赵燕（辽宁省锦州市传染病医院检验科辽宁锦州121017）
血小板计数对血栓、出血性疾病和血小板减少性疾病的诊断与治疗有重要的参考价值。如今各医疗单位均采用自动化的血液分析仪进行血小板计数，其对于血小板数及形态正常的标本结果比较可靠，但对于血小板减少和/或红细胞形态异常者，所得结果误差甚大，这里对血液分析仪血小板计数的影响因素进行探讨。
1检测前因素
1.1抗凝剂影响近年来许多国家的仪器血液检查都已改用EDTA抗凝静脉血，它是一种钙螯合剂，常用的有二钠盐、二钾盐，钾盐溶解度大，与血混合后，抗凝效果较好，结果较可靠。但如有红细胞碎片则易与血小板混淆，有时也可引起非特异性血小板凝集，导致血小板计数减少。另外，抗凝剂(稀释液)一定要经常保持新鲜，随时配置，防止酸、碱及脏物污染，以致使血小板破坏，影响计数。关于EDTA抗凝剂的使用，刘健等研究认为静脉血4ml分别加入EDTA-K2和EDTA-K3抗凝试管中各2ml，其检测结果均无显著性差异。还有研究表明若将丁胺卡那霉素在抽血前或抽血后15min内以浓度为5mg/ml血加入，其血小板数在室温4h内可保持相对稳定，既可保持血细胞形态稳定又利于血小板准确计数。
1.2采血是否顺利直接影响到血小板计数结果静脉采血必须一针见血，顺利采到标本后与抗凝剂迅速混匀。末梢血采集时要深扎2mm左右，使血液自然流出，不要挤得太甚。而且必须先采血小板，后采其它检验项目，避免由于血小板破碎致计数减少。
1.3取血后混匀程度影响计数结果汪兆亮等对末梢采血后不振荡立即检测和充分振荡混匀静置5min后检测结果进行分析，结果显示未振荡的计数值与充分振荡混匀静置5min后的计数值差别甚大，前者比后者平均低30×109/L左右。充分摇匀及静置平衡之后上机检测结果稳定性较好。
1.4静置时间长短也影响计数后果李星五等认为采血后不能及时测定是血小板减少的一个重要原因，目前大部分血常规均用自动血液分析仪测定，每日血常规标本从病房采血到实验室测定前，最长可放置3h，这样会因血小板离体时间太长，发生变形、自溶、体积变小，致使计数减少。研究还认为血液标本与抗凝剂混匀时间对结果影响也很大。在血液与抗凝剂混匀的0～15min内，EDTA-K2会使血小板形态发生变化，血小板周围可形成丝状伪足并相互缠绕，形成血小板可逆聚集体。由于仪器只识别颗粒大小而不区分颗粒性质，且血小板与红细胞计数在同一通道进行，致使这些血小板被误认为是小红细胞而不纳入血小板计数范围，这就是血小板混匀时间在0～15min仪器法较手工法显著偏低的原因。研究认为，血小板测定的最佳时间为抽血后30min～60min，而且最迟应在120min内完成，以避免由于混匀时间过短或过长导致血小板假性减少的情况发生。
1.5试剂的影响富晓丽等研究认为溶血及溶血素等都会对血小板的测定产生影响。
1.6小红细胞的影响章文等对采血后立即测定与放置15min后测定PLT结果及红细胞MCV<70fl时血液分析仪与显微镜计数比较测定，结果有显著性差异。有研究采用SymexXE22100全自动五分群血液分析仪测定小红细胞标本血小板，结果和参考方法差异有显著性，而光学法和参考方法则差异无显著性，认为造成小红细胞组电阻抗法和手工参考方法差异有显著性的原因是血中会出现一些大小近似血小板的小红细胞，会被当作血小板加以计数，从而使血小板数假性增多。
1.7血小板形态异常的影响古宏心研究发现血小板直方图有多峰出现，分布低而宽，部分图形尾巴上翘，结果仪器法与手工计数结果则有明显差异。笔者研究中发现PLT计数在30～90×109/L，仪器分布图正常，则结果可信度高，如分布图异常，则可信度差，需手工法校正，而<30×109/L更不可信。
2血液分析仪因素
目前主要检测原理有电阻抗法、激光流式细胞法、综合电学和激光流式细胞术法。陈小剑等采用光学法和阻抗法原理的血液分析仪测定小红细胞样本的血小板，结果显示光学法可以通过荧光强度提供的RNA信息对微粒进行内部结构的确认来区分小细胞的血小板，在流式细胞仪(FCM)通道被荧光物质标记后用荧光识别，由于红细胞(包括小红细胞)和红细胞碎片不会对荧光着色，根据细胞大小和荧光强度可以把小红细胞及其他杂质与血小板区分开，从而排除干扰，准确着色，得到更可靠的血小板结果。Olieira，-R-A等用四种血液分析仪(ADVIA-120(Bayer)、CoulterSTKS、HlSystem(Technicom-Bayer)、CoulterT-890)对血小板减少样本的血小板进行计数，观察它们的准确性和精密度，结果显示除ADVIA-120(Bayer)外，其它三种仪器对血小板减少性疾病的样本的血小板计数结果与参考方法相比，显示了低准确性和精密度，AD-VIA-120(Bayer)测定原理以体积和折光性为基础，它与标准方法相比显示高相关性(r=0.974)。
3血小板检测新方法
彭黎明等利用FITC-抗CD42a-GPIb/Ix，流式细胞仪术(FCM)检测全血PLT，用FCM测得PLT/RBC，乘以经准确校正的血细胞分析仪所测同一标本的RBC值，得PLT结果(×109/L)，并将FCM所测PLT结果与SE-9500、NE-1500、CD-1600及手工法测定结果相比较，结果表明FCM测定PLT-CD42a定量PLT特异、准确、精密，可望成为PLT测定的参考方法。Nishiyama，-M等利用抗GPIb抗体和微球、流式细胞术测定严重血小板减少患者的血小板计数，结果显示该方法精确、可用，特别是可以排除红细胞碎片的干扰。