着增加常氧CNE-2细胞的辐射敏感性,而蜂毒肽对乏氧CNE-2细胞照射组中的细胞凋亡率增加更为明显。蜂毒肽作用于乏氧CNE-2细胞,诱导乏氧相关蛋白HIF-1α、VEGF的表达降低,呈现量效关系。蜂毒肽抑制放疗后CNE-2细胞移植瘤模型裸鼠皮下肿瘤生长。结论：蜂毒肽抑制乏氧鼻咽癌细胞CNE-2内HIF-1α及其VEGF的表达,增加乏氧和常氧下CNE-2细胞放射敏感性；同时抑制鼻咽癌裸鼠移植瘤放疗后肿瘤组织生长。蜂毒肽对增加常氧和乏氧情况下鼻咽癌细胞的放疗敏感性,且对乏氧细胞作用更为明显,这一现象可能与HIF-1 α相关。(本文来源于《南京医科大学》期刊2016-03-01）
朱宝松[8]（2016）在《肿瘤相关巨噬细胞的自噬调节对胃癌放射敏感性的影响及机制研究》一文中研究指出目的:研究调节肿瘤相关巨噬细胞(Tumor associated macrophages,TAMs)的自噬状态对共培养胃癌细胞放射敏感性的影响并探讨其可能机制,为胃癌的放射增敏研究提供新的思路;通过观察自噬调节预处理的肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)与胃癌细胞混合接种裸鼠的生长情况及移植瘤的放射敏感性,初步探索通过调控TAMs自噬状态影响肿瘤放射治疗效果的可能性。方法:(一)通过选择激活途径使用佛波酯(PMA)、人重组白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)激活人单核细胞THP-1分化为Ⅱ型肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)后,采用流式细胞术鉴定选择激活途径激活所得细胞表面CD68、CD204、CD206标志性分子表达情况;分别用不同自噬调节剂雷帕霉素(Rapamycin)和巴弗洛霉素A1(Bafilomycin A1)干预其自噬,MDC(Monodansylcardeverine)荧光染色法、Lyso-Tracker Red和Mito-Traker Green免疫荧光标记法检测线粒体和溶酶体的表达、免疫荧光检测自噬标记性蛋白MAP1 LC3及透射电镜观察自噬调控剂作用后各组Ⅱ型肿瘤相关巨噬细胞自噬的发生情况。(二)采用非接触共培养方式将自噬上调组Ⅱ型肿瘤相关巨噬细胞、空白实验组、自噬下调组Ⅱ型肿瘤相关巨噬细胞与人胃癌MGC803细胞共同培养48h。检测辐照前后自噬调节剂对共培养胃癌MGC803细胞放射反应能力的表达情况,MDC荧光染色法、Lyso-Tracker Red和Mito-Traker Green免疫荧光标记法检测线粒体和溶酶体的表达、免疫荧光检测自噬标记性蛋白LC3及透射电镜观察自噬调控剂调节各组Ⅱ型肿瘤相关巨噬细胞自噬并辐照后胃癌MGC803细胞自噬的表达情况。应用Western Blot技术分别对各组胃癌细胞相关蛋白caspase 3、7,cathepasin B、D、E、L进行检测。(叁)在体外实验基础上,利用雷帕霉素与巴弗洛霉素A1分别对TAMs进行自噬上调与下调,按照3:1的比例与MGC803胃癌细胞混合接种于BALB/c裸鼠,观察各种成瘤率、成瘤时间,瘤体体积变化与小鼠体重改变,并对成瘤裸鼠进行局部外照射,比较各组受照后小鼠体重与瘤体体积变化及照后7d瘤体重量,并通过HE染色、免疫组化等方法观察照后病理改变及相关蛋白表达变化。结果:(一)人单核细胞白血病细胞THP-1在通过佛波酯(PMA)、人重组白介素-4(IL-4)依次序贯作用总计72h小时后,检测所得贴壁细胞表面CD68、CD204、CD206的表达水平,流式细胞检测显示经上述2种药物作用后所得的细胞表面CD68、CD204、CD206表达皆高于未经处理的THP-1细胞,差异具有统计学意义(P<0.05)。针对Ⅱ型肿瘤相关巨噬细胞自噬水平的LC3免疫荧光及自噬囊泡(Autophagic Vacuoles,AVs)荧光蛋白染色检测结果显示:经过一定浓度自噬上调控剂作用后的Ⅱ型肿瘤相关巨噬细胞自噬标志性蛋白MAP1 LC3(microtubule-associated protein 1 light chain 3)在撤除干预药物48h后仍然有显着表达。结合MDC染色实验结果,Lyso-Tracker Red及Mito-Traker Green免疫荧光双标记法的检测结果,在预处理之后的M2-TAMs自噬状态的维持可持续一段时间,可以作为共培养的研究试剂使用。(二)经一定剂量(4gy)照射后,MGC803细胞与不同自噬状态M2-TAMs共培养,克隆形成实验显示自噬上调组克隆形成数最多,自噬下调组克隆数最少;在放射敏感性方面,M2-TAMs细胞自噬上调促进了MGC803细胞的克隆形成率,抑制其凋亡,M2-TAMs自噬下调对MGC803细胞的影响则相反,抑制M2-TAMs自噬有望提高共培养体系中胃癌细胞的放射敏感性。M2-TAMs自噬改变,对肿瘤相关蛋白的表达也产生显着影响,自噬上调组的cathepsin、B、D、E基因表达上调,而caspase-3、7以及cathepsin L表达下调,自噬下调组为cathepsin、B、D、E表达下调,而caspase-3、7以及cathepsin L表达上调。(叁)在体外实验基础上,我们建立胃癌移植瘤裸鼠模型;TAMs自噬上调组肿瘤体积最大、瘤体最重,自噬上调组COX-2,PD-L1,TNF-α表达最强,PTEN表达最弱。而自噬下调组肿瘤最小,瘤体最轻,COX-2,PD-L1,TNF-α表达最少,辐照后自噬下调组明显抑制COX-2,PD-L1,TNF-α表达,而促进PTEN表达。结论:上调TAMs自噬水平,可降低共培养胃癌细胞的放射敏感性,而抑制TAMs自噬,可增加共培养胃癌细胞的放射敏感性;肿瘤微环境中TAMs自噬的调节状态,可能是肿瘤放射抵抗的机制之一,抑制TAMs的自噬,有望增加肿瘤的放射敏感性,提高肿瘤放疗效果,值得进一步深入研究。(本文来源于《苏州大学》期刊2016-03-01）
冯飞[9]（2015）在《叁维培养肿瘤细胞耐药性及放射敏感性的研究》一文中研究指出目的建立叁维细胞模型,观察其细胞形态学变化,研究叁维培养对肿瘤细胞耐药性及放射敏感性的影响,并比较与单层培养的差异,进一步探讨其应用前景。方法1、建立体外人U87脑胶质瘤细胞、人HDF成纤维细胞、共培养相同浓度两种细胞的3D和2D培养模型,荧光相差显微镜观察并记录其形态学变化。2、分别给予不同剂量照射和不同浓度药物处理3D及2D细胞,荧光相差显微镜观察3D及2D形态学变化以及迁移增殖能力,MTT法测定各组细胞存活率。结果1、2D培养人HDF成纤维细胞和共培养细胞呈单层平面分布,人U87脑胶质瘤细胞可在平面聚集成点,3D培养显示人U87脑胶质瘤细胞形成团状聚集,3D共培养细胞显示聚集形态比较贴近单纯培养人HDF成纤维细胞走向。2、2D培养细胞随着药物浓度增加,形态明显改变及部分细胞脱离培养皿,3D细胞培养相同浓度药物则无明显变化甚至人U87脑胶质瘤细胞继续培养依旧能形成3D结构,MTT显示在10μmol/L各组细胞2D及3D培养存活率差异不明显,随着浓度增加各组细胞3D较2D培养存活率明显升高。3、培养六天观察:2D培养U87、HDF、Co-culture叁组细胞予2Gy辐照组细胞形态基本正常;8Gy组人U87脑胶质瘤细胞形态萎缩且多数细胞死亡;12Gy组细胞多呈碎片。3D培养结果显示2Gy、4Gy、8Gy及12Gy组和对照组形态无明显区别,但12Gy组增殖能力下降。MTT结果显示除人HDF成纤维细胞2Gy组3D和2D培养无统计学差异(P=0.05),其它组3D细胞存活率明显高于单层培养细胞(P<0.05)。进一步延长时间培养结果显示3D培养人U87脑胶质瘤细胞在对照组、2Gy、4Gy、8Gy组均能形成叁维结构,随着剂量增加迁移至末端的时间相应变长,12Gy组少部分细胞可迁移至1/2处,无3D结构形成。而2D细胞随着时间延长结果无明显变化4Gy组增殖能力明显降低,12Gy几乎大部分死亡。结论3D培养相对于2D培养的细胞具有耐药性及辐射不敏感性,肿瘤细胞差异更为明显,更能模拟肿瘤细胞及与间质之间的作用过程和作用机制,接近体内细胞生长的微环境,直观的展现肿瘤细胞黏附、侵袭和远处转移的生物学过程。表明3D培养的叁维肿瘤细胞结构更接近人体器官结构,培养细胞具有更好的增殖转移能力,更接近于人体实体肿瘤复发与转移的可能机制,对放射增敏剂、化疗药物效果研究、对测定研究肿瘤抗辐射、耐药基因表达改变及信号通路激活改变细胞间质及细胞表型提供更贴近实体肿瘤的实验技术。(本文来源于《苏州大学》期刊2015-05-01）
吴永友[10]（2014）在《肿瘤相关成纤维细胞自噬调控对大肠癌放射敏感性的影响及其机制研究》一文中研究指出目的：研究调控肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）的自噬状态对共培养大肠癌细胞放射敏感性的影响并探讨其可能机制，为大肠癌的放射增敏研究提供新的思路；通过观察自噬调控预处理的肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）与大肠癌细胞混合接种小鼠的成瘤情况及移植瘤的放射敏感性，初步探索通过调控CAFs自噬状态提高肿瘤放射治疗效果的可能性。方法：（一）取新鲜直肠癌组织手术标本，进行组织块培养，反复传代纯化，获取CAFs；取大肠癌患者正常大肠粘膜原代培养获取正常成纤维细胞（CNFs），并将其与大肠癌CCL224细胞共培养诱导生成CAFs；对CNFs及两种方法获取的CAFs进行形态学观察，并以α-SMA、vimentin及CK18、SDF-1单抗进行荧光免疫检测鉴定；（二）以MDC自噬囊泡染色法、LC3免疫荧光法比较CNFs与CAFs自噬状态；筛选自噬上调剂雷帕霉素与自噬抑制巴弗洛霉素的最佳作用时间与剂量，分别对CAFs进行自噬调控，以MDC法、LC3免疫荧光法及自噬相关蛋白Western blot法进行自噬调控效果比较；设立对照组（CAFs+大肠癌细胞组）、自噬上调组（雷帕霉素预处理CAFs+大肠癌细胞组）及自噬下调组（巴弗洛霉素预处理CAFs+大肠癌细胞），观察不同CAFs自噬状态对大肠癌侵袭与迁移能力对影响；通过观察0Gy、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy照射后大肠癌细胞克隆形成能力、细胞凋亡等方法观察经自噬调控的CAFs对共培养大肠癌细胞放射敏感性的影响；并通过对肿瘤细胞γH2AX焦点计数以及P53、Bcl-2、Bax、caspase-3、NFkB等蛋白的检测与CAFs培养液中乳酸含量的检测，分析经自噬调控CAFs影响大肠癌放射敏感性的可能机制；（叁）利用雷帕霉素与巴弗洛霉素分别对CAFs进行自噬上调与下调，按照3:1的比例与HCT116及CCL224大肠癌细胞混合接种于BALB/c裸鼠，分肿瘤细胞单独接种组、CAFs+肿瘤混合接种组、自噬上调CAFs+肿瘤混合接种组、自噬下调CAFs+肿瘤混合接种组，每组含HCT116及CCL224亚组，每亚组6只小鼠。观察各种成瘤率、成瘤时间，瘤体体积变化与小鼠体重改变，并对成瘤小鼠进行局部外照射，比较各组受照后小鼠体重与瘤体体积变化及照后7d瘤体重量，并通过HE染色、免疫组化及Western blot等方法观察照后病理改变及相关蛋白表达变化。结果：（一）利用直肠癌组织直接原代培养法或大肠粘膜原代培养获取CNFs与肠癌细胞HCT116及CCL224共培养诱导法，均可可获得α-SMA（+）SDF-1（+）vimentin（+）CK18（-）的具有典型CAFs特征的肌成纤维细胞；（二）活化的CAFs细胞比CNFs具有更高的自噬水平；400nM雷帕霉素可进一步增加CAFs自噬，Western blot检测显示DRAM、Atg5及Beclin-1、LC3等自噬相关基因表达上调，而400nM巴弗洛霉素可抑制CAFs自噬水平，DRAM、Atg5与Beclin-1基因表达下调；不同CAFs自噬状态对大肠癌CCL224侵袭与迁移能力产生影响，自噬上调组大肠癌细胞迁移能力最强，自噬下调组迁移能力最弱，在侵袭实验中，自噬上调组穿出细胞数最多，而自噬下调组穿出细胞数最少；经不同剂量照射后CCL224细胞与不同自噬状态CAFs共培养，克隆形成实验显示自噬上调组克隆形成数最多，自噬下调组克隆数最少；4Gy照射后，对照组大肠癌细胞凋亡率为36.62%，自噬上调组的细胞凋亡率为21.56%，与其他两种具有统计学差异（p<0.05），而自噬下调组肿瘤细胞凋亡率为47.47%，与其他两组具有显着性差异（p<0.01）；γH2AX焦点计数实验发现照射后4h及16h时，自噬下调组焦点计数明显多于其他两组；CAFs自噬改变，对凋亡相关基因的表达也产生显着影响，自噬上调组的Bcl-2、NFκB基因表达上调，而Bax、P53及caspase-3表达下调，自噬下调组为Bcl-2与NFκB表达下调，而Bax、P53、caspase-3表达上调；不同自噬水平CAFs的培养液中，乳酸含量明显不同，以自噬上调组浓度最高，自噬下调组浓度最低；（叁）1×106个HCT116及CCL224细胞单独接种，小鼠成瘤率极低，而与CAFs混合接种后全部小鼠成瘤，不受CAFs自噬状态影响；CAFs自噬未调控组肿瘤体积最大、瘤体最重，自噬上调组Ki67表达最强，而自噬下调组肿瘤最小，瘤体最轻，Ki67、α-SMA及Glut-1表达最少，HCT116细胞移植瘤与CCL224细胞移植瘤中，自噬相关蛋白表达缺乏一致性，自噬上调似可增加组织Beclin-1与caspase-3的表达。结论：直肠癌直接原代培养法或利用原代培养CNFs与肿瘤细胞混合培养的活化诱导法，均可获取具有典型表型与特征的CAFs，CAFs比CNFs具有更高的自噬水平；上调CAFs自噬水平，可降低共培养大肠癌细胞的放射敏感性，而抑制CAFs自噬，可增加共培养大肠癌细胞的放射敏感性；CAFs自噬调控对大肠癌放射敏感性的改变，可能与乳酸含量、促增殖/凋亡相关基因表达以及DNA损伤修复能力的变化有关。无论是否接受自噬调控预处理，CAFs均具有明显促肿瘤成瘤作用。CAFs自噬，可能是肿瘤放射抵抗的机制之一，抑制CAFs的自噬，有望增加肿瘤的放射敏感性，提高肿瘤放疗效果，值得进一步深入研究。(本文来源于《苏州大学》期刊2014-10-01）
肿瘤细胞放射敏感性论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:研究不同肿瘤细胞辐照敏感性的差异以及RMP对肿瘤细胞放射敏感性的影响,并对其中具体机制进行初步探讨。方法:1.CCK-8检测经不同剂量的~(60)Coγ射线辐照处理后,不同种类的肿瘤细胞的增殖情况,筛选出辐照敏感细胞株与辐照耐受株,同时确定后续实验中CCK-8实验的辐照剂量。2.克隆形成实验检测CNE-1、HEp-2及HepG2经不同剂量的~(60)Coγ射线辐照后克隆形成的情况。3.彗星电泳检测不同辐照敏感性的细胞株经~(60)Coγ射线辐照处理后DNA损伤修复情况。4.流式细胞术检测不同辐照敏感性的细胞株经~(60)Coγ射线辐照处理24 h、72 h后细胞凋亡情况。5.Western Blot检测不同辐照敏感性的细胞株辐照前后p-ATM、p65等损伤修复相关蛋白的表达。6.CCK-8检测不同敏感性的细胞株瞬时转染2μg RMP过表达质粒,经~(60)Coγ射线辐照处理后细胞的增殖情况。7.流式细胞术检测MCF-7细胞瞬时转染2μg RMP经~(60)Coγ射线辐照处理后细胞凋亡情况。8.通过裸鼠皮下移植瘤实验,检测辐照前后RMP对移植瘤生长的影响。9.HE染色检测移植瘤的生长状况。结果:1.CCK-8结果显示人鼻咽癌细胞株CNE-1及人喉癌细胞株HEp-2细胞株在10Gy辐照时增殖能力就明显受到抑制,在20 Gy、50 Gy时增殖能力抑制情况更为严重;而在肝癌细胞株HepG2、Hep3B及乳腺癌细胞株MCF-7中,辐照对细胞增殖的抑制作用并不明显;在肝癌细胞株Huh7及人肺癌细胞株A549中,辐照对细胞增殖的影响介于两者之间。2.在辐照剂量为2 Gy、4 Gy及6 Gy时,辐照耐受细胞株HepG2与两株辐照敏感细胞株CNE-1、HEp-2相比显着增高,有显着性差异(P<0.005)。3.彗星电泳结果显示在CNE-1、HEp-2和MDA-MB-231叁株细胞中,辐照后彗星电泳彗尾的OTM值较未辐照组明显增加;而在HepG2、Hep3B及MCF-7叁株细胞中彗星电泳彗尾的OTM值较未辐照组增加得并不明显。4.在辐照24 h后,辐照敏感株和辐照耐受株细胞的凋亡率较未辐照组无明显差异。在辐照72 h后,辐照敏感的鼻咽癌细胞株CNE-1及人喉癌细胞株HEp-2的凋亡率较未辐照组明显增高;而辐照耐受的细胞株凋亡率则相对较低。5.Western Blot结果显示,不同辐照敏感性的细胞受到辐照后都可以促进ATM磷酸化及p65磷酸化。6.在辐照敏感株CNE-1和HEp-2中,与对照组相比,过表达RMP可以显着增加其对辐照的耐受性(P<0.001);在辐照耐受株HepG2、MCF-7中,过表达RMP也可以增加其对辐照的耐受性,但无显着性差异。7.MCF-7中瞬时转染NC、RMPo及RMPi经辐照处理,与未辐照组相比NC组与RMPo组辐照前后凋亡率差异不明显,RMPi组辐照后凋亡率明显提高。8.裸鼠皮下移植瘤实验结果显示RMP过表达组移植瘤体积显着大于对照组,RMP干扰组移植瘤体积显着小于对照组。9.HE染色结果显示辐照后RMPo组肿瘤细胞明显增多,生长状况较对照组好;RMPi组肿瘤细胞密度较对照组明显降低,细胞生长情况较差。结论:1.筛选出CNE-1、HEp-2、MDA-MB-231叁株细胞为辐照敏感细胞株,HepG2、Hep3B及MCF-7叁株细胞为辐照耐受细胞株。2.不同辐照敏感性的肿瘤细胞中,辐照都可以激活的NFκB途径。3.RMP可以增加肿瘤细胞对辐照的耐受性,相反干扰RMP后增加肿瘤细胞的放射敏感性。4.RMP过表达可以促进移植瘤生长,增加移植瘤对辐照的耐受性。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
肿瘤细胞放射敏感性论文参考文献
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[9].冯飞.叁维培养肿瘤细胞耐药性及放射敏感性的研究[D].苏州大学.2015
[10].吴永友.肿瘤相关成纤维细胞自噬调控对大肠癌放射敏感性的影响及其机制研究[D].苏州大学.2014