导读:本文包含了壳聚糖支架论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:脂肪干细胞,丝素,壳聚糖叁维支架,外泌体,成骨分化
壳聚糖支架论文文献综述
魏松乔,郭澍,佟爽,朱梦茹,张华[1]（2019）在《脂肪干细胞-丝素/壳聚糖支架复合物在外泌体诱导下的体外成骨效应》一文中研究指出目的探究成骨分化脂肪干细胞(ADSCs)来源的外泌体对ADSCs-丝素/壳聚糖叁维支架复合物(ADSCs-SF/CS)的成骨效应。方法体外提取、培养和鉴定ADSCs,采用冷冻干燥法制备叁维支架。将ADSCs诱导为成骨细胞,超速离心提取外泌体。将ADSCs接种于支架上,扫描电镜观察。将细胞支架复合体分为普通培养液组(阴性对照组)、成骨诱导液组(阳性对照组)、普通培养液加外泌体组(实验组a)、成骨诱导液加外泌体组(实验组b),连续培养14 d后,采用Western blotting检测成骨相关蛋白Runx2的表达量以证实ADSCs成骨分化,并通过CCK-8法及碱性磷酸酶(ALP)活性检测探究外泌体对ADSCs-SF/CS复合物中ADSCs体外增殖及成骨分化效应的作用。结果 CCK-8结果显示,实验组a与阴性对照组相比,加入外泌体有利于ADSCs的增殖,Runx2及ALP活性结果显示,实验组b与阳性对照组相比,加入外泌体可使ADSCs-SF/CS复合物中的ADSCs成骨效应显着增强。结论成骨诱导后,ADSCs来源的外泌体可诱导附着于SF/CS上的ADSCs向成骨细胞分化,并且对ADSCs的成骨具有促进效应。(本文来源于《中国医科大学学报》期刊2019年10期）
李宝印,班硕丰,戴桓琰,段聪聪,徐鸿玮[2]（2019）在《硅酸钙的掺入对胶原-壳聚糖支架的影响》一文中研究指出目的:探索不同质量分数的硅酸钙对胶原-壳聚糖支架性能的影响。方法:通过冷冻干燥法制成硅酸钙含量分别为0%、1%、2%、5%和8%(w/v)的支架,采用扫描电镜、能量色散谱分析,以及万能试验机检测其理化性能的变化。通过模拟体外矿化和细胞培养,检测其生物学性能的变化。结果:与对照组(0%w/v硅酸钙)比较,随着硅酸钙含量的增加,支架的压缩弹性模量逐渐增加(P<0.05),降解速率也逐渐增加(P<0.05),而孔隙率逐渐减小(P<0.05);实验组均能促进成骨细胞的增殖以及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的表达(P<0.05)。此外,实验组均有不同程度的羟基磷灰石晶体沉积,而对照组几乎无羟基磷灰石晶体沉积。结论:适量的硅酸钙能增强胶原-壳聚糖支架的理化性能,促进成骨及体外矿化,有作为骨组织工程支架的潜力。(本文来源于《口腔医学研究》期刊2019年07期）
刘嘉昱[3]（2019）在《铈掺杂β-磷酸叁钙磁性壳聚糖支架的制备及其在骨修复中的应用》一文中研究指出骨作为人体最大的具有生命的坚硬的组织器官,承担着非常重要的生命活动的职责,但由于人口老龄化、各类骨科疾病以及骨创伤等原因,极易引起缺损。因此,寻找更多更好的骨组织替代物一直是生物医用材料领域研究的重点和热点。生物陶瓷中的b-磷酸叁钙(b-TCP)因其与自然骨成分的相似,使其天然的具有成骨性能和良好的生物相容性。壳聚糖(CS)作为天然多糖,与磷酸叁钙一样被广泛的应用在骨修复材料中。稀土离子Ce~(3+)半径与钙离子半径相似,而电荷相较钙离子更大,对细胞内的钙离子位点更具亲和力,因此可能影响骨细胞的功能和干预骨重建过程。本研究采用叁步煅烧法制备b-TCP粉末材料以及掺杂稀土元素铈的磷酸叁钙(Ce/b-TCP)粉末;采用水热法制备出四氧化叁铁(Fe_3O_4)粉末。进而采用混合法和冷冻干燥法相结合的方式,分别将b-TCP与CS复合、Ce/b-TCP与CS复合,Ce/b-TCP与Fe_3O_4、CS复合,制备出磷酸叁钙/壳聚糖多孔支架(b-TCP/CS)、铈掺杂磷酸叁钙/壳聚糖多孔支架(Ce/b-TCP/CS)以及铈掺杂磷酸叁钙/壳聚糖磁性多孔支架(Ce/Fe/b-TCP/CS)。利用XRD、SEM、TEM、FTIR等检测手段对制备出的材料进行形貌、官能团、化学组成、物象结构等分析测定。采用叁步煅烧法所制得的b-TCP粉末以不规则的小颗粒的形式团聚在一起,颗粒粒径大小约为2~4mm。在同样利用叁步煅烧法掺杂稀土元素Ce后制备出的粉末仍以不规则的小颗粒的方式存在,粒径大小并未发生明显改变,因其晶胞参数的变化对其小颗粒的形貌产生了一定程度上的变化。采用混合法和冷冻干燥法制备出的b-TCP/CS多孔支架、Ce/b-TCP/CS多孔支架以及Ce/Fe/b-TCP/CS多孔支架均具有立体交互的叁维多孔结构,叁维多孔结构除了使材料具备一定类似天然骨的机械强度、生物活性和化学结构外,其孔道结构通过新陈代谢进行营养物质的运输、废物的代谢等,磷酸叁钙粉末和稀土粉末颗粒被壳聚糖颗粒所形成的薄膜包裹或是附着在壳聚糖上形成薄膜表面。以人脂肪间充质干细胞(hADSCs)和人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)为模型,利用碱性磷酸酶染色、茜素红染色、CCK-8试剂盒、免疫蛋白印记、荧光叁标以及Micro-CT等方法对制备出的材料进行体内和体外的生物学实验,以验证其生物相容性以及骨诱导性。hADSCs与hBMSCs细胞培养实验证明,制备出的b-TCP/CS多孔支架、Ce/b-TCP/CS多孔支架以及Ce/Fe/b-TCP/CS多孔支架均具有良好的生物相容性以及骨诱导性,细胞均能在材料上得以铺展、黏附和生长,无明显的毒副反应。而当稀土元素Ce~(2+)的浓度控制在一定范围(0~10mm)内时,对细胞的增殖分化有促进作用,而当稀土元素Ce~(2+)浓度高达100mm后则会对细胞的生长表现出抑制作用。通过细胞活性和Micro-CT等也发现了选用混合法将Fe_3O_4掺杂进入支架材料中,对于细胞的生长黏附、对于小鼠颅骨缺损的修复具有一定的促进作用。综上所述,铈掺杂磷酸叁钙/壳聚糖叁维多孔复合支架材料对于骨缺损修复具有重要的意义和广阔的应用前景。(本文来源于《上海师范大学》期刊2019-05-01）
魏松乔[4]（2019）在《脂肪干细胞-丝素/壳聚糖支架复合物在外泌体诱导下体外成骨效应的研究》一文中研究指出研究背景:骨作为一种器官具有显着的再生特性,然而,骨的再生是细胞、血管基质和生长因子共同作用的复杂结果。骨组织工程包括合适的种子细胞、可降解的支架材料以及生长因子叁个要素。其最新研究表明,由外泌体(exosomes,EXOs)、脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)及丝素-壳聚糖叁维支架(Silk fibroin-chitosan 3D scaffold,SF-CS)构成的复合物有望为解决临床骨缺损的修复提供新的思路。目的:验证丝素-壳聚糖叁维多孔支架与脂肪干细胞体外构建细胞-支架复合物的可行性,探究成骨分化脂肪干细胞来源的外泌体对脂肪干细胞-丝素/壳聚糖叁维支架(ADSCs-SF/CS)复合物成骨效应的影响。方法:1、提取人脂肪干细胞,进行体外分离培养及鉴定。2、制备丝素-壳聚糖叁维多孔支架。3、对脂肪干细胞进行成骨诱导培养,超速离心法提取细胞上清液中的外泌体。4、制备ADSCs-SF/CS复合物,扫描电镜下观察细胞-支架复合物的外观和内部结构。5、将ADSCs-SF/CS复合物分为普通培养液组、成骨诱导液组、普通培养液加外泌体组、成骨诱导液加外泌体组,连续培养14天后,运用Western Blot方法检测成骨相关蛋白Runx2的表达量以证实脂肪干细胞成骨分化,并通过CCK-8法及ALP活性检测探究外泌体对ADSCs-SF/CS复合物成骨效应的影响。结果:所提取干细胞经完全培养基培养长势良好,经成骨、成脂及成软骨诱导并染色鉴定,证实所培养细胞为脂肪干细胞。冷冻干燥法制作完成的丝素-壳聚糖支架外表为乳白色,大体观呈海绵状,质软且有弹性。扫描电镜观察结果显示人脂肪干细胞可以在丝素-壳聚糖支架上粘附生长。超速离心法提取的细胞上清液中的小囊泡经过透射电镜观察及western鉴定CD9和CD63蛋白,证实为诱导后成骨分化的脂肪干细胞来源的外泌体,将外泌体与ADSCs-SF/CS复合物共培养,通过检测成骨相关蛋白Runx2及测定CCK-8和ALP活性,与对照组相比加入外泌体可使ADSCs-SF/CS复合物成骨效应显着增强结论:丝素-壳聚糖复合支架的多孔叁维立体结构为细胞的粘附增殖提供了良好的微环境,其与人脂肪干细胞体外构建细胞-支架复合物方法可行,可以作为骨组织工程骨的人工骨支架应用于临床;成骨分化的脂肪干细胞来源的外泌体可诱导附着于丝素-壳聚糖支架上的脂肪干细胞向成骨细胞分化,并且对脂肪干细胞的成骨具有促进效应。(本文来源于《中国医科大学》期刊2019-02-01）
向柄彦,李鹏,柏帆,周思睿[5]（2019）在《载万古霉素缓释微球纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架联合自体红骨髓可修复慢性骨髓炎兔的骨缺损》一文中研究指出背景:前期研究证实,万古霉素缓释微球对兔慢性骨髓炎具有良好的治疗效果,纳米羟基磷灰石/壳聚糖具有良好的生物相容性、降解性及成骨诱导性,自体红骨髓联合纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架可用于修复兔桡骨骨缺损。因此,3者联合修复兔慢性骨髓炎骨缺损的效果有待验证。目的:探讨载万古霉素/聚乳酸-羟基乙酸共聚物(polyactic-co-glycolicacid,PLGA)缓释微球的纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架,联合自体红骨髓修复兔慢性骨髓炎骨缺损的治疗效果及可行性。方法:采用水-油-水乳相法制备万古霉素/PLGA缓释微球,将缓释微球与纳米羟基磷灰石/壳聚糖混合液充分混匀,采用真空冷冻干造法制备载万古霉素/PLGA缓释微球的纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架,对支架进行力学性能测试及万古霉素释放量检测。在20只5月龄新西兰大白兔(解放军第叁军医大学大坪医院实验动物中心提供)左侧胫骨髓腔内注射金黄色葡萄球菌,构建慢性骨髓炎骨缺损模型,随机分4组干预,A组仅作清创处理,B组清创后植入纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架,C组清创后植入载万古霉素/PLGA缓释微球纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架,D组清创后植入载万古霉素/PLGA缓释微球纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架及自体红骨髓。治疗3个月后,通过X射线、病理苏木精-伊红染色评价骨缺损修复效果。结果与结论:(1)载万古霉素/PLGA缓释微球的纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架,具有良好的生物力学性能及缓慢平稳释放万古霉素的能力;(2)治疗3个月后的X射线显示,A、B组胫骨近端仍见明显的缺损区、骨质破坏及骨膜反应;C组可见新生骨形成,缺损区稍模糊,但仍有缺损存在;D组可见新骨形成,缺损区模糊,密度稍增高,骨膜反应消失;(3)治疗3个月后的病理苏木精-伊红染色显示,A、B组骨小梁紊乱、破坏较多;C、D组骨小梁排列较为整齐,破坏较少,且D组骨小梁粗大,排列有序;(4)结果表明,载万古霉素/PLGA缓释微球的纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架联合自体红骨髓修复兔慢性骨髓炎骨缺损效果良好。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2019年06期）
钟红荣,张岩,包红,方艳,吴婷芳[6]（2018）在《丝素/明胶/壳聚糖支架材料的构建及表征》一文中研究指出基于丝素、明胶和壳聚糖叁者作为生物材料的优良性能,采用二次冷冻干燥方法制备了一种疏松多孔的新型组织工程材料。首先检测了复合支架材料的理化性能,其次研究了该材料的形貌结构,最后利用细胞学和动物学实验对该材料的细胞毒性和生物相容性进行了评价。结果显示,复合支架材料孔隙率高于(53.52±1.16)%,吸水率高于(89.36±0.43)%。在预冻温度为-20℃,以戊二醛作交联剂,丝素/明胶/壳聚糖复合比例为1∶1∶1.5时,制备的材料力学性能达到最优,断裂伸长率为(11.5±1.05)%。扫描电镜图显示该材料具有连通的叁维多孔结构。红外光谱及X射线衍射表明材料各组分化学基团间发生了相互作用,并伴有结晶状态的改变。小鼠体内植入实验表明,该支架无毒、生物相容性好,是一种综合性能优异的组织工程材料。(本文来源于《材料导报》期刊2018年22期）
罗鸣骜,伍尚敏,苏晓叁,高嘉,于璐[7]（2018）在《壳聚糖支架负载SHH和CM-Dil标记的脂肪干细胞移植后存活分化研究》一文中研究指出目的:观察壳聚糖支架负载音猬因子(Sonic hedgehog,SHH)和脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)移植后,ADSCs存活分化的效果。方法:将健康C57BL/6小鼠随机分为A组(PBS+ADSCs)、B组(SHH+ADSCs)、C组(壳聚糖+ADSCs)、D组(壳聚糖+SHH+ADSCs)。将各组混合物分别注射到小鼠背部皮下。术后1、2、4、8周处死小鼠,通过对移植组织一般观察、荧光显微镜观察、HE染色、免疫组化染色来评价移植细胞存活分化的情况。结果:术后8周,壳聚糖支架完全降解,大体观察、HE染色、免疫组化染色均说明壳聚糖支架同时搭载SHH和ADSCs脂肪干细胞存活率较高,新生血管增加,效果均优于A、B、C叁组。结论:壳聚糖支架同时负载SHH和ADSCs可有效促进干细胞存活,显着增加血管组织数量。(本文来源于《中国美容医学》期刊2018年10期）
王安[8]（2018）在《含钽壳聚糖支架在骨质疏松性骨缺损修复中的应用研究》一文中研究指出一、研究背景骨质疏松症(Osteoporosis,OS)是一种以骨代谢异常为特征的系统性骨病,代谢异常导致骨的再生能力下降,进而产生延迟愈合、骨不连,甚至引起骨缺损。在骨质疏松症的诊疗方面,全球范围内投入的医疗费用及社会资源非常可观,而且伴随着世界人口老龄化的步伐,这种投入还在继续攀升。骨质疏松症合并骨缺损更是困扰临床工作的难题之一。虽然国内外的专家学者们已经开发出多种类型的组织工程支架,但是目前尚未找到一种理想的支架。理想的组织工程支架应该达到以下要求:支架应具有促进细胞粘附和增殖的能力;支架的降解产物不产生炎症或毒性;支架应能提供合适的机械支撑,以避免细胞被破坏性的压缩和拉伸;支架应能促进细胞成骨分化,以增强骨的再生能力。目前研究较为广泛的组织工程材料包括:天然生物材料:胶原蛋白、纤维蛋白、壳聚糖、海藻酸钠、透明质酸等;人工合成高分子材料:聚乙烯、聚丙烯、聚乳酸、聚羟基乙酸;陶瓷材料:羟基磷灰石、磷酸叁钙、生物玻璃;金属材料:不锈钢、钛、钽等。壳聚糖是一种碱性氨基多糖,由甲壳素脱乙酰化制备而成,其结构和性质类似氨基多糖,而氨基多糖正是细胞外基质中的主要成分。壳聚糖的生物相容性良好,而且降解产物无毒性作用,但是作为组织工程支架材料,壳聚糖的缺点在于其力学性能和成骨能力的不足。力学性能不足导致其无法为承重部位提供有效的机械支撑,成骨能力不足使其难以应用于骨质疏松性骨缺损的修复。为了解决这一问题,许多学者进行了制备复合材料的尝试。Bayer等制备了磷酸钙与壳聚糖组成的聚合物,形成类似骨组织的结构,可以通过调整材料的成分比例改变其部分性能,然而这种支架的弹性模量较低,力学支撑不足,而且对于这种支架材料的成骨能力也未做进一步研究。因此,与壳聚糖组成聚合物的材料,应该具有更高的弹性模量,以及更好的成骨能力。钽具有更高的弹性模量,同时具有较强的成骨能力,而且生物相容性良好,然而,钽材料由于比重大、过于致密等缺点,无法直接植入人体中。因此,我们对壳聚糖支架进行改良,制备成含钽壳聚糖复合支架。钽材料较高的弹性模量、较强的成骨能力能否弥补壳聚糖材料在力学性能与成骨能力方面的不足?复合支架能否达到修复骨质疏松性骨缺损所需的机械支撑和成骨能力?本研究将对含钽壳聚糖复合支架的力学性能、生物学特性以及动物体内骨质疏松性骨缺损的修复能力进行分析探讨。二、研究目的1.对含钽壳聚糖复合支架的力学性能进行检测。2.对含钽壳聚糖复合支架影响骨髓间充质干细胞的粘附、增殖及成骨分化的能力进行检测,以评估支架的生物学特性。3.利用骨质疏松兔模型检测含钽壳聚糖复合支架修复动物体内骨质疏松性骨缺损的能力。叁、研究方法1.为研究含钽壳聚糖复合支架的力学性能,使用ElectroForce 3100 Test Instrument测出支架的载荷——位移曲线。对曲线初始阶段相对平滑的线性部分进行分析,并计算出支架的弹性模量(E)。2.为研究含钽壳聚糖复合支架的生物学特性,将大鼠BMSCs置于含10%胎牛血清的α-MEM培养基中,置于培养箱中培养。隔天更换培养液,汇合后用0.25%胰酶消化,再用含血清的培养基中止消化,并制备细胞悬液。3.为研究含钽壳聚糖复合支架对大鼠BMSCs粘附的影响,培养的大鼠BMSCs分别接种至壳聚糖支架和含钽壳聚糖复合支架上。在1小时、2小时、4小时、8小时每个时间点,分别使用CCK-8法于450nm波长处测量OD值,间接反映支架对细胞粘附的影响。4.为研究含钽壳聚糖复合支架对大鼠BMSCs增殖的影响,将培养的大鼠BMSCs分别接种至壳聚糖支架和含钽壳聚糖复合支架上,使用CCK-8法在24小时、48小时、72小时、96小时和120小时每个时间点对450nm波长处的OD值进行测量。5.为研究含钽壳聚糖复合支架对大鼠BMSCs成骨分化的影响,培养的大鼠BMSCs分别接种至壳聚糖支架和含钽壳聚糖复合支架上,用成骨诱导培养基进行诱导培养。在成骨诱导后第7、14天进行ALP染色,第21、28天进行茜素红染色,以评估细胞的矿化程度。成骨诱导后第7、14、21、28天分别对样本矿化时所吸收的钙离子浓度进行定量分析,间接反映支架对成骨分化的影响。成骨诱导第28天后,Real-time PCR测定成骨相关基因表达,Western blot法测定成骨相关目标蛋白质表达。6.为研究含钽壳聚糖复合支架对骨质疏松性骨缺损的修复能力,将骨质疏松兔随机分为2组,在腰椎椎体制造骨缺损,然后分别将壳聚糖支架和含钽壳聚糖复合支架植入骨缺损部位。12周后取出椎体,使用Micro-CT对标本进行扫描,并对支架周围的骨小梁数量、骨体积分数、骨密度、骨小梁厚度进行检测及统计分析。用1%甲苯胺蓝对标本的硬组织切片进行染色后,镜下观察,并对骨面积分数进行检测及统计分析。四、研究结果1.复合支架力学性能测试结果复合支架力学性能良好。复合支架的弹性模量为3.07±0.12 GPa,壳聚糖支架的弹性模量为2.38±0.69GPa,复合支架的弹性模量高于壳聚糖支架,两者差异具有统计学意义(P<0.05)。2.复合支架对骨髓间充质干细胞粘附的影响复合支架对骨髓间充质干细胞的粘附具有更好的促进作用。在第1小时、2小时、4小时、8小时每个时间点,细胞在复合支架表面的粘附能力均高于壳聚糖支架,并且差异逐渐增大。3.复合支架对骨髓间充质干细胞增殖的影响复合支架对骨髓间充质干细胞的增殖具有更好的促进作用。在第24小时、48小时、72小时、96小时、120小时每个时间点,细胞在复合支架表面的增殖能力均高于壳聚糖支架,并且差异逐渐增大。4.复合支架对骨髓间充质干细胞分化的影响复合支架对骨髓间充质干细胞的成骨分化具有更好的促进作用。含钽壳聚糖复合支架表面细胞的碱性磷酸酶阳性水平、钙结节颗粒数量明显高于壳聚糖支架,从更换成骨诱导分化培养基的第7天开始,复合支架表面细胞的钙离子吸收浓度均大于壳聚糖支架,并且差异逐渐增大。成骨诱导第28天后,Real-time PCR测定复合支架表面细胞的成骨相关基因表达高于壳聚糖支架,Western blot法测定复合支架表面细胞的成骨相关目标蛋白质表达高于壳聚糖支架3-5倍。5.复合支架修复骨质疏松动物模型骨缺损的能力复合支架对骨质疏松动物模型骨缺损具有更好的修复作用。Micro-CT显示复合支架周围的骨小梁厚度、骨体积分数、骨密度、骨小梁数量均高于壳聚糖支架,硬组织切片可见复合支架周围的骨面积比高于壳聚糖支架。五、结论我们的研究结果表明,含钽壳聚糖复合支架不但具有良好的力学性能,而且还能促进支架表面细胞的粘附、增殖及成骨分化,同时能够促进骨质疏松动物模型骨缺损的修复。含钽壳聚糖复合支架有望成为一种具有良好应用前景的骨修复材料。(本文来源于《中国人民解放军海军军医大学》期刊2018-05-01）
高嘉[9]（2018）在《壳聚糖支架的制备及其作为脂肪组织工程材料的初步研究》一文中研究指出[目的]机体由于先天畸形、创伤、肿瘤切除以及感染等多种因素造成的体表软组织缺损,常常导致人体正常组织的形态及轮廓改变,不只影响患者容貌美观,还对患者造成一定的生理功能障碍,严重时对其心理也产生负面作用。目前虽然常常应用真皮移植、自体组织瓣移植、胶原注射、以及人工合成材料植入等多种方法修复重建缺损的组织,但仍旧不能满足临床上所有整形修复外科的需要。对软组织缺损的修复重建仍然是整形外科所面临的重大难题。现研究较多的是自体脂肪组织移植技术,但也存在较多缺点,比如移植脂肪成活率低、脂肪组织血供差、移植脂肪组织易液化被吸收需要多次反复注射等等[1,2]。因此,利用脂肪组织工程技术已然成为当下临床研究的热点。脂肪组织工程的基本原理及方法是[3]将理想的种子细胞,接种到生物性能良好的叁维支架上,经体外扩增、定向诱导分化培养后,将此细胞支架复合物植入组织缺损部位。最终,支架逐渐降解,其降解产物被机体吸收,种子细胞分化为脂肪细胞,并与移植受区建立血运,从而与受区组织整合,完全填充组织缺损区域,达到修复和重建功能的治疗目的。因此,本实验从小鼠皮下及腹股沟脂肪组织中分离获得脂肪组织来源间充质干细胞(Adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,ADMSCs),作为脂肪组织工程的种子细胞,以制备壳聚糖多孔支架为切入点,并检测其孔隙率、显微结构、机械强度以及与小鼠ADMSCs生物相容性等多项指标,旨在为脂肪组织工程寻找更加合适的支架材料,为其进一步的组织工程化脂肪的临床应用积累实验数据。[方法]1.选择实验动物:选用健康、雌性、体重20g左右、4-8周龄的C57BL/6小鼠。购自昆明医科大学动物实验中心。2.脂肪组织来源间充质干细胞原代分离、培养及鉴定:利用Ⅰ型胶原酶消化法从小鼠脂肪组织中分离提纯出ADMSCs,常规细胞培养并传代,取第4代贴壁生长的细胞制备成单细胞悬液,运用流式细胞术检测及鉴定悬浮细胞表面的分子标志物,并将其定向诱导分化为脂肪细胞、骨细胞,经油红O及茜素红染色,以鉴定其多向分化能力。3.壳聚糖支架的制备及其孔隙率、力学性能和毒性检测:通过冷冻干燥法制备壳聚糖叁维多孔支架,并对壳聚糖支架进行了不同交联工艺探索(交联时间分别为2h、4h和8h)。大体观察支架性状,行扫描电镜(SEM)观察支架显微结构。乙醇排水法检测支架孔隙率。对于韧性材料,主要考察其拉伸性能。并做细胞毒性实验(MTT法),以鉴定材料有无细胞毒性。4.壳聚糖支架复合小鼠脂肪组织来源间充质干细胞:最终选取交联8h的壳聚糖支架作为复合干细胞支架。取第4代小鼠ADMSCs与壳聚糖支架体外复合培养,采用扫描电镜观察细胞在支架上的粘附生长情况。[结果]1.Ⅰ型胶原酶消化法可成功从小鼠脂肪组织中分离培养出ADMSCs,细胞贴壁生长,具有典型梭形、成纤维细胞样形态;流式细胞仪检测免疫表型,结果显示,分离培养的第4代细胞表达MSC标志分子CD44、CD90分别为98.78%±0.73%,98.31%±0.57%,而造血干细胞标志分子CD34、CD45表达阴性,这符合间充质干细胞特性。ADMSCs细胞经过成脂诱导14d后,其内出现了透明圆形脂肪粒,经油红O染色后可见橘红色脂滴;同时,经过成骨诱导培养21d后,细胞内具有钙盐沉积,经茜素红染色后呈橘红色致密结节。说明本实验成功从小鼠脂肪组织中分离得到ADMSCs。2.壳聚糖支架大体呈乳白色或微黄色,触摸有一定弹性,较柔软。扫描电镜观察支架显微结构呈多孔海绵样状,孔隙相互连接,孔径大小主要分布在25-260μm范围内,且支架材料的孔隙率达到92.8%±2.4%。经过交联处理的壳聚糖支架具有叁维多孔结构,支架的拉伸强度在交联2h为(2.55±0.89)MPa、交联4h为(4.11±0.7)MPa、交联8h为(5.73±0.77)MPa,与未交联的拉伸强度(0.9±0.27)MPa 比较(p=0.04t=3.08、p=0.002t=7.38、p=0.0005t=10.19),支架材料的强度随着交联时间的增加而不断增加,且差异有统计学意义(P<0.05)。其中交联8h的壳聚糖支架拉伸强度达到最大,为5.73±0.77MPa。细胞毒性实验材料浸提液浓度0.5mg/ml时,细胞增殖度(RGR)为(98.30%±5.93%);1.0mg/ml时,细胞增殖度(RGR)为(97.03%±4.12%);1.5mg/ml时,细胞增殖度(RGR)为(99.79%±1.82%);2.0mg/ml 时,细胞增殖度(RGR)为(101.41%±3.54%)。材料浸提液各浓度实验组与阴性对照组(100±0.00)(p=0.65t=0.50、p=0.28 t=1.25、p=0.86t=0.19、p=0.53 t=0.69)比较,RGR 值统计学无显着变化(P>0.05),细胞增殖度都在90-100之间,细胞毒性为0或1级,说明壳聚糖支架材料无毒性。3.脂肪组织来源间充质干细胞与壳聚糖支架复合培养后,扫描电镜观察可见干细胞能够在支架上黏附、生长,并长出伪足,说明壳聚糖材料生物相容性良好。[结论]1.采用Ⅰ型胶原酶消化法可成功分离纯化出ADMSCs;2.利用冷冻干燥技术可以成功制备壳聚糖支架,该支架具有良好的叁维空间结构,即较高的孔隙率和适宜的孔径大小。经过交联,该壳聚糖材料机械强度加强,且对细胞无毒性,生物安全性良好,可以作为组织工程的支架使用;3.细胞在壳聚糖支架上增殖、黏附良好,具有良好的生物相容性。壳聚糖作为一种理想的组织工程用支架材料,适于细胞在其上的黏附与增殖,为进一步用于软组织缺损临床修复积累实验数据。(本文来源于《昆明医科大学》期刊2018-05-01）
王嘉琪,张文芳[10]（2018）在《角膜组织工程研究的丝素蛋白/壳聚糖支架:理论进展与应用转化》一文中研究指出背景:角膜炎、化学伤、创伤和其他疾病往往导致角膜组织不可逆的损伤,留下纤维瘢痕进而最终导致视力下降甚至视力丧失。角膜移植是唯一的治疗途径,但供体的缺乏限制了其应用,此外其他替代材料制备复杂且价格昂贵。丝素蛋白和壳聚糖是组织工程领域常用的材料,制备成生物支架的技术已日趋成熟,得到了广泛应用,但在角膜修复领域尚处于起步阶段。目的:系统分析丝素蛋白/壳聚糖支架材料应用于角膜修复领域的相关文献,为进一步研究和促进其修复角膜时的临床应用提出新方向和理论支持。方法:以"丝素蛋白,壳聚糖,角膜,角膜修复材料"为中文关键词,以"silk fibroin,chitosan,cornea,keratoprosthesis,scaffold"为英文关键词检索CNKI,万方以及Pub Med数据库有关角膜修复材料的相关文献,追踪以丝素蛋白/壳聚糖作为修复材料在角膜组织工程领域的发展过程,并分析其应用现状及前景。结果与结论:初步检索178篇文献,最终纳入52篇符合标准的文献进行综述。(1)丝素蛋白/壳聚糖支架作为缺损角膜的修复体,细胞毒性低,生物相容性良好;(2)丝素蛋白/壳聚糖支架为角膜细胞提供了适宜的细胞外环境,有利于角膜细胞的水电解质交换;(3)ABCG2蛋白的检出,提示支架为角膜缘干细胞的增殖提供了可能;(4)大量的动物模型实验表明该支架几乎不会引起角膜细胞的炎症反应,这对于维持角膜组织的透明性有重要意义;(5)由于供体角膜的缺乏,寻找新型的人工材料修复损伤角膜是角膜移植领域的发展方向,而丝素蛋白壳/聚糖支架具有巨大的潜力,值得深入研究。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2018年06期）
壳聚糖支架论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:探索不同质量分数的硅酸钙对胶原-壳聚糖支架性能的影响。方法:通过冷冻干燥法制成硅酸钙含量分别为0%、1%、2%、5%和8%(w/v)的支架,采用扫描电镜、能量色散谱分析,以及万能试验机检测其理化性能的变化。通过模拟体外矿化和细胞培养,检测其生物学性能的变化。结果:与对照组(0%w/v硅酸钙)比较,随着硅酸钙含量的增加,支架的压缩弹性模量逐渐增加(P<0.05),降解速率也逐渐增加(P<0.05),而孔隙率逐渐减小(P<0.05);实验组均能促进成骨细胞的增殖以及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的表达(P<0.05)。此外,实验组均有不同程度的羟基磷灰石晶体沉积,而对照组几乎无羟基磷灰石晶体沉积。结论:适量的硅酸钙能增强胶原-壳聚糖支架的理化性能,促进成骨及体外矿化,有作为骨组织工程支架的潜力。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
壳聚糖支架论文参考文献
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[7].罗鸣骜,伍尚敏,苏晓叁,高嘉,于璐.壳聚糖支架负载SHH和CM-Dil标记的脂肪干细胞移植后存活分化研究[J].中国美容医学.2018
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[10].王嘉琪,张文芳.角膜组织工程研究的丝素蛋白/壳聚糖支架:理论进展与应用转化[J].中国组织工程研究.2018