佘有彬[]佘权[]
1南京市六合区疾病预防控制中心（江苏六合211500）
2扬州大学医学院临床医学1406班（江苏扬州225100）
【摘要】目的：分析探究胶体金法快速筛查疟原虫抗体的应用价值。方法：选取2011年1月-2016年12月近六年在我区中心镜检站就诊有发热症状疑似疟原虫感染和病例复核的100例患者作为本次实验的研究对象，所有患者均进行血涂片及胶体金法筛查疟原虫抗体，观察该100例患者经胶体金法筛查疟原虫抗体的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。结果：研究发现，胶体金法筛查出疟原虫阳性患者有12例，阴性患者3例。血涂片法筛查检出疟原虫阳性患者5例（均为出国务工人员输入性感染），阴性92例；胶体金检测法的灵敏度为80.00%，特异度为94.12%。阳性预测值为70.59%，阴性预测值为96.39%。结论：胶体金法在快速筛查疟原虫抗体中具有重要价值，能提高疟原虫的检出率，提倡在临床上进行推广。
【关键词】胶体金法；快速筛查；疟原虫抗体；应用价值
AnalysisoftheapplicationvalueofcolloidalgoldmethodforrapidscreeningofPlasmodiumantibody
Abstract:Objective:toanalyzetheapplicationvalueofcolloidalgoldmethodforrapidscreeningofPlasmodiumantibody.Methods:FromJanuary2011-2016yearinDecemberfornearlysixyearsinthecenterareamirrorinspectionstationclinicsymptomsoffeversuspectedPlasmodiuminfectionandcasereview,100patientsastheresearchobjectofthisexperiment,allthepatientsweregivenbloodsmearandcolloidalgoldantibodyscreeningofPlasmodium,theobservationof100casesofpatientswithsensitivity,colloidalgoldmethodscreeningmalariaantibodyspecificity,positivepredictivevalue,negativepredictivevalue.Results:itwasfoundthat12casesofPlasmodiumpositivepatientswerescreenedbycolloidalgoldmethodand3caseswerenegative.Bloodsmearmethodwasusedtoscreen5casesofmalariapositivepatients(allmigrantworkerswereimported)and92caseswerenegative.Thesensitivityandspecificityofcolloidalgolddetectionmethodwere80%and94.12%respectively.Thepositivepredictivevaluewas70.59%andthenegativepredictivevaluewas96.39%.Conclusion:colloidalgoldmethodisofgreatvalueinrapidscreeningofPlasmodiumantibody.ItcanimprovethedetectionrateofPlasmodium,andpromotetheclinicalapplication.
[Keywords]colloidalgoldmethod;rapidscreening;Plasmodiumantibody;applicationvalue
疟疾是严重威胁人类健康和生命安全公认的疾病，死亡率高，危害大[1]。其主要发生在经济和卫生条件差的贫困地区，疟疾的诊断以往常用的方法是血涂片，通过吉姆萨染色法在镜下观察是否有疟原虫，但该方法有一定的局限性，首先血涂片检测方法对于实验设备、实验试剂和操作人员的专业性要求较高，同时该检测方法较繁琐，对于一些地区来说，做到大范围的筛查较为困难[2-3]。近年来，胶体金免疫层析技术发展较为迅速，其为快速诊断疟疾试剂盒的研制提供了一定的理论基础，同时其费用相对于血涂片方法来说相对较低，并且其操作简单、灵敏度及特异度都较高[4]。虽然胶体金技术发展较为迅速，但其在疟原虫筛查的价值方面的研究较少。本实验分析探究胶体金法快速筛查疟原虫抗体的应用价值，特选取了2011年1月-2016年12月近六年在我区中心镜检站就诊有发热症状疑似疟原虫感染和病例复核的100例患者作为本次实验的研究对象，现报告如下：
1资料与方法
1.1一般资料
选取2011年1月-2016年12月近六年在我区中心镜检站就诊有发热症状疑似疟原虫感染和病例复核的100例患者作为本次实验的研究对象，其中男性患者54例，女性患者46例，年龄在28-65岁之间，平均年龄在（45.45±3.21）岁，所有患者在年龄、病因、性别等方面比较均无差异，不具有统计学意义（P>0.05）。
1.2方法
100例均接受血涂片及胶体金法进行筛查，具体方法如下：
血涂片法：首先抽取患者2ml静脉血放入抗凝管中，经全自动血液分析仪进行检测，20分钟-2小时后取出试管。主要检测患者的白细胞数、中性粒细胞百分比、红细胞数、血红蛋白含量及血小板计数。然后取1-2滴患者指尖末梢血,滴在盖玻片上制作厚薄血涂片，晾干后，用分析纯的甲醇固定薄血膜。放置2-3分钟后待涂片晾干后，经吉姆萨染色液（由苏省寄生虫防治研究所提供）染色15至20分钟后，放到油镜下（生产厂家：日本OLYMPUS公司，型号：CX21型生物显微镜），观察是否有疟原虫。血涂片对于推片的质量要求较高，推片的边缘要整齐、表面要保持平滑，在推片前要在弱酸性溶液中浸泡，时间要求超过24h，浸泡后要用蒸馏水对玻片的表面进行彻底清洗去除表面的游离碱质，然后进行干燥；载玻片一般选用厚度为1-2mm，面积25.4mm×76.2mm；制备薄血片时，醮取的血液量1-1.5ul，将其放在载玻片的右端大约1/3处，接触载玻片直到血液扩散均匀充满整个载玻片。推片的角度一般以30°~40°为宜。制片的要求：薄厚度要适宜，均匀，整齐，保证血液细胞均匀的分布在载波片上，占载玻片总面积的2/3；染色时，要保证滴入第2滴液体时在低倍镜下可见核浆，此时的染色效果最好；制备厚血片时，取血量4-5ul，按顺时针方向由里向外旋转2～4圈，直径大小以0.8～1.2cm为宜，厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到5～10个WBC为宜。
疟原虫胶体金检测卡法（生产厂家为广州万孚生物技术有限公司）：首先抽取患者2ml患者末梢血，再用毛细管吸取5-10ul血液，放入已准备好的胶体金检测卡A孔区域内，并在其B孔区域滴加4滴裂解液，15分钟内观察显示结果。胶体金试剂盒中硝酸纤维素膜上画线抗体从上至下的顺序依次为恶性疟原虫乳酸脱氢酶（pfLDH）单克隆抗体（T1区）、疟原虫乳酸脱氢酶（panLDH）单克隆抗体（T2区）、抗鼠免疫球蛋白（IgG）多克隆抗体（C区）；判定结果如下：其中+表示出现一条红线，—未出现红线；结果显示见表1。
1.3观察指标[5-6]（1）灵敏度（真阳性率）：实际患病人数占按该筛检实验的标准诊断为患病的百分比，是反映所用筛查方法在判定患病能力的指标；（2）特异度（真阴性率），实际未患病人数占按该诊断标准判定为未此患病的百分比，是反映所用筛查方法判定非患病能力的指标；（3）阳性预测值是真正患病例数占筛查出的全部阳性例数的百分比。阴性预测值是真正未患病人数占所用筛检方法检出全部阴性患者人数的百分比。
1.4统计学处理
采用Spss15.0软件处理，（%，n）表示计数资料结果，χ2检验；（x±s）表示计量资料结果，t检验；P<0.05为差异具有统计学意义。
2结果
2.1血涂片及胶体金法在疟原虫筛查的结果（见表2）。
研究发现，胶体金法筛查出疟原虫阳性患者有12例，阴性患者3例。血涂片法筛查检出疟原虫阳性患者5例(均为出国务工人员输入性感染)，阴性92例；胶体金检测法的灵敏度为80.00%，特异度为94.12%。阳性预测值为70.59%，阴性预测值为96.39%。
3讨论
疟疾是上世纪60年代常见的传染病，传染性强，死亡率高，主要是由疟原虫感染，经蚊子等媒介传染的疾病[7]。该病主要发生在经济不发达，医疗卫生条件较差的地区，目前我区已达到消除疟疾标准，现在主要是输入性病例（出国回国人员）不断增加，所以要加强监测。因此选择一种既经济又相对来说准确率较高的方法至关主要[8]。胶体金免疫层析技术是目前常用的检测寄生虫的方法，它是一种将胶体金标记技术、免疫检测技术和层析分析技术结合在一起的固相免疫标记检测技术[9]。主要是通过毛细作用使样品溶液在层析条上泳动，样品中的成分与层析材料上针对待测物的受体发生抗原抗体的免疫反应。传统疟疾胶体金诊断试剂盒检测的靶点主要是富组氨酸蛋白-Ⅱ，当血液中含有成熟配子时，才是阳性表现，对于健康人群往往不能检出，仅仅适用于疟原虫的无性生殖期。在实际应用中受限。而我们的胶体金法主要的靶点是L-乳酸脱氢酶，L-乳酸脱氢酶由疟原虫的活虫产生，交叉反应发生的较少，近年来在临床筛查中应用的较为广泛，具有一定的价值[10-11]。
本研究结果显示：胶体金法筛查出疟原虫阳性患者有12例，阴性患者3例。血涂片法筛查检出疟原虫阳性患者5例（均为出国务工人员输入性感染），阴性92例；胶体金检测法的灵敏度为80.00%，特异度为94.12%。阳性预测值为70.59%，阴性预测值为96.39%。说明胶体金法在疟原虫抗体筛查中的灵敏度及特异性较高。
笔者认为，胶体金免疫层析技术在快速筛查疟原虫抗体中具有较佳的效果，该技术方法具有操作简单、试验结果快速、阳性率高、误差小、成本低等优点。
存在的问题：在实验过程中我们发现，当间日疟原虫虫体较少时，患者应用胶体金法检测时可出现假阴性结果，为提高间日疟原虫的检出率，当我们进行实验胶体金法提示阴性时应该立即进行血涂片检测。恶性疟患者往往相反，其对胶体金法检测的敏感性较高，可以应用检测。胶体金法未能发现阳性疟原虫主要与以下因素有关：（1）所检测样本的虫体密度较低[12-13]；（2）样品保存的时间较长，虫体中的LDH抗原成分遭到破坏；（3）患者来我区中心镜检站检查前就已经接受过药物治疗，原虫大部分被杀灭；（4）患者有可能同时存在其他疟原虫和恶性疟的感染[14-15]。
综上所述，胶体金法在快速筛查疟原虫抗体中的灵敏度及特异性较高，费用也相对较低，适合于一些基础医疗机构及大规模的筛查，提倡其在临床上进行推广使用。
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作者简介：佘有彬（196811），男，汉，江苏六合人，本科（学士），副主任技师，主要从事微生物及寄生虫检验工作，
通讯作者：佘权（199607），男，汉，江苏六合人，本科在读，临床医学专业学生，