导读:本文包含了结膜成纤维细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:结膜松弛症,成纤维细胞,肿瘤坏死因子α,丝裂原活化蛋白激酶
结膜成纤维细胞论文文献综述
贾元玲,项敏泓,文杭,李青松,詹月萍[1]（2018）在《杞精明目汤颗粒剂对肿瘤坏死因子-α刺激下结膜松弛症成纤维细胞MAPK信号通路的影响》一文中研究指出目的观察肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)刺激下,杞精明目汤颗粒剂对结膜松弛症(conjunctivochalasis,CCH)结膜成纤维细胞表达丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)的影响,探讨CCH的发病机制及有效治疗策略。方法体外培养CCH结膜成纤维细胞,分为CCH组、CCH+TNF-α组及CCH+TNF-α+杞精明目汤组。CCK-8确定杞精明目汤颗粒剂有效浓度,用含10~(-2)mg·L~(-1)的TNF-α刺激培养的成纤维细胞,加入杞精明目汤颗粒剂干预48 h,分别采用ELISA、Western Blot和RT-PCR检测MAPK信号通路相关蛋白及mRNA的表达,并行统计学分析。结果 CCK-8确定杞精明目汤颗粒剂有效浓度为1.61 g·L~(-1)。叁组MAPK信号通路相关分子细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)、c-jun氨基末端激酶(c-jun N-terminal kinase JNK)、p38 MAPK及其磷酸化水平的吸光度(A_(450))值总体差异均有统计学意义(均为P<0.05),且TNF-α可明显上调CCH表达ERK1/2、JNK1/2、p-JNK1/2、p38 MAPK、p-p38 MAPK(均为P<0.05),而杞精明目汤可显着下调TNF-α刺激后的CCH成纤维细胞表达ERK1/2、p-ERK1/2、JNK1/2、p38 MAPK、p-p38 MAPK(均为P<0.05)。叁组p-ERK1/2、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白总体差异均有统计学意义(均为P<0.05),且TNF-α可明显上调CCH成纤维细胞p-ERK1/2、p-JNK1/2、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白的表达(均为P<0.05),杞精明目汤可显着下调TNF-α刺激后的CCH成纤维细胞表达p-ERK1/2、p38 MAPK(均为P<0.05)。叁组ERK1/2、p38 MAPK mRNA表达总体差异均有统计学意义(均为P<0.05),且TNF-α可明显上调CCH成纤维细胞ERK1/2、p38 MAPK mRNA的表达(均为P<0.05),杞精明目汤可显着下调TNF-α刺激后的CCH成纤维细胞p38 MAPK mRNA表达(P<0.05)。结论 TNF-α可上调CCH成纤维细胞MAPK信号通路的表达,导致CCH的发生发展,而杞精明目汤颗粒剂在一定程度上可下调MAPK信号通路的表达从而发挥治疗作用。(本文来源于《眼科新进展》期刊2018年04期）
晏维玲[2]（2018）在《MiRNA-29b调控p53表达在正常人眼结膜下Tenons囊成纤维细胞中表达的研究》一文中研究指出目的通过离体原代培养人眼Tenon’s囊成纤维细胞,模拟体外青光眼术后滤过道瘢痕形成的过程,检测正常的成纤维细胞和活化了的肌成纤维细胞中microRNA-29b和p53的表达水平调控关系,探讨青光眼滤过术后滤过道瘢痕形成的机制。方法取安徽医科大学第一附属医院眼科手术室2016年3月至2016年7月眼科斜视手术病人术眼正常Tenon’s囊组织,用组织块培养法培养出原代成纤维细胞,传代至2-4代并进行实验。用TGF-β1(10ng/ml)将成纤维细胞活化为肌成纤维细胞,分别用qPCR和IHC技术检测p53 mRNA和蛋白在成纤维细胞和肌成纤维细胞中在表达水平。用si RNA转染抑制成纤维细胞中p53的表达,使用qPCR检测miRNA-29b和p53在成纤维细胞、活化的肌成纤维细胞和转染后的肌成纤维细胞中的表达情况。再用SPSS16.0软件等软件进行数据分析。结果1.用组织块培养法约2周左右可见细胞从组织边缘爬出,6-8周可细胞可铺满细胞培养瓶瓶底,在放大10倍的倒置显微镜下可见成纤维细胞体积较大,呈典型的扁平长梭形,细胞核居中,呈规则卵圆形,细胞之间成螺旋状排列。将细胞传代后用TGF-β1(10ng/ml,48h)活化后,细胞由成纤维细胞活化为肌成纤维细胞,细胞体积增大且细胞形态不规则,边缘毛躁,细胞之间呈无序状态。2.分别将成纤维细胞和活化的肌成纤维细胞消化爬片后,按照免疫组化步骤操作,DAB染色后,倒置显微镜下观察发现细胞核着色深染,而细胞质未着色,说明p53蛋白表达于细胞核中,呈黄褐色弥漫性分布,细胞质中未见表达。根据着色深浅可以看出MFs中p53蛋白的表达量明显高于HTFs组。选用image proplus软件对免疫组化所有图片根据染色着色程度不同进行分析,独立样本均数t检验显示:各组数据均服从正态分布,两组细胞中p53蛋白表达量MFs组(0.0419±0.0124)高于HTFs(0.0089±0.0085)组,t=-10.384,P<0.05,N=3,差异有统计学意义。3.将HTFs细胞及MFs细胞提取mRNA,逆转录为cDNA后,经过qPCR比较p53mRNA的相对表达量。采用独立样本t检验,分析HTFs及MFs细胞中p53的表达水平。结果显示,与HTFs(1±0.0672)比较,MFs中p53的表达量(4.8650±0.2577)明显增高,t=-19.821,p<0.05,N=3,差异具有统计学意义。4.将HTFs细胞,MFs细胞及siRNA转染的细胞提取mRNA,逆转录cDNA,用qPCR验证p53mRNA相对表达量,观察p53是否转染成功,再用qPCR检测miRNA-29b的相对表达量。qPCR结果显示,叁组细胞中miR-29b的表达量从高到低依次为:siRNA-p53转染组,HTFs正常组,MFs活化组,采用KruskalWallis H检验的统计学方法,对各组细胞中p53的表达量及miR-29b的表达量进行分析。发现各组中,p53:HTFs组1(1,1),MFs组3.9750(1.6350,6.2452),siRNA转染组0.0560(0.0112,0.1195),阴性对照组0.9750(0.8300,1.1200)。miR-29b:HTFs组1(1,1),MFs组0.5450(0.4500,0.6100),siRNA转染组5.0500(3.0875,4.1700),阴性对照组1.0250(0.9475,1.1250),用KruskalWallis H检验的统计学方法对各组p53mRNA数据进行分析,X2=15.928,双侧P值为0.000,认为各组之间有差别,再将各组进行两两比较,除阴性对照组与HTFs组P>0.05,差异无统计学意义外,其余各组中p53的表达量均有差异,p<0.05,差异均有统计学意义。同样,用Kruskal-Wallis H检验的统计学方法对各组miR-29b数据进行分析,X2=22,双侧P值为0.000,认为各组之间有差别,再将各组进行两两比较,除阴性对照组与HTFs组P>0.05,差异无统计学意义外,其余各组中miR-29b的表达量均有差异,p<0.05,差异均有统计学意义。5.通过划痕实验比较HTFs细胞及MFs细胞迁徙能力,发现HTFs活化为MFs后,细胞的迁徙能力增强。结论活化了的MFs中,p53mRNA及p53蛋白表达均增高,而miRNA-29b表达降低,下调p53表达后,MiRNA-29b表达上调,说明MiRNA-29b可能通过下调p53的表达而抑制青光眼术后滤过道瘢痕的形成。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2018-03-01）
李媛,王涛,崔月玲,赵儒意,谭薇[3]（2017）在《TGF-β2诱导人眼结膜下筋膜囊成纤维细胞Survivin表达变化》一文中研究指出目的检测TGF-β2作用下人眼结膜下筯膜囊成纤维细胞(HCFs)表达Survivin变化情况,初步探讨Survivin与TGF-β2在结膜组织瘢痕化中的作用。方法采用免疫荧光细胞化学染色检测人眼结膜下筋膜囊成纤维细胞Survivin表达;Western blot检测TGF-β2不同浓度(2、5、10 ng/m L)作用下HCFs表达Survivin的变化,以及5 ng/m L TGF-β2作用不同时间(1、2、6、12、24、48 h)HCFs表达Survivin的变化情况。结果人眼结膜下筋膜囊成纤维细胞可见Survivin表达;TGF-β2不同浓度(2、5、10 ng/m L)均抑制结膜成纤维细胞Survivin的表达,具有一定浓度依赖性;5 ng/m L TGF-β2分别刺激HCFs 1、2、6、12、24、48 h,各组与对照组相比较Survivin表达均明显降低。结论 TGF-β2阻抑人眼结膜下筋膜囊成纤维细胞Survivin表达,可能参与其调控成纤维细胞的增殖或凋亡水平。(本文来源于《遵义医学院学报》期刊2017年06期）
贾元玲[4]（2017）在《杞精明目汤颗粒剂对TNF-α刺激下结膜松弛症成纤维细胞表达MAPK信号通路的影响》一文中研究指出目的:观察肿瘤坏死因子(TNF-α)刺激下,杞精明目汤颗粒剂对结膜松弛症(CCh)成纤维细胞表达丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的影响,探讨结膜松弛症的发病机制及有效治疗策略。方法:体外培养CCh结膜成纤维细胞,CCK-8确定杞精明目汤颗粒剂有效浓度,用含10ng/ml的TNF-α细胞全培养基预刺激培养的成纤维细胞后加入杞精明目汤颗粒剂干预48h,分别采用ELISA、Western Blot和RT-PCR检测p38 MAPK、JNK1/2、ERK1/2的表达。结果:CCK-8确定杞精明目汤颗粒剂有效浓度为1.51mg/ml,ELISA检测CCh组、 CCh+TNF-α组、CCh+TNF-α+杞精明目汤组p38MAPK、p-p38 MAPK、JNK1/2、p-JNK1/2、ERK1/2、p-ERK1/2吸光度(A450)OD值表达总体均数差异均有统计学意义(p38 MAPK:F=15.675,P=0.004;p-p38 MAPK:F=7.910,P=0.021;JNK1/2:F=37.415,P=0.000;p-JNK1/2:F=7.557,P=0.023;ERK1/2:F=13.016,P=0.007;;p-ERK1/2:F=7.620,P=0.023)。其中TNF-α可明显上调结膜松弛症表达p38 MAPK、p-p38 MAPK、JNK1/2、p-JNK1/2、ERK1/2(P<0.05);而杞精明目汤颗粒剂可明显下调TNF-α刺激后的CCh成纤维细胞表达p38 MAPK、p-p38 MAPK、JNK1/2、ERK1/2、p-ERK1/2(P<0.05)。CCh组、 CCh+TNF-α组、CCh+TNF-α+杞精明目汤组p38 MAPK、p-p38 MAPK、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达总体均数差异均有统计学意义(p38 MAPK:F=6.653,P=0.030;p-p38 MAPK:F=5.632,P=0.042;p-ERK1/2:F=5.535,P=0.043)。而叁组JNK1/2、p-JNK1/2、ERK1/2蛋白表达总体均数差异均无统计学意义(JNK1/2:F=2.641,P=0.150;pJNK1/2:F=3.557,P=0.096;ERK1/2:F=1.538,P=0.289),TNF-α可明显上调结膜松弛症p38 MAPK、p-p38 MAPK、p-JNK1/2、p-ERK1/2蛋白的表达,与结膜松弛症CCh组比较差异均有统计学意义(P<0.05);杞精明目汤可明显下调TNF-α刺激后的CCh组结膜成纤维细胞表达p38 MAPK、p-ERK1/2,与TNF-α刺激后的CCh组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。CCh组、CCh+TNF-α组、CCh+TNF-α+杞精明目汤组p38 MAPK、ERK1/2 mRNA表达总体均数差异均有统计学意义(p38 MAPK:F=5.189,P=0.049;ERK1/2:F=10.130,P=0.032),而叁组JNK1/2 mRNA表达总体均数差异均无统计学意义(F=3.527,P=0.097);可见TNF-α可明显上调结膜松弛症p38MAPK、ERK1/2、mRNA的表达(P<0.05),杞精明目汤可明显下调TNF-α刺激后的CCh成纤维细胞p38 MAPK mRNA表达(P<0.05)。结论:TNF-α可上调CCh成纤维细胞MAPK信号通路相关蛋白和mRNA的表达;杞精明目汤一定程度上可下调TNF-α刺激后的结膜松弛症成纤维细胞表达MAPK信号通路,可见炎性细胞因子和MAPK信号通路参与结膜松弛症的发生发展过程,而杞精明目汤可起到治疗作用。(本文来源于《2017年第五次世界中西医结合大会论文摘要集（上册）》期刊2017-12-06）
柯梅青,张兴儒,李青松,项敏泓,周桂贞[5]（2015）在《杞精明目汤药物血清对结膜松弛症成纤维细胞TSG-6和PTX3表达的影响》一文中研究指出目的:研究杞精明目汤药物血清对结膜松弛症成纤维细胞TSG-6和PTX3表达的影响,探讨结膜松弛症的发病机制及杞精明目汤对其影响作用。方法制备杞精明目汤药物血清和无药血清,分别用含20%、10%、5%药物血清或无药血清的细胞全培养基培养结膜松弛症成纤维细胞4h、24h后提取mRNA和蛋白质,采用RT-PCR和Western Blot法检测细胞TSG_6、PTX3和MMP-1、MMP-3的表达。结果20%和10%的含药血清均可有效上调结膜松弛症成纤维细胞TSG-6 mRNA(F=22.176,P=0.000)和蛋白(F=6.84,P=0.003)的表达,差异无统计学意义,而5%浓度的含药血清对TSG-6mPNA和蛋白的表达无明显上调作用;叁种浓度的含药血清对结膜松弛症成纤维细胞PTX3 mRNA(F=1.669,P=0.158)和蛋白(F=0.276,P=0.945)的表达无明显作用;叁种浓度的含药血清均可明显抑制结膜松弛症成纤维细胞MMP-1 mRNA(F=43.879,P=0.000)和蛋白(F=91.236,P=0.000)的表达,其中20%和10%浓度对MMP-1 mRNA抑制作用较强,差异无统计学意义;其次为5%;20%浓度含药血清对MMP-1蛋白表达的抑制作用最明显,10%和5%浓度对MMP-1蛋白表达的抑制作用无明显差异;叁种浓度的含药血清均可有效抑制MMP-3 mRNA(F--5.82,P=0.000)和蛋白(F=70.868,P=0.000)的表达,其中对MMP-3mRNA及蛋白的抑制作用最显着的均为20%浓度的含药血清,其次为10%。结论20%和10%浓度的杞精明目汤药物血清能有效上调TSG-6的表达,而5%含药血清对TSG-6的表达无明显作用;20%、1 0%、5%叁种浓度的含药血清对PTX3的表达均无明显作用;叁种浓度的杞精明目汤药物血清均能有效抑制MMP-1、MMP-3的表达。(本文来源于《中国中西医结合学会眼科专业委员会第十四届学术年会暨海峡两岸眼科学术交流会论文汇编》期刊2015-10-10）
柯梅青,张兴儒,李青松,周桂贞,项敏泓[6]（2015）在《TNF-α和IL-1β对结膜松弛症结膜成纤维细胞基质金属蛋白酶表达的影响》一文中研究指出目的:探讨TNF-α和IL-1β对结膜松弛症结膜成纤维细胞表达基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、肿瘤坏死因子α刺激基因6(TSG-6)和穿透素-3(PTX3)的影响。方法分别用含20ng/ml的PBS、TNF-α或IL-1β的细胞全培养基培养结膜松弛症和单纯白内障患者的结膜成纤维细胞,4h、24h后分别采用RT-PCR和Western Blot检测MMP-1、MMP-3和TSG-6、PTX3的表达。结果结膜松弛症和单纯白内障结膜成纤维细胞PBS组、TNF-α组、IL-1β组MMP-1、MMF_3和TSG-6、PTX3 mRNA表达总体均数比较差异均有统计学意义(MMP-1 mRNA:F=557.246,P=0.000;MMP-3 mRNA:F=I 10.953,P=0.000;TSG-6 mRNA:F=4126.083,P=0.000;PTX3 mRNA:F=2276.612,P=0.000);结膜松弛症PBS组MMP-1、MMP-3和TSG-6、PTX3 mRNA表达较单纯白内障PBS组明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05);TNF-α和IL-1β可明显上调结膜松弛症表达MMP-1 mRNA、MMP-3mRNA和TSG-6 mRNA、PTX3 mRNA,均有统计学意义(P<0.05);TNF-α和IL-1β可明显上调单纯白内障组的结膜成纤维细胞表达MMP-1 mRNA、MMP-3 mRNA和TSG-6 mRNA、PTX3 mRNA,均有统计学意义(P<0.05)。结膜松弛症和单纯白内障结膜成纤维细胞PBS组、TNF-α组、IL-1β组MMP-1、MMP-3和TSG-6、PTX3蛋白表达总体均数比较差异均有统计学意义(MMP-1:F=40.859 P=0.000;MMP-3:F=170.196,P--0.000;TSG-6:F=127.446,P=0.000;PTX3:F=81.986,P=0.000),其中结膜松弛症PBS组MMP-1、MMP-3和TSG-6、PTX3蛋白的表达较单纯白内障PBS组明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05);TNF-α和IL-1β可明显上调结膜松弛症成纤维细胞表达MMP-1、MMP-3和TSG-6、PTX3蛋白,均有统计学意义(P<0.05);TNF-α和IL-1β可明显上调单纯白内障组结膜成纤维细胞表达MMP-1、MMP-3和TSG-6、PTX3蛋白,均有统计学意义(P<0.05)结论结膜松弛症成纤维细胞表达MMP-1、MMP-3和TSG-6、PTX3增力口;TNF-α和IL-1β均可上调结膜松弛症成纤维细胞表达MMP-1、MMP-3和TSG-6、PTX3;炎性细胞因子参与结膜松弛症的发病机制。(本文来源于《中国中西医结合学会眼科专业委员会第十四届学术年会暨海峡两岸眼科学术交流会论文汇编》期刊2015-10-10）
李青松,张兴儒,柯梅青,赵黎[7]（2014）在《结膜松弛症成纤维细胞PTX-3、TSG-6的表达》一文中研究指出目的:探讨PTX-3、TSG-6两种炎性因子在结膜松弛症结膜成纤维细胞中的表达情况。方法:将结膜松弛症的结膜、正常结膜及胬肉组织的成纤维细胞进行原代培养和传代。选取呈对数生长的细胞,采用E LISA法检测叁种成纤维细胞培养液上清中PTX-3和TSG-6的表达,并进行比较。结果:结膜松弛症结膜成纤维细胞上清中的PTX-3的浓度明显高于正常结膜组和胬肉组,总体差异有统计学意义(F=6.474,P=0.032);TSG-6浓度与正常结膜组差异无统计学差异。结论:结膜松弛症结膜成纤维细胞上调表达PTX-3、TSG-6,进一步证实了炎症反应参与了结膜松弛症的发生和发展。(本文来源于《第十四届国际眼科学学术会议、第十四届国际视光学学术会议、第叁届国际角膜塑形学术大会论文集》期刊2014-03-28）
韩竹梅,张兴儒,李青松,项敏泓[8]（2014）在《基质金属蛋白酶及其组织抑制剂在结膜松弛症成纤维细胞中的表达》一文中研究指出目的:探讨基质金属蛋白酶1、3(MMP-1、MMP-3)及其组织抑制因子1、3(TIMP-1、TIMP-3)在CCh成纤维细胞培养上清中的表达,揭示四者表达水平变化与CCh的内在联系。方法:体外原代培养CCh成纤维细胞,取第3～6代细胞,以2.5×1 05个/mL浓度接种于24孔板中培养,24h后提取细胞上清,采用E LISA法检测MMP-1、MMP-3、TIMP-1、TIMP-3的表达水平。不同组间比较采用单因素方差分析。结果:MMP-1的表达,MMP-3的表达差异有统计学意义TIMP-1的表达:差异无统计学意义TIMP-3的表达:CCh组成纤维细胞的蛋臼浓度明显低于正常对照组,差异有统计学意义。结论:成纤维细胞MMP-1/T1MP-1及MMP-3/TIMP-3的表达失衡可能参与了CCh的发生发展。(本文来源于《第十四届国际眼科学学术会议、第十四届国际视光学学术会议、第叁届国际角膜塑形学术大会论文集》期刊2014-03-28）
张兴儒,李青松,韩竹梅[9]（2014）在《球结膜成纤维细胞的培养和鉴定》一文中研究指出目的:研究组织贴壁法原代培养结膜松弛症球结膜成纤维细胞,并对细胞进行鉴定,为结膜松弛症体外实验提供大量的细胞。方法:以结膜松弛症手术切除的球结膜为材料,采用组织贴壁法培养细胞,胰酶消化、传代,并对细胞进行形态学观察、免疫荧光鉴定、流式细胞术检测成纤维细胞胞浆特异性蛋白的表达。结果:传代至第2代细胞倒置显微镜下观察形态一致,大小均一,呈放射状排列,为长梭形或两头尖的长条状,胞质中有一个卵圆形的细胞核,周围有长短不等的细胞突起相互交联。细胞免疫化学染色,荧光显微镜下阴性。结论:(本文来源于《第十四届国际眼科学学术会议、第十四届国际视光学学术会议、第叁届国际角膜塑形学术大会论文集》期刊2014-03-28）
韩竹梅,张兴儒,柯梅青,倪振华,符之瑄[10]（2013）在《基质金属蛋白酶及其组织抑制剂在结膜松弛症成纤维细胞中的表达》一文中研究指出目的探讨基质金属蛋白酶1、3(MMP-1、MMP-3)及其组织抑制因子1、3(TIMP-1、TIMP-3)在结膜松弛症(CCh)成纤维细胞培养上清液中的表达,揭示四者表达水平变化与CCh的内在联系。方法体外原代培养CCh成纤维细胞,取第3~6代细胞,以2.5×105个/mL浓度接种于24孔板中培养,24 h后提取细胞上清液,采用ELISA检测MMP-1、MMP-3、TIMP-1、TIMP-3的表达水平。不同组间比较采用单因素方差分析。结果MMP-1的表达:CCh组成纤维细胞的蛋白浓度明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。MMP-3的表达:CCh组成纤维细胞的蛋白浓度明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。TIMP-1的表达:CCh组成纤维细胞的蛋白浓度与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。TIMP-3的表达:CCh组成纤维细胞的蛋白浓度明显低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成纤维细胞MMP-1/TIMP-1及MMP-3/TIMP-3的表达失衡可能参与了CCh的发生、发展。(本文来源于《中国眼耳鼻喉科杂志》期刊2013年06期）
结膜成纤维细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的通过离体原代培养人眼Tenon’s囊成纤维细胞,模拟体外青光眼术后滤过道瘢痕形成的过程,检测正常的成纤维细胞和活化了的肌成纤维细胞中microRNA-29b和p53的表达水平调控关系,探讨青光眼滤过术后滤过道瘢痕形成的机制。方法取安徽医科大学第一附属医院眼科手术室2016年3月至2016年7月眼科斜视手术病人术眼正常Tenon’s囊组织,用组织块培养法培养出原代成纤维细胞,传代至2-4代并进行实验。用TGF-β1(10ng/ml)将成纤维细胞活化为肌成纤维细胞,分别用qPCR和IHC技术检测p53 mRNA和蛋白在成纤维细胞和肌成纤维细胞中在表达水平。用si RNA转染抑制成纤维细胞中p53的表达,使用qPCR检测miRNA-29b和p53在成纤维细胞、活化的肌成纤维细胞和转染后的肌成纤维细胞中的表达情况。再用SPSS16.0软件等软件进行数据分析。结果1.用组织块培养法约2周左右可见细胞从组织边缘爬出,6-8周可细胞可铺满细胞培养瓶瓶底,在放大10倍的倒置显微镜下可见成纤维细胞体积较大,呈典型的扁平长梭形,细胞核居中,呈规则卵圆形,细胞之间成螺旋状排列。将细胞传代后用TGF-β1(10ng/ml,48h)活化后,细胞由成纤维细胞活化为肌成纤维细胞,细胞体积增大且细胞形态不规则,边缘毛躁,细胞之间呈无序状态。2.分别将成纤维细胞和活化的肌成纤维细胞消化爬片后,按照免疫组化步骤操作,DAB染色后,倒置显微镜下观察发现细胞核着色深染,而细胞质未着色,说明p53蛋白表达于细胞核中,呈黄褐色弥漫性分布,细胞质中未见表达。根据着色深浅可以看出MFs中p53蛋白的表达量明显高于HTFs组。选用image proplus软件对免疫组化所有图片根据染色着色程度不同进行分析,独立样本均数t检验显示:各组数据均服从正态分布,两组细胞中p53蛋白表达量MFs组(0.0419±0.0124)高于HTFs(0.0089±0.0085)组,t=-10.384,P<0.05,N=3,差异有统计学意义。3.将HTFs细胞及MFs细胞提取mRNA,逆转录为cDNA后,经过qPCR比较p53mRNA的相对表达量。采用独立样本t检验,分析HTFs及MFs细胞中p53的表达水平。结果显示,与HTFs(1±0.0672)比较,MFs中p53的表达量(4.8650±0.2577)明显增高,t=-19.821,p<0.05,N=3,差异具有统计学意义。4.将HTFs细胞,MFs细胞及siRNA转染的细胞提取mRNA,逆转录cDNA,用qPCR验证p53mRNA相对表达量,观察p53是否转染成功,再用qPCR检测miRNA-29b的相对表达量。qPCR结果显示,叁组细胞中miR-29b的表达量从高到低依次为:siRNA-p53转染组,HTFs正常组,MFs活化组,采用KruskalWallis H检验的统计学方法,对各组细胞中p53的表达量及miR-29b的表达量进行分析。发现各组中,p53:HTFs组1(1,1),MFs组3.9750(1.6350,6.2452),siRNA转染组0.0560(0.0112,0.1195),阴性对照组0.9750(0.8300,1.1200)。miR-29b:HTFs组1(1,1),MFs组0.5450(0.4500,0.6100),siRNA转染组5.0500(3.0875,4.1700),阴性对照组1.0250(0.9475,1.1250),用KruskalWallis H检验的统计学方法对各组p53mRNA数据进行分析,X2=15.928,双侧P值为0.000,认为各组之间有差别,再将各组进行两两比较,除阴性对照组与HTFs组P>0.05,差异无统计学意义外,其余各组中p53的表达量均有差异,p<0.05,差异均有统计学意义。同样,用Kruskal-Wallis H检验的统计学方法对各组miR-29b数据进行分析,X2=22,双侧P值为0.000,认为各组之间有差别,再将各组进行两两比较,除阴性对照组与HTFs组P>0.05,差异无统计学意义外,其余各组中miR-29b的表达量均有差异,p<0.05,差异均有统计学意义。5.通过划痕实验比较HTFs细胞及MFs细胞迁徙能力,发现HTFs活化为MFs后,细胞的迁徙能力增强。结论活化了的MFs中,p53mRNA及p53蛋白表达均增高,而miRNA-29b表达降低,下调p53表达后,MiRNA-29b表达上调,说明MiRNA-29b可能通过下调p53的表达而抑制青光眼术后滤过道瘢痕的形成。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
结膜成纤维细胞论文参考文献
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