导读:本文包含了体外甲基化论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:玻璃化冷冻,囊胚,全基因组,甲基化
体外甲基化论文文献综述
赵亚涵,郝海生,杜卫华,庞云渭,闫长亮[1]（2019）在《新鲜、玻璃化冷冻牛卵母细胞体外受精囊胚全基因组甲基化模式初探》一文中研究指出旨在初步分析新鲜及玻璃化冷冻牛卵母细胞体外受精囊胚全基因组甲基化模式。本研究采用单细胞全基因组甲基化测序技术(scWGMS)检测新鲜、玻璃化冷冻牛卵母细胞体外受精囊胚全基因组甲基化水平和差异甲基化区域(DMR),探讨两者之间DNA甲基化水平上的差异。结果表明,新鲜卵母细胞体外受精囊胚的整体甲基化水平显着高于玻璃化冷冻卵母细胞体外受精囊胚的整体甲基化水平(P<0.05)。采用基因本体分析(GO)和相关信号通路(KEGG)对143个DMRs分析,发现生物学过程主要显着富集在新陈代谢、生长发育、细胞定位、细胞刺激反应等,通路主要富集在生长发育、核酸结合及组蛋白乙酰化上,并筛选出几个与之相关的候选基因(FARP2、PI4KA、FAM3D、NCOR2、ZNF827等)。本研究初步发现,玻璃化冷冻牛卵母细胞体外受精囊胚的全基因组甲基化水平显着降低,且DMR区域主要集中在ATP结合、生长发育及组蛋白乙酰化,为提高玻璃化冷冻卵母细胞体外受精囊胚质量提供信息参考。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2019年06期）
宋尚桥,曾素先,马围围,王睿敏,严瑾[2]（2019）在《猪孤雌激活胚胎和卵母细胞体外成熟过程中的甲基化检测》一文中研究指出【目的】探索猪孤雌激活胚胎培养过程和猪卵母细胞体外成熟前后的DNA甲基化水平及其变化,为探讨猪孤雌激活胚胎和卵母细胞的发育提供理论依据。【方法】通过使用间接免疫荧光组化和激光共聚焦显微镜的荧光相对定量的两种方法来间接检测猪孤雌激活胚胎培养过程中和猪卵母细胞成熟前后的细胞5-甲基胞嘧啶的相对含量,观察其体外发育过程中甲基化水平的变化。【结果】随着体外培养时间的延长,猪孤雌激活胚胎的甲基化程度在二到桑葚胚时呈逐渐减弱趋势;在猪孤雌激活胚胎发育的过程中,同一个胚胎的不同卵裂球之间的甲基化水平有差异;内细胞团的甲基化水平低于滋养层。猪卵母细胞成熟前和体外成熟的基因组DNA甲基化水平相比,成熟前卵母细胞基因组DNA甲基化水平低于体外成熟后的卵母细胞基因组DNA甲基化水平;随着体外成熟时间的延长,猪卵母细胞的基因组DNA甲基化水平大致呈上升趋势。【结论】IVM/PA/IVC对猪卵母细胞及早期胚胎的甲基化模式有一定影响;猪卵母细胞体外培养过程中,猪卵母细胞核基因组的甲基化水平接近于正常体内的卵母细胞。(本文来源于《西南农业学报》期刊2019年03期）
李银停,周涛[3]（2018）在《羧甲基化和异羟肟酸化羊栖菜降解多糖的体外抗氧化活性及抗菌活性的研究》一文中研究指出为了提高羊栖菜多糖的生物活性,通过羧甲基化修饰降解羊栖菜多糖,得到羧甲基化多糖,进一步修饰得到异羟肟酸化多糖。利用傅里叶变换红外光谱对羧甲基化和异羟肟酸化多糖进行表征。测定羧甲基化和异羟肟酸化多糖的分子量分别为354kDa和375kDa,通过测定羧甲基化和异羟肟酸化多糖的自由基清除能力和总抗氧化活性,来评价其体外抗氧化活性,结果表明,与降解羊栖菜多糖相比,羧甲基化和异羟肟酸化多糖的抗氧化活性明显提高。用抑菌圈和最小抑菌浓度(MIC)法评价羧甲基化和异羟肟酸化多糖多糖对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、沙门氏菌5个菌株的抑菌效果。研究发现羧甲基化和异羟肟酸化多糖均具有明显的抗菌能力,而在相同条件下,降解羊栖菜多糖没有表现出这种作用。(本文来源于《中国食品科学技术学会第十五届年会论文摘要集》期刊2018-11-07）
何颖,邹立津,高蔓蔓,梁堂钊,邹学农[4]（2018）在《体外长期培养的猪BMSCs发生转化过程中基因表达谱和DNA甲基化谱关联分析》一文中研究指出目的探讨体外长期培养的长白猪BMSCs全基因组DNA甲基化状态,阐明甲基化在调节基因表达上与BMSCs发生转化的关系。方法抽取3月龄长白猪胫骨近端骨髓,采用密度梯度离心法并根据细胞贴壁特性对BMSCs进行分离、纯化、体外传代培养。细胞恶性转化通过细胞形态、核型分析、双层软琼脂克隆形成实验、血清依赖性实验以及裸鼠成瘤实验进行验证。使用定制的家猪甲基化芯片和Agilent全基因组表达谱芯片,通过生物信息学分析获得第2代和第25代BMSCs全基因组甲基化表达水平和m RNA表达谱,并进行m RNA-甲基化的关联分析,筛选DNA异常甲基化谱,同时对这些基因进行KEGG富集分析。结果长期培养的BMSCs逐渐表现出转化细胞的特性:由较大的纺锤形逐渐变为小的梭形,血清依赖程度显着降低,在双层软琼脂培养基中锚着独立生长并形成细胞集落,在裸鼠体内形成肿瘤组织。全基因表达谱芯片筛选出转化过程中上调表达的257条基因和下调表达的315条基因,信号通路分析发现部分细胞周期相关基因表达上调,部分细胞外基质受体相互作用(ECM-receptor interaction)、黏着斑通路(focal adhesion)、肌动蛋白细胞骨架调节(regulation of actin cytoskeleton)、癌症通路(pathways in cancer)、P53等通路相关基因表达下调。DNA甲基化芯片分析得到受甲基化调控的962条差异基因和1 219条受去甲基化的基因,并发现这些基因主要参与细胞代谢、增殖分化、细胞结构、炎性免疫、肿瘤发生等生物过程。联合分析BMSCs转化过程受甲基化调控的基因,发现35个基因的甲基化改变与表达变化方向相反(相关系数r=–0.686,P=0.000),其中21个基因启动子区甲基化程度升高而基因表达下降,14个基因启动子区甲基化程度下降而基因表达升高;同时KEGG富集分析发现多个受甲基化调控、参与干细胞分化的基因及参与的多个细胞信号通路,其中在14条甲基化下调而表达上调的基因中,很多具有调节肿瘤发生与免疫炎性相互平衡的作用,其中CDKN3启动子区甲基化状态改变可能与细胞肿瘤化密切相关。结论研究结果表明甲基化参与猪BMSCs自发转化,这为BMSCs临床应用预警和防止转化提供了新线索。(本文来源于《中国修复重建外科杂志》期刊2018年08期）
王婧,程超,盛文军,李敏,祝霞[5]（2018）在《葡萄酒泥酵母β-葡聚糖及其羧甲基化衍生物体外抗氧化》一文中研究指出以葡萄酒泥酵母为原料制备高纯度酵母β-葡聚糖,对其进行紫外光谱、溶解性、颜色反应、薄层层析和红外光谱分析,并对β-葡聚糖及其羧甲基化衍生物进行体外抗氧化活性对比实验。结果表明:所得产品为纯度较高的碱不溶性β-葡聚糖;β-葡聚糖和羧甲基β-葡聚糖清除·OH、O_2~-·、DPPH·、ABTS~+·和螯合Fe~(2+)的IC_(50)分别为10.874、11.122、11.780、10.109、21.399mg/mL和3.982、3.182、3.222、2.562、5.027 mg/mL,其中后者的IC_(50)均低于10 mg/mL,具有较好的抗氧化活性。经过羧甲基化改性后的抗氧化能力较改性前的酵母β-葡聚糖得到显着提升。(本文来源于《食品与生物技术学报》期刊2018年06期）
刘钦成[6]（2018）在《大鼠CD90~+Lin~-骨髓间充质干细胞在体外诱导向肝细胞分化过程中Klf4 Nanog基因表达及其启动子区的甲基化变化》一文中研究指出1.研究背景与目的骨髓间充质干细胞是位于骨髓内的具有自我更新能力及多能性的成体干细胞,在一定的条件下,可分化为具有成熟功能的肝细胞,并且已经得到了动物实验及临床实验的证实。课题组研究人员潘润华曾对大鼠骨髓间充质干细胞在体外诱导向肝细胞分化过程中OCT4的表达及其启动子区的甲基化变化进行观察,发现OCT4的表达量和启动子区甲基化频率随分化进程的不同而变化。而Oct4与Klf4、Nanog等是一组多潜能性基因,在维持干细胞的多能性方面起着重要作用。因此基于潘润华等人员的成果上,本研究主要观察Klf4和Nanog在这个分化过程中的表达变化及其启动子区的甲基化变化,以期更加全面的认识骨髓间充质干细胞向肝细胞分化的表观遗传学调控机制。2.材料与方法2.1实验主要试剂及仪器高糖DMEM培养基(美国Hyclone公司);EpiTect Bisulfite Kit,甲基化转化试剂盒(德国Qiagen公司):0.25%胰酶-EDTA(美国Gibco公司);Gel Extraction Kit,琼脂糖凝胶回收试剂盒(美国Omega公司);重组人肝细胞生长因子(美国Peprotech公司);澳洲特级胎牛血清(以色列BioInd公司);TaKaRa EpiTaq HS,PCR用扩增酶(Takara公司);青霉素-链霉素(美国Gibco公司);Biospin细胞基因组DNA提取试剂盒(杭州博日科技公司);RNasin,特异性核糖核酸酶抑制剂(美国Promega公司);RT-PCR试剂(德国DBI公司);地塞米松(美国Gibco公司);.Trizol,RNA提取试剂(日本Takara公司);逆转录试剂盒(德国DBI公司)。紫外分光光度计UV-1206(日本SHIMODZU公司);凝胶扫描系统DF-23B(英国 UVP公司);Stratagene Mx3000P Real time PCR仪(美国Agilent公司);ABI9700PCR扩增仪(美国ABI公司)2.2实验细胞课题组之前已成功提取了 vista雄性大鼠骨髓间充质干细胞,通过免疫磁珠阴、阳分选法获得了表达CD90+Lin-表面抗原的细胞,即大鼠CD90+Lin-骨髓间充质干细胞。2.3实验方法2.3.1冻存细胞复苏、培养及定向诱导分化将冻存的大鼠CD90+Lin-骨髓间充质干细胞复苏后,将其置于孵箱中培养,培养液为高糖培养液(高糖DMEM培养基+胎牛血清+青霉素-链霉素),每3天换液1次,细胞生长到约80%的时候用0.25%胰酶-EDTA消化传代。按照课题组研究人员潘润华所报道的方案。把细胞培养至第叁代的良好细胞,置入培养液(高糖DMEM培养基+胎牛血清+青霉素-链霉素+25 μg/L重组人肝细胞生长因子+0.1nmol/L地塞米松)中进行诱导分化,3天换液1次,连续诱导14天。在第0、7、14天用显微镜记录细胞形态。2.3.2定量PCR检测基因表达按照RNA提取试剂盒方法(Trizol+氯仿+异丙醇提取法)从培养至第0、7、14天组大鼠CD90+Lin-骨髓间充质干细胞中提取总RNA。把1μg的总RNA作为模板,逆转录反应体系依照荧光定量PCR试剂说明书所配制,合成cDNA的第一链,然后在PCR仪内进行PCR扩增实验。最后的PCR结果依照相对定量法计算。2.3.3 Klf4和Nanog启动子区甲基化检测按照细胞基因组DNA提取试剂盒说明书,从第0、7、14天组大鼠CD90+Lin-骨髓间充质干细胞中提取基因组DNA,根据甲基化转化试剂盒说明书进行DNA重亚硫酸盐转化。完成后于PCR仪内进行甲基化PCR反应。最后提取甲基化PCR反应产物进行琼脂凝胶电泳进行产物分析。2.3.4统计学分析应用SPSS 20.0统计分析软件来进行计算,计量资料以(?)x±s表示。Alb、Nanog mRNA和Klf4 mRNA表达量采用单因素方差分析,而他们的组间差异两两互相比较则运用LSD检验方法;基因启动子区甲基化频率采用χ2检验,P<0.05视为具有统计学差异。3.结果大鼠CD90+Lin-骨髓细胞在体外诱导向肝细胞分化过程中的第0、7、14天,Alb mRNA相对表达量显着随时间增长而增加(p=0.001)。第0天至第7天,Klf4和Nanog的表达显着减少(p<0.001),Klf4启动子区第1、2个CpG位点甲基化频率显着上升(p<0.001),第3个CpG位点甲基化频率无显着性变化(p=0.247);Nanog启动子区第1个CpG位点甲基化频率显着下降(p<0.001),第2个CpG位点甲基化频率显着上升(p<0.001)。第7天至第14天,Klf4(p<0.001)和Nanog(p=0.045)的表达显着增加,Klf4第1个CpG位点甲基化频率显着上升(p=0.007),第2、3个CpG位点甲基化频率显着下降(p<0.001);Nanog第1个CpG位点甲基化频率无显着变化(p=0.109),第2个CpG位点甲基化频率显着下降(p<0.001)。4.结论CD90+Lin-骨髓间充质干细胞在体外诱导向肝细胞分化过程中,Klf4和Nanog基因启动子区CpG位点的甲基化变化不仅会影响Klf4和Nanog的表达,还可能会影响到其它与分化有关基因的表达,这意味着它们在体外诱导分化过程中很可能起重要的调控作用。(本文来源于《南方医科大学》期刊2018-04-25）
裴文江,赵峰,吴衍,钟明,高航[7]（2018）在《肿瘤高甲基化基因1重要下游基因HMMR对乳腺癌细胞株MDA-MB-231迁移和侵袭能力影响的体外实验》一文中研究指出目的 :探讨肿瘤高甲基化基因1(hypermethylated in cancer 1,HIC-1)与透明质酸介导的细胞游走受体(hyaluronan-mediated motility receptor,HMMR)基因之间的调控关系,观察HMMR产物对MDA-MB-231乳腺癌细胞株的迁移和侵袭能力的影响。方法:MDA-MB-231细胞分别转染双链小激活RNA(small activating RNA,sa RNA)HIC-1和双链小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)HMMR,通过反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白印迹法检测观察转染后HIC-1、HMMR的m RNA和蛋白的表达情况,用CCK-8细胞增殖实验检测HIC-1和HMMR表达改变对乳腺癌细胞增殖能力的影响,再用Transwell小室观察其改变对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:转染sa RNA HIC-1时MDA-MB-231细胞中HIC-1上调,同时HMMR表达下调,细胞的迁移和侵袭能力受抑制,细胞增殖能力未发生改变;转染si RNA HMMR时,MDA-MB-231细胞中HMMR表达下调,细胞的迁移和侵袭能力受抑制,细胞增殖能力未受影响。结论:HIC-1可调控HMMR的表达,HIC-1表达上调可下调HMMR,乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力受抑制;乳腺癌细胞中因HIC-1失活,导致HMMR呈高表达,促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭。(本文来源于《诊断学理论与实践》期刊2018年01期）
吴霄,李果,敖政,石俊松,蔡更元[8]（2017）在《过表达H3K9me3去甲基化酶对猪克隆胚胎体外发育效率的影响》一文中研究指出为了探索过表达组蛋白H3K9me3去甲基化酶KDM4B/KDM4D对猪克隆胚胎体外发育效率的影响,研究构建了鼠源KDM4B/KDM4D表达载体,通过体外转录获得KDM4B/KDM4D mRNA并将其分别显微注射至猪克隆胚胎。结果显示两组注射的克隆胚胎的H3K9me3水平、卵裂率和囊胚率与对照克隆胚胎无显着差异,但两组注射的克隆胚胎的H3K9me3去甲基化酶表达水平显着高于无注射的对照克隆胚胎,且注射KDM4B mRNA的克隆胚胎的囊胚细胞数显着高于注射KDM4D mRNA的克隆胚胎及对照克隆胚胎,表明过表达组蛋白H3K9me3去甲基化酶KDM4B可以显着提高猪克隆胚胎的体外发育效率。(本文来源于《广东农业科学》期刊2017年10期）
聂晓伟,谈勇,殷燕云[9]（2017）在《TET介导猪体外受精卵和体细胞克隆胚的去甲基化研究》一文中研究指出目的:本研究旨在探讨猪体外受精卵、孤雌胚和体细胞克隆胚在原核期和早期胚胎卵裂过程中5mC和5hmC的表达变化,以验证猪受精卵、孤雌胚和克隆胚在原核期和卵裂期是否发生5mC向5hmC的转变,并进一步验证这种转变是否由TET1-3介导。通过该项研究我们希望可以测定在猪的早期胚胎的发育过程中DNA去甲基化的模式,阐明猪早期胚胎去甲基化的机制,为进一步深入了解猪胚胎的早期发育机制,提高猪体细胞克隆胚的细胞核重新程序化效率和克隆胚培育效率提供理论依据。方法:利用5mC,5hmC的特异性抗体对猪卵母细胞、不同阶段原核期体外受精卵、孤雌胚、体细胞克隆胚以及卵裂期胚胎进行免疫荧光染色,检测不同发育阶段胚胎5mC,5hmC的表达及变化规律;利用亚硫酸盐测序的方法对基因组进行亚硫酸盐转化,PCR获得目的片段后进行连接及转化,提取质粒并测序,分析不同阶段原核期受精卵基因组SINE、POU5F1 and Satelite Region的甲基化水平,以其反应基因组总甲基化水平;利用qGlu MS-PCR的方法需要对DNA进行糖基化处理,限制性酶切酶切和荧光定量PCR,检测不同阶段原核期受精卵基因组SINE和OCT4的羟甲基化水平;利用Tet3,Dnmt1,Dnmt3a的特异性抗体对猪卵母细胞、不同阶段原核期受精卵、孤雌胚、克隆胚以及卵裂期胚胎进行免疫荧光染色,检测不同发育阶段胚胎Tet3,Dnmt1,Dnmt3a的表达情况;利用荧光定量PCR方法(RT-PCR)检测Tet基因家族和Dnmt1在原核期受精卵、孤雌胚和克隆胚中m RNA的转录水平。结果在体外受精胚胎原核发育过程中,从PN3到PN5发育阶段,5hmC的荧光信号主要存在于雄原核中,并呈现逐渐增加的趋势,而雌原核中5hmC的信号较弱,随着原核发育没有明显变化。5mC在雌原核和雄原核中的荧光信号均没有明显的变化。在受精卵发育过程中,雌雄原核中5hmC表现出不对称分布;在孤雌胚胎中,单原核孤雌胚胎的原核同时显示5mC和5hmC染色信号,双原核孤雌胚的两个原核之间5mC和5hmC染色信号一致,并没有观察到两个原核间的不对称的分布;在克隆胚胎中,单个原核的克隆胚同时显示5mC和5hmC染色信号,双原核克隆胚的两个原核之间5hmC表现出不对称分布。免疫荧光染色结果显示5hmC和5mC存在于卵裂期胚胎中,在体外受精卵和孤雌激活卵母细胞发育而来的卵裂期胚胎5hmC和5mC均有表达,但2细胞荧光表达强度与原核期胚胎相比开始减弱;在受精卵中,从PN2到PN5的发育过程中,SINE、POU5F1、Satelite Region的总甲基化水平是逐渐下降的,说明原核期胚胎发生了去甲基化过程;随着合子的发育,合子中SINE和POU5F1 5hmC与5mC的比值升高,说明在此阶段发生了5mC到5hmC的转变。通过免疫荧光染色,体外受精卵的雄原核、单原核和多原核孤雌胚、克隆胚原核均可以检测到Tet3的表达,原核周围未检测到Dnmt1的表达,Dnmt1主要分布于细胞膜的周围,Dnmt3a在细胞质中有表达。卵裂期胚胎可以检测到TET3、Dnmt1和Dnmt3a的表达,随着卵裂的进行,TET3的表达有下降的趋势;在原核期受精卵、孤雌胚和克隆胚中,Tet3基因表达量最高;在不同阶段原核期受精卵中,Dnmt1的表达量在升高;在囊胚期,Tet1基因表达量最高。结论在受精卵从PN2到PN5的发育过程中雄原核发生了5mC到5hmC的转变。Tet3介导了猪受精卵雄原核5mC到5hmC的转变,即Tet3介导了猪受精卵雄原核主动去甲基化过程;介导受精卵雄原核发生主动去甲基化的Tet3可能来源于卵母细胞;Tet3可能介导了孤雌胚和克隆胚的去甲基化过程。(本文来源于《第9届中国中西医结合学会妇产科专业委员会第二次学术会议论文集》期刊2017-09-14）
缑盼红[10]（2017）在《Tet1介导的DNA去甲基化在胆红素致体外神经元损伤中的机制研究》一文中研究指出目的:通过建立大鼠神经元胆红素(Bilirubin,Bil)体外模型,观察Bil对神经元细胞活力、氧化损伤、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase-3)活性及DNA去甲基化转移酶(Tet1)和Klotho基因蛋白和mRNA水平变化的影响,探讨Bil通过氧化应激引起Tet1介导的DNA去甲基化在神经元损伤中的作用机制,为高胆红素血症致神经元损伤的机理研究提供新的思路与方法。方法:(1)采用0.025%的胰蛋白酶消化SD乳鼠(出生24h以内)脑组织分离出神经元,无血清神经元特异性培养基Neurobasal培养单纯的神经元;(2)37℃,5%CO2培养箱培养神经元72h后,给予低、中、高浓度的Bil(分别为25、50、100μmol/L)处理,在Bil作用4、8、12、24h后,通过MTT法检测细胞活性;(3)Caspase-3活性检测试剂盒及活性氧(ROS)检测试剂盒(DCFH-DA探针法)分别检测培养72h,并对不同浓度Bil作用24h后的神经元Caspase-3活性和ROS总量水平;(4)蛋白免疫印迹(Western blot)和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法分别测定培养72h并用不同浓度Bil作用24h后各组神经元中Tet1和Klotho基因的蛋白质表达与mRNA表达水平。结果:(1)经过特异性培养基培养72h后,可以获得单一的神经元;(2)MTT结果显示:神经元培养72h并用不同浓度Bil作用4h后,与对照组相比较,各组神经元细胞活性均未出现显着性降低(P>0.05);Bil作用时间增加至8h时,与对照组相比较高浓度组神经元活性出现了显着性降低(P<0.01);Bil作用12h后,神经元活性的变化与8h相同(P<0.01);但是当Bil作用24h后,与对照组相比较,中浓度与高浓度Bil均能显着性降低神经元活性(P<0.05,P<0.01);(3)Caspase-3活性检测结果显示:神经元培养72h并用不同浓度Bil作用24h后,与对照组相比较,低、中、高浓度Bil均会引起神经元中Caspase-3活性升高(P<0.01);(4)ROS检测结果显示:神经元培养72h并用不同浓度Bil作用24h后,与对照组比较,在荧光显微镜下观察,各浓度Bil均可引起神经元中ROS的相对含量显着性升高(P<0.01);(5)Western blot结果显示:神经元培养72h并用不同浓度Bil作用24h后,与对照组相比,低、中、高浓度组Tet1蛋白表达水平均出现了显着性降低(P<0.01);与对照组相比,低、中浓度组Klotho蛋白表达水平也均出现显着性降低(P<0.05),并且高浓度组Klotho蛋白表达水平降低更明显(P<0.01);RT-PCR结果显示:与对照组比低浓度Bil组神经元中Tet1和Klotho mRNA表达水平出现了降低(P<0.05),同时中、高浓度Bil组的Tet1和Klotho mRNA表达降低更显着(P<0.01)。结论:神经元培养72h并且Bil作用24h后,高浓度Bil能显着性的降低神经元的活性,增加神经元内ROS的含量,增强Caspase-3的活性促进神经元的凋亡。同时不同浓度的Bil作用24h后神经元中Tet1与Klotho蛋白与mRNA表达水平均出现了明显的降低。因此,Bil对神经元的损伤作用可能是通过氧化应激引起Tet1与Klotho基因被抑制所致,为高胆红素血症机制进一步研究提供了新思路与依据。(本文来源于《兰州大学》期刊2017-05-01）
体外甲基化论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
【目的】探索猪孤雌激活胚胎培养过程和猪卵母细胞体外成熟前后的DNA甲基化水平及其变化,为探讨猪孤雌激活胚胎和卵母细胞的发育提供理论依据。【方法】通过使用间接免疫荧光组化和激光共聚焦显微镜的荧光相对定量的两种方法来间接检测猪孤雌激活胚胎培养过程中和猪卵母细胞成熟前后的细胞5-甲基胞嘧啶的相对含量,观察其体外发育过程中甲基化水平的变化。【结果】随着体外培养时间的延长,猪孤雌激活胚胎的甲基化程度在二到桑葚胚时呈逐渐减弱趋势;在猪孤雌激活胚胎发育的过程中,同一个胚胎的不同卵裂球之间的甲基化水平有差异;内细胞团的甲基化水平低于滋养层。猪卵母细胞成熟前和体外成熟的基因组DNA甲基化水平相比,成熟前卵母细胞基因组DNA甲基化水平低于体外成熟后的卵母细胞基因组DNA甲基化水平;随着体外成熟时间的延长,猪卵母细胞的基因组DNA甲基化水平大致呈上升趋势。【结论】IVM/PA/IVC对猪卵母细胞及早期胚胎的甲基化模式有一定影响;猪卵母细胞体外培养过程中,猪卵母细胞核基因组的甲基化水平接近于正常体内的卵母细胞。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
体外甲基化论文参考文献
[1].赵亚涵,郝海生,杜卫华,庞云渭,闫长亮.新鲜、玻璃化冷冻牛卵母细胞体外受精囊胚全基因组甲基化模式初探[J].畜牧兽医学报.2019
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[8].吴霄,李果,敖政,石俊松,蔡更元.过表达H3K9me3去甲基化酶对猪克隆胚胎体外发育效率的影响[J].广东农业科学.2017
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[10].缑盼红.Tet1介导的DNA去甲基化在胆红素致体外神经元损伤中的机制研究[D].兰州大学.2017