导读:本文包含了低氧诱导分子论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:低氧,细胞自噬,信号通路,缺氧
低氧诱导分子论文文献综述
张洁,丁金旺,李文华[1]（2019）在《低氧诱导自噬相关信号通路分子机制研究进展》一文中研究指出缺氧是指低氧分压,其会引发多种心血管疾病,在实体肿瘤中也能检测到。细胞在低氧环境中发生代谢改变及氧化应激损伤,严重影响细胞存活。自噬是真核生物细胞对其内部受损的细胞器、错误折迭的蛋白质及入侵的病原体进行降解[1],并利用降解产物为细胞的再生和修复提供新原料,实现细胞(本文来源于《现代医药卫生》期刊2019年16期）
吴蓉蓉,晁燕,赵永丽,陈祺昌,郑志琴[2]（2019）在《裂腹鱼亚科鱼类Hif-α基因的分子进化及低氧诱导表达》一文中研究指出目的探究低氧诱导因子Hif-α在裂腹鱼亚科鱼类适应低氧环境中的作用及表达调控。方法利用RT-PCR技术获得了裂腹鱼亚科鱼类13个代表物种的Hif-1αΑ、Hif-1αB、Hif-2αΑ和Hif-2αB基因编码区序列,基于裂腹鱼亚科鱼类系统进化关系开展了基因选择压力分析,并选取花斑裸鲤进行低氧诱导表达研究。结果 Hif-1αΑ、Hif-1αB、Hif-2αΑ和Hif-2αB基因编码区长度分别为2196、2325、2544和2511 bp。通过序列比对发现裂腹鱼亚科鱼类HIF1αΑNODD结构域中保守脯氨酸羟基化基序LxxLAP发生缺失,特化及高度特化的裂腹鱼的HIF1αB CODD结构域中脯氨酸羟基化基序突变为PxxLAP。与常氧组相比,在重度缺氧条件下花斑裸鲤的脑和心脏组织中部分Hif-α基因表达量显著下降,在中度低氧中心脏组织中的Hif-1αA和Hif-2αA基因表达量上调。结论 Hif-α基因在13个物种中受到正向选择作用,但具体物种分支有待进一步研究,同时裂腹鱼亚科鱼类在适应慢性低氧和急性低氧环境可能存在两种不同的表达调控机制。(本文来源于《中国实验动物学报》期刊2019年04期）
胡惠琼,朱光辉,张学利[3]（2019）在《Ⅰ型1,4,5-叁磷酸肌醇受体在低氧诱导胰腺癌转移中的分子机制研究》一文中研究指出目的探讨Ⅰ型1,4,5-叁磷酸肌醇受体(ITPR1)在低氧诱导胰腺癌转移中的分子机制。方法免疫组化检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、ITPR1、表皮生长因子受体(EGFR)、磷酸化JAK激酶2(p-JAK2)和信号转导及转录激活因子3(STAT3)在胰腺导管腺癌(PDAC)及正常胰腺组织中的表达及其临床意义;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、免疫印迹(WB)及双荧光素酶报告基因系统分析在低氧微环境下ITPR1调控EGFR相关分子机制;MTS增殖、Transwell迁移侵袭实验探讨低氧状态下ITPR1对Panc-1细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果 HIF-1α、ITPR1、EGFR信号通路在PDAC组织中表达均增高,且HIF-1α、ITPR1、EGFR、STAT3与PDAC转移有关,HIF-1α及EGFR是影响PDAC患者术后生存时间的独立风险因素;低氧可提高Panc-1中HIF-1α、ITPR1、EGFR通路的表达量,且敲低ITPR1后EGFR轴相关因子表达下降;沉默HIF-1α后ITPR1表达下降,ITPR1启动子区存在HIF-1α的结合位点。敲低ITPR1后细胞增殖能力下降,在常氧和低氧状态下细胞增殖能力相似;敲低ITPR1后细胞迁移和侵袭能力下降,而在低氧状态下体外迁移和侵袭能力提高。结论低氧增强胰腺癌的转移可能是通过HIF-1α调控ITPR1的表达而实现,而ITPR1可调控EGFR/JAK2/STAT3信号通路的表达。(本文来源于《军事医学》期刊2019年01期）
马玉滨,燕速,于鹏杰,白振忠[4]（2017）在《低氧诱导因子-1α在胃癌组织中表达水平及分子作用机制研究》一文中研究指出目的:检测低氧诱导因子-1α(Hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)在胃癌组织的表达水平,探讨HIF-1α在胃癌发病过程的分子作用机制。方法:选取世居于青海省境内河湟谷地的新发胃癌患者60例,设为高原组;选取平原地区(深圳)新发胃癌患者60例,设为平原组。收集两组患者胃癌组织标本,采用免疫组织化学染色SP法检测两组患者组织标本中HIF-1α蛋白的表达情况。采用免疫荧光染色测定两组受试者胃癌组织的HIF-1α的表达量。采用RT-PCR检测两组患者组织标本中miR-210的表达水平。分析胃癌患者HIF-1α的表达与临床病理特征的关系。结果:高原组患者胃癌组织的HIF-1α蛋白表达量显著高于平原组(P<0.05)。高原组患者胃癌组织的HIF-1αmRNA含量也显着高于平原组(P<0.05)。高原组患者胃癌组织的miR-210的表达水平也显着高于平原组(P<0.05)。HIF-1α在胃癌中的阳性表达与肿瘤的分化(P=0.044 1)、浸润深度(P=0.031 9)、淋巴结转移(P=0.025 3)及TNM分期(P=0.028 9)相关。结论:低氧环境下胃癌组织中HIF-1α水平显著增加,并且HIF-1α能通过miR-210促进胃癌细胞进展。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2017年12期）
焦德,路炜,张学东[5]（2016）在《低氧诱导因子-1α、Delta样配体4在不同乳腺癌分子亚型组织中的表达及临床意义》一文中研究指出目的探讨低氧诱导因子(HIF-)1α、Delta样配体(DLL)4在不同乳腺癌分子亚型组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学法检测乳腺癌组织〔基底细胞样型17例、人表皮生长因子受体(HER)-2过表达型21例、Luminal A型54例、Luminal B型23例与普通乳腺样型23例〕与癌旁组织(对照组)HIF-1α、DLL4表达。结果 115例乳腺癌组织HIF-1α、DLL4分别为70.43%、69.57%,明显高于对照组(25.00%、22.00%)(P<0.05),其中基底细胞样型、HER-2过表达型、Luminal A型与Luminal B型乳腺癌组织HIF-1α、DLL4的阳性表达率均明显高于对照组(P<0.05),基底细胞样型乳腺癌组织HIF-1α、DLL4的阳性表达率明显高于Luminal A型,HER-2过表达型乳腺癌组织HIF-1α的阳性表达率明显高于Luminal A型与Luminal B型(P<0.05)。乳腺癌组织HIF-1α、DLL4表达与年龄、组织学分级无明显的关系(P>0.05),与腋窝淋巴结转移、临床分期具有明显的关系,其中中青年乳腺癌患者HIF-1α、DLL4阳性表达较高,腋窝淋巴结转移者上述因子阳性表达率更高,Ⅲ/Ⅳ期上述因子阳性表达率更高(P<0.05))。结论 HIF-1α、DLL4在基底细胞样型、HER-2过表达型乳腺癌组织中的表达较高,而在Luminal A、B型乳腺癌组织中的表达较低;其可能与临床病理特征及预后状况有一定的关系。(本文来源于《中国老年学杂志》期刊2016年17期）
袁媛[6]（2016）在《低氧诱导因子1α、上皮间质化相关蛋白及钙结合蛋白在乳腺非特殊型浸润性导管癌不同分子亚型中的表达及相关性研究》一文中研究指出目的:通过检测低氧诱导因子-1α(Hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)、上皮间质化(Epithelial mesenchymal transitions,EMT)相关蛋白及钙结合蛋白(S100 calcium binding protein A4,S100A4)在不同分子亚型乳腺非特殊型浸润性导管癌(Invasive ductal carcinoma,not otherwise specified,IDC-NOS)中的表达及相关性分析;叁阴型乳腺癌MDA-MB-231细胞经小分子干扰RNA(Small interference RNA,si RNA)HIF-1α后EMT相关蛋白、S100A4的表达变化和侵袭迁移能力改变,探讨HIF-1α、EMT及S100A4在不同分子亚型乳腺IDC-NOS浸润转移中的作用,以及HIF-1α促进三阴型乳腺癌浸润转移的可能分子机制。方法:依照《St.Gallen共识》,对123例乳腺IDC-NOS行乳腺癌分子分型。免疫组织化学染色方法检测各分子亚型乳腺癌组织中HIF-1α、EMT相关蛋白及S100A4的表达并相关性分析;叁阴型乳腺癌MDA-MB-231细胞转染针对HIF-1α的si RNA,Real-time PCR方法和Western Blotting方法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及S100A4 m RNA和蛋白表达,Transwell实验检测细胞侵袭迁移能力。结果:(1)HIF-1α和EMT在人表皮生长因子受体2(Human epidermalgrowth factor receptor 2,HER2)过表达型及叁阴型乳腺癌中的阳性表达率显着高于Luminal A型、Luminal B(HER2-)型及Luminal B(HER2+)型(P<0.05),S100A4在叁阴型乳腺癌中的阳性表达率显着高于Luminal A型、Luminal B(HER2-)型及Luminal B(HER2+)型(P<0.05),HIF-1α与Luminal A型负相关、与HER2过表达型及叁阴型乳腺癌正相关(P<0.05),EMT与Luminal A型负相关、与叁阴型乳腺癌正相关(P<0.05),S100A4的表达与叁阴型乳腺癌正相关(P<0.05);(2)本组乳腺IDC-NOS中HIF-1α与EMT、HIF-1α与S100A4表达相关(P<0.05),在叁阴型乳腺癌中不相关(P>0.05);(3)与对照组相比,MDA-MB-231细胞HIF-1αsi RNA组E-cadherin m RNA及蛋白表达水平分别增加了49%和67%(P<0.05),Vimentin m RNA及蛋白表达水平分别降低了37%和32%(P<0.05),S100A4 m RNA及蛋白表达水平无明显改变(P>0.05),Transwell侵袭和迁移实验显示HIF-1αsi RNA组吸光度(OD)分别降低了40%和42%(P<0.05)。结论:HIF-1α、EMT及S100A4可能在叁阴型乳腺癌浸润转移过程中发挥了重要的作用。高表达HIF-1α的三阴型乳腺癌细胞可通过调控E-cadherin和Vimentin的表达,促进EMT形成,增加了癌细胞的浸润转移能力。HIF-1α可能不是引起三阴型乳腺癌S100A4表达上调的上游分子事件。(本文来源于《贵州医科大学》期刊2016-05-26）
孙官文[7]（2015）在《低氧诱导因子-1α诱导的MG-63成骨细胞的凋亡分子机制研究》一文中研究指出[目的]在骨折的愈合过程中,参与的细胞因子和细胞较多,机制十分复杂,血液供应不足是造成骨折延迟愈合或骨折不愈合的重要因素。骨折后的血液流动中断必然会导致骨折部位的缺氧环境,随之会造成细胞死亡,导致软骨细胞和成骨细胞的分化延迟以及骨折愈合过程受损.因此更好的了解在缺血缺氧条件下的骨折愈合作用机制,有助于我们探索促进骨折愈合的新型治疗方法。在骨折后,局部会进入低氧状态,因此低氧诱导因子-1Q对于骨折愈合后骨不连的影响十分大,其调控过程有着至关重要的作用。低氧诱导因子是专家Semenza等发现的,属于一种转录激活因子,对氧有着较大的依赖性,其主要包括了两组亚基,分别为⒑和β,组成了异二聚体蛋白。本文主要研究骨折标本和缺氧条件下的成骨细胞中的microRNA-210的表达水平,详细了解了microRNA-210在成骨细胞中的过量表达对成骨细胞的增殖和凋亡产生的影响,以及microRNA-210调控成骨细胞增殖可能的机制；并且通过动物实验研究了小鼠成骨细胞在氧化钴诱导的化学模拟缺氧状态下,凋亡造成骨不连的相关情况,为探索缺血缺氧条件下的骨折愈合作用机制,研究促进骨折愈合的新型治疗方法提供基础实验参考。[方法]第一部分：1.人体组织样本本研究使用的所有骨折组织和正常骨骼组织均获得了武汉大学人民医院内部审查委员会(IRB)的批准。34份骨折组织样品的来源为股骨粉碎性骨折,是直径小于0.5cm不适合复位术的骨组织标本,在骨折后24-38小时内获得。另外18份的正常骨骼组织来自股骨移植的剩余部分骨组织标本。所有的组织样本在使用前均在-80℃深低温冰箱中保存。2.细胞培养和试剂处理人MG-63成骨细胞由武汉大学细胞中心提供,使用含有10%胎牛血清的Eagle's Minimum Essential Medium (EMEM)培养液培养,于37℃、5%CO2的环境下生长。低氧环境的处理则是将细胞置于含5% CO2和2%氧气的缺氧孵箱中。连续监测孵箱中氧气浓度。MG-63细胞缺氧或常氧处理0,12,24,48或72h,然后收集分离miRNA或mRNA,用于细胞蛋白提取或细胞凋亡分析。使用RNA干扰技术敲除HIF-1α的表达,使用的HIF-1α特异性干扰质粒siHIF-1α(CUC AAG CAA CUG UCA UAUA)和siHIF-1α 2 (UGC CAC CAC UGA UGA AUUA),以及小干扰RNA(siRNA) (UAA GGC CAG ACG CGA AUUA)。MG-63细胞通过脂质体2000转染50nM的siRNA寡核苷酸,6小时后上清换液细胞用于接下来的处理。microRNA-210类似物(CUG UGC GUG UGA CAG CGG CUGA)或对照类似物(UCA CAA CCU CCU AGA AAGA) (QIAGEN, Valencia, CA, USA)则用于控制nicroRNA-210的水平。25nm或50nm的microRNA-210类似物/对照类似物使用脂质体2000转染MG-63细胞。浓度为5μg/ml或40μg/ml时可诱导MG-63细胞的凋亡过程。3.RNA分离,反转录,实时定量PCR细胞内总RNA的提取反转录过程则使用M-MLV Reverse Transcriptase。在mRNA水平进行的HIF-1α的RT-qPCR检测,所有mRNA的表达水平均以β-肌动蛋白(β-actin)为标准。miRNA样本分离提取,microRNA-210表达的定量检测,并以U6小核RNA作为检测的内参,结果用AΔCt方法进行相对定量。4.蛋白样品的制备和免疫印迹法(western blot)分析使用加入蛋白酶抑制剂混合物的细胞溶解试剂提取细胞内总蛋白。抗HIF-1α的兔多克隆抗体(Abcam, Cambridge, UK),半胱天冬氨酸水解酶3或半胱天冬氨酸水解酶9用于检测HIF-1α的水平,使用免疫印迹法检测裂解的caspase 3(CASP3)或裂解的caspase 9 (CASP 9)水平。检测的内参为β-actin,可与抗β-actin的兔多克隆抗体发生特异性结合。使用辣根过氧化物酶共轭的山羊抗兔和ECL检测系统进行检测。5.细胞增殖、细胞集落形成和细胞凋亡测定用5μg/mL 5-FU处理的MG-63细胞,在注入microRNA-210或对照转染类似物24,36或48h后,使用CCK-8进行孵育。当出现肉眼可见的颜色变化后检测细胞450nm光谱下的吸光度。细胞集落使用12孔板在37℃、5% CO2条件下培养约103个细胞,并进行0nm或者50nm的microRNA-210类似物或对照类似物的转染实验,然后作用2-5天。细胞用结晶紫(0.005%)染色20min后进行克隆计数。MG-63细胞凋亡的检测,约有5×105个细胞使用膜蛋白V-FITC和碘化丙啶染色,并用流式细胞仪检测(Biosciences)。CellQuestTM Pro软件进行结果的计算,并评估凋亡细胞占总细胞数的比例。第二部分：取妊娠19d的KM小鼠的颅骨,应用改良组织块法培养原代鼠胚成骨细胞,同时对细胞使用贴壁法纯化处理,再行对第3代培养的细胞计数持续一周,同时对已经培养的第4代细胞进行成骨细胞鉴定,并使用钙-钻染色法检测细胞的碱性磷酸酶。在125umol/L浓度的氯化钻常规DMEM培养液中培养第3代的成骨细胞,随后予以氯化钴化学模拟低氧状态,应用倒置相差显微镜观察低氧下培养的细胞并作好计数,随后将不同时间培养的成骨细胞设为0、1、3、5以及7d缺氧组,并将常规氧条件下培养的第3代细胞设为0、1、3、5以及7d常规氧气组。再对低氧组与常规氧气组不同时间的成骨细胞进行检测,分析HIF-1p表达及凋亡所致骨不连情况。同时采用免疫印迹法检测成骨细胞中的Bcl-2与Caspase-3蛋白表达情况。[结果]第一部分：1.microRNA-210在人类骨折样本中的含量上调,且与HIF-1α相关在34份骨折患者样本中,其均值(士标准差)的AACT值为1.87士1.23,而在健康对照组中的这一数值为1.00±0.32(p<0.01；图1A)。与对照组相比骨折组织中的HIF-1α mRNA的表达量要显着提高(p<0.01)。在骨折患者中microRNA-210的表达与HIF-1α mRNA的表达成正相关(R2=0.3626,p<0.01)2.microRNA-210表达量的上升受HIF-1α调控采用RT-PCR技术来测定MG-63成骨细胞系在常氧或缺氧情况下,其microRNA-210的表达情况。与临床样本的实验结果相符,缺氧成骨细胞系的microRNA-210表达量更高,且其体外表达量与时间存在相关性,在缺氧处理24h后,microRNA-210受缺氧环境影响其表达量显着上升,此外受缺氧环境影响HIF-1α在mRNA水平和蛋白水平的表达均上调,通过HIF-1α特异性的siRNA-1或siRNA-2显着降低了HIF-1α的mRNA水平(siHIF-1α-1或siHIF-1α-2均p<0.01)。且siHIF-1α-1或siHIF-1α-2能够有效地消除缺氧促进的miRNA-210表达上调的现象。3.microRNA-210类似物可减少5-FU引起的细胞死亡现象并促进成骨细胞的生长相较于对照组,microRNA-210类似物可使MG-63细胞中的microRNA-210水平明显增高(25或50 nM p<0.001)。相较于对照miRNA, microRNA-210类似物减少了5-FU依赖时间和剂量引起的MG-63细胞的死亡,MG-63细胞在转染50nm的microRNA-210类似物后比转染50nnm的对照miRNA后具有更高的聚落形成能力(p<0.05)。4.microRNA-210类似物能够改善的体外成骨细胞因缺氧引起的细胞凋亡现象在常氧培养条件下,5-FU引起的细胞凋亡仅有轻微的时间增长现象,但是在5-FU和缺氧的共同刺激下MG-63细胞的凋亡现象明显增多。在使用低剂量的5-FU处理的情况下,裂解的CASP 3和裂解的CASP 9在缺氧条件下的表达量要比在常氧条件下的表达量显着升高(图5B和5C)。缺氧处理48h后,没有转染microRNA-210类似物的MG-63细胞开始出现凋亡(处理后48h或72h p<0.05)。裂解CASP 3和裂解CASP 9的免疫印迹实验结果再次证实了microRNA-210且有抑制缺氧引起的细胞凋亡的功能,而且从转染了microRNA-210的MG-63细胞中能分离到的CASP 3和CASP 9很少。第二部分：成骨细胞有较多的突起,多为叁角形、多角或者短梭形,轮廓较为清晰,部分突起会与远处细胞突起有一定的连接,细胞核呈现椭圆或者圆形,能够清晰发现1个或者3个核仁,在倒置显微镜下观察,细胞的扩增速度十分缓慢在第6d达到了高潮,随后增长继续呈现缓慢趋势,同时数量有所减少,在第4代培养的碱性磷酸酶细胞染色结果中,可见少量细胞质内出现颗粒状物质且在细胞周围呈现分散状,在经氯化钴处理后,细胞膜边界模糊,且出现皱缩,同时形态学上发现细胞质较为致密,核染色质呈现边集化,在处理后7d,能够发现细胞核已经裂解,对处理后的细胞进行计数处理,可发现细胞数量在第5d至高峰,但仍旧远远低于常规氧气组,随后细胞数量开始快速下降。同时发现氯化钴处理后,低氧诱导因子-1α与Caspase-3 mRNA表达会随着时间的递增而呈现增加(P<0.01),除了初始阶段,其他时间段均要高于常规氧气组(P<0.01),常规氧气组在各个时间段无明显变化,统计学比较,差异无统计学意义(P>0.05)；但Bcl-2 mRNA表达情况却与前两者相反,随着时间递进,会表现出下降的趋势(P<0.01),除了初始阶段,其他时间段均要低于常规氧气组(P<0.01),而常规氧气组在各时间段无显着变化(P>0.05)。通过免疫印迹法检测发现,在氯化钻处理后,Caspase-3蛋白的表达呈现逐渐增加趋势(P<0.01),除了初始阶段,各个时间段均要高于常规氧气组(P<0.01),常规氧气组在各时间段无显着变化(P>0.05)；而Bcl-2蛋白表达情况与前两者相反,呈现降低(P<0.01),除初始阶段,均要明显低于常规氧气组(P<0.01),常规氧气组在其他各时间段无显着变化(P>0.05)。[结论]1.在临床人体骨折组织中microRNA-210表达量的上调与HIF-1α因子的过量表达相关,且在MG-63成骨细胞依赖HIF-1α的缺氧型应答中表达量上调。2.通过microRNA-210类似物提高microRNA-210的表达量以减少化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导的成骨细胞死亡现象3.集落形成实验显示microRNA-210类似物能够促进成骨细胞的生长。4. microRNA-210类似物的转染能够通过抑制caspase-3(细胞凋亡蛋白酶3)和caspase 9(细胞凋亡蛋白酶9)的激活来抑制缺氧诱导型MG-63细胞的凋亡现象5.改良组织块法具有传统组织块法所有的优点,能够短时间内得到较多的成骨细胞,所培养细胞有典型的成骨细胞功能及形态,在氯化钴化学模拟出的低氧状态下,促进成骨细胞凋亡并产生大量的低氧诱导因子HIF-1α,该因子可以通过对Caspase-3和Bcl-2蛋白的调节来促进成骨细胞发生凋亡并致骨不连形成,且这种促进与缺氧的时间有着密切关系。(本文来源于《武汉大学》期刊2015-10-01）
袁兆新,曾美纯,刘怡,陈然,范小芳[8]（2015）在《小分子活性肽apelin在低氧诱导肺血管内皮细胞损伤中的表达及其意义》一文中研究指出目的:探讨apelin-APJ系统在低氧诱导肺血管内皮细胞(PVECs)损伤中的表达变化,阐明小分子活性肽apelin对细胞增殖的影响。方法:体外培养的大鼠PVECs分为正常对照组、低氧6h组、低氧12h组、低氧24h组、低氧48h组、低氧24h加apelin组和apelin组,MTT法检测各组细胞增殖率。体外培养的大鼠PVECs分为正常对照组和低氧6h组、12h组及24h组,免疫荧光染色法检测细胞中apelin蛋白荧光表达,Western blotting法检测apelin-APJ系统蛋白表达水平。结果:与正常对照组比较,低氧6、12h组和apelin组细胞增殖率无明显变化(P>0.05),低氧24和48h组细胞增殖率明显降低(P<0.05或P<0.01);与低氧24和48h组比较,低氧24h加apelin组细胞增殖率明显升高(P<0.05)。与正常对照组比较,低氧6h组细胞中apelin荧光表达强度无明显变化(P>0.05),低氧12和24h组细胞中apelin荧光表达强度明显降低(P<0.01)。与正常对照组比较,低氧6、12和24h组细胞中apelin蛋白表达水平明显下降(P<0.01),而APJ蛋白表达水平无明显变化(P>0.05)。结论:低氧可能通过降低小分子活性肽apelin损伤内皮细胞,而外源性给予apelin在一定程度上能够保护低氧对肺血管内皮细胞的损伤作用。(本文来源于《吉林大学学报(医学版)》期刊2015年04期）
杨俊艳,王旎,刘智敏,董超然,刘小花[9]（2014）在《低氧诱导因子-1α促进人甲状腺未分化癌FRO细胞侵袭转移的分子机制》一文中研究指出目的探讨低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)对人甲状腺未分化癌FRO细胞侵袭转移的影响,并探讨其分子机制。方法用5%O2的低氧培养箱培养FRO细胞不同时间(0、2、4、8、12 h),倒置显微镜下观察细胞形态的变化,Western blot法检测细胞中上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)相关蛋白HIF-1α、Snail、E-cadherin、Vimentin、MMP2的表达;另设FRO细胞常氧组、HIF-1α特异性抑制剂3-(5’-羟甲基-2’-呋喃基)-1-苯甲基吲哚(YC-1)+常氧组、YC-1+低氧组、常氧+HIF-1α激活剂氯化钴(CoCl2)组,采用Western blot法检测各组细胞中HIF-1α和EMT相关蛋白的表达,Transwell侵袭和迁移试验检测各组细胞的侵袭和迁移能力。结果随着低氧培养时间的延长,FRO细胞逐渐发生间质样改变,低氧12 hHIF-1α、Snail、Vimentin、MMP2蛋白的表达量较0 h显着升高(P<0.01),上皮细胞特征性蛋白E-cadherin的表达持续降低(P<0.01)。YC-1+低氧组与低氧组比较,HIF-1α、Snail、Vimentin、MMP2蛋白的表达量显着降低(P<0.01),E-cadherin蛋白的表达量显着升高(P<0.05)。低氧组和常氧+CoCl2组与常氧组比较,HIF-1α蛋白的表达量显著升高(P<0.01);常氧+CoCl2组与常氧组比较,Snail、Vimentin、MMP2蛋白的表达量显着升高(P<0.01),E-cadherin蛋白的表达量显着降低(P<0.01);常氧+CoCl2组与低氧组比较,HIF-1α、Snail、Vimentin蛋白的表达量显着升高(P<0.01),E-cadherin蛋白的表达量显着降低(P<0.01),MMP2蛋白的表达量差异无统计学意义(P>0.05)。低氧组和常氧+CoCl2组的穿膜细胞数和迁移细胞数均较常氧组显着增多(P<0.01)。结论低氧使FRO细胞中HIF-1α高表达,HIF-1α可上调Snail、Vimentin和MMP2的表达,下调E-cadherin的表达,对FRO细胞的侵袭转移具有促进作用。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2014年04期）
冯晨晨[10]（2014）在《低氧诱导因子1α与系统性红斑狼疮相关性的分子流行病学研究》一文中研究指出研究背景系统性红斑狼疮（Systemic Lupus Erythematosus，SLE）是一种侵犯皮肤及多器官、临床表现复杂、病程迁延反复的自身免疫性疾病，对患者的身心健康造成较大危害，已经成为一个重要的公共卫生问题。近年来，SLE病因学研究发展迅速，在免疫、遗传、流行病学等领域均取得了一定进展。已有研究表明，辅助性T细胞（Helper T Cell，Th）在SLE及其它自身免疫疾病的发病中起重要作用，活化的自身反应性Th细胞促使B细胞分化、产生自身抗体，包含自身抗体的免疫复合物和炎性Th细胞因子导致组织和器官损伤。低氧诱导因子-1（Hypoxia-Inducible Factor1，HIF-1）是一种异二聚体转录因子，1992年由美国Semenza等人首先发现，它由亚单位HIF-1α和HIF-1β组成。HIF-1α广泛表达于各种组织，既是HIF-1的调节亚基又是活性亚基，因此HIF-1的生物效应是由α亚基实现的。表达于T细胞中的HIF-1α，在低氧或非低氧的刺激下，均可以促进其mRNA表达的增加。已有证据显示，在炎症反应过程中，机体常需要“激活”HIF-1，以应对炎症过程中的低氧，而HIF-1本身也可通过调节免疫细胞而驱动炎症反应。在癌症、炎性肠炎和感染等炎症性疾病的免疫反应调节过程中，HIF-1均扮演了至关重要的角色。近年来本课题组和国内外的研究均发现，Th17细胞及其相关细胞因子参与了SLE的发病。与Th17细胞介导的炎症反应相对应，调节性T细胞（Regulatory TCells，Tregs）则在维持外周耐受，压制自身反应性T细胞活性等免疫调节过程中扮演了至关重要的角色。在正常情况下Treg细胞和Thl7细胞的效应处于一种平衡状态，Treg/Thl7平衡失调在组织炎症和自身免疫性疾病等疾病的发生发展中具有重要作用。同时，SLE患者体内的调节性T细胞也存在着功能和数量上的异常。活化的Th17和缺陷的Tregs在SLE发病过程中起着重要作用。最近研究发现HIF-1α能激活RORγt（Retinoid-related Orphan Nuclear Receptorγt，维甲酸相关孤核受体γt）的转录，从而促进Th17的增殖，并且可与RORγt、p300共同作用上调IL-17A基因表达；同时，HIF-1α通过介导转录因子Foxp3（foxheadbox protein3，叉头样转录因子P3）降解而抑制Treg细胞的发育。这些研究提示Th17/Tregs分化平衡依赖于HIF-1α；阻断HIF-1α有可能减缓Th17细胞介导的自身免疫性疾病。表达/功能异常的HIF-1α是否可通过影响Th17/Tregs的平衡，导致炎性细胞因子的表达紊乱从而参与SLE的发病等问题尚有待于进一步探讨。在中国汉族人群尚无HIF-1α与SLE的关联研究。因此，本研究拟开展HIF-1α与SLE发病相关性的分子流行病学研究拟收集SLE患者和健康对照样本，应用RNA干扰技术沉默HIF-1基因，检测HIF-1基因Knockdown对SLE患者体内PBMC中细胞因子表达的调节作用，初步探讨HIF-1基因功能；采用ELISA等技术，检测SLE患者与对照血清中HIF-1α表达水平的差异，并分析其与SLE疾病活动度、临床亚型的关联；通过Sequenom MassARRAY方法，分析HIF-1α基因多态性与SLE遗传易感性的关系，并进行独立验证。本研究分为叁个部分。第一部分RNA干扰体外沉默SLE患者PBMC中HIF-1的影响及相关机制研究目的利用RNA干扰技术，构建HIF-1α-shRNA慢病毒载体，沉默SLE患者外周血单个核细胞（PBMC）中HIF-1基因表达，观察沉默效率并研究沉默后相关细胞因子表达水平变化，初步探索系统性红斑狼疮患者HIF-1的基因功能。方法收集SLE确诊且新发病例5例，患者符合美国风湿病学会1997年修订的SLE分类标准。采集研究对象外周血各40ml，分离PBMC。利用RNA干扰沉默HIF-1基因初步研究其基因功能，并分析HIF-lα与IL-17之间的相关性。采用脂质体转染法将LV-shRNA-HIF和LV-shRNA-HIF-NC同包装质粒和包膜质粒共转染到293T细胞中，获得重组慢病毒。采用慢病毒载体方法将LV-shRNA-HIF慢病毒感染SLE患者PBMC细胞，采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR，RT-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测构建成功的RNAi表达载体在mRNA及蛋白水平对目标基因表达的抑制，同时酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测HIF-1α和IL-17在培养上清中的表达水平。结果（1）实验组HIF-1沉默效率可达95%；（2）RT-PCR可见，实验组HIF-1基因mRNA表达丰度显着低于对照组（p<0.05）；（3）Western blot可见，实验组HIF-1蛋白表达水平显着降低（p<0.05）；（3）实验组培养上清中HIF-1α浓度显著低于对照组（p<0.001）；（4）实验组培养上清中IL-17浓度显着低于对照组（p<0.001）；（5）实验组HIF-1α与IL-17显着正相关（r=0.959，p<0.001）。结论构建成功的RNAi表达载体可以有效抑制目标基因HIF-1在mRNA及蛋白水平的表达，沉默HIF-1基因后HIF-1α与IL-17表达水平显着正相关。第二部分HIF-1α血清学表达水平与SLE的相关性研究目的比较SLE患者与正常对照、类风湿性关节炎（RA）、原发性干燥综合症（pSS）和系统性硬化症（SSc）之间；狼疮肾炎（LN）患者和SLE未并发肾炎患者之间；SLE患者有无某临床症状之间以及活动期SLE患者和非活动期SLE患者之间HIF-1α血清学水平的差异，探讨HIF-1α水平与系统性红斑狼疮疾病活动度、IL-17水平的关联。方法收集149例确诊的SLE患者，102例健康对照者，疾病对照组由叁种常见自身免疫疾病患者组成：46例RA患者；50例pSS患者和26例SSc患者。在获取研究对象知情同意后采用自行设计的问卷进行调查，同时抽取5ml非抗凝外周静脉血，分离血清，-80℃冻存留待检测。采用ELISA试剂盒检测血清HIF-1α和IL-17水平。数据录入采用Excel2007软件进行，统计分析采用SPSS10.01软件进行。符合正态分布的计量资料以均数±标准差（x±s）表示，组间比较符合正态分布且方差齐性者采用t检验，两组间定量资料相关性分析采用Pearson相关分析。检验水准α=0.05。结果（1）各组人口学资料分析149例SLE患者被纳入分析，其中141例女性，8例男性，年龄分布从9岁到65岁（32.5±10.9）。患者从出现症状到被纳入分析的时间（即采集血液并收集信息的时间）被定义为病程，从0到19.3年（3.7±4.2）。SLE患者的疾病活动度评分从1到44（12.0±7.9），81例患者为活动期病人，约占54.4%。（2）各组HIF-1α水平比较SLE患者血清HIF-1α水平为32.76±12.60pg/ml，健康对照组为23.04±11.35pg/ml，RA患者组为28.71±10.88pg/ml，pSS患者组为30.08±23.57pg/ml，SSc患者组为26.15±13.92pg/ml。两两比较分析发现，SLE组与健康对照组、SSc患者组有统计学差异（p值分别为：p<0.0001和p=003）；SLE组与RA患者组和pSS患者组无统计学差异（p值分别为：p=0.09和p=0.25）。同时，RA患者组和pSS患者组分别与健康对照组比较，差异具有统计学意义（p=0.02和p=0.004）。在SLE亚组分析中，SLE合并肾炎组血清HIF-1α水平为35.06±11.64pg/ml，非肾炎组为32.03±12.86pg/ml，两者之间无统计学差异（p=0.50），但是分别与健康对照组相比差异都具有统计学意义（p值均<0.0001）。SLE活动期患者血清HIF-1α水平为34.83±13.94pg/ml，非活动期患者组为30.31±10.38pg/ml，差异具有统计学意义（p=0.03）。对各临床症状阳性组与阴性组的血清HIF-1α水平进行分析，均没有统计学意义（p值均>0.05）。（3）相关性分析HIF-1α水平与SLE疾病活动度评分（SLEDAI）显着正相关（r=0.23；p=0.004）。同时，在SLE患者组，HIF-1α水平与IL-17水平正相关（r=0.53；p<0.0001），但是未发现其与SLE的病程之间的相关性（r=-0.02；p>0.05）。结论本研究发现SLE患者与健康对照组（HC组）、SSc患者组，狼疮肾炎、非狼疮肾炎患者与健康对照组（HC组），SLE患者疾病活动组与非疾病活动组之间HIF-1α表达水平有统计学差异，SLE患者与RA、PSS患者，狼疮肾炎组与非狼疮肾炎组之间未发现表达差异，SLE患者HIF-1α表达水平与SLEDAI、IL17水平存在相关，但未发现HIF-1α水平与SLE患者的部分临床特征之间存在关联。第叁部分HIF-1基因多态性与SLE遗传易感性的相关性研究目的比较SLE患者和正常对照HIF-1基因（rs11549465、rs12434438、rs1957757、rs1951795和rs7143164）的基因型频率和等位基因频率，探讨其与中国汉族人群SLE易感性的关系，同时结合临床资料分析其与SLE主要临床特征之间的关系。方法病例组共1497例SLE患者，来自两所叁甲医院的住院和门诊病例，均符合美国风湿病学会1997年修订的SLE分类标准；健康对照2296例，来自健康体检中心和健康献血者，均排除SLE和其他自身免疫疾病。收集研究对象的一般情况和病例的相关临床资料，采集所有研究对象的外周静脉血，提取DNA冻存。利用SequenomMassARRAY技术，检测五个位点的多态性；比较SLE病例组和对照组中各多态性位点的基因型和等位基因频率分布是否存在差异。采用SPSS10.01软件进行统计分析，以α=0.05作为检验水准。结果（1）哈德-温伯格平衡（Hardy-Weinberg equilibrium，HWE)检验：5个位点rs11549465、 rs12434438、rs1957757、rs1951795和rs7143164的基因型分布在对照组中均达到遗传平衡。（2）HIF-1基因分型：五个位点的基因型频率和等位基因频率在病例组和对照组之间差异均无统计学意义（p>0.05）。（3）基因分型与主要临床特征的关系：分析rs11549465, rs12434438, rs1957757,rs1951795和rs7143164多态性与SLE主要临床特征潜在的易感性关联，结果显示在1497例SLE患者中各位点基因型与主要临床特征（碟状红斑、光敏感、口腔溃疡、狼疮肾炎、关节炎和神经系统异常等）均无统计学关联（p>0.05），与盘状红斑的有无存在统计学关联（p<0.05）。结论本研究表明在中国汉族人群中HIF-1基因多态性可能与SLE的易感性无统计学关联，HIF-1基因多态性与SLE患者有无盘状红斑首发症状存在统计学关联。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2014-03-01）
低氧诱导分子论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探究低氧诱导因子Hif-α在裂腹鱼亚科鱼类适应低氧环境中的作用及表达调控。方法利用RT-PCR技术获得了裂腹鱼亚科鱼类13个代表物种的Hif-1αΑ、Hif-1αB、Hif-2αΑ和Hif-2αB基因编码区序列,基于裂腹鱼亚科鱼类系统进化关系开展了基因选择压力分析,并选取花斑裸鲤进行低氧诱导表达研究。结果 Hif-1αΑ、Hif-1αB、Hif-2αΑ和Hif-2αB基因编码区长度分别为2196、2325、2544和2511 bp。通过序列比对发现裂腹鱼亚科鱼类HIF1αΑNODD结构域中保守脯氨酸羟基化基序LxxLAP发生缺失,特化及高度特化的裂腹鱼的HIF1αB CODD结构域中脯氨酸羟基化基序突变为PxxLAP。与常氧组相比,在重度缺氧条件下花斑裸鲤的脑和心脏组织中部分Hif-α基因表达量显著下降,在中度低氧中心脏组织中的Hif-1αA和Hif-2αA基因表达量上调。结论 Hif-α基因在13个物种中受到正向选择作用,但具体物种分支有待进一步研究,同时裂腹鱼亚科鱼类在适应慢性低氧和急性低氧环境可能存在两种不同的表达调控机制。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
低氧诱导分子论文参考文献
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