导读:本文包含了脆性智力低下蛋白论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:FMRP,非编码RNA通路,piRNA,基因组稳定
脆性智力低下蛋白论文文献综述
李恩惠,赵欣,张策,刘威[1]（2018）在《脆性X智力低下蛋白参与非编码RNA通路的研究进展》一文中研究指出脆性X综合征(Fragile X syndrome)是一种最常见的遗传性智力低下疾病,并且伴有语言和行为障碍等。该疾病是由脆性X智力低下基因(Fragile X mental retardation 1,FMR1)突变而导致脆性X智力低下蛋白(Fragile X mental retardation protein,FMRP)表达异常造成的。近年来,研究发现FMRP参与非编码RNA通路,并发挥多种重要生物学功能,这对理解脆性X综合征发病机理具有重要的推动作用。首先发现FMRP与siRNA和miRNA通路中Dicer酶、Ago1和Ago2蛋白相互作用,参与神经活动及生殖干细胞命运决定等重要过程。随后又发现FMRP与piRNA通路中Aub、Ago1和Piwi蛋白相互作用,维持了染色体正常结构和基因组稳定性。最新研究结果发现FMRP与lncRNA相互作用,其功能和价值正引起关注。本文从FMRP与非编码RNA通路的关系展开,着重介绍了FMRP与piRNA之间的相互作用,以期为深入理解非编码RNA通路在脆性X综合征的发病过程中作用提供参考,同时期望与临床医学领域尽快形成交叉研究,早日促进理论成果转化为临床应用。(本文来源于《遗传》期刊2018年02期）
邢洲[2]（2015）在《脆性X智力低下蛋白通过MEK/ERK信号通路促进星形胶质细胞瘤增殖》一文中研究指出研究背景胶质瘤是非常常见的颅内肿瘤,占颅内恶性肿瘤的80%,根据临床病理标准,胶质瘤分为四个级别(I-IV)。高病理级别的胶质瘤增殖能力强,与患者不良预后相关。充分认识胶质瘤增殖的分子机制,对于实施新的治疗策略,以改善患者的预后非常重要。胶质瘤的增殖与某些功能性蛋白的表达相关,如:诱骗受体3(Dc R3),肿瘤坏死因子受体超家族成员的表达,和富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5(Lgr5)。已经有报道,胶质瘤所表达的功能性蛋白持续激活有丝分裂原激活的蛋白激酶/ERK激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)促进胶质瘤细胞的增殖和迁移。研究鉴定影响胶质瘤增殖的蛋白是非常有意义的,因为这些蛋白可以作为胶质瘤治疗的新靶点,提高治疗效果。脆性X综合症(FXS)是一种X染色体连锁的单基因病,主要发病原因是FMR1基因缺失或突变导致脆性X智力低下蛋白(FMRP)表达缺失。FMRP是RNA结合蛋白,在神经细胞突触联系中起关键的作用。突触在细胞与细胞间通讯连接中起关键的作用,随着时间的推移,突触可以对刺激的反应产生变化或耐受,这就是突触的可塑性,这种突触的特性对于人的记忆和学习是非常重要的。FMRP通过结合m RNA分子把这些m RNA分子从细胞核带到细胞的其它部位,在这些部位蛋白质被合成,FMRP可以调节蛋白的合成,而有些受FMRP调节的蛋白对于维持神经元的正常功能起重要作用。FMRP与m RNA相结合调节蛋白翻译和运输,而且有助于靶向的m RNA稳定。研究FMRP调控哪些m RNAs是非常重要的,人们用了多种方法研究FMRP所结合的m RNAs,在脑组织中有1000种以上的m RNAs与FMRP结合,在非神经元细胞中有6000种以上的m RNAs是FMRP的靶点。与FMRP结合的许多m RNAs所编码的蛋白与突触的活性、细胞粘附、细胞骨架结构重塑相关。FMRP的缺失导致所结合的m RNAs调节障碍,功能性蛋白表达失控,患者出现FXS的临床表现,表现为多种神经系统的症状,包括智力障碍、躁狂、强迫、焦虑和抑郁。有研究报道,在FXS患者中,FMRP表达缺失导致MEK/ERK/PI3K/m TOR/GSK-3β的信号受到抑制。近年研究FMRP在脑组织中的功能提示FMRP的表达与肿瘤相关。例如,FMRP在乳腺癌和肝癌中表达升高与肿瘤侵袭和转移相关。非常有趣的是,在患有FXS的患者中,颅内肿瘤进展的风险很小。有一个患有FXS的患儿同时患中脑不可手术的胶质母细胞瘤,在确诊后存活8年还没有神经系统症状。但FMRP在FXS中缺失与胶质瘤进展缓慢相关还未见报道。在本课题中,我们重点阐明FMRP与神经胶质瘤增殖的关系,阐明FMRP在神经胶质瘤中发挥作用的分子机制。材料与方法1、脑星形胶质细胞瘤组织标本我们回顾性分析了广州医科大学附属第二医院2004年1月到2014年10月的医学影像资料,收集被诊断为星形胶质瘤的组织标本。入组74例脑星形胶质瘤石蜡包埋的组织标本,在74例标本中,有42例是WHO病理分级2级,32例是WHO病理级别III级或IV级。WHO病理级别III级或IV级标本被界定为高级别胶质瘤,II级被界定为低级别胶质瘤。在胶质瘤石蜡标本中,胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、KI67和FMRP的表达水平,由两位病理学家鉴定。24例脑星形胶质细胞瘤新鲜标本和6例脑外伤患者脑组织新鲜标本来自广医二院2013年3月到2014年3月手术患者。2、FMRP在不同病理级别胶质瘤中的表达差异及预后分析用western blot的方法检测不同病理级别星形胶质瘤组织和脑外伤患者的脑组织标本中FMRP的表达。通过H&E或免疫组化的方法检测不同病理级别胶质瘤组织中GFAP、Ki67、FMRP的表达。用Image-Pro Plus 6.0软件,分析FMRP的阳性染色,计算阳性染色的积分光密度。计算Ki67和FMRP阳性染色细胞的百分率。同时分析在星形胶质细胞瘤中FMRP的表达与Ki67间的关系。用Kaplan-Meier生存曲线分析星形胶质细胞瘤患者总生存期与FMRP或Ki67表达的关系。3、FMRP在两个星形胶质瘤细胞系中的表达及与胶质瘤细胞增殖的关系用western blot的方法检测胶质瘤细胞系U251/U87 BT325/SHG44细胞系中的表达。检测U251/U87 BT325/SHG44细胞增殖的比率。4、FMRP促进星形胶质瘤细胞增殖用脂质体包裹靶向FMR1基因的si RNA,转染星形胶质瘤细胞系U251、U87,以沉默细胞中FMRP的表达。用MTT和Ed U摄入实验检测U251和U87细胞增殖的情况,说明FMRP促进胶质瘤细胞增殖。5、FMRP在星形胶质瘤细胞中诱导MEK/ERK信号通路的激活在FMRP-si RNAs转染入U251或U87的条件下,用western blot的方法检测FMRP、PTEN、PDK1、AKT、m TOR、GSK-3β、MEK和ERK,用免疫荧光的方法检测FMRP和MEK,说明FMRP在星形胶质瘤细胞系中诱导MEK/ERK信号通路的激活。6、体内实验证明FMRP促进星形胶质细胞瘤增殖转染携带GFP-sh RNA或FMRP-sh RNA的慢病毒载体感染进入U251星形胶质瘤细胞后,用western blot方法检测FMRP的表达。将上述处理的U251细胞植入裸鼠的皮下,在不同时间点检测移植瘤的体积。对移植瘤的石蜡切片进行H&E和免疫组化染色,检测GFAP、Ki67或FMRP。7、统计分析所用统计分析用SPSS19.0完成。实验结果1、FMRP在星形胶质细胞瘤中的表达与肿瘤增殖相关,与患者的预后相关。用western blot的方法检测FMRP在24例新鲜胶质瘤标本中的表达,以6例外伤性脑组织为对照,结果表明,与对照组相比,在IV级星形胶质细胞瘤中FMRP的蛋白水平升高5.1倍,III级肿瘤升高3.2倍。74例胶质瘤患者组织标本免疫组化检测表明,随着病理级别的升高,GFAP的表达逐渐降低,FMRP和Ki67的表达逐渐升高,分析FMRP+细胞和Ki67+细胞的百分率表明,在病理III级和IV级病例中明显升高(P<0.05或P<0.01)。在Ki67+率≤5%时FMRP+细胞的百分率明显高于Ki67+细胞>5%时FMRP+细胞百分率为(P<0.01)。Kaplan-Meier生存曲线分析表明,Ki67+细胞比率低或FMRP+细胞的IOD值低的患者预后明显改善(P<0.001或P<0.01)。这些结果表明FMRP高表达与星形胶质细胞瘤增殖快相关,与患者的不良预后相关。2、FMRP通过MEK/ERK信号通路促进星形胶质瘤细胞增殖。在星形胶质瘤细胞系中探讨FMRP的表达与肿瘤增殖的关系,结果表明FMRP高表达的细胞系的增殖能力强(P<0.01)。用两个不同的FMRP-si RNAs分别转染胶质瘤细胞,用MTT检测胶质瘤细胞增殖,结果表明,FMRP的高表达与星形胶质瘤细胞的增殖相关,FMRP表达受到抑制后,与未转染组比,U251的增殖被抑制33.3%和43.0%,U87增殖被抑制37.1%和44.1%(P<0.05和P<0.01)。在Ed U摄入实验中也得到了相似的结果。这些结果说明FMRP在星形胶质细胞瘤增殖中起关键的作用。进一步研究FMRP表达下调的情况下,信号通路的激活状态。把两个FNRP-si RNAs分别转染入U251或U87细胞,不能改变PTEN/PDK1/AKT/GSK-3β/AKT3的磷酸化激活状态。但两条si RNAs均抑制MEK/ERK的磷酸化激活,对照组转染GFP-si RNA或单纯转染试剂组没有这样的作用。免疫荧光实验证明在UTR51/U87细胞中,FMRP-si RNAs降低MEK的表达。这些数据表明,FMRP通过MEK/ERK信号通路促进星形胶质瘤细胞的增殖。3、在内实验中证实FMRP促进星形胶质瘤增殖。把携带FMRP-sh RNA的慢病毒载体感染进入U251细胞,植入裸鼠皮下,感染lenti-FMRP-sh RNA的慢病毒载体降低移植瘤的体积,在第9天降低37.2%(P<0.05),第12天降低44.2%(P<0.05),第15天降低36.3%(P<0.01)。在第15天携带lenti-FMRP-sh RNA组移植瘤的重量降低61.5%(P<0.01)。对移植瘤进行免疫组化分析,结果表明,感染lenti-FMRP-sh RNA组FMRP和Ki67的表达降低,而提高了GFAP的表达。总的来说下调FMRP-sh RNA可以下调34.7%Ki67的表达(P<0.05),可以下调77.1%FMRP的表达(P<0.05)。所有这些数据说明FMRP在体内促进星形胶质瘤增殖。研究结论结论表明,FMRP通过MEK/ERK信号通路促进星形胶质细胞瘤增殖。1、FMRP和Ki67均随着病理级别的升高而升高,高病理级别的星形胶质细胞瘤FMRP的表达水平高,FMRP与星形胶质细胞瘤的增殖密切相关;2、FMRP的表达水平与星形胶质细胞瘤患者的预后密切相关,FMRP的表达水平越高,患者的预后越差。3、FMRP促进星形胶质瘤细胞增殖,FMRP的高表达上调MEK的表达,从而通过激活MEK/ERK信号通路促进星形胶质细胞瘤增殖;4、FMRP在裸鼠星形胶质细胞移植瘤中的表达与Ki67密切相关,FMRP促进裸鼠体内星形胶质细胞移植瘤的生长。(本文来源于《暨南大学》期刊2015-10-15）
李芳芳,郭永,崔芳芳,丁宁,张嵘[3]（2012）在《脆性X智力低下蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化》一文中研究指出目的:在大肠杆菌中对脆性X智力低下蛋白(FMRP)进行重组表达,获得高产量及高纯度的可溶性重组蛋白。方法:以人脑cDNA文库为模板,PCR扩增FMR1基因后将其克隆至融合表达载体pGEX-6P-1中,重组载体转化进入大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,并用IPTG进行诱导表达。应用谷胱甘肽-琼脂糖凝胶4B进行亲和层析纯化GST-FMRP融合蛋白,并以SDS-PAGE电泳和Westernblot对融合蛋白的表达进行检测。结果:亲和纯化后的融合蛋白经FMRP及GST单抗分别进行Westernblot鉴定为GST-FMRP融合蛋白。结论:大肠杆菌中FMRPISO10的重组表达产量高,纯化得到可溶性重组蛋白,为FMRP抗体的制备及FXS检测试剂盒的开发奠定基础。(本文来源于《中国计划生育学杂志》期刊2012年06期）
张红琴,陈瑶,姚英民,陈红武,杨明[4]（2011）在《腺苷酸环化酶激活剂对脆性X智力低下一号基因重启及蛋白表达的影响》一文中研究指出目的在用硝普钠体外封闭脆性X智力低下一号(FMR1)基因建立脆性X综合症细胞模型的基础上,初步研究腺苷酸环化酶激活剂弗司可林(FSK)对FMR1基因的重启及表达的影响。方法利用硝普钠产生的一氧化氮可以诱导FMR1基因启动子区Cp G岛甲基化的原理,将人类慢性髓源性白血病细胞系(K-562)在加入适宜浓度硝普钠(SNP)的完全培养基中培养,诱导FMR1基因启动子区CpG岛甲基化从而使FMR1基因封闭,并失表达;用普通及Taqman荧光定量PCR、Westblot技术验证腺苷酸环化酶激活剂弗司可林(forskolin,FSK)诱导FMR1基因封闭后的重启及表达。结果浓度1000μmol/L的SNP作用24h后,可使K-562细胞的FMR1基因量降至正常组的0.2%并达到封闭效果,且72h后可抑制脆性X智力低下蛋白(FMRP)的表达,蛋白表达量降至正常组的48%;发现浓度50μmol/L的FSK可以在24h时重新开启封闭的FMR1基因,使其表达量上升到13.3%,最高达13.8%并持续至48h,且72h后体现在FMRP的表达上,其量基本上与正常组相当。结论 FSK可有效地诱导启动子区CpG岛甲基化封闭后的FMR1基因重新启动以及满意的FM-RP表达,FSK对Fra(X)的治疗作用还有待于进一步研究。(本文来源于《中国优生与遗传杂志》期刊2011年11期）
李芳芳,郭永,崔芳芳,丁宁,邹检平[5]（2011）在《脆性X智力低下蛋白(FMRP)ISO 10在大肠杆菌中表达与纯化》一文中研究指出脆性X综合征(fragile X syndrome,FXS)是X连锁先天性智力低下中最常见的疾病之一,在智力低下患者中所占比例仅次于唐氏综合征。FXS是由于脆性X智力低下基因1(fragile X mentalretardation 1 gene,FMRl)所编码的脆性X智力低下蛋白(fragile X mental retardation protein,FMRP)表达缺失所致。基于FMRP的抗体检测可以诊断出包括CGG重复增加以及点突变等各种原因导致FMRP缺失的患者。本实验以表达并纯化得到FMRP蛋白为目的,克隆FMRl cDNA至含有谷胱甘肽巯基转移酶(Glutathione S-transferase,GST)融合标签的表达载体pGEX-6P-l,以大肠杆菌BL21(DE3)pLysS为宿主进行融合表达,SDS-PAGE及Western blot检测蛋白表达。通过GST融合表达标签,以Glutathione sepharose 4B树脂进行亲和层析,从而纯化得到GST-FMRP蛋白。实验中我们成功表达并纯化得到足够的可溶性重组FMRP isoform 10,可以满足后续抗体制备及FXS诊断试剂盒开发。(本文来源于《“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集》期刊2011-07-16）
廖娟,兰风华[6]（2010）在《脆性X智力低下蛋白结构及功能的研究进展》一文中研究指出脆性X综合征(fragile X syndrome,FXS)是一种发病率仅次于唐氏综合征的遗传性智力低下疾病,其发病率在男性为1/4 000,女性为1/8 000。临床主要表现为:程度不等的智力低下、巨睾丸、特殊面容、语言发育障碍以及行为异常(如注意力集(本文来源于《福建医科大学学报》期刊2010年04期）
董玉霞,孙晓红,宋卫科,何悦[7]（2010）在《脆性X智力低下蛋白致病机制研究进展》一文中研究指出脆性X智力低下蛋白(FMRP)是X染色体长臂脆性X智力低下1(fmr1)基因编码的一种多功能mRNA结合蛋白,其结合并调控神经元胞质内多种mRNA的靶向转运与翻译过程,调控突触部位多种功能蛋白的表达。目前研究认为,由fmr1基因动态突变引起的脆性X智力低下蛋白不表达或低表达可影响神经元的发育成熟和突触可塑性,最终导致脆性(本文来源于《中国现代神经疾病杂志》期刊2010年03期）
罗序峰,钟建民,张晓珍,邹音,陈勇[8]（2009）在《发根脆性X智力低下蛋白检测法诊断脆性X综合征》一文中研究指出目的至今已有多种筛查和诊断脆性X综合征(fragile X syndrome,FXS)的方法,以PCR法和Southern印迹方法应用最广,然而每种方法均存在各自的局限性。该研究探讨发根脆性X智力低下蛋白(fragile X mental retardation protein,FMRP)检测在诊断或筛查FXS中的可靠性,以建立一种快速、简便、价廉且可靠的诊断FXS的方法。方法采用发根FMRP免疫组化的检测方法对80例健康儿童、40例不明原因智力低下儿童、已确诊FXS家系成员12例进行检查;用7-deza-dGTPPCR法进行对照,探讨其对诊断FXS的应用价值。结果在80例健康儿童中,发根FMRP的表达率均在80%以上。40例不明原因智力低下患儿中,2例确诊为FXS患儿的发根FMRP表达率分别为10%和0,另38例非FXS患者发根FMRP的表达率均在80%以上。在FXS家系调查中,确诊的2例FXS患者的发根FMRP表达率均为0。结论发根FMRP检测诊断FXS具有快速、简便、价廉、可靠等特点,值得进一步推广应用。(本文来源于《中国当代儿科杂志》期刊2009年10期）
刘剑,邹柯,朱宁,沈岩[9]（2008）在《脆性X智力低下蛋白的克隆表达与纯化》一文中研究指出目的探讨脆性X智力低下蛋白(FMRP)的克隆表达与纯化条件。方法用分子克隆的方法构建重组质粒pET22b(+)-FMR1,并将其转入原核表达菌株E.coliBL21(DE3)中诱导表达;用固化Ni2+吸收色谱纯化重组FMRP,Western-blot鉴定并将纯化得到的蛋白与已知的RNA片段进行结合反应。结果成功构建了重组表达质粒pET22b(+)-FMR1,在E.coliBL21(DE)中表达出相对分子质量约79 000的蛋白;该蛋白为FMRP,且可与特定RNA相互作用。结论在原核系统中表达得到了纯度和活性都较为理想的FMRP蛋白,为相关功能性研究奠定了基础。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2008年07期）
王丹,姚爱玉,张永清[10]（2007）在《脆性X智力低下蛋白调控果蝇细胞骨架蛋白的稳定性》一文中研究指出脆性 X 综合征(Fragile X Syndrome)的主要原因是由于基因突变而导致脆性 X 智力低下蛋白(Fragile X mental retardation protein,FMRP)在体内缺乏。FMRP 是一个含有多结构域的 RNA 结合蛋白,可能参与 mRNA 的转运和翻译调控,从而保证正常的智力发育。果蝇是一有效的研究脆性 X 综合征的动物模型。为揭示 FMRP 的体内功能,利用果蝇的遗传学优势进行了大规模的遗传学筛选包括化学诱变筛选、共过表达筛选和缺失突变体筛选。其基本原理是 dFMRP 蛋白在果蝇眼睛特异性的过高表达可导致粗糙眼表型,如果与 dFMRP 共过表达某一基因或在某一基因突变的情况下过(本文来源于《遗传学进步与人口健康高峰论坛论文集》期刊2007-11-01）
脆性智力低下蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
研究背景胶质瘤是非常常见的颅内肿瘤,占颅内恶性肿瘤的80%,根据临床病理标准,胶质瘤分为四个级别(I-IV)。高病理级别的胶质瘤增殖能力强,与患者不良预后相关。充分认识胶质瘤增殖的分子机制,对于实施新的治疗策略,以改善患者的预后非常重要。胶质瘤的增殖与某些功能性蛋白的表达相关,如:诱骗受体3(Dc R3),肿瘤坏死因子受体超家族成员的表达,和富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5(Lgr5)。已经有报道,胶质瘤所表达的功能性蛋白持续激活有丝分裂原激活的蛋白激酶/ERK激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)促进胶质瘤细胞的增殖和迁移。研究鉴定影响胶质瘤增殖的蛋白是非常有意义的,因为这些蛋白可以作为胶质瘤治疗的新靶点,提高治疗效果。脆性X综合症(FXS)是一种X染色体连锁的单基因病,主要发病原因是FMR1基因缺失或突变导致脆性X智力低下蛋白(FMRP)表达缺失。FMRP是RNA结合蛋白,在神经细胞突触联系中起关键的作用。突触在细胞与细胞间通讯连接中起关键的作用,随着时间的推移,突触可以对刺激的反应产生变化或耐受,这就是突触的可塑性,这种突触的特性对于人的记忆和学习是非常重要的。FMRP通过结合m RNA分子把这些m RNA分子从细胞核带到细胞的其它部位,在这些部位蛋白质被合成,FMRP可以调节蛋白的合成,而有些受FMRP调节的蛋白对于维持神经元的正常功能起重要作用。FMRP与m RNA相结合调节蛋白翻译和运输,而且有助于靶向的m RNA稳定。研究FMRP调控哪些m RNAs是非常重要的,人们用了多种方法研究FMRP所结合的m RNAs,在脑组织中有1000种以上的m RNAs与FMRP结合,在非神经元细胞中有6000种以上的m RNAs是FMRP的靶点。与FMRP结合的许多m RNAs所编码的蛋白与突触的活性、细胞粘附、细胞骨架结构重塑相关。FMRP的缺失导致所结合的m RNAs调节障碍,功能性蛋白表达失控,患者出现FXS的临床表现,表现为多种神经系统的症状,包括智力障碍、躁狂、强迫、焦虑和抑郁。有研究报道,在FXS患者中,FMRP表达缺失导致MEK/ERK/PI3K/m TOR/GSK-3β的信号受到抑制。近年研究FMRP在脑组织中的功能提示FMRP的表达与肿瘤相关。例如,FMRP在乳腺癌和肝癌中表达升高与肿瘤侵袭和转移相关。非常有趣的是,在患有FXS的患者中,颅内肿瘤进展的风险很小。有一个患有FXS的患儿同时患中脑不可手术的胶质母细胞瘤,在确诊后存活8年还没有神经系统症状。但FMRP在FXS中缺失与胶质瘤进展缓慢相关还未见报道。在本课题中,我们重点阐明FMRP与神经胶质瘤增殖的关系,阐明FMRP在神经胶质瘤中发挥作用的分子机制。材料与方法1、脑星形胶质细胞瘤组织标本我们回顾性分析了广州医科大学附属第二医院2004年1月到2014年10月的医学影像资料,收集被诊断为星形胶质瘤的组织标本。入组74例脑星形胶质瘤石蜡包埋的组织标本,在74例标本中,有42例是WHO病理分级2级,32例是WHO病理级别III级或IV级。WHO病理级别III级或IV级标本被界定为高级别胶质瘤,II级被界定为低级别胶质瘤。在胶质瘤石蜡标本中,胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、KI67和FMRP的表达水平,由两位病理学家鉴定。24例脑星形胶质细胞瘤新鲜标本和6例脑外伤患者脑组织新鲜标本来自广医二院2013年3月到2014年3月手术患者。2、FMRP在不同病理级别胶质瘤中的表达差异及预后分析用western blot的方法检测不同病理级别星形胶质瘤组织和脑外伤患者的脑组织标本中FMRP的表达。通过H&E或免疫组化的方法检测不同病理级别胶质瘤组织中GFAP、Ki67、FMRP的表达。用Image-Pro Plus 6.0软件,分析FMRP的阳性染色,计算阳性染色的积分光密度。计算Ki67和FMRP阳性染色细胞的百分率。同时分析在星形胶质细胞瘤中FMRP的表达与Ki67间的关系。用Kaplan-Meier生存曲线分析星形胶质细胞瘤患者总生存期与FMRP或Ki67表达的关系。3、FMRP在两个星形胶质瘤细胞系中的表达及与胶质瘤细胞增殖的关系用western blot的方法检测胶质瘤细胞系U251/U87 BT325/SHG44细胞系中的表达。检测U251/U87 BT325/SHG44细胞增殖的比率。4、FMRP促进星形胶质瘤细胞增殖用脂质体包裹靶向FMR1基因的si RNA,转染星形胶质瘤细胞系U251、U87,以沉默细胞中FMRP的表达。用MTT和Ed U摄入实验检测U251和U87细胞增殖的情况,说明FMRP促进胶质瘤细胞增殖。5、FMRP在星形胶质瘤细胞中诱导MEK/ERK信号通路的激活在FMRP-si RNAs转染入U251或U87的条件下,用western blot的方法检测FMRP、PTEN、PDK1、AKT、m TOR、GSK-3β、MEK和ERK,用免疫荧光的方法检测FMRP和MEK,说明FMRP在星形胶质瘤细胞系中诱导MEK/ERK信号通路的激活。6、体内实验证明FMRP促进星形胶质细胞瘤增殖转染携带GFP-sh RNA或FMRP-sh RNA的慢病毒载体感染进入U251星形胶质瘤细胞后,用western blot方法检测FMRP的表达。将上述处理的U251细胞植入裸鼠的皮下,在不同时间点检测移植瘤的体积。对移植瘤的石蜡切片进行H&E和免疫组化染色,检测GFAP、Ki67或FMRP。7、统计分析所用统计分析用SPSS19.0完成。实验结果1、FMRP在星形胶质细胞瘤中的表达与肿瘤增殖相关,与患者的预后相关。用western blot的方法检测FMRP在24例新鲜胶质瘤标本中的表达,以6例外伤性脑组织为对照,结果表明,与对照组相比,在IV级星形胶质细胞瘤中FMRP的蛋白水平升高5.1倍,III级肿瘤升高3.2倍。74例胶质瘤患者组织标本免疫组化检测表明,随着病理级别的升高,GFAP的表达逐渐降低,FMRP和Ki67的表达逐渐升高,分析FMRP+细胞和Ki67+细胞的百分率表明,在病理III级和IV级病例中明显升高(P<0.05或P<0.01)。在Ki67+率≤5%时FMRP+细胞的百分率明显高于Ki67+细胞>5%时FMRP+细胞百分率为(P<0.01)。Kaplan-Meier生存曲线分析表明,Ki67+细胞比率低或FMRP+细胞的IOD值低的患者预后明显改善(P<0.001或P<0.01)。这些结果表明FMRP高表达与星形胶质细胞瘤增殖快相关,与患者的不良预后相关。2、FMRP通过MEK/ERK信号通路促进星形胶质瘤细胞增殖。在星形胶质瘤细胞系中探讨FMRP的表达与肿瘤增殖的关系,结果表明FMRP高表达的细胞系的增殖能力强(P<0.01)。用两个不同的FMRP-si RNAs分别转染胶质瘤细胞,用MTT检测胶质瘤细胞增殖,结果表明,FMRP的高表达与星形胶质瘤细胞的增殖相关,FMRP表达受到抑制后,与未转染组比,U251的增殖被抑制33.3%和43.0%,U87增殖被抑制37.1%和44.1%(P<0.05和P<0.01)。在Ed U摄入实验中也得到了相似的结果。这些结果说明FMRP在星形胶质细胞瘤增殖中起关键的作用。进一步研究FMRP表达下调的情况下,信号通路的激活状态。把两个FNRP-si RNAs分别转染入U251或U87细胞,不能改变PTEN/PDK1/AKT/GSK-3β/AKT3的磷酸化激活状态。但两条si RNAs均抑制MEK/ERK的磷酸化激活,对照组转染GFP-si RNA或单纯转染试剂组没有这样的作用。免疫荧光实验证明在UTR51/U87细胞中,FMRP-si RNAs降低MEK的表达。这些数据表明,FMRP通过MEK/ERK信号通路促进星形胶质瘤细胞的增殖。3、在内实验中证实FMRP促进星形胶质瘤增殖。把携带FMRP-sh RNA的慢病毒载体感染进入U251细胞,植入裸鼠皮下,感染lenti-FMRP-sh RNA的慢病毒载体降低移植瘤的体积,在第9天降低37.2%(P<0.05),第12天降低44.2%(P<0.05),第15天降低36.3%(P<0.01)。在第15天携带lenti-FMRP-sh RNA组移植瘤的重量降低61.5%(P<0.01)。对移植瘤进行免疫组化分析,结果表明,感染lenti-FMRP-sh RNA组FMRP和Ki67的表达降低,而提高了GFAP的表达。总的来说下调FMRP-sh RNA可以下调34.7%Ki67的表达(P<0.05),可以下调77.1%FMRP的表达(P<0.05)。所有这些数据说明FMRP在体内促进星形胶质瘤增殖。研究结论结论表明,FMRP通过MEK/ERK信号通路促进星形胶质细胞瘤增殖。1、FMRP和Ki67均随着病理级别的升高而升高,高病理级别的星形胶质细胞瘤FMRP的表达水平高,FMRP与星形胶质细胞瘤的增殖密切相关;2、FMRP的表达水平与星形胶质细胞瘤患者的预后密切相关,FMRP的表达水平越高,患者的预后越差。3、FMRP促进星形胶质瘤细胞增殖,FMRP的高表达上调MEK的表达,从而通过激活MEK/ERK信号通路促进星形胶质细胞瘤增殖;4、FMRP在裸鼠星形胶质细胞移植瘤中的表达与Ki67密切相关,FMRP促进裸鼠体内星形胶质细胞移植瘤的生长。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
脆性智力低下蛋白论文参考文献
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