导读:本文包含了褪绿叶斑病毒论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:检测效果,反应体系,PCR,ACLSV
褪绿叶斑病毒论文文献综述
胡国君,董雅凤,张尊平,范旭东,任芳[1]（2019）在《苹果褪绿叶斑病毒双引物对PCR检测体系的建立及应用》一文中研究指出病毒病在我国苹果树上普遍发生,其中苹果褪绿叶斑病毒(apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)、苹果茎沟病毒(apple stem grooving virus,ASGV)和苹果茎痘病毒(apple stem pitting virus,ASPV)最常见,常混合侵染,引起树体衰弱,苹果产量和品质下降,经济损失严重(Cieniewicz&Fuchs,2016)。因此,建立快速、准确的检测技术对病毒病防控具有重要意义。Hu et al.(2015)认为在病毒检测过程中,需(本文来源于《植物保护学报》期刊2019年05期）
陈雅寒,马强,李正男[2]（2018）在《东北和内蒙古苹果褪绿叶斑病毒检测及其多样性分析》一文中研究指出采用RT-PCR对从我国东北叁省和内蒙古自治区采集的165份苹果枝条样品进行了苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)的检测,明确了ACLSV在我国东北冷寒苹果产区的发生和分子变异情况。在165份苹果样品中ACLSV的检出率达62.42%,说明ACLSV在我国东北冷寒苹果产区普遍发生;克隆了其中25份样品的全长CP基因,将获得的CP基因序列与NCBI数据库中报道的来源于世界上不同国家、不同寄主的76个ACLSV分离物CP基因序列进行系统发育和一致性分析,结果表明这101个ACLSV分离物分成4个组,本研究中克隆到的25个ACLSV分离物分别属于B6、P205和SHZ组,它们彼此间核酸一致性为84.0%～99.7%,与其他ACLSV分离物彼此间核酸一致性为67.7%～99.7%;重组分析结果表明ACLSV-鄂尔多斯和ACLSV-吉林白城分离物CP基因序列中存在重组事件,上述研究结果证明,ACLSV在我国东北冷寒苹果产区存在丰富的分子变异。本研究中采集的苹果品种为沙果、鸡心果、金红苹果等小苹果品种,结合系统发育分析结果证明来源于不同寄主、不同地理区域、不同苹果品种的ACLSV分离物间存在寄主特异性,如Ta Tao5组所有ACLSV分离物均来源于桃树,但不存在地理区域特异性。本研究结果为ACLSV遗传多样性研究提供了一定的依据,对指导ACLSV病毒防治具有重要的意义。(本文来源于《中国植物病理学会2018年学术年会论文集》期刊2018-08-24）
李楠,王亚迪,杨军玉,丁丽,王亚南[3]（2018）在《苹果褪绿叶斑病毒在苹果植株体内的分布》一文中研究指出以采自河北农业大学苹果园的褪绿叶斑病毒(apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)样本为试材,采用实时荧光定量RT-PCR方法,研究了苹果不同组织部位、不同树体方位、不同生长发育时期和病毒相对含量之间的关系,以期为明确褪绿叶斑病毒在苹果植株中的时空分布规律提供参考依据。结果表明:从组织部位角度分析,在苹果的盛花期,ACLSV在花中的相对含量最高,芽中最低,ACLSV相对含量由高到低依次为:花、二年生枝皮组织、叶、一年生枝皮组织和芽。从树体方位角度分析,在苹果一年生枝皮组织中,ACLSV在4个方位上的病毒相对含量差异显着,位于南向的病毒相对含量最高,西向最低。从生长发育时期角度进行分析,2015年9月至2016年4月,苹果一年生枝皮组织中,病毒相对含量从9月中旬至10月中旬大幅升高,10月中旬达到这8个月中的最高峰,此后病毒相对含量开始下降,3月起呈上升趋势。(本文来源于《北方园艺》期刊2018年13期）
张双纳,李正男,范旭东,张尊平,任芳[4]（2018）在《苹果褪绿叶斑病毒RT-LAMP检测方法的建立》一文中研究指出【目的】建立一种利用反转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)技术简便、快速检测苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)的方法。【方法】在ACLSV基因组序列的3个保守区域设计3组引物,每组引物包括一对外引物(F3/B3)和一对内引物(FIP/BIP),从3组引物中筛选出一组效果最好的引物。对RT-LAMP反应体系,即Mg~(2+)、d NTPs、Betaine、FIP/BIP、B3/F3浓度进行优化,Mg~(2+)浓度梯度设置为0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0 mmol·L~(-1),d NTPs浓度为0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8 mmol·L~(-1),Betaine浓度为0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mol·L~(-1),FIP/BIP浓度为0.8、1.2、1.6、2.0、2.4μmol·L~(-1),F3/B3浓度为0、0.1、0.2、0.3、0.4μmol·L~(-1);优化RT-LAMP反应条件,采用已优化的反应体系,设置65、63、61、59、57℃5个不同的反应温度,反应时间设定为90 min。在引物筛选和反应体系反应条件优化过程中,使用荧光定量PCR仪,在反应体系中加入荧光染料,利用荧光信号积累实时监测整个反应过程,根据扩增曲线判断反应结果。以携带苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)、苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus,ASPV)、苹果花叶病毒(Apple mosaic virus,Ap MV)的植株叶片中提取的总RNA为模板测试RT-LAMP检测方法的特异性。将含ACLSV的叶片总RNA原液进行10倍梯度稀释,以RNA原液和10~(-1)、10~(-2)、10~(-3)、10~(-4)、10~(-5)、10~(-6)稀释液作为模板,进行RT-LAMP反应,测试RT-LAMP检测方法的灵敏性。随机采集23株苹果树的叶片,同时进行RT-LAMP和RT-PCR检测,加入SYBR GreenⅠ进行可视化检测。【结果】建立了ACLSV RT-LAMP检测方法,优化的检测体系为:6.0 mmol·L~(-1) Mg~(2+)、1.2 mmol·L~(-1) d NTPs、0.2 mol·L~(-1) Betaine、1.6μmol·L~(-1) FIP/BIP和0.2μmol·L~(-1) F3/B3引物,最佳反应条件为59℃,60 min。特异性检测中,仅ACLSV检测结果为阳性,对照组均为阴性。灵敏性检测中,RT-LAMP方法最低可检测到10-3 RNA稀释液,灵敏度是RT-PCR方法的100倍。随机采取的23株苹果叶片样品RT-PCR阳性检出率为52.2%,RT-LAMP阳性检出率为65.2%,RT-LAMP的检出率高于RT-PCR。【结论】建立的ACLSV RT-LAMP检测方法具有简便、快速、灵敏性高、成本低等特点,可满足基层、科研部门在田间调查、种苗繁育和海关检疫中快速检测ACLSV。(本文来源于《中国农业科学》期刊2018年09期）
张双纳,李正男,张尊平,范旭东,任芳[5]（2018）在《苹果褪绿叶斑病毒辽宁分离物生物学和基因组研究》一文中研究指出苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)属于乙型线形病毒科(Betaflexiviridae)纤毛病毒属(Trichovirus),基因组为正义单链RNA,含有约7 500个核苷酸,编码3个部分重迭的开放阅读框。目前从Gen Bank数据库可以检索到19个ACLSV分离物的基因组序列。该病毒侵染仁果与核果,如苹果和桃,在苹果栽培种上不引起症状,在特定指示植物上引起症状,如俄罗斯苹(本文来源于《植物病理学报》期刊2018年05期）
张双纳[6]（2018）在《苹果褪绿叶斑病毒RT-LAMP检测技术研究及侵染性克隆载体构建》一文中研究指出苹果是主要的经济果树。在苹果的高产优质生产中,病毒病害已经成为制约苹果产业发展的重要因素。在世界范围内苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)在苹果上检出率最高,为害最严重,地理分布最广的苹果病毒病之一。基于我国对ACLSV的研究现状且对苹果高质安全生产的迫切需求,本文旨在完成以下实验:利用反转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)技术,建立一种简便、快速检测ACLSV的检测方法;以带有ACLSV的辽宁兴城寒富苹果(Malus domestica cultivar Hanfu)为研究材料,采用RT-PCR结合RACE技术,扩增了该ACLSV分离物的全长基因组;构建了ACLSV侵染性克隆载体,为后续开展ACLSV复制、移动,与寄主互做等致病机理研究,改造用于苹果基因功能研究的基因沉默载体奠定基础。具体研究成果如下:1、建立了ACLSV RT-LAMP检测方法,优化的各反应物浓度为:6.0 mM Mg~(2+)、1.2 mM dNTPs、1.0 M Betaine、1.6μM FIP/BIP和0.2μM F3/B3引物,59℃反应60 min;特异性测试中,仅ACLSV检测结果为阳性,对照组均为阴性;灵敏性测试中,此法最低可检测到10~(-3)倍RNA稀释液;随机采取的23株苹果叶片样品RT-PCR阳性检出率为52.2%,RT-LAMP法检测ACLSV,阳性检出率为65.2%,RT-LAMP的检出率高于RT-PCR,表明RT-LAMP具有较高的灵敏性。2、ACLSV XC-HF分离物基因组全长7557个核苷酸(nt),编码3个ORF,与已经报道的19个ACLSV分离物基因组核苷酸序列的一致性为68.9%~84.4%。基于全长基因组序列的系统发育分析证明,Genbank登录的20个ACLSV分离物被划分为6个组,ACLSV XC-HF分离物位于JB组内,与中国梨分离物JB、KMS、YH和中国山楂分离物SY03聚为一支;重组分析结果显示该分离物为一个自然重组产物,重组区域发生在1-338nt。3、通过摩擦接种和木本指示植物双芽嫁接法分别将该分离物接种到草本寄主苋色黎(Chenopodiu mamaranticolor)和木本指示植物俄罗斯苹果(Malus sylvestris cv.R12740-7A)上,该分离物在这两种寄主上分别引起褪绿和皱缩症状。4、本实验成功构建了ACLSV侵染性克隆载体,接种后的西方烟出现了感染ACLSV的症状,叶片黄化褪绿,经凝胶电泳检测ACLSV呈阳性。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2018-03-01）
郑文燕[7]（2017）在《山楂属植物中苹果褪绿叶斑病毒检测及病毒脱除方法研究》一文中研究指出苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)是危害极大的果树潜隐性病毒之一,该病毒感染果树初期大多没有明显症状,较难及早发现,但是随着树体的生长,病毒会逐年积累,造成果园减产。ACLSV侵染的植物种类众多,不同的ACLSV分离物在基因组序列上存在较大的变异。因此,本研究基于转录组高通量测序解析的山楂属植物ACLSV基因组序列设计病毒检测引物,建立了优化的病毒检测体系,并探讨基于山楂组培苗的ACLSV脱除技术,为揭示ACLSV在山楂属植物中的传播及培育山楂无病毒苗奠定基础。主要研究如下:1.根据山楂属植物ACLSV基因组序列设计病毒RT-PCR检测引物,比较cDNA模板浓度、Taq DNA聚合酶种类及病毒检测采样部位对病毒RT-PCR检测效果的影响。结果表明,引物对F3/R3适合作为病毒的检测引物;RT-PCR扩增时,20μ1L的PCR体系中加入1 μL未经稀释的cDNA较为适宜;Promega公司的Taq DNA聚合酶适用于ACLSV的PCR检测;嫩叶扩增出的谱带最强,说明其病毒含量最高,适合作为病毒检测试材的采样部位。2.根据ACLSV外壳蛋白基因保守序列设计了特异性引物和TaqMan探针,以构建的PMD18-ACLSV-CP阳性重组质粒为标准品绘制TaqMan探针定量RT-PCR标准曲线,并对该方法的灵敏性、重复性和实用性进行检测,由此建立了山楂属植物中基于TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR技术的ACLSV快速检测体系。结果显示,以重组质粒为标准品建立的标准曲线相关系数达0.99,扩增效率高,建立的TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR病毒检测体系灵敏度为100 copies·μL-1,比常规RT-PCR高100倍,批内与批间变异系数均小于0.91%。3.利用建立的山楂属植物中ACLSV的检测体系,对80份山楂属植物携带ACLSV的情况进行检测,结果18份山楂试材检测出ACLSV,带毒率为22.5%,并且这18份试材均属于山楂(C.pinnatifida)或大果山楂(C.pinnatifida var.major),在供试的阿尔泰山楂(CAltaic.(Loud.)Lange)、绿肉山楂(C.Chlorosarca Maxim)、伏山楂(C.BBrettschnhdeSchneid)及毛山楂(C.Mamioiczii Schneid)中未检测到带病毒的植株。4.为了建立山楂属植物ACLSV脱除体系,比较了热处理(37 ℃C、30 d)、化学处理(培养基中添加20mg·L-1的叁氮唑核苷,处理40d)、热处理与化学处理结合方法(处理30 d)3种方法对山楂组培苗中ACLSV的脱除效率。首先以感染ACLSV的'新宾软籽,、'秋红,的1 a生枝条为试材,通过茎尖培养及增殖继代获得生长健壮的山楂组培苗;然后以组培苗为试材,进行不同脱毒处理;最后采用ACLSV检测体系检测材料的带病毒情况。结果显示,热处理或热处理结合化学处理均可完全脱除ACLSV,而单纯化学处理的脱毒效率与品种有关,其中'新宾软籽'和'秋红'的脱毒率分别为88.9%和57.1%,表明组培苗热处理是脱除山楂植株中ACLSV的有效方法。(本文来源于《沈阳农业大学》期刊2017-06-01）
王亚迪,李楠,吕运霞,王树桐,胡同乐[8]（2016）在《苹果褪绿叶斑病毒互作寄主因子的鉴定》一文中研究指出苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leafspot virus,ACLSV)是苹果上危害最大的一类潜隐性病毒,广泛分布于世界各地。该病毒单独侵染或与其他病毒混合侵染严重影响果树产量及果实品质,造成严重的经济损失。本研究在利用酵母双杂交技术筛选能与ACLSV CP、MP互作的苏俄苹果寄主因子的基础上,通过生物信息学分析,从中选取可能具有重要功能的寄主因子,利用酵母双杂交、Pull-down技术进行进一步互作验证。主要研究结果如下:(1)构建带有完整寄主基因Malus4-1、Malus15-1、Malus40-5、Malus72-3、Malus85-1、Malus86-1的酵母双杂交表达载体。利用共转化法将诱饵载体pGBKT7-CP、pGBKT7-MP与带有上述6种寄主基因的酵母表达载体转化至酵母菌株Y2H gold中,将共转化产物涂布于四缺(SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-Gal)培养基上,观察酵母的生长及显色情况,验证寄主功能基因与寄主基因之间的互作。结果表明,寄主因子Malus15-1、Malus40-5在四缺平板上菌落呈明显蓝色,证明CP、MP与寄主因子Malus15-1、Malus40-5互作。(2)构建原核表达载体pET28a-CP、pET28a-MP、pET28a-15-1和pET28a-40-5,然后将重组载体转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,并诱导表达目的蛋白。采用Pull-down方法,将洗脱产物经SDS-PAGE、Western blot检测蛋白间的互作。结果表明,以CP为诱饵捕获Malus15-1蛋白,洗脱产物中有21.5 kDa、16 kDa两条明显条带;以MP蛋白为诱饵捕获Malus15-1蛋白,洗脱产物中有50.8 kDa、16 kDa两条条带,证明CP、MP与Malus15-1之间存在直接相互作用。同样分别以CP、MP为诱饵捕获Malus40-5蛋白,洗脱产物中仅有一条条带,证明CP、MP与Malus40-5蛋白之间无相互作用。Malus15-1为苏俄苹果PR10基因。研究结果将为揭示寄主基因在ACLSV侵染过程中具有的生物学功能及两蛋白互作的意义奠定基础。(本文来源于《中国植物病理学会2016年学术年会论文集》期刊2016-08-05）
李楠,王亚迪,吕运霞,丁丽,王树桐[9]（2016）在《苹果褪绿叶斑病毒植株体内分布》一文中研究指出苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)是世界性分布最广的一类苹果潜隐性病毒,该病毒会导致树体衰弱、产生慢性病害,严重影响果树的生长发育。繁育无毒苗木是目前苹果病毒病害最为有效的防治措施。但ACLSV在常规品种上不表现明显症状,加之树体大、病毒含量受气候因素影响,在不同生育期病毒在树体内分布不均,影响了病毒的检测效率。因此,了解病毒在植株体内的分布规律是准确诊断的前提,也是果树无毒栽培的基本保障。本研究利用实时荧光定量RT-PCR技术,对苹果不同生长发育时期、不同组织部位ACLSV进行测定,揭示病毒分布规律,为ACLSV的准确诊断及无毒苗木生产奠定基础。取得的具体研究结果如下。(1)ACLSV实时荧光定量RT-PCR检测体系的优化:参考王鹏等(2013)的引物,对检测体系进行了优化。测定了内参基因和病毒基因引物特异性,确定病毒特异性引物最佳引物浓度为10μmol/L、最佳退火温度为57℃,优化后的检测体系灵敏度为10~(-6)模板稀释液,并且验证了该方法在田间检测中的可靠性。(2)ACLSV在苹果植株体内的分布:采用实时荧光定量RT-PCR技术,对2015年9月中旬至2016年4月中旬苹果树体内ACLSV基因相对表达量进行了测定。从生长发育时期、树体方位和组织部位3个角度对病毒含量变化进行了分析,结果表明:①从生长发育时期角度进行分析,在苹果一年生枝条树皮组织中,以9月份ACLSV RNA表达量为参照,病毒含量的整体趋势是从9月中旬到10月中旬大幅度升高,10月中旬达到这8个月份中的最高峰,此后病毒含量开始下降,3月起呈上升趋势。②从树体方位角度分析,在苹果一年生枝条树皮组织中,以东向ACLSV RNA的表达量为参照,ACLSV在4个方位上的病毒含量差异比较显着,位于南向的病毒含量在所有采集时期中均高于其他方向,而西向与北向的差异较小且大部分时期都低于东向。③从组织部位角度分析,在苹果的盛花期,以幼叶中ACLSV RNA的表达量为参照,ACLSV在花中的含量最高,幼叶最低,ACLSV含量由高到低的顺序依次为:花、两年生枝条树皮组织、芽、一年生枝条树皮组织和幼叶。(本文来源于《中国植物病理学会2016年学术年会论文集》期刊2016-08-05）
王海荣,刘伟,安淼,董晓民,余贤美[10]（2016）在《桃上苹果褪绿叶斑病毒的发生与检测》一文中研究指出对山东省果树研究所试验基地‘玉妃’、‘超红’、‘岱妃’叁个桃品种的苹果褪绿叶斑病毒病的发生情况进行调查,采集22份样品,利用ACLSV特异性引物进行RT-PCR检测。结果表明,在‘玉妃’桃的叶片中扩增出与苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)预期大小一致的目的片段,并与GenBank登录的病毒核苷酸序列具有较高的一致性,而在‘超红’和‘岱妃’桃中均未检测到该病毒。(本文来源于《山东农业科学》期刊2016年04期）
褪绿叶斑病毒论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
采用RT-PCR对从我国东北叁省和内蒙古自治区采集的165份苹果枝条样品进行了苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)的检测,明确了ACLSV在我国东北冷寒苹果产区的发生和分子变异情况。在165份苹果样品中ACLSV的检出率达62.42%,说明ACLSV在我国东北冷寒苹果产区普遍发生;克隆了其中25份样品的全长CP基因,将获得的CP基因序列与NCBI数据库中报道的来源于世界上不同国家、不同寄主的76个ACLSV分离物CP基因序列进行系统发育和一致性分析,结果表明这101个ACLSV分离物分成4个组,本研究中克隆到的25个ACLSV分离物分别属于B6、P205和SHZ组,它们彼此间核酸一致性为84.0%～99.7%,与其他ACLSV分离物彼此间核酸一致性为67.7%～99.7%;重组分析结果表明ACLSV-鄂尔多斯和ACLSV-吉林白城分离物CP基因序列中存在重组事件,上述研究结果证明,ACLSV在我国东北冷寒苹果产区存在丰富的分子变异。本研究中采集的苹果品种为沙果、鸡心果、金红苹果等小苹果品种,结合系统发育分析结果证明来源于不同寄主、不同地理区域、不同苹果品种的ACLSV分离物间存在寄主特异性,如Ta Tao5组所有ACLSV分离物均来源于桃树,但不存在地理区域特异性。本研究结果为ACLSV遗传多样性研究提供了一定的依据,对指导ACLSV病毒防治具有重要的意义。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
褪绿叶斑病毒论文参考文献
[1].胡国君,董雅凤,张尊平,范旭东,任芳.苹果褪绿叶斑病毒双引物对PCR检测体系的建立及应用[J].植物保护学报.2019
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[10].王海荣,刘伟,安淼,董晓民,余贤美.桃上苹果褪绿叶斑病毒的发生与检测[J].山东农业科学.2016