导读:本文包含了磷酸化肽论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:磷酸化肽,磁性纳米粒子,固相萃取,质谱
磷酸化肽论文文献综述
江丹丹[1]（2019）在《功能化磁性纳米材料的制备及其在磷酸化肽分析中的应用》一文中研究指出作为一种分布广泛的翻译后修饰,蛋白质磷酸化在细胞增殖、代谢、分化和转录等多种生命过程中起着重要的调节作用。目前,检测磷酸化蛋白/肽的重要手段之一即为质谱技术。然而,应用质谱技术直接检测磷酸化肽基本不具有可行性,这是由于磷酸根具有弱电离性以及磷酸化肽在生物样品中存在的丰度十分低。因此,发展有效的分离富集方法以排除干扰、提高质谱检测的灵敏度是必不可少的。近年来,开发高效的亲和材料用来选择性捕获磷酸化肽的研究受到研究者们的高度重视。亲和材料的选择性和高效率取决于其表面的结构特征以及富集磷酸化肽的机理。目前,许多介孔、杂化或化学修饰的亲和材料被制备并用于磷酸化肽的分离富集,包括聚合物材料、介孔材料、整体材料和磁性纳米材料等。磁性纳米材料在很多领域中都有着普遍的应用,如生物医学领域、传感与催化领域,以及分离富集领域等。与传统的吸附剂相比,磁性纳米材料具有良好的磁响应性,可以在外界磁铁的帮助下实现与溶液的迅速分离。磁性纳米粒子本身不具备特异性吸附能力,并且在分离富集过程中容易发生团聚现象。因此,在实际的实验操作时常常会对磁性纳米粒子的表面进行功能化修饰。本论文将对磁性纳米粒子进行各种功能化修饰以提高其特异性吸附能力及稳定性,制备出集高选择性、良好生物相容性、快速磁响应性等于一体的吸附材料,通过与MALDI-TOF MS仪器联用,用于复杂生物样品中低丰度的磷酸化肽的分离与检测。具体的实验内容分为以下五个部分:1.设计了一种以氧化铟修饰的磁性纳米粒子为吸附剂的微流控芯片固相萃取系统,结合MALDI-TOF MS,实现了选择性地富集与检测磷酸化肽。氧化铟修饰的磁性纳米粒子不仅拥有一层氧化铟的外壳,使其具有捕获磷酸化肽的能力,而且由于具有快速的磁响应性,很大程度上加速了样品预处理过程。该方法对标准蛋白质酶解液、脱脂牛奶酶解液和人血清中的磷酸化肽具有较高的选择性。此外,该方法具有检测限低、可重复利用性好等特点,在复杂样品中磷酸化肽的分析领域具有很大的潜力。2.制备了一种TiO_2-酰肼功能化的聚酰胺胺树枝状分子(PAMAM)修饰的磁性纳米材料并用于特异性的富集复杂样品中的低丰度磷酸化肽。首先通过将PAMAM连接在硅烷化处理的磁性纳米微球上,随后,将连接到磁球上的PAMAM末端进行酰肼化处理。最后,将TiO_2微球嵌入到PAMAM的枝杈部位得到最终的吸附材料。将所制备的磁性复合材料用于分离纯化磷酸化肽,其富集机理为:PAMAM末端酰肼基团与磷酸化肽之间的静电及氢键作用、TiO_2与磷酸化肽之间的亲和作用。将该吸附材料结合MALDI-TOF MS检测,获得了低至0.4 fmol的检出限,证明了该方法具备高灵敏度地检测实际样品中磷酸化肽的能力。3.首先制备了一种半胱胺改性的壳聚糖。随后,采用层层自组装技术将多金属氧酸盐和半胱胺改性的壳聚糖修饰到氨基硅烷化的磁性纳米微球上。最后将所制备的复合吸附材料与MALDI-TOF MS联用应用于复杂样品中的磷酸化肽的检测。考察了该材料制备过程中层数的变化对形貌、Zeta电位值、最大饱和磁化强度值及对小磷酸分子吸附效果的影响,得到了最佳的组装层数。在最优的富集和解吸条件下,该方法达到了低至0.02 fmol的检出限,测得回收率为92.6%。4.设计了一种基于钆的固定化金属离子色谱材料用于选择性富集磷酸化肽。采用简便、有效的合成路线,将钆离子固定在谷胱甘肽包覆的磁性纳米粒子表面。该吸附剂结合了Fe_3O_4的超顺磁性、谷胱甘肽的良好生物相容性、钆离子与磷酸化肽之间强的亲和能力等优点。实验考察了吸附、解吸步骤中的一系列条件。在最优的实验条件下,考察了所制备的材料在一系列复杂样品中高效捕获磷酸化肽的能力。随后,考察了方法的灵敏度、稳定性和重现性,测得的标准偏差分别为0.340(日内)和0.367(日间)。5.制备了剥离的Cu/Ga层状双氢氧化物纳米片,随后将Fe_3O_4纳米粒子均匀地沉积在其表面上以维持二维形貌。结合MALDI-TOF MS检测手段,将该材料应用于生物样品中低丰度的磷酸化肽的富集检测。由于该材料拥有金属离子含量高、正电荷丰富、比表面积大、生物相容性好和超顺磁性等优点,成功地捕获了脱脂牛奶、唾液、血清等实际样品中的磷酸化肽。此外,应用同位素标记法,该材料在定量检测白血病患者血清中异常调节的磷酸化肽方面也具有良好的性能。本实验为二维材料在生物大分子分离领域的应用开拓了崭新的思路。(本文来源于《吉林大学》期刊2019-06-01）
江丹丹,马玖彤,贾琼[2]（2019）在《多金属氧酸盐/壳聚糖磁性复合材料的制备及其用于磷酸化肽的富集》一文中研究指出建立了一种基于多金属氧酸盐磁性材料富集磷酸化肽的方法。采用层层自组装技术制备多金属氧酸盐/壳聚糖磁性材料,结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)检测手段,用于磷酸化肽的富集。该磁性材料具有快速磁响应、亲水性、正电性等优点,对磷酸化肽具有高的富集选择性。实验用β-酪蛋白作为模型蛋白质,通过富集后,方法的检出限为0.02 fmol,说明合成的磁性材料对微量蛋白样品分析具有很高的应用潜力。(本文来源于《色谱》期刊2019年03期）
陈朗星,苏捷,周剑乔,何锡文,张玉奎[3]（2018）在《高选择性磷酸化肽分离富集材料的制备研究》一文中研究指出蛋白质的磷酸化作为最主要的蛋白质翻译后修饰形式之一,在生物系统的多项活动中扮演着重要角色,例如信号传递,细胞生长和凋亡以及酶活性~([1]),而异常的蛋白质磷酸化与代谢紊乱或其他疾病的发生有密切的关系~([2])。因此,蛋白质磷酸化研究有助于发现一些潜在的疾病生物标志物。目前,对磷酸化蛋白的研究通常是先进行酶解,再通过质谱进行鉴定分析。但是磷酸化肽的本身丰度和电离效率较低,使得它们的质谱信号易被样品中高丰度成分所抑制~([3])。因此,需要在质谱分析之前对磷酸化肽进行选择性富集来提高信号的强度进而获得更好的分析鉴定结果~([4])。迄今为止,许多基于不同机理的策略被开发出来用于选择性捕捉磷酸化肽,例如,免疫亲和法,化学修饰法,金属氧化物亲和色谱法(MOAC)和固定金属离子亲和色谱法(IMAC)~([5])。其中,IMAC法和MOAC法应用最为广泛,两者各有优势,互为补充。本论文工作包括(1)基于IMAC法和MOAC法双功能化磁性金属-有机骨架材料的制备及其对磷酸化肽的富集;(2)设计制备了叁种基于固定金属离子亲和色谱法(IMAC)的磷酸化肽富集材料。叁种材料对磷酸化肽均表现出良好的富集性能,并成功地用于标准磷酸蛋白酶解液和实际生物样品(脱脂牛奶和人血清)中磷酸化肽的富集。(本文来源于《第五届全国原子光谱及相关技术学术会议摘要集》期刊2018-09-20）
申惠莲,卡哈尔·阿里木[4]（2018）在《基于天冬氨酸的固定化金属离子亲和色谱材料用于磷酸化肽选择性富集》一文中研究指出采用点击化学的方法将自然界中的天冬氨酸(aspartic acid)键合到硅球上(命名为Click Asp),并将Fe3+配位到Click Asp上,合成固定金属离子亲和色谱(IMAC)材料(Fe3+-Click Asp);采用红外光谱、X射线电子能谱和扫描电镜等表征证明Fe3+-Click Asp成功合成。将此IMAC材料用于蛋白质酶解液和牛奶中的磷酸化肽的富集,实现了磷酸化肽的高选择性富集。本研究为磷酸化蛋白质组学提供了新材料和新方法。(本文来源于《色谱》期刊2018年04期）
杨世庶[5]（2018）在《基于二维埃及蓝和金属有机骨架纳米片的磷酸化肽选择性富集新方法》一文中研究指出蛋白质磷酸化在调控生命活动中发挥重要作用。利用蛋白组学技术大规模分析磷酸化蛋白的主要障碍在于复杂样品中痕量磷酸化蛋白的高效富集。针对这个问题,研究工作者发展了“自下而上”样品预处理和质谱(MS)分析方法,将蛋白酶解后的磷酸化肽段进行富集,利用质谱实现磷酸化蛋白的检测。此方法的关键在于磷酸化肽段的高选择性富集。目前,已有许多材料和方法策略用于磷酸化肽段的高效富集。但在选择性富集特定磷酸化肽方面进展不多。本论文将二维片层材料应用于富集磷酸化肽,开展了基于埃及蓝和金属有机骨架纳米片的研究工作。具体的研究内容和取得的研究进展如下:1、基于剥离的二维埃及蓝纳米片对多磷酸化肽的特异性富集方法研究从复杂生物样品中富集低丰度的磷酸化肽对于研究磷酸化蛋白具有重要的意义。但是选择性地富集多磷酸化肽却有很少报道。在本体系中,我们合成了叁种二维纳米片,包括CaCuSi4O10纳米片,SrCuSi4O10纳米片和BaCuSi4O10纳米片,它们是首次应用于富集磷酸化肽。二维CaCuSi4OH)纳米片有富集多磷酸化肽的特异性效果,并且在酸度以及有机溶剂比例改变的条件下,这种特异性富集效果不会改变。二维CaCuSi4O10纳米片用于与阿尔茨海默症有关的Tau蛋白的磷酸化蛋白质组分析中,并得到了良好的实验结果。二维CaCuSi4O1)纳米片不仅展示了特异性的选择吸附,并且显示了更低的检测限(检测限4×10-7M)。2、基于二维金属有机骨架纳米片对磷酸化肽富集方法研究蛋白磷酸化参与着许多细胞反应过程,其在调控蛋白活性和功能方面发挥着重要作用。基于质谱(MS)的蛋白质组学是一种有效的检测磷酸化蛋白/磷酸化肽的手段。但是,磷酸化肽的浓度很低(低于1×10-9M),因此从复杂生物样品中检测磷酸化肽面临着巨大的挑战。在本体系中,我们选取四个基于Ti的叁维MOFs(MIL-125和NH2-MIL-125),基于Ti的二维NTU-9纳米片和基于Zr的二维Zr-BTB纳米片。将具有高价态的金属Ti(IV)和纳米片所具有的特点结合起来是富集磷酸化肽的一种新的研究方法。通过实验得出,NTU-9纳米片展现出高效地富集能力(1:10000)和极低的检测限(1×10-10M)。最后,运用稳定同位素二甲基标记的方法,我们将此NTU-9纳米片应用于检测2型糖尿病人血清中磷酸化肽的相对含量测定,并最终用于富集小鼠大脑皮层和脊髓样品中的磷酸化肽段。(本文来源于《南京师范大学》期刊2018-03-25）
徐林楠,白玉,刘虎威[6]（2018）在《氨基功能化整体材料在磷酸化肽快速可控富集中的应用》一文中研究指出针对质谱在磷酸化肽分析过程中检测灵敏度低的问题,本文在移液器吸头尖端原位制备了氨基功能化整体材料,并将其应用于磷酸化肽的快速富集.基于该材料所建立的磷酸化肽富集方法操作简便、分析时间短,并且能够有效避免富集过程中材料与溶液分离不完全所导致的样品损失等问题.而在不同组成的上样溶液条件下,氨基功能化整体材料对单磷酸化肽和多磷酸化肽表现出了不同的磷酸化肽富集选择性,因而借助于对上样溶液组成的调控,该材料可以分别实现对磷酸化肽的全富集以及对多磷酸化肽的选择性富集.(本文来源于《中国科学:生命科学》期刊2018年02期）
徐林楠,白玉,刘虎威[7]（2017）在《磷酸化肽富集新方法研究进展》一文中研究指出对组成复杂的生物样品中的低丰度磷酸化肽进行预富集,能够消除高丰度非磷酸化肽等干扰组分,从而提高磷酸化肽在质谱分析中的灵敏度,获得更好的检出和鉴定结果。在磷酸化肽富集过程中,对磷酸化肽具有选择性亲和作用的富集材料是实现对磷酸化肽特异高效富集的关键,多种具有不同类型亲和作用的富集材料已在磷酸化肽富集研究中得到了应用;而在材料形貌、富集操作形式、磷酸化肽富集特异性等方面,研究者们也不断在现有磷酸化肽富集材料的基础上进行多样化的改进。本文分别从不同类型亲和作用的磷酸化肽富集材料以及磷酸化肽富集方法改进两方面,对近年来磷酸化肽富集方法的研究进展进行了评述。(本文来源于《分析化学》期刊2017年12期）
肖静,杨世庶,古志远[8]（2017）在《基于二维金属有机骨架纳米片高效富集磷酸化肽的MALDI-TOF MS分析》一文中研究指出蛋白质磷酸化几乎调节着生命活动的所有关键过程,异常的磷酸化反应往往会导致许多疾病的产生(例如:癌症,阿尔茨海默病等)[1-3]。然而,磷酸化肽通常在酶解的磷酸化蛋白中丰度较低且其电离效率较弱。此外,磷酸化肽的信号在质谱检测中经常受到非磷酸化肽的抑制。因此,对于磷酸化肽的富集研究是现阶段的研究热点。金属有机骨架材料(Metal-Organic Frameworks, MOFs)是一类由金属离子或金属簇与刚性有机分子形成的多孔材料。具有永久的纳米级孔隙、高比表面积、可调孔尺寸等性质[4-5]。现如今,已经有文献报道许多具有叁维层状的MOFs,通过剥离可得到具有二维片层的MOFs。二维金属有机骨架纳米片具有稳定的片层结构、片层表面金属离子丰度高、较大的比表面等性质[6-7],因此,可运用二维MOFs纳米片对磷酸化肽进行特异性富集,并借助于基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)进行检测,相比于传统的两种亲和色谱法(固定化金属亲和色谱法与金属氧化物亲和色谱法),利用二维MOFs纳米片富集磷酸化肽后,其质谱图具有背景清晰,信噪比高,特异性强等优点,同时表现出对磷酸化肽的高效富集。(本文来源于《第叁届全国质谱分析学术报告会摘要集-分会场5：有机/生物质谱新方法》期刊2017-12-09）
杨世庶,古志远[9]（2017）在《二维金属有机骨架纳米片对磷酸化肽的高效富集及同位素标记定量检测血清磷酸化肽》一文中研究指出金属有机多孔骨架材料(Metal-Organic Frameworks, MOFs)亦称为配位聚合物(Coordination Polymers),是一类由金属离子或金属簇与刚性有机分子形成的一维、二维或叁维的多孔材料。这类材料具有高孔隙率、超大的比表面积、孔道结构与性质可调控等优良性能,因此金属-有机骨架材料在分离、气体储存、光催化等领域具有广泛应用前景[1-3]。在近十年里,金属-有机骨架材料得到迅速发展并成为化学和材料领域的研究热点。本论文选取一种具有叁维层状结构的MOFs,并通过液态剥离的方法得到了二维MOFs纳米片,首次提出了基于二维MOFs纳米片特异性选择性富集磷酸化肽的方法。二维金属有机骨架纳米片具有稳定的片层结构、片层表面金属离子丰度高、较大的比表面等性质,与传统的固定化金属亲和色谱法(IMAC)与金属氧化物亲和色谱法(MOAC)相比[4-6],二维金属有机骨架纳米片作为吸附磷酸化肽的材料,经过质谱分析后,其具有背景清晰,信噪比高,且表现出对磷酸化肽的高效富集,在对复杂生物样品进行分析时,我们选取了数组糖尿病人的血清以及健康人血清作为对照,通过二甲基同位素标记的方法来定量检测血清中4条磷酸化肽在患病人与健康人中的含量变化情况(图1)。(本文来源于《第叁届全国质谱分析学术报告会摘要集-分会场5：有机/生物质谱新方法》期刊2017-12-09）
许东坡,宴国权,高明霞,邓春晖,张祥民[10]（2017）在《Fe3O4@Au-B(OH)2@mTiO2核壳结构纳米微球选择性富集糖肽/磷酸化肽》一文中研究指出蛋白质的糖基化和磷酸化修饰在免疫响应和信号传递等生命过程中起到很重要的作用1.质谱是一个非常有效的蛋白质组学分析工具2,但是,由于糖肽和磷酸化肽的含量和离子化效率都比较低,如果在复杂样品中直接用质谱测定比较困难2-3,因此,有必要在质谱分析前对复杂样品中的糖肽和磷酸化肽选择性富集。迄今为止,已经报道有很多不同的分析技术用来分离和富集磷酸化肽,例如化学修饰法4,免疫沉淀法5,液相色谱法6,固定金属离子亲和色谱法(IMAC)7和金属氧化物亲和色谱法(MOAC)8等。而凝集素法9,亲水作用法10,体积排阻色谱11和硼酸法12等用于糖肽的富集。尽管这些方法结合材料在单独分离富集糖肽或者磷酸化肽的过程中有很大优势,但是很少可以同时可以富集糖肽和磷酸化肽。MOAC是通常应用最广泛的富集磷酸化肽的方法13。相对与其他的金属氧化物而言,二氧化钛具有更高的富集量和更好的选择性14。硼酸修饰的纳米材料通常用作糖蛋白的研究15。因此,具有硼酸基团的二氧化钛双功能纳米材料可以同时富集糖肽和磷酸化肽。介孔材料由于具有相对较大的比表面积、比较高的稳定性和均匀的孔道结构被用于生物样品中选择性富集肽17。有多种创新性方法结合介孔材料选择性富集内源性肽18和磷酸化肽19。本文中,合成了硼酸修饰的介孔二氧化钛双功能Fe_3O_4@Au-B(OH)_2@mTiO_2核壳微球。这种多层的核壳结构具有硼酸基团和二氧化钛分别富集糖肽和磷酸化肽。磁性核易于材料富集后的洗脱分离,除去非糖基化和非磷酸化肽。同时介孔的二氧化钛层具有比较大的表面积和体积排阻效应,能更高效的富集磷酸化肽和排除大分子蛋白的干扰。这对多极化修饰的蛋白质组学分析有潜在的应用。(本文来源于《第21届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集》期刊2017-05-19）
磷酸化肽论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
建立了一种基于多金属氧酸盐磁性材料富集磷酸化肽的方法。采用层层自组装技术制备多金属氧酸盐/壳聚糖磁性材料,结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)检测手段,用于磷酸化肽的富集。该磁性材料具有快速磁响应、亲水性、正电性等优点,对磷酸化肽具有高的富集选择性。实验用β-酪蛋白作为模型蛋白质,通过富集后,方法的检出限为0.02 fmol,说明合成的磁性材料对微量蛋白样品分析具有很高的应用潜力。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
磷酸化肽论文参考文献
[1].江丹丹.功能化磁性纳米材料的制备及其在磷酸化肽分析中的应用[D].吉林大学.2019
[2].江丹丹,马玖彤,贾琼.多金属氧酸盐/壳聚糖磁性复合材料的制备及其用于磷酸化肽的富集[J].色谱.2019
[3].陈朗星,苏捷,周剑乔,何锡文,张玉奎.高选择性磷酸化肽分离富集材料的制备研究[C].第五届全国原子光谱及相关技术学术会议摘要集.2018
[4].申惠莲,卡哈尔·阿里木.基于天冬氨酸的固定化金属离子亲和色谱材料用于磷酸化肽选择性富集[J].色谱.2018
[5].杨世庶.基于二维埃及蓝和金属有机骨架纳米片的磷酸化肽选择性富集新方法[D].南京师范大学.2018
[6].徐林楠,白玉,刘虎威.氨基功能化整体材料在磷酸化肽快速可控富集中的应用[J].中国科学:生命科学.2018
[7].徐林楠,白玉,刘虎威.磷酸化肽富集新方法研究进展[J].分析化学.2017
[8].肖静,杨世庶,古志远.基于二维金属有机骨架纳米片高效富集磷酸化肽的MALDI-TOFMS分析[C].第叁届全国质谱分析学术报告会摘要集-分会场5：有机/生物质谱新方法.2017
[9].杨世庶,古志远.二维金属有机骨架纳米片对磷酸化肽的高效富集及同位素标记定量检测血清磷酸化肽[C].第叁届全国质谱分析学术报告会摘要集-分会场5：有机/生物质谱新方法.2017
[10].许东坡,宴国权,高明霞,邓春晖,张祥民.Fe3O4@Au-B(OH)2@mTiO2核壳结构纳米微球选择性富集糖肽/磷酸化肽[C].第21届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集.2017