导读:本文包含了酸性甘露聚糖酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:黑曲霉,耐酸性α-淀粉酶,甘露聚糖酶,基因克隆
酸性甘露聚糖酶论文文献综述
刘欢[1]（2018）在《一株嗜酸性霉菌的鉴定及其α-淀粉酶和甘露聚糖酶基因的克隆与表达》一文中研究指出黑曲霉是一种重要的工业发酵菌,生长迅速,发酵周期短,且生长过程中不受杂菌的污染及不产毒素的特点,为符合美国FDA之GRAS公认安全菌株,产酶种类多,产酶能力强,一些极端酶大部分来自于曲霉,由此更加奠定了其在发酵工业上的地位。耐酸性α-淀粉酶可补足常用淀粉酶在低pH条件下性能不足的短板,在提高工业生产废品的利用和处理、降低原料消耗等方面具有很大的应用潜力与开发前景,甘露聚糖酶是一种新型的工业化生产酶,但是由于其发酵酶活低而导致其成本高,限制了应用范围,因此,对该酶的研究具有一定的价值。本实验从新疆某铀矿酸性浸出液分离得到一株霉菌,本实验中命名为MJ 5。根据形态学特征、rDNA ITS序列分析以及Biolog鉴定系统对该菌株进行鉴定,同时Biolog鉴定板可提供菌株对碳源的消耗情况,由此可分析了解该菌的生长情况及优势碳源。通过对菌株的粗酶液测定α淀粉酶酶活,根据全基因组测序结果,设计引物获得耐酸性α淀粉酶和甘露聚糖酶基因的序列片段,与pPIC9K构建表达载体,导入酵母受体细胞进行表达,结果表明:(1)结合叁种鉴定系统鉴定霉菌MJ 5为黑曲霉Aspergillus niger,霉菌的最适碳源为p-羟苯乙酸,在8大类碳源中对氨基酸类、脂类、酸类的利用率较高,由其所产的粗酶液酶学性质研究可知该菌产酸性淀粉酶,酶催化反应的最适pH和温度为5.0和45℃,相同温度不同pH的条件下保温反应1h,MJ 5淀粉酶的酶活性在pH 3-7范围内仍保持在80%以上,在pH相同温度不同的环境下进行保温反应1h,MJ 5淀粉酶在40℃、45℃、50℃以及55℃酶活性还剩余70%以上,由此可说明MJ 5的淀粉酶具有较好的pH稳定性和热稳定性。(2)根据黑曲霉全基因组测序结果对耐酸性α-淀粉酶基因序列设计合适引物,运用PCR扩增法从真菌Aspergillus niger MJ 5中得到属于糖苷水解酶第13家族(GH13)的耐酸性α-淀粉酶基因α-amy-5片段,将基因片段连接载体pPIC9K导入大肠杆菌TransI-T1中进行克隆,挑取阳性克隆测序,由结果可知:α-淀粉酶基因总长为1650 bp,N端前28个氨基酸为信号肽序列,去除信号肽序列后该基因长度为1566 bp,编码521个氨基酸和一个终止密码子,将重组质粒pPIC9K-α-amy-5线性化并电击转入毕赤酵母表达,但是没有检测到重组酶酶活,具体原因尚待分析。(3)从Aspergillus niger MJ 5中克隆得到的甘露聚糖酶基因man-5片段,全长为1008 bp,BlastP显示该酶为糖苷水解酶第26家族,除去信号肽序列后DNA片段与cDNA片段长度为954 bp,编码317个氨基酸和一个终止密码子,由生物信息学分析可以知道该段氨基酸序列有4个可被糖基化位点,并且等电点和分子量分别预测为5.71和37KDa,通过酶学性质测定可知该段基因的最适温度和最适pH为35℃和pH 5.0,在不同缓冲液下,37℃反应1 h,在pH 5.0-pH 7.0之间还残余80%的酶活,对pH耐受范围不广,在40℃反应1h,酶活几乎没有损失,但是随着温度的提高,甘露聚糖酶几乎失活,K~+、β-巯基乙醇、N~(a+)、Pb~(2+)、Mg~(2+)和EDTA可以提高甘露聚糖酶的酶活,Cr~(3+)、Mn~(2+)、Cu~(2+)和Ca~(2+)则对酶活有抑制作用,其中β-巯基乙醇对酶活的提高能力最强,Fe~(3+)对Man-5酶活的提高不受浓度的影响,其他离子及试剂对酶活几乎没有影响,由此可知金属离子及化学试剂对MJ 5所产的甘露聚糖酶影响不大,纯化后的Man-5的蛋白含量为8.57mg/mL,酶活为864 U/mL,最后得出比活为101 U/mg,动力学测定得出Man-5的Km和Vmax分别为1.9 mg/mL,1638μmol/min·mg。(本文来源于《东华理工大学》期刊2018-06-12）
成莉凤,冯湘沅,段盛文,郑科,刘正初[2]（2015）在《一种耐热偏酸性β-甘露聚糖酶基因克隆与高效表达》一文中研究指出【目的】克隆半纤维素降解高效菌株Bacillus subtilis BE-91的甘露聚糖酶基因并进行原核表达,对表达产物进行酶学性质研究。【方法】采用PCR扩增法从B.subtilis BE-91菌株中克隆β-甘露聚糖酶基因,分别连接到p EASY-E1和p ET28a载体,导入Escherichia coli BL21(DE3)进行诱导表达。用DNS法对工程菌株的胞内和胞外β-甘露聚糖酶进行定量分析,选取胞外甘露聚糖酶活力高的组分进行酶学性质研究。【结果】从B.subtilis BE-91菌株中克隆的β-甘露聚糖酶基因(Gen Bank登录号:KP277209)在E.coli中获得高效表达,工程菌株p EASY-man/BL产胞外β-甘露聚糖酶的活性可达229.1 IU/m L;该基因序列全长960 bp,包含319个氨基酸的编码序列和一个终止密码子;表达产物的最适反应温度为65°C,最适反应p H为6.0,属于耐热偏酸性β-甘露聚糖酶;该酶稳定温度≤65°C,稳定p H为4.5-7.0;1 mmol/L的Cu2+、Mn2+、Zn2+、Ca2+对该酶有激活作用,而Ba2+和Pb2+有强烈抑制作用。【结论】B.subtilis BE-91拥有珍贵的β-甘露聚糖酶基因资源,其胞外表达产物的耐热偏酸性酶学性质在开发饲料添加剂方面具有潜在的应用前景。(本文来源于《微生物学通报》期刊2015年11期）
张居作,李志波,徐君飞[3]（2014）在《产酸性甘露聚糖酶菌株的筛选、鉴定及酶活性研究》一文中研究指出采用酸性魔芋精粉平板,从土壤中分离到两株产酸性甘露聚糖酶菌株,命名为LZ11、LZ12;分别对菌株LZ11、LZ12在生长过程中分泌酸性甘露聚糖酶的活力进行跟踪研究后发现,这两株菌株的对数生长期皆为2~12 h,发酵8 h后,酶活力呈明显上升趋势,14 h达到峰值,分别为23.15 U,19.09 U;选择酶活力稍高的菌株LZ11进行鉴定,根据生理生化试验结果,初步鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)。(本文来源于《中国酿造》期刊2014年11期）
何勇[4]（2013）在《基因工程酸性β-甘露聚糖酶在生产应用等方面的技术优势》一文中研究指出本文初步研究了基因工程酸性β-甘露聚糖酶在研发、生产、应用等方面的技术优势。基因工程菌酸性β-甘露聚糖酶全套生产技术是肇东市日成酶制剂有限公司自主开发,具有自主知识产权的一项专利技术,其主要工作是以黑曲霉为栽体构建基因工程菌并高效表达,进而进行发酵提取生产,并对应用领域进行了对比(与传统菌产品)研究。实验证明本公司的酸性β-甘露聚糖酶生产水平在国内处于领先地位。新型酸性β-甘露聚糖酶在生产技术及应用领域效果比老菌种具有巨大的优势。(本文来源于《第九届中国酶工程学术研讨会论文摘要集》期刊2013-11-14）
赵顺阁[5]（2012）在《黑曲霉酸性β-甘露聚糖酶基因克隆与表达的研究》一文中研究指出β-甘露聚糖酶（β-1,4-D-mannan mannohydrolase，EC3.2.1.78）是一种水解甘露聚糖分子中的β-1,4-D-甘露吡喃糖苷键的半纤维素酶，主要来自于微生物。它在食品加工、动物饲料、石油开采、生物能源等领域都有广阔的应用前景。设计引物Fman-F和Fman-R扩增出黑曲霉(Aspergillus niger) LW-1的β-甘露聚糖酶基因的全长cDNA序列（不含polyA），该序列长为1417bp，包含5′-非编码区(41bp)、开放读码框(1152bp)和3′-非编码区(224bp)。其中开放阅读框含1152bp，编码383个氨基酸。该基因已提交到GenBank数据库中，数据库登录号为：JN123356。设计引物ManF和ManR，以A. niger LW-1总RNA为模板进行RT-PCR扩增出编码成熟肽基因(Anman5A)，成功构建表达重组子Pichia pastoris GS115/Anman5A，经0.5%甲醇诱导培养96h，产酶活为29.0U/mL，SDS-PAGE电泳显示重组β-甘露聚糖酶的分子量为52.0kDa，重组子基因组PCR鉴定结果表明Anman5A已整合到毕赤酵母基因组中。对重组β-甘露聚糖酶酶学性质研究显示：重组β-甘露聚糖酶的最适反应温度为70℃，在60℃下稳定；酶的最适反应pH值为3.5，在较宽的pH范围(2.5-7.5)内保持稳定；除了Fe~(2+)和Mn~(2+)对酶活性具有一定的抑制作用，大多金属离子（Li~+、Na~+、Ba~(2+)、Co~(2+)、Cu~(2+)、Mg~(2+)、Zn~(2+)和Fe~(3+)）对重组酶的活性影响不大，而EDTA和Ca~(2+)能激活酶的催化能力；重组β-甘露聚糖酶对角豆胶、魔芋胶和瓜尔豆胶的相对酶活分别为100%、79.1%和41.1%，而对木聚糖、淀粉和微晶纤维素均无酶活。利用双质粒体系首次实现了β-甘露聚糖酶基因(Anman5A)和木聚糖酶基因(xynII)在毕赤酵母中的共表达。双重重组子基因组PCR鉴定结果表明Anman5A和xynII均已整合到毕赤酵母基因组中，遗传稳定性试验表明两种酶基因在P. pastoris GS115/Anman5A-xynⅡ中的表达水平比较稳定。通过G418和摇瓶发酵筛选得到产酶最佳的工程菌P. pastoris GS115/Anman5A-xynⅡ，命名为GSMX2，对其表达条件进行初步优化，确定较优的表达条件：诱导培养120h，培养基起始pH值为7.0，甘油添加量为1.5%，甲醇添加量为1.5%。在上述条件培养下，β-甘露聚糖酶和木聚糖酶的活性分别达到37.1U/mL和193.6U/mL。(本文来源于《江南大学》期刊2012-06-01）
张娟,罗长财[6]（2011）在《耐酸性黑曲霉β-甘露聚糖酶的克隆及其在毕赤酵母中的表达分析》一文中研究指出目的:克隆黑曲霉β-甘露聚糖酶基因,研究该基因在毕赤酵母中的表达情况。方法:运用RT-PCR从黑曲霉AN070902中克隆β-甘露聚糖酶cDNA片段,与载体pPIC9K相连,构建重组载体VMAN-pPIC9K,电转化毕赤酵母GS115,筛选产酶最高菌株进行5 L液体发酵,对该菌株所产重组酶进行酶学性质分析。结果:克隆获得1152 bpcDNA,编码由383个氨基酸残基组成的蛋白质,该蛋白质属于GH5家族,理论pI和相对分子质量分别为4.48和41.6×103;筛选获得的重组菌株VMAN-pPIC9K-GS115在5 L液体发酵中上清酶活达11 785 U/mL;表达的重组酶是一种酸性β-甘露聚糖酶,最适反应pH值为3.0,经pH2.0～9.0处理2 h后剩余酶活保持90%以上;该重组酶最适反应温度为65℃,70℃处理1 h后剩余酶活保持75%以上;该重组酶活性被1 mmol/L的Fe3+和Mn2+显着抑制,被1mmol/L的Co2+显着激活。结论:重组耐酸性β-甘露聚糖酶的特性,决定了其在工业生产中,特别是动物饲料和食品加工中具有应用价值。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2011年02期）
李伟,陈权军[7]（2011）在《黑曲霉固态发酵饲用酸性β-甘露聚糖酶的研究》一文中研究指出以自筛选得到的1株黑曲霉为试验菌株,经固态发酵获得了较高活性的酸性β-甘露聚糖酶。以此酶粉为样本,在相应的pH条件下测定分析其他酶系的活力表现。测定此酸性β-甘露聚糖酶的最适反应pH及最适反应温度,并对其酸稳定性及对胃蛋白酶和胰酶的抗降解作用也进行了特定分析。结果发现,该酶系中除了含有高活性的酸性β-甘露聚糖酶,还含有酸性蛋白酶、木聚糖酶和羧甲基纤维素酶(CMCase)等多种酶活。在pH 2~6,此酸性β-甘露聚糖酶表现出很好的活力,最适酶促反应pH约在3.5;在酸性缓冲液(pH 2.8)中40℃保温8 h,酸性β-甘露聚糖酶的酶活几乎没有损失。在胃蛋白酶环境中(pH 2.8)40℃保温5 h,此酸性甘露聚糖酶表现出非常好的抗降解能力,在胰酶环境中(pH 7.5)40℃保温5 h,酶活力损失不超过20%,在实际生产中具有很广的应用前景。(本文来源于《饲料研究》期刊2011年03期）
梁增成,刘盼琦,诸葛增玉,高浩嵩,马金磊[8]（2010）在《β-甘露聚糖酶对鸡血浆中α1-酸性糖蛋白的影响》一文中研究指出本论文研究了在正常养殖状况下于饲料中添加药物和β-甘露聚糖酶后对肉鸡血浆酸性糖蛋白(AGP)水平、生产性能的影响。试验选择健康肉鸡1 500只,随机分为3组:一个对照组和两个试验组,每组500只。各个组都添加盐霉素(60 g/t饲料)防球虫感染。第1组为对照组(CONTR),不添加杆菌肽锌和β-甘露聚糖酶,第2组添加杆菌肽锌(50 g/t饲料,ZINEB)而不添加β-甘露聚糖酶,第3组添加β-甘露聚糖酶(100 g/t饲料,MANNS)而不加杆菌肽锌。整个试验期为42 d。试验过程中肉鸡自由采食、自由饮水。结果表明,与对照组相比,两个试验组鸡只血浆中的AGP均明显降低,且β-甘露聚糖酶对成鸡比杆菌肽锌更有效。在肉鸡生产性能水平方面,添加杆菌肽锌和添加β-甘露聚糖酶对降低料肉比、提高饲料效率均具有明显的作用,且β-甘露聚糖酶更有效。(本文来源于《中国兽医杂志》期刊2010年11期）
高兆建,唐仕荣,孙会刚,侯进慧[9]（2010）在《短小芽孢杆菌XZG33耐高温酸性β-甘露聚糖酶酶学性质研究》一文中研究指出[目的]从短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)XZG33发酵液中分离纯化甘露聚糖酶,并对其酶学性质进行研究。[方法]利用硫酸铵分级盐析、DEAE-cellulose DE52阴离子交换层析和Sephadex G-100分子筛凝胶过滤层析等方法,分离纯化到了均一的蛋白酶,酶纯度提高了39.7倍,回收率20.2%。通过SDS-PAGE电泳和SephadexG-75分子筛凝胶电泳测得酶蛋白分子量是40.0 kDa,为单亚基蛋白。酶最适作用pH值5.0,最适作用温度60℃,在pH值2.0～8.0范围内酶活性及稳定性较高。在80℃以下保温1 h,残余酶活还在80.0%以上。二价金属离子Mg2+、Ca2+、Co2+及Mn2+对酶有明显激活作用。酶对槐豆胶有强的底物水解特异性,而对淀粉、羧甲基纤维素钠以及桦树木聚糖水解活性极低。在最适作用条件下,以槐豆胶为底物测定Km为4.6 mg/ml。[结论]鉴于短小芽孢杆菌XZG33甘露聚糖酶具有以上优良的酶特性,它在食品原料及功能性低聚糖的开发方面有着潜在的应用价值。(本文来源于《安徽农业科学》期刊2010年18期）
[10]（2010）在《酸性β-甘露聚糖酶高产菌株的诱变育种》一文中研究指出以1株实验室保藏的酸性β-甘露聚糖酶产生菌黑曲霉(Aspergillusniger)LW-1作为原始出发菌株,首先经自然分离筛选出1株产酶较稳定的N-9作为诱变出发菌株,再经真空微波和甲基磺酸乙酯(EMS)逐级诱变处理,采用基础发酵培养基固态发酵筛选以及斜面传代培养,获得了一株高产和稳定酸性β-甘露聚糖酶的E-30菌株。其产β-甘露聚糖酶活性达36675U/g,是原始出发菌株LW-1的2.15倍。E-30菌株叁角瓶麸曲种子保藏2个月,产酶活性稳定。(本文来源于《饲用酶制剂开发与应用技术交流研讨会论文集》期刊2010-05-07）
酸性甘露聚糖酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
【目的】克隆半纤维素降解高效菌株Bacillus subtilis BE-91的甘露聚糖酶基因并进行原核表达,对表达产物进行酶学性质研究。【方法】采用PCR扩增法从B.subtilis BE-91菌株中克隆β-甘露聚糖酶基因,分别连接到p EASY-E1和p ET28a载体,导入Escherichia coli BL21(DE3)进行诱导表达。用DNS法对工程菌株的胞内和胞外β-甘露聚糖酶进行定量分析,选取胞外甘露聚糖酶活力高的组分进行酶学性质研究。【结果】从B.subtilis BE-91菌株中克隆的β-甘露聚糖酶基因(Gen Bank登录号:KP277209)在E.coli中获得高效表达,工程菌株p EASY-man/BL产胞外β-甘露聚糖酶的活性可达229.1 IU/m L;该基因序列全长960 bp,包含319个氨基酸的编码序列和一个终止密码子;表达产物的最适反应温度为65°C,最适反应p H为6.0,属于耐热偏酸性β-甘露聚糖酶;该酶稳定温度≤65°C,稳定p H为4.5-7.0;1 mmol/L的Cu2+、Mn2+、Zn2+、Ca2+对该酶有激活作用,而Ba2+和Pb2+有强烈抑制作用。【结论】B.subtilis BE-91拥有珍贵的β-甘露聚糖酶基因资源,其胞外表达产物的耐热偏酸性酶学性质在开发饲料添加剂方面具有潜在的应用前景。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
酸性甘露聚糖酶论文参考文献
[1].刘欢.一株嗜酸性霉菌的鉴定及其α-淀粉酶和甘露聚糖酶基因的克隆与表达[D].东华理工大学.2018
[2].成莉凤,冯湘沅,段盛文,郑科,刘正初.一种耐热偏酸性β-甘露聚糖酶基因克隆与高效表达[J].微生物学通报.2015
[3].张居作,李志波,徐君飞.产酸性甘露聚糖酶菌株的筛选、鉴定及酶活性研究[J].中国酿造.2014
[4].何勇.基因工程酸性β-甘露聚糖酶在生产应用等方面的技术优势[C].第九届中国酶工程学术研讨会论文摘要集.2013
[5].赵顺阁.黑曲霉酸性β-甘露聚糖酶基因克隆与表达的研究[D].江南大学.2012
[6].张娟,罗长财.耐酸性黑曲霉β-甘露聚糖酶的克隆及其在毕赤酵母中的表达分析[J].生物技术通讯.2011
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[8].梁增成,刘盼琦,诸葛增玉,高浩嵩,马金磊.β-甘露聚糖酶对鸡血浆中α1-酸性糖蛋白的影响[J].中国兽医杂志.2010
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[10]..酸性β-甘露聚糖酶高产菌株的诱变育种[C].饲用酶制剂开发与应用技术交流研讨会论文集.2010