导读:本文包含了大鼠蛛网膜下腔出血模型论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:SS-31,NLRP3,蛛网膜下腔出血,早期脑损伤
大鼠蛛网膜下腔出血模型论文文献综述
彭华,唐晓平,孙浩耕,赵龙,杨彬彬[1]（2019）在《SS-31对蛛网膜下腔出血大鼠模型早期脑损伤及NLRP3炎性小体的影响》一文中研究指出目的探讨线粒体靶向抗氧化肽SS-31对Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体的影响以及对蛛网膜下腔出血(SAH)早期脑损伤的作用。方法将120只成年雄性大鼠随机分为4组:假手术组(Sham组)、SAH组、SAH+载体组(SAH+V组)和SAH+SS-31组,对每组大鼠进行神经功能评估,脑含水量和活性氧(ROS)测量,蛋白质免疫印迹分析NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和caspase-1的蛋白表达情况,采用退化神经元染色(Fluoro-Jade C)、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)和DNA聚合酶I介导的生物素标记的(dATP)缺口平移(PANT)染色分析神经细胞死亡情况。结果 SS-31治疗可以增加大鼠神经功能评分,使SAH损伤后的脑水肿减少,ROS的含量显着降低,抑制SAH后大鼠NLRP3炎性小体,显着降低IL-1β和IL-18的表达,显着减少Fluoro-Jade C阳性细胞、PANT阳性细胞和TUNEL阳性细胞的数量。结论线粒体靶向抗氧化肽SS-31可抑制NLRP3炎性小体,并对蛛网膜下腔出血早期脑损伤具有保护作用。(本文来源于《新疆医科大学学报》期刊2019年06期）
穆军博[2]（2018）在《蛛网膜下腔出血大鼠模型的优化及早期脑损伤发病机制的相关研究》一文中研究指出背景:蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,简称SAH)是指大脑底部或大脑表面的病变血管破裂,导致血液直接进入蛛网膜下腔而引起的一种临床综合征,占所有脑卒中的5%～10%。有研究显示:在所有原发性蛛网膜下腔出血患者中,大约有1/4死亡,而在存活的患者中,有一半比例遗留有神经系统受损的表现。作为临床上非常严重且常见的疾病,SAH因其较高的死亡率以及发病率,给社会和家庭带来非常沉重的经济负担,因此SAH的治疗干预一直是神经外科的研究重点。在过去的几十年中,SAH后第4天至第10天发生的脑血管痉挛(cvs)被认为是导致不良后果的重要原因,后期研究通过干预措施缓解SAH后的脑血管痉挛,但是SAH预后却没有得到明显改善,可见SAH预后不佳的主要原因并非CVS。于是早期脑损伤(early brain injury,EBI)的概念被提出,EBI是指在SAH后72小时内发生的一系列复杂而多变的病理生理变化。其中主要包括颅内压(ICP)升高、血脑屏障(BBB)破坏、脑灌注压改变、氧化应激反应、炎症反应、离子稳态失衡、细胞自噬和凋亡等。经过不断的实验研究,人们开始普遍认为EBI可能是导致SAH预后不佳的主要原因。EBI的特点是出现较早、发生路径多样、预后较为复杂。目前,相关的的病理生理机制还没有完全研究清楚,它们之间的相互作用关系还停留在多种设想中,这也为EBI的治疗增加了难度。目前的关于EBI的研究主要集中在实验性干预措施相关的实验,且研究多倾向于专注某一项单独的的病理生理变化,没有综合的研究对比各项机制的变化趋势,以及它们之间可能的联系,EBI的发生发展路径多样,相关病理生理变化并不是单独分开的过程,而是相互影响,相互促进,因此,检测并了解相关病理生理变化的趋势,通过趋势变化综合它们之间可能的影响关系就显得尤为重要。目的:在优化的SAH大鼠模型的基础上,通过研究EBI相关的重要病理生理变化,发现它们在EBI中的变化趋势以及相互之间可能的联系,进一步明确EBI的作用机制,也为针对发病机制研究多靶点治疗提供依据和可能。方法:将168只大鼠随机分为空白对照组,假手术组(Sham)、SAH组,其中空白对照组36只,假手术组36只,SAH组96只,根据研究时间不同将SAH组分为叁个亚组,即为24 h、48 h、72 h叁组。利用视交叉前池注血法建立大鼠SAH模型并进行优化,取大脑标本肉眼观察,统计动物死亡率,并与传统造模法进行比较。在模型优化的基础上,根据研究需要分别在SAH后对应时间点取材、收集相关数据,监测EB工相关重要的病理生理变化,包括:神经功能评分、脑水肿水平、血脑屏障破坏程度、氧化应激水平、CGRP(降钙素基因相关肽)的变化、细胞凋亡和自噬表达水平。应用单因素方差分析或Kruskal-Wallis秩和检验进行统计学方法分析,对不同组之间数据进行比较,了解相关病理生理变化在SAH后72内的变化趋势特点,结合它们相互之间的联系,分析相关变化在EBI进程中所起的作用,进一步明确EBI的作用机制。结果:1.经过优化后的视交叉前池注血法建立的SAH模型死亡率较普通方法低,模型更加稳定。2.在空白对照组和假试验组中,大鼠无神经功能障碍或表现不明显,SAH发生后EBI相关的神经功能障碍表现明显,在SAH后24h达到较高水平,此后在48h和72h逐渐降低,但是72h仍高于对照组水平。3.与空白对照组和假试验组相比,脑水肿和氧化应激反应在EBI中明显增强,SAH后24h达到较高水平,在48h和72h处于持续增强的趋势。4.正常大鼠无明显血脑屏障破坏,但在SAH后的EBI中表现明显,SAH后24h达到较水平,在48h和72h有轻微减少,但是72h仍明显高于对照组水平。5.大鼠脑脊液中存在少量CGRP,SAH后24h内脑脊液中CGRP的浓度剧烈增加,达到正常值的10余倍,在48h和72h减少明显,但在72h仍明显高于正常值数倍。6.自噬和凋亡在正常组大鼠脑组织内有少量表达,水平较低;但二者在SAH后的EBI中明显增强,24h即达到较高水平。自噬在48h和72h水平有所降低,但仍高于正常水平。结论:1.经过优化后的视交叉前池注血法建立的SAH大鼠模型死亡率降低,模型变异较小且稳定,操作方便且省时,易于推广。2.血管源性脑水肿在EBI后期不占优势,EBI后期脑水肿持续增强很可能与脑缺血缺氧、能量依赖型Na+-K+离子泵活性降低等因素引起的细胞毒性脑水肿有关。3.EBI过程中细胞凋亡与血脑屏障破坏的有着密切关系,可能是引起BBB破坏的关键因素,而EBI后期氧化应激造成的BBB损伤作用可能很有限。4.CGRP在SAH后24h剧烈增高,72h内均明显高于正常水平,此时CVS发生极少,随着CGRP的减少,CVS开始表现出来,下降趋势与CVS出现的时间点较为吻合,提示CGRP的减少很可能是CVS发生的重要原因。(本文来源于《厦门大学》期刊2018-04-01）
韩雨薇,刘秀娟,高阳,李晓明[3]（2017）在《齐墩果酸通过VEGF-Src通路对蛛网膜下腔出血大鼠模型血管内皮紧密连接表达的影响》一文中研究指出目的探讨齐墩果酸对蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的保护作用,阐释其可能的机制。方法 54只成年雄性SD大鼠分成3组(假手术组、SAH模型组、齐墩果酸给药组),每组18只。采用颈内动脉穿刺法建立大鼠SAH模型,造模1 h后给药,24 h后进行神经功能损伤评分;检测脑水含量及脑伊文思蓝浸出;并利用Western blot方法检测脑组织Src、VEGF、ZO-1、Claudin-5、Occludin蛋白的表达量。结果齐墩果酸高剂量给药可有效改善神经功能损伤(P<0.01);降低脑组织含水量和脑血管通透性(P<0.01);增加ZO-1、Claudin-5、Occludin蛋白的表达,降低VEGF水平,抑制Src激活(P<0.05)。结论齐墩果酸对SAH后早期脑损伤有显着的保护作用,可改善脑水肿,其作用机制可能与增加脑组织紧密连接蛋白的表达有关。(本文来源于《实用药物与临床》期刊2017年08期）
王琳,王涛,梁迎春,宁方波,赵芳芳[4]（2017）在《尼莫地平对蛛网膜下腔出血模型大鼠谷氨酸转运体表达的影响》一文中研究指出目的探究尼莫地平对蛛网膜下腔出血(SAH)模型大鼠脑干组织中谷氨酸转运体表达情况影响。方法选取54只Wistar大鼠,按照随机数字表法分为对照组6只,SAH组24只和SAH-尼莫地平组24只,使用枕大池二次注血法建立SAH模型,SAH-尼莫地平组注射尼莫地平,分别检测叁组大鼠基底动脉的最大血流速度以及谷氨酸转运体(EAATs)m RNA表达水平。结果 SAH组第1、7、14天的基底动脉最大血流速度(Vba)显着高于对照组,SAH-尼莫地平组第1、7天的Vba显着高于对照组,SAH-尼莫地平组在第1、7、14天的Vba显着低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。SAH组第1天的EAAT-1/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)显着低于对照组,第21天显着高于对照组;SAH-尼莫地平组4个时间点的EAAT-1/GAPDH值均显着高于对照组,第1、7、14天显着高于SAH组,差异均有统计学意义(P<0.05)。SAH组第1、7天的EAAT-2/GAPDH显着低于对照组,SAH-尼莫地平组第14、21天的EAAT-2/GAPDH显着高于对照组,4个时间点均显着高于SAH组,差异均有统计学意义(P<0.05)。SAH组第1、7天的EAAT-3/GAPDH显着低于对照组,SAH-尼莫地平组第1天的EAAT-3/GAPDH值均显着高于对照组,第1、7天显着高于SAH组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论使用尼莫地平可有效增加大鼠脑干中EAATs的表达水平,从而缓解脑血管痉挛,治疗SAH。(本文来源于《中华神经创伤外科电子杂志》期刊2017年04期）
单宏宽,刘刚[5]（2017）在《改良枕大池二次注血法建立大鼠蛛网膜下腔出血模型》一文中研究指出目的:建立大鼠蛛网膜下腔出血模型,通过研究其出血后认知、行为学改变,基底动脉变化探讨枕大池穿刺二次注入自体动脉血溶血物法建立大鼠蛛网膜下腔出血模型的实际可行性。方法:将72只清洁级雄性SD大鼠(体重300~350 g)随机分成对照组(n=12只)、实验组(n=60只)。实验组又分别划分为出血后12 h、24 h、48 h、3 d、5 d 5个时相组,每个时相组各12只大鼠。造模后,通过水迷宫试验观察各时相点大鼠蛛网膜下腔出血后的认知、行为学改变,评价大鼠的学习记忆功能障碍。结果:水迷宫结果显示实验组大鼠与正常对照组比较,逃避潜伏期明显延长,跨越平台次数减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。大体标本观察,对照组脑蛛网膜下腔未见出血,实验组大鼠蛛网膜下腔出血明显,可见有大量血液或血凝块弥漫分布于蛛网膜下腔。结论:枕大池穿刺二次注入自体动脉血溶血物法建立模型操作简便易行,可重复性强,大鼠学习记忆功能障碍改变明显。大鼠基底动脉痉挛明显,模型复制成功。(本文来源于《中国医学创新》期刊2017年22期）
刘振刚,高建亮,孙林林,郭鑫,王萌[6]（2017）在《颈内动脉刺破法制作大鼠蛛网膜下腔出血模型》一文中研究指出目的通过图文结合的形式,详细介绍大鼠蛛网膜下腔出血模型的制作方法及过程;改进并创新模型,使其能更好的模拟临床动脉瘤破裂所致蛛网膜下腔出血。方法选取SD雄性大鼠,采用颈内动脉颅外段穿入颈内段法,建立SD雄性大鼠蛛网膜下腔出血模型,用呼吸、瞳孔、大小便及留置纤芯解剖大鼠头颈等方法对模型进行验证。通过观察死亡率和临床表现,探讨模型的可控性、可重复性。结果实现了刺破血管造成蛛网膜下腔出血,且纤芯到达的位置能准确的刺破所需要的血管。结论此法制作模型稳定,方法通俗易懂,操作精巧灵活,可重复性强,理解后短时间内就可造模成功,且成功造模所形成的蛛网膜下腔出血,能更好地模拟临床动脉瘤突然破裂出血,非常适用于蛛网膜下腔出血早期脑损害及其血管痉挛的研究。(本文来源于《中国比较医学杂志》期刊2017年06期）
周栎[7]（2017）在《蛛网膜下腔出血大鼠模型中T型钙通道Cav3.1的表达及其干预》一文中研究指出目的:通过建立蛛网膜下腔出血(subarachnoidhemorrhage,SAH)动物模型,在不同水平上观察T型钙离子通道Cav3.1在模型大鼠脑血管中的表达,并通过特异性拮抗剂干预,初步探讨T型钙离子通道Cav3.1在蛛网膜下腔出血后迟发性血管痉挛(delayed cerebral vasospasm,DCVS)中的意义,并进一步探究其损伤机制和病理基础,从而为临床提供新的治疗方法。方法:通过微型注射器将大鼠自体血注入视交叉前池,建立大鼠蛛网膜下腔出血模型。随机将SD大鼠分为正常组、注盐水组(假手术组)、注血组(模型组)、药物A组(尼莫地平组)(2mg/kg/d)、药物B组(盐酸氟桂利嗪组)(1mg/kg/d)。在造模后2d、4d、6d处死大鼠,采用Garcia JH评分、HE染色、蛋白免疫印迹法(Western blotting)、实时荧光定量 PCR 法(Quantitative Real-time PCR)评价大鼠神经功能损伤程度、血管痉挛程度、T型钙离子通道Cav3.1表达量及模型的有效性,并评价干预药物治疗的效果。结果:1.模型组大鼠的综合死亡率为33%,术后Garcia JH评分提示大鼠出现活动减少、反应减退,神经功能评分低于假手术组及正常组。药物A组、药物B组大鼠行为能力明显强于模型组,药物A组模型大鼠第2d行为评分要高于药物B组,其中药物B组第6d大鼠行为评分高于药物A组。2.模型组大鼠脑组织切片显示各时期脑血管均有内皮收缩,在术后第2d血管内皮收缩程度明显。药物A组、药物B组血管痉挛程度小于模型组,药物A组第2d血管痉挛程度小于对应天数的药物B组,而第6d药物B组血管痉挛程度要小于对应天数的药物A组。3.免疫蛋白印迹法察到T型钙离子通道Cav3.1在模型大鼠脑血管中有大量表达,并明显高于正常组大鼠,并随时间呈递增趋势。4.实时荧光定量PCR显示Cav3.1mRNA在正常组、假手术组、模型组、药物A组、药物B组中均有表达,其中模型组、药物A组、药物B组中Cav3.1mRNA量均大于假手术组,且随时间呈递增趋势。5.模型组、药物A组、药物B组大鼠均有体重下降表现,其中又以模型组大鼠体重下降最明显。结论:1.蛛网膜下腔出血大鼠模型的脑血管中T型钙离子通道Cav3.1表达在6d内呈递增趋势。2.尼莫地平、盐酸氟桂利嗪并不通过改变T型钙离子通道Cav3.1表达量起到治疗效果。(本文来源于《湖南师范大学》期刊2017-06-01）
孙新刚,侯亚芝,马乾,王荔,王改青[8]（2017）在《血管内穿刺法建立大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤模型》一文中研究指出目的:建立一种微创、有效、重复性好的大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑损伤(EBI)动物模型。方法:制备正常对照组和SAH组大鼠,每组12只。采用血管内穿刺法建立SAH后EBI动物模型,观察各组动物脑组织大体标本,比较各组大鼠一般情况、神经行为学评分、脑含水量及血脑屏障通透性。结果:与对照组及假手术组相比,SAH组大鼠神经行为学评分明显降低(t=12.37,P<0.01),蛛网膜下腔可见弥漫性分布的血液或血凝块,脑含水量(t=-9.04,P<0.01)及血脑屏障通透性(t=-38.70,P<0.01)明显增加。结论:采用血管内穿刺法可成功建立大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤模型。(本文来源于《临床医药实践》期刊2017年03期）
朱清风[9]（2017）在《蛛网膜下腔出血大鼠模型早期脑损伤中S1PR1的表达及依达拉奉干预后的影响研究》一文中研究指出目的:本实验采用SD(Sprague dawley)蛛网膜下腔出血大鼠模型,并从形态学水平、分子水平和药物干预等方面进行实验,采用HE染色、WB、reat-time PCR等方法,观察蛛网膜下腔出血早期脑损伤大鼠脑组织中S1PR1(Sphingosine-1-Phosphate Receptor 1,S1PR1)和炎症因子TNF-α的表达情况。初步研究并讨论依达拉奉对S1PR1的表达变化的作用和对蛛网膜下腔出血早期脑损伤的影响。方法:实验选用的是70只等级属于清洁级、体格较为健康、性情相对危险的雄性Sprague-Dawley大鼠,年龄范围控制在周龄10~12之间,体重控制在250g以上,300g以下的范围内。然后基于随机分组的方法理论,把上述大鼠分为数量为10只不作处理的空白参照组,数量为20只假定做了手术的假手术组,蛛网膜下腔出血早期脑损伤组(n=20)和药物干预组(n=20)四个组,这四组为了方便实验操作,分别编号为第1至4组。采用视交叉前池注血法建立蛛网膜下腔出血(Subarachnoid hemorrhage,SAH)后早期脑损伤(Early Brain Injury,EBI)动物模型,造模后对药物干预组大鼠采用依达拉奉进行药物干预。造模成功24h后,采用动物行为学评分法来评价SD大鼠的神经功能缺损情况,并对各组大鼠的神经功能缺损评分进行比较。采用HE染色观察大鼠脑组织的病理形态,观察各组大鼠神经元坏死情况,评估各组大鼠的脑组织损伤程度。采用Western Blot的方法检测各组大鼠脑组织中S1PR1蛋白和TNF-α的表达情况,并对各大鼠脑组织中S1PR1蛋白和TNF-α的表达情况进行比较。采用real-time PCR的方法检测各组大鼠脑组织中S1PR1mRNA的定量表达情况,并根据各组大鼠脑组织中S1PR1mRNA的定量表达情况的显示结果,对数据经过处理,再分析对比。结果:1.根据显示的结果,在神经功能的完善性能方面,对各组实验进行评价:其中第一组和第二组在神经性能是否完善方面的结果一样,都为0分,蛛网膜下腔出血早期脑损伤组和在药物作用下进行试验的组即第叁组和第四组,其得到的结果中,最低评分0分以及最高的评分4分都不成规律的出现,需要用同等条件下的大鼠进行补充替换,试验中出现最高和最低评分的大鼠,到最后整个评价系统完成时,第四组大鼠的神经功能缺损评分显着低于蛛网膜下腔出血早期脑损伤组,根据结果表现出的差异性,说明实验数据在统计学范畴内很有意义(P<0.05)。2.染色结果:实验采用的染色方法是苏木精—伊红法,在实验第一组和第二组的结果中,可见大鼠脑组织中神经元细胞结构完整,未见组织水肿,未见炎症细胞聚集。而在蛛网膜下腔出血早期脑损伤组即第叁组的实验对象,可以看见大鼠脑组织的有大量神经元细胞坏死,数量较对照组减少,且有明显的炎症细胞侵润。药物干预组与蛛网膜下腔出血早期脑损伤模型组相比,可见脑组织结构更为清晰,损伤程度减轻,有更多的正常神经元细胞,炎症细胞侵润情况明显减少。3.Western Blot检测结果:蛛网膜下腔出血早期脑损伤组S1PR1的表达显着低于假手术组和正常对照组(P<0.05),TNF-α的表达则明显高于假手术组和正常对照组(P<0.05),药物干预组大鼠的S1PR1的表达显着高于假手术组和正常对照组(P<0.05),TNF-α的表达明显低于蛛网膜下腔出血早期脑损伤模型组(P<0.05)。4.real-time PCR检测结果:S1PR1(CD363)-mRNA在药物干预有明显表达,蛛网膜下腔出血早期脑损伤组S1PR1(CD363)-mRNA表达量与药物干预组相比则减弱,各组之间相比较均有显着的差异性(P<0.05)。结论:1.蛛网膜下腔出血早期脑损伤SD大鼠脑组织中S1PR1蛋白表达降低。2.依达拉奉可以促进蛛网膜下腔出血早期脑损伤SD大鼠脑组织中S1PR1蛋白的表达,可以起到减轻炎症反应,对蛛网膜下腔出血早期脑损伤大鼠的脑起到保护作用。(本文来源于《湖南师范大学》期刊2017-03-01）
钱聪[10]（2016）在《SIRT1在大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤模型的神经保护作用及机制研究》一文中研究指出研究背景自发性蛛网膜下腔出血(spontaneous subarachnoid hemorrhage, SAH)是神经外科常见的危重急症,大约30%的病人在发病初期死亡,10%的病人死于其后续发生的各种并发症,其总体死亡率高达50%。自发性蛛网膜下腔出血大约占所有中风疾病的5-7%,全世界的发病率大约为10/10万人。大多数患者死亡发生于疾病早期,其中最主要原因是自发性蛛网膜下腔出血或者并发急性脑积水后导致的颅内压急剧增高。进一步的基础研究表明自发性蛛网膜下腔出血后早期脑损伤(Early brain injury, EBI)是导致高死亡率和致残率的主要原因。早期脑损伤是指从蛛网膜下腔出血开始至72小时这一时间窗之内的脑损伤,它是一个非常复杂的病理生理学过程。目前的研究认为早期脑损伤主要与颅内压升高、脑血流量降低、脑灌注压下降、血脑屏障破坏和脑水肿等有关,同时还有很多研究证据表明凋亡是早期脑损伤的主要病理改变因,神经元与内皮细胞的凋亡在蛛网膜下腔出血模型中均有报道,而且均与脑水肿密切相关。肿瘤抑制因子p53是非常重要的凋亡调控因子,蛛网膜下腔出血后发现p53的表达水平明显增高。而p53又是最早被发现能被乙酰化调节而且非组蛋白的蛋白质,当p53末端的赖氨酸被乙酰化,将激活p53增强其对下游分子的转录,比如Bax, Puma, Noxa, Bid等凋亡促进分子从而起到促进凋亡的作用。关于p53乙酰化进一步研究发现,乙酰化作用能在同一赖氨酸位点与其他蛋白修饰作用竞争比如泛素化和甲基化,从而调节其转录的活性甚并起到进一步调节生物功能的目的。以往的实验证据表明蛋白的乙酰化依赖于去乙酰化酶家族分子的作用,p53的去乙酰化调控就是依赖于去乙酰化酶的作用。Sirtuins家族属于Ⅲ类去乙酰化酶家族,它能够对组蛋白或非组蛋白去乙酰化。SIRT1是哺乳动物sirtuins家族成员中研究最多,在以往的研究中发现其在多种生理或者病理过程中起到重要的调控作用。除了能够对H1、H3和H4去乙酰化之外,它还被发现能对p53、NF-κB、FoxO等转录因子去乙酰化,因此在理论上SIRT1能够通过对上述蛋白乙酰化状态的调节而具有调节细胞周期,凋亡和肿瘤抑制的作用。很多体外或者体内研究证实SIRT1能够通过对重要分子去乙酰化的调节而对心脑等器官起到很好的保护作用。白藜芦醇是一种天然存在化合物,在多种植物中含量很高比如葡萄皮中,同时它也是SIRT1的一种激活剂,在许多研究中它被发现能够具有类似于热量限制(calorie restriction, CR)带来的生物体生命周期延长的作用。相反sirtinol是SIRT1的抑制剂,在多个研究中通过抑制SIRT1的活性来验证SIRT1在不同生物或生理活动中的作用。本研究将观察SIRT1在蛛网膜下腔出血早期脑损伤中后其表达调控情况以及其对神经元凋亡、脑水肿和神经功能的影响,然后通过激活与抑制SIRT1来进一步阐明SIRT1在蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中的作用机制。实验方法第一部分首先采用颈内动脉线栓穿刺法制作大鼠蛛网膜下腔出血模型。成年雄性SD大鼠被随机分为：假手术组(Sham组),蛛网膜下腔出血组(SAH组),SAH组按取材时间不同又分为蛛网膜下腔出血后6h组(SAH 6h组),蛛网膜下腔出血后24h组(SAH 24h组),蛛网膜下腔出血48h组(SAH48h组)。通过神经功能缺陷评分,脑水含量测定检测脑损伤程度。采用Western blot检测自SIRT1的表达和凋亡相关蛋白(p53及其乙酰化状态)的表达；采用免疫荧光法检测神经元凋亡细胞数目。第二部分1.成年雄性SD大鼠被随机分为：假手术+溶剂组(Sham组)、蛛网膜下腔出血+溶剂组(SAH组)和蛛网膜下腔出血+白藜芦醇预处理组(SAH+RES组)(模型制作前48小时开始每日腹腔注射白藜芦醇(100mg/kg))。通过神经功能缺陷评分,不同部位脑组织的脑水含量测定检测早期脑损伤程度。2.成年雄性SD大鼠被随机分为：假手术组(Sham组),蛛网膜下腔出血组(SAH组),蛛网膜下腔出血+溶剂组(SAH+SOL),蛛网膜下腔出血+白藜芦醇组(SAH+RES),蛛网膜下腔出血+白藜芦醇+脑室DMSO组(SAH+RES+DMSO)和蛛网膜下腔出血+白藜芦醇+脑室sirtinol组(SAH+RES+SIR).白藜芦醇在蛛网膜下腔出血模型制作前48小时腹腔注射100mg/kg, sirtinol为脑室注射10ul, Sham组除不刺穿颈内动脉外其余操作与SAH组相同,(SAH+RES+DMSO)组脑室内注射与sirtinol等体积DMSO.然后在蛛网膜下腔出血模型制作完成后24小时采集数据：神经功能功能缺陷评分,不同部位脑组织的脑水含量测定,Evans blue评估血脑屏障破坏程度；采用Western blot法检测ZO-1、Occludin、cluadin5、SIRT1、凋亡相关蛋白p53及其乙酰化状态和凋亡相关蛋白(活化的caspase3)的表达；免疫荧光多重标记法检测神经元细胞凋亡情况；实时荧光定量PCR检测p53下游调控蛋白(Bax, Puma, Noxa, Bid)的mRNA表达情况。结果第一部分蛛网膜下腔出血后48h内大鼠的脑水含量上升程度和神经功能评分下降程度在24h时达到最大值,western blot结果显示蛛网膜下腔出血后SIRT1在24小时达到低谷,此时p53表达达高峰,其乙酰化水平达高峰。免疫组织化学结果提示,蛛网膜下腔出血后24h,脑组织TUNEL阳性标记的凋亡细胞数增力口,TUNEL和神经元标记物NeuN共荧光定位,提示凋亡在神经元细胞发生。第二部分1.蛛网膜下腔出血24小时后通过脑水含量及神经功能的评估发现白藜芦醇预处理缓解了左右脑半球脑水含量的上升和神经功能缺陷,白藜芦醇预处理降低了蛛网膜下腔出血后大鼠的死亡率。2.蛛网膜下腔出血24小时后观察发现白藜芦醇预处理缓解了左右脑半球脑水含量的上升和神经功能缺陷,而sirtinol逆转了白藜芦醇的作用。通过测量脑组织Evans Blue的含量发现,蛛网膜下腔出血后血脑屏障严重破坏,白藜芦醇预处理保护了血脑屏障(减少Evans blue渗出),而sirtinol作用以后原本减少的Evans blue又增多了,说明其逆转了白藜芦醇的血脑屏障保护作用。通过western blot检测发现,蛛网膜下腔出血后24小时ZO-1、Occludin. Claudin5等紧密链接蛋白表达下降是导致血脑屏障通透性增加的直接原因之一,白藜芦醇预处理能上调其表达水平从而减轻血脑屏障通透性的增加,但使用了sirtinol之后白藜芦醇上调上述紧密连接蛋白的作用被逆转。在SIRT1激活方面的作用,白藜芦醇预处理使蛛网膜下腔出血后SIRT1表达下降得到减轻,而sirtinol能够反转白藜芦醇对SIRT1表达上调的作用；同时白藜芦醇能够明显减少p53和乙酰化p53的水平,降低了激活的caspase3的表达,而Sirtinol则逆转了白藜芦醇下调p53、乙酰化p53和激活的caspase3的作用。进一步通过TUNEL和NeuN免疫荧光共定位方法检测凋亡神经元数目发现,白藜芦醇预处理可以明显减少凋亡神经元数目,sirtinol抑制了白藜芦醇的减轻神经元凋亡的作用。通过荧光定量PCR检测发现白藜芦醇预处理明显减少了BaxmRNA水平,其余几个凋亡相关蛋白的mRNA水平有下降的趋势但未发现统计学差异；而sirtinol明显抑制了白藜芦醇对Bax mRNA水平下调的作用。结论第一部分大鼠颈内动脉穿刺的蛛网膜下腔出血观察返现脑水肿、p53和乙酰化p53均在24小时达到高峰,神经功能缺陷明显,而SIRT1在此时最低,结合神经元凋亡情况,提示SIRT1可能参与了蛛网膜下腔出血早期脑损伤相关的后神经元凋亡的调控。第二部分白藜芦醇预处理能够改善蛛网膜下腔出血后大鼠神经功能缺陷,减轻脑水肿；通过白藜芦醇预处理和sirtinol逆转白藜芦醇的研究发现：白藜芦醇其血脑屏障保护可能是通过上调ZO-1、Occludin、Claudin5等紧密连接蛋白而起作用,同时白藜芦醇上调了SIRT1的表达水平,降低了p53和乙酰化p53的水平,激活的caspase3也下降了,免疫荧光检查也证实白藜芦醇预处理使凋亡的神经元细胞减少；相反使用SIRT1抑制剂sirtinol在各方面抑制了白藜芦醇的神经元保护作用,脑水肿减轻被逆转、减少的Evans blue渗出又开始增多、被白藜芦醇减轻的大鼠神经功能缺陷再次加重,分子检测方面ZO-1、Occludin、Claudin5等血脑屏障相关蛋白再次下调,SIRT1表达水平低于单独白藜芦醇预处理、p53和乙酰化p53水平转向增高,凋亡神经元数目增高。通过使用SIRT1增强剂和抑制剂从神经功能、脑水肿和血脑屏障检测,进而在信号通路等分子水平说明SIRT1信号通路在蛛网膜下腔出血后起到重要调节作用,进而减轻脑水肿、保护血脑屏障、减少神经元凋亡、改善神经功能。(本文来源于《浙江大学》期刊2016-04-04）
大鼠蛛网膜下腔出血模型论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景:蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,简称SAH)是指大脑底部或大脑表面的病变血管破裂,导致血液直接进入蛛网膜下腔而引起的一种临床综合征,占所有脑卒中的5%～10%。有研究显示:在所有原发性蛛网膜下腔出血患者中,大约有1/4死亡,而在存活的患者中,有一半比例遗留有神经系统受损的表现。作为临床上非常严重且常见的疾病,SAH因其较高的死亡率以及发病率,给社会和家庭带来非常沉重的经济负担,因此SAH的治疗干预一直是神经外科的研究重点。在过去的几十年中,SAH后第4天至第10天发生的脑血管痉挛(cvs)被认为是导致不良后果的重要原因,后期研究通过干预措施缓解SAH后的脑血管痉挛,但是SAH预后却没有得到明显改善,可见SAH预后不佳的主要原因并非CVS。于是早期脑损伤(early brain injury,EBI)的概念被提出,EBI是指在SAH后72小时内发生的一系列复杂而多变的病理生理变化。其中主要包括颅内压(ICP)升高、血脑屏障(BBB)破坏、脑灌注压改变、氧化应激反应、炎症反应、离子稳态失衡、细胞自噬和凋亡等。经过不断的实验研究,人们开始普遍认为EBI可能是导致SAH预后不佳的主要原因。EBI的特点是出现较早、发生路径多样、预后较为复杂。目前,相关的的病理生理机制还没有完全研究清楚,它们之间的相互作用关系还停留在多种设想中,这也为EBI的治疗增加了难度。目前的关于EBI的研究主要集中在实验性干预措施相关的实验,且研究多倾向于专注某一项单独的的病理生理变化,没有综合的研究对比各项机制的变化趋势,以及它们之间可能的联系,EBI的发生发展路径多样,相关病理生理变化并不是单独分开的过程,而是相互影响,相互促进,因此,检测并了解相关病理生理变化的趋势,通过趋势变化综合它们之间可能的影响关系就显得尤为重要。目的:在优化的SAH大鼠模型的基础上,通过研究EBI相关的重要病理生理变化,发现它们在EBI中的变化趋势以及相互之间可能的联系,进一步明确EBI的作用机制,也为针对发病机制研究多靶点治疗提供依据和可能。方法:将168只大鼠随机分为空白对照组,假手术组(Sham)、SAH组,其中空白对照组36只,假手术组36只,SAH组96只,根据研究时间不同将SAH组分为叁个亚组,即为24 h、48 h、72 h叁组。利用视交叉前池注血法建立大鼠SAH模型并进行优化,取大脑标本肉眼观察,统计动物死亡率,并与传统造模法进行比较。在模型优化的基础上,根据研究需要分别在SAH后对应时间点取材、收集相关数据,监测EB工相关重要的病理生理变化,包括:神经功能评分、脑水肿水平、血脑屏障破坏程度、氧化应激水平、CGRP(降钙素基因相关肽)的变化、细胞凋亡和自噬表达水平。应用单因素方差分析或Kruskal-Wallis秩和检验进行统计学方法分析,对不同组之间数据进行比较,了解相关病理生理变化在SAH后72内的变化趋势特点,结合它们相互之间的联系,分析相关变化在EBI进程中所起的作用,进一步明确EBI的作用机制。结果:1.经过优化后的视交叉前池注血法建立的SAH模型死亡率较普通方法低,模型更加稳定。2.在空白对照组和假试验组中,大鼠无神经功能障碍或表现不明显,SAH发生后EBI相关的神经功能障碍表现明显,在SAH后24h达到较高水平,此后在48h和72h逐渐降低,但是72h仍高于对照组水平。3.与空白对照组和假试验组相比,脑水肿和氧化应激反应在EBI中明显增强,SAH后24h达到较高水平,在48h和72h处于持续增强的趋势。4.正常大鼠无明显血脑屏障破坏,但在SAH后的EBI中表现明显,SAH后24h达到较水平,在48h和72h有轻微减少,但是72h仍明显高于对照组水平。5.大鼠脑脊液中存在少量CGRP,SAH后24h内脑脊液中CGRP的浓度剧烈增加,达到正常值的10余倍,在48h和72h减少明显,但在72h仍明显高于正常值数倍。6.自噬和凋亡在正常组大鼠脑组织内有少量表达,水平较低;但二者在SAH后的EBI中明显增强,24h即达到较高水平。自噬在48h和72h水平有所降低,但仍高于正常水平。结论:1.经过优化后的视交叉前池注血法建立的SAH大鼠模型死亡率降低,模型变异较小且稳定,操作方便且省时,易于推广。2.血管源性脑水肿在EBI后期不占优势,EBI后期脑水肿持续增强很可能与脑缺血缺氧、能量依赖型Na+-K+离子泵活性降低等因素引起的细胞毒性脑水肿有关。3.EBI过程中细胞凋亡与血脑屏障破坏的有着密切关系,可能是引起BBB破坏的关键因素,而EBI后期氧化应激造成的BBB损伤作用可能很有限。4.CGRP在SAH后24h剧烈增高,72h内均明显高于正常水平,此时CVS发生极少,随着CGRP的减少,CVS开始表现出来,下降趋势与CVS出现的时间点较为吻合,提示CGRP的减少很可能是CVS发生的重要原因。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
大鼠蛛网膜下腔出血模型论文参考文献
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