导读:本文包含了韦荣菌论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:殊异韦荣菌,S-腺苷同型半胱氨酸水解酶,基因克隆,基因表达
韦荣菌论文文献综述
孙晓宇[1]（2014）在《殊异韦荣菌sahH基因的克隆、重组蛋白表达和纯化》一文中研究指出韦荣菌（Veillonella）是一种革兰阴性厌氧小球菌，在口腔内主要寄生于黏膜、舌体和牙菌斑中，是牙菌斑中较早定植的常驻菌之一。口腔内各种细菌长期定居、生长繁殖、不断进行竞争和拮抗，这些活动主要是通过密度感应系统进行的。其中不同信号分子的产生就涉及到甲基循环。甲基循环中的S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(sahH)是细胞内广泛存在的一种酶,能可逆地催化S-腺苷-L-高半胱氨酸(SAH)水解生成腺苷(Ado)和同型半胱氨酸(Hcy)，参与细胞代谢过程中的甲基化作用。本实验提取殊异韦荣菌基因组DNA,利用PCR方法扩增sahH基因序列,构建pET28a-sahH重组质粒，转化到大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中,酶切、PCR鉴定和测序后，IPTG诱导蛋白表达,并进行分离纯化。结果显示韦荣菌中存在sahH,PCR扩增产物全长为1410bp。测序结果经BLAST软件分析,与GenBank中所报道的绿脓假单胞菌sahH基因序列进行对比分析,其同源性为99%。该基因序列已登陆GenBank,序列号为KC477409。SDS-PAGE分析,重组质粒在E.coliJM109中表达并纯化,得到的融合蛋白相对分子质量约为50000,而且诱导5h，蛋白表达量最高,浓缩后蛋白浓度为5.4g·L-1。Westernblotting法得到的蛋白条带与目的蛋白大小相符。通过实验从分子水平上探讨sahH甲基化机制及生理活性,了解信号传导通路和密度感应系统在口腔疾病中的作用，探讨口腔微生物环境之间的联系情况和致病机制，以期为龋病的预防和治疗扩展新的思路。(本文来源于《吉林大学》期刊2014-04-01）
刘晓红[2]（2014）在《殊异韦荣菌苹果酸脱氢酶基因的克隆及其重组蛋白的表达，纯化和活性测定》一文中研究指出殊异韦荣菌（Veillonella dispar）是口腔中一种常见的革兰阴性厌氧小球菌，是较早定植于牙菌斑中的常驻菌。苹果酸脱氢酶（Malatedehydrogenase，MDH）在殊异韦荣菌代谢产酸的过程中起到调节作用，对龋病的发生和发展起着重要的作用。在这个实验中，以殊异韦荣菌为研究对象，对它的苹果酸脱氢酶基因进行克隆及重组表达，并对其重组蛋白进行纯化及活性测定，为苹果酸脱氢酶在龋病诊断和治疗中的作用奠定基础。在本实验的第一部分中，提取殊异韦荣菌基因组DNA，并通过PCR聚合酶链式反应扩增MDH基因序列，将PCR产物和pET-28a-c(+)载体进行EcoRⅠ、SalⅠ双酶切，并用T4DNA连接酶将其连接，连接产物转化至大肠杆菌DH5α中，经EcoRⅠ、SalⅠ双酶切和PCR鉴定，并进行测序验证。PCR扩增产物特异，全长1139bp。测序结果经BLAST软件分析，包含MDH基因及其前后片段，通过基因序列和氨基酸分析证明其具有完整的阅读框架，该基因序列已经登陆GenBank，序列号为KC421072。在本实验第二部分中，将鉴定正确的重组质粒MDH-pET-28a-c(+)转化至大肠杆菌BL21（DE3）中进行重组表达，并对其表达条件进行优化。重组质粒MDH-pET-28a-c(+)成功的在大肠杆菌BL21(DE3)中表达，其表达的重组蛋白大约为36kb。经过设置不同诱导剂浓度梯度、相同诱导时间以及不同诱导时间梯度、相同诱导剂浓度成功的得出重组质粒MDH-pET-28a-c(+)在大肠杆菌BL21(DE3)中的最佳诱导表达条件为IPTG终浓度为0.5mmol/L,37℃诱导6h，并经过超声破菌鉴定其表达形式为可溶性蛋白。最后对重组蛋白进行高效表达，并对其进行纯化和活性测定，其活性测定值为0.4403U/ml。本实验成功克隆出殊异韦荣菌苹果酸脱氢酶基因MDH并通过基因序列和氨基酸分析证明其具有完整的阅读框架。获得了重组表达MDH蛋白的最佳表达条件，并测出了苹果酸脱氢酶的活性，这为进一步研究苹果酸脱氢酶提供了条件，为研究苹果酸脱氢酶在龋病的诊断和治疗中的作用奠定了基础。(本文来源于《吉林大学》期刊2014-04-01）
刘晓红,何钟勤,孙晓宇,高心,薛莹[3]（2013）在《殊异韦荣菌苹果酸脱氢酶的基因克隆及其重组蛋白的表达和活性测定》一文中研究指出目的:对殊异韦荣菌(V·dispar)苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase,MDH)基因进行克隆和重组表达,并对其重组蛋白进行纯化和活性测定。方法:提取殊异韦荣菌基因组DNA,PCR扩增MDH同源区序列片段,克隆入pET-28a载体并转化至大肠杆菌DH5α,酶切及PCR鉴定,测序。将重组质粒转入BL21(DE3)中,选择最佳表达条件,提纯及测定活性。结果:PCR扩增产物特异,全长1139bp。测序结果包含MDH基因,并与GenBank中所报道的大肠杆菌MDH基因序列进行对比分析,其同源性为99%。MDH纯化后的蛋白活性值为0.4403U/mL。结论:成功克隆殊异韦荣菌MDH基因,并通过基因序列和氨基酸分析证明其具有完整的阅读框架。还获得了重组表达MDH蛋白的最适表达条件,并测出韦荣菌苹果酸脱氢酶的活性。(本文来源于《口腔医学研究》期刊2013年11期）
孙晓宇,何钟勤,刘晓红,高心,钟丞[4]（2013）在《殊异韦荣菌sahH基因的克隆、表达和纯化》一文中研究指出目的:对殊异韦荣菌S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(sahH)基因进行克隆、鉴定、表达和纯化,为研究龋病的微生物致病机制提供理论依据。方法:提取殊异韦荣菌基因组DNA,采用PCR方法扩增sahH基因序列,构建pET28a-sahH重组质粒,转化到大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)感受态细胞中,酶切、PCR鉴定和测序后,IPTG诱导蛋白表达,并进行分离纯化。结果:PCR扩增产物全长为1 410bp。测序结果经BLAST软件分析,与GenBank中所报道的绿脓假单胞菌sahH基因序列进行对比分析,其同源性为99%。该基因序列已登陆GenBank,序列号为KC477409。SDS-PAGE分析,重组质粒在E.coli JM109中表达并纯化,得到的融合蛋白相对分子质量约为50 000,诱导5h蛋白表达量最高,浓缩后蛋白浓度为5.4g.L-1。Western blotting法得到的蛋白条带与目的蛋白大小相符。结论:成功克隆了殊异韦荣菌sahH基因,并通过基因序列和氨基酸分析证明其具有完整的阅读框架,且重组载体表达出融合蛋白,分离纯化得到目的蛋白。(本文来源于《吉林大学学报(医学版)》期刊2013年04期）
薛莹[5]（2013）在《殊异韦荣菌电子传递黄素蛋白基因的克隆及重组蛋白表达》一文中研究指出殊异韦荣菌(Veillonella dispar)是口腔中常见的一种球菌，其具有专性厌氧以及生长缓慢的特点，其在口腔菌斑pH调节以及龋病的发生等方面都有着重要作用。电子传递黄素蛋白是一类以黄素腺嘌呤二核苷酸(FlavinAdenine Dinucleotide,FAD)为辅酶的蛋白，参与细胞的电子传递及pH调节。本实验以殊异韦荣菌为研究对象，对其电子传递黄素蛋白基因(Electron Transfer Flavoprotein,etf)进行克隆及表达，为将来龋病防治提供理论基础。本实验第一部分提取殊异韦荣菌基因组，通过PCR反应扩增etf基因序列，并与pMD18-T载体连接，转化至大肠杆菌DH5α，经酶切鉴定后，进行测序验证。PCR产物特异大小约900bp。测序结果经Blast软件分析该序列为etf基因，通过基因序列及氨基酸的分析证明其具有完整的阅读框架，该基因序列已登录GenBank，序列号为JQ669939。第二部分构建etf-pET28a-c(+)重组质粒并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行重组表达，以及表达条件的优化。etf-pET28a-c(+)重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达，蛋白大小约33KD，设定七个诱导剂浓度梯度、七个诱导时间梯度成功摸索出etf-pET28a-c(+)重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达的最佳诱导条件为0.2mM IPTG诱导3小时，并通过超声裂解鉴定表达形式为包涵体，进行了重组蛋白的高效表达。本实验成功克隆了殊异韦荣菌的etf基因序列，通过基因序列及氨基酸的分析证明其具有完整的阅读框架，并进行了重组质粒的构建及最适表达条件的摸索，鉴定蛋白表达形式为包涵体，希望通过对其的研究能够为后续蛋白功能研究提供理论基础并为龋病防治探寻新途径。(本文来源于《吉林大学》期刊2013-04-01）
李倪娜[6]（2012）在《殊异韦荣菌丝氨酸羟甲基转移酶的基因克隆及重组表达》一文中研究指出口腔中的细菌生长、繁育、成熟需要特定的微生态环境，牙菌斑的形成即是细菌和宿主之间相互作用的产物。由于生存环境影响和营养物质限制，细菌之间的关系会以不同形式存在，总体来说有两大主要方面,共生和拮抗。当细菌之间处于动态平衡状态时即以细菌性生物膜的形式存在，而细菌性生物膜正是导致龋病形成的重要基础条件。如果能打破这样的平衡状态从而破坏菌斑形成的条件可从某一方面抑制龋病的形成。韦荣菌（Veillonella）是一种革兰氏阴性厌氧小球菌，主要寄生在动物与人类的口腔、肠道以及呼吸道中，具有一定的耐酸性，可以在酸性环境下生长。有研究表明在韦荣菌定植于口腔后变形链球菌等细菌可随即定植从而形成牙菌斑生物膜这一较稳定结构。丝氨酸羟甲基转移酶为殊异韦荣菌中代谢的关键酶，催化丝氨酸和甘氨酸的转化，其中间产物四氢叶酸更是细胞DNA中的重要酶，对韦荣菌的生长繁殖其重要作用。本实验从分子生物学角度探讨该酶的作用，可能开辟一条龋病预防和治疗的新思路，同时也为生物性防龋的成功提供了可能性。本实验主要分为两个部分①通过PCR反应扩增了殊异韦荣菌丝氨酸羟甲基转移酶基因，并与克隆载体PMD18-T相连接，构建了殊异韦荣菌丝氨酸羟甲基转移酶基因的克隆质粒(gly-PMD18-T)。②以实验一中构建的克隆质粒为模板，重新设计引物，扩增出包含编码区及保守序列的丝氨酸羟甲基转移酶基因，并将其与表达载体pET28a相连接，构建了殊异韦荣菌丝氨酸羟甲基转移酶基因的原核表达质粒(gly-pET28a),并将其转化入大肠杆菌BL21中表达。在37℃条件下用终浓度为1.0mmol/L的IPTG诱导表达分别诱导1、2、3h，将表达产物与未经IPTG诱导的重组质粒，pET28a载体及BL21空白菌做对照，进行SDS-PAGE电泳分析。结果显示：①实验一最终测序结果殊异韦荣菌gly基因通过GenBank BLAST比较，与小韦荣球菌（Veillonella parvula）的gly基因的同源性达99%，该基因现已登陆NCBI GenBank，登录号为JQ929767。②实验二中殊异韦荣菌gly基因表达的蛋白产物在相应处有目的条带出现，对照组均未显示该条带。说明殊异韦荣菌丝氨酸羟甲基转移酶基因的原核表达质粒gly-pET28a能够翻译表达蛋白，为下一步进行酶的活性测定实验及蛋白功能检测奠定了基础。(本文来源于《吉林大学》期刊2012-04-01）
庾桦,何钟勤,高心,钟丞,李倪娜[7]（2011）在《殊异韦荣菌乳酸脱氢酶基因的克隆及鉴定》一文中研究指出目的:对殊异韦荣菌(V.dispar)乳酸脱氢酶(LDH)基因及其前后基因进行克隆和鉴定,为龋病的预防和治疗奠定理论基础。方法:提取殊异韦荣菌基因组DNA,利用PCR方法扩增LDH及其前后同源区序列片段,并克隆入pMD18-T载体中,转化大肠杆菌JM109,酶切及PCR鉴定后,进行测序。结果:PCR扩增产物特异,全长2 300 bp。测序结果经BLAST软件分析,共包含3个基因,分别是DNA旋转酶(gyr A)、LDH和一个由未知蛋白编码的基因。并与GenBank中所报道的变形链球菌LDH基因序列进行对比分析,其同源性为99%,该基因序列已登陆GenBank,序列号为EU518464。结论:成功克隆殊异韦荣菌LDH基因,并通过基因序列和氨基酸分析证明其具有完整的阅读框架。(本文来源于《吉林大学学报(医学版)》期刊2011年05期）
钟丞[8]（2011）在《殊异韦荣菌LDH重组蛋白的表达、纯化及活性分析》一文中研究指出韦荣菌(Veillonella)是一种革兰氏阴性厌氧小球菌,主要寄生在动物与人类的口腔、肠道以及呼吸道中,具有一定的耐酸性,可以在酸性环境下生长。韦荣菌在菌斑中所扮演的角色非常微妙,可以将酸性较强的乳酸转变成弱酸,而在糖的催化下又可使乳酸大量生成。具有这一功能的是韦荣菌中的乳酸脱氢酶( lactate dehydrogenase, LDH),是细菌的固有酶。它以是否依赖NAD(尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸)分为依赖性LDH(nLDH)和非依赖性LDH(iLDH)。而行使这一功能的则是nLDH。其基因的具体功能及作用机制尚不清楚。但可以肯定的是韦荣菌与菌斑的生长以及龋病的发生有着密切的关联,因此有必要继续对韦荣菌深入研究。前期试验中已克隆了殊异韦荣菌乳酸脱氢酶的基因,构建了pET-28a-LDH,进行了重组蛋白的初步表达。该基因序列现已登陆美国GenBank,序列号为EU518464。本实验将已经构建好的pET-28a-LDH转入BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中,分别进行了高效表达,并且对比其表达量。BandScan5.0扫描分析,pET-28a-LDH质粒转化BL21(DE3)表达量明显高于Rosetta(DE3)。后将目的蛋白进行性质鉴定,SDS-PAGE电泳显示,在上清的约33KD处见明显蛋白表达条带。经HisTRAP FF柱提纯后,用南京建成生物技术公司LDH活性试剂盒测定蛋白有活性。为从生物学角度继续深入探索研究韦荣菌乳酸脱氢酶奠定基础,从而寻找防龋的新途径。(本文来源于《吉林大学》期刊2011-05-01）
张志民,吕海驰,洪丽华,朱来宽[9]（2009）在《殊异韦荣菌中耐酸相关基因ffh的检测》一文中研究指出目的:检测殊异韦荣菌中是否含有耐酸相关基因ffh。方法:体外诱导殊异韦荣菌菌株,碱裂解法提取细菌基因组,根据耐酸相关基因ffh的同源性,从最保守区设计一对引物进行PCR,利用pGEM-T载体进行T-A克隆,构建重组质粒,从而检测殊异韦荣菌中是否存在耐酸相关基因ffh,并进行测序鉴定。结果:从殊异韦荣菌菌株中获得耐酸相关基因ffh部分片段,重组质粒含有其目的片段,对其进行测序,并将测序结果提交美国GeneBank。结论:殊异韦荣菌中存在耐酸相关基因ffh,在GeneBank上登陆序列号为EU551144。(本文来源于《全国第叁次牙体牙髓病学临床技术研讨会论文汇编》期刊2009-10-23）
高心,庚华,钟丞,何钟勤[10]（2009）在《殊异韦荣菌乳酸脱氢酶的基因克隆及重组表达》一文中研究指出韦荣菌缺乏糖酵解的关键酶,不能利用碳水化合物,不能发酵葡萄糖,但能利用其他细菌糖酵解后产生的乳酸生成丙酸、乙酸、CO_2和H_2,其中主要是丙酸。丙酸和乙酸的酸性比乳酸弱,从而减少酸对牙体的破坏作用。本实验主要从两个方面进行①通过PCR扩增了殊异韦荣菌乳酸脱氢酶基因及其前后部分片段,并与克隆载体PMD18-T相连,构建了殊异韦荣菌乳酸脱氢酶基因及前后部分片段的克隆质粒(LDH-PMD18-T)②以克隆质粒为模板,根据引物设计原则设计引物,扩增包含活性区及保守序列在内的乳酸脱氢酶基因,大小为798bp,通过与表达载体Pet28a相连,构建了殊异韦荣菌乳酸脱氢酶基因的原核表达质粒(LDH-Pet28a);并将构建的重组质粒在大肠杆菌BL21中表达,在37℃条件下用终浓度为1.0mmol/L的IPTG诱导表达,将表达产物进行SDS-PAGE电泳分析,并与未经IPTG诱导的重组质粒,BL21空白菌及Pet28a载体做对照,结果显示,殊异韦荣菌LDH-Pet28a表达质粒在30KD处有目的条带出现,其余均未显示条带,说明所构建的殊异韦荣菌乳酸脱氢酶基因的原核表达质粒LDH-Pet28a能够翻译表达蛋白,为下一步进行酶活实验及蛋白功能检测奠定了基础。通过实验,我们从殊异韦荣菌总DNA中扩增出乳酸脱氢酶基因及其前后部分片段,所测序列大小2.3Kb,含叁个基因,分别为gyrA、LDH及一段未知基因。其中LDH为完整的开放阅读框架,通过基因序列和氨基酸的分析比较,推断LDH具有依赖NAD的典型结构,为NAD依赖型LDH(nLDH),与变形链球菌(S.mutans)的LDH同源性高达99%。该基因现已登陆NCBI GenBank,登录号为EU518464。(本文来源于《全国第叁次牙体牙髓病学临床技术研讨会论文汇编》期刊2009-10-23）
韦荣菌论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
殊异韦荣菌（Veillonella dispar）是口腔中一种常见的革兰阴性厌氧小球菌，是较早定植于牙菌斑中的常驻菌。苹果酸脱氢酶（Malatedehydrogenase，MDH）在殊异韦荣菌代谢产酸的过程中起到调节作用，对龋病的发生和发展起着重要的作用。在这个实验中，以殊异韦荣菌为研究对象，对它的苹果酸脱氢酶基因进行克隆及重组表达，并对其重组蛋白进行纯化及活性测定，为苹果酸脱氢酶在龋病诊断和治疗中的作用奠定基础。在本实验的第一部分中，提取殊异韦荣菌基因组DNA，并通过PCR聚合酶链式反应扩增MDH基因序列，将PCR产物和pET-28a-c(+)载体进行EcoRⅠ、SalⅠ双酶切，并用T4DNA连接酶将其连接，连接产物转化至大肠杆菌DH5α中，经EcoRⅠ、SalⅠ双酶切和PCR鉴定，并进行测序验证。PCR扩增产物特异，全长1139bp。测序结果经BLAST软件分析，包含MDH基因及其前后片段，通过基因序列和氨基酸分析证明其具有完整的阅读框架，该基因序列已经登陆GenBank，序列号为KC421072。在本实验第二部分中，将鉴定正确的重组质粒MDH-pET-28a-c(+)转化至大肠杆菌BL21（DE3）中进行重组表达，并对其表达条件进行优化。重组质粒MDH-pET-28a-c(+)成功的在大肠杆菌BL21(DE3)中表达，其表达的重组蛋白大约为36kb。经过设置不同诱导剂浓度梯度、相同诱导时间以及不同诱导时间梯度、相同诱导剂浓度成功的得出重组质粒MDH-pET-28a-c(+)在大肠杆菌BL21(DE3)中的最佳诱导表达条件为IPTG终浓度为0.5mmol/L,37℃诱导6h，并经过超声破菌鉴定其表达形式为可溶性蛋白。最后对重组蛋白进行高效表达，并对其进行纯化和活性测定，其活性测定值为0.4403U/ml。本实验成功克隆出殊异韦荣菌苹果酸脱氢酶基因MDH并通过基因序列和氨基酸分析证明其具有完整的阅读框架。获得了重组表达MDH蛋白的最佳表达条件，并测出了苹果酸脱氢酶的活性，这为进一步研究苹果酸脱氢酶提供了条件，为研究苹果酸脱氢酶在龋病的诊断和治疗中的作用奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
韦荣菌论文参考文献
[1].孙晓宇.殊异韦荣菌sahH基因的克隆、重组蛋白表达和纯化[D].吉林大学.2014
[2].刘晓红.殊异韦荣菌苹果酸脱氢酶基因的克隆及其重组蛋白的表达，纯化和活性测定[D].吉林大学.2014
[3].刘晓红,何钟勤,孙晓宇,高心,薛莹.殊异韦荣菌苹果酸脱氢酶的基因克隆及其重组蛋白的表达和活性测定[J].口腔医学研究.2013
[4].孙晓宇,何钟勤,刘晓红,高心,钟丞.殊异韦荣菌sahH基因的克隆、表达和纯化[J].吉林大学学报(医学版).2013
[5].薛莹.殊异韦荣菌电子传递黄素蛋白基因的克隆及重组蛋白表达[D].吉林大学.2013
[6].李倪娜.殊异韦荣菌丝氨酸羟甲基转移酶的基因克隆及重组表达[D].吉林大学.2012
[7].庾桦,何钟勤,高心,钟丞,李倪娜.殊异韦荣菌乳酸脱氢酶基因的克隆及鉴定[J].吉林大学学报(医学版).2011
[8].钟丞.殊异韦荣菌LDH重组蛋白的表达、纯化及活性分析[D].吉林大学.2011
[9].张志民,吕海驰,洪丽华,朱来宽.殊异韦荣菌中耐酸相关基因ffh的检测[C].全国第叁次牙体牙髓病学临床技术研讨会论文汇编.2009
[10].高心,庚华,钟丞,何钟勤.殊异韦荣菌乳酸脱氢酶的基因克隆及重组表达[C].全国第叁次牙体牙髓病学临床技术研讨会论文汇编.2009
标签：殊异韦荣菌; S-腺苷同型半胱氨酸水解酶; 基因克隆; 基因表达;