导读:本文包含了肾脏皮质论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:糖皮质激素,免疫抑制剂,小儿肾脏风湿性疾病并发重症肺炎
肾脏皮质论文文献综述
周杜鹃[1]（2019）在《糖皮质激素联合免疫抑制剂治疗小儿肾脏风湿性疾病并发重症肺炎的疗效观察》一文中研究指出目的:观察免疫抑制剂与糖皮质激素联合治疗小儿肾脏风湿性疾病并发重症肺炎的效果。方法:2017年4月-2018年5月收治小儿肾脏风湿性疾病并发重症肺炎患儿15例,均使用免疫抑制剂与糖皮质激素进行治疗,患儿并发重症肺炎时,先给予经验用药,无好转迹象使用大环内酯类药物与碳青霉烯类药物,如果仍无好转迹象,加用复方新诺明、万古霉素,并停止使用免疫抑制剂,将甲基泼尼松龙行静脉输注。对患儿重症肺炎的治疗转归、易感病原体等进行分析。结果:联合免疫抑制剂与糖皮质激素进行治疗,感染情况得到有效控制10例,但是对免疫功能产生了不利影响,使患儿感染病原微生物的概率大幅度增加,尤其是提高了重症肺炎的患病率。结论:小儿肾脏风湿性疾病在治疗的过程中需要使用免疫抑制剂,会导致患儿出现重症肺炎,临床医生应该对小儿肾脏风湿性疾病并发重症肺炎提起重视,并对患儿并发重症肺炎的情况进行详细分析,根据情况适时调整药物,必要时停止免疫抑制剂的使用。(本文来源于《中国社区医师》期刊2019年17期）
张梓焜[2]（2019）在《达格列净通过抑制血清/糖皮质激素调节激酶1逆转Th17/Tregs失衡延缓糖尿病肾脏疾病进展》一文中研究指出糖尿病肾脏疾病(Diabetic Kidney Disease,DKD)是糖尿病最常见的慢性并发症之一,也是导致终末期肾病的最主要原因之一。目前关于糖尿病肾脏疾病发生发展机制并不是完全清楚。有研究表明,T细胞免疫在糖尿病肾脏疾病发生发展过程中起到重要作用,而其中辅助性T细胞17(Helper T cell 17,Th17)与调节性T细胞(Regulatory T cell,Tregs)比例的失衡能促进糖尿病肾脏疾病的发生及发展。血清/糖皮质激素调节激酶1(Serum/Glucocorticoid Regulated Kinase 1,SGK1)是一种广泛表达于各个组织器官的丝氨酸-苏氨酸激酶,其可被高盐环境所激活,有研究表明活化的血清/糖皮质激素调节激酶1能促进初始T细胞向辅助性T细胞17分化,进而导致组织中辅助性T细胞17与调节性T细胞比例的失衡,这与Foxol/IL-23R通路激活相关。钠离子/葡萄糖同向转运体2(Sodium/Glucose cotransporter 2,SGLT2)是一类广泛表达于肾小管上皮细胞的转运蛋白,高糖环境下,肾小管上皮细胞中钠离子/葡萄糖同向转运体2表达明显升高,促进了肾小管上皮细胞对钠离子及葡萄糖的重吸收,进而导致肾脏组织钠离子浓度升高,形成局部高盐环境。因此,本研究旨在探讨钠离子/葡萄糖同向转运体2是否能通过增加肾小管上皮细胞重吸收钠离子,激活血清/糖皮质激素调节激酶1进而引起肾组织中辅助性T细胞17与调节性T细胞比例的失衡,最终促进糖尿病肾脏疾病进展。并进一步探讨达格列净对上诉机制的抑制作用。方法1、动物实验实验使用8周龄db/db小鼠(n=18)及8周龄C57L6野生型小鼠(n=6)。将db/db小鼠随机均分为糖尿病对照组(DM组)、糖尿病+达格列净组(Dap组)和糖尿病+伏格列波糖组(Vog组),分别每天以生理盐水(1mg/kg·d)、达格列净(1 mg/kg·d)和伏格列波糖(0.6 mg/kg·d)进行灌胃。C57L6小鼠作为空白对照组,每天以生理盐水(1 mg/kg·d)灌胃。药物干预前、干预后第6和12周收集24 h尿。所有小鼠于22周龄时处死,处死前眼眶采血收集外周血。2.肾组织病理与免疫组化小鼠处死后取其肾脏组织,使用4%多聚甲醛固定24小时后用石蜡包埋、切片机切片(3um)。病理检验方面,组织切片使用PAS染色及Masson染色处理后显微镜下拍照。免疫组化方面,组织切片经兔-抗人SGLT2多克隆抗体或兔-抗人SGK1多克隆抗体孵育过夜后,使用辣根过氧化酶标记的兔二抗孵育,最后用苏木紫染色,显微镜下拍照。3.ELISA小鼠尿液样本经过3000r/分钟离心10分钟后取上清液,分别使用小鼠肌酐ELISA检测试剂盒及小鼠尿蛋白ELISA检测试剂盒检测小鼠尿液中肌酐及尿蛋白含量。小鼠血液样本经2%EDTA抗凝处理后,于4℃ 3000r/分钟离心10分钟,取上清液,分别使用IL-17及IL-10 ELISA检测试剂盒检测上清液中IL-17及IL-10含量。操作按说明书进行,Bio-Rad iMark酶标仪测量各孔的吸光度(OD值)。4.外周血和肾组织流式细胞术在单细胞悬液中加适量的IL-17A抗体,室温避光孵育20分钟后加入2ml细胞染色缓冲液,250g离心5分钟,去上清。加入1ml 1×RORγt Fix/Perm buffer重悬细胞室温避光孵育20分钟,250g离心5分钟,去上清。加入2ml细胞染色缓冲液,250g离心5分钟,去上清。加入1ml 1 ×RORγt Permbuffer,250g离心5分钟,去上清后加入1ml 1 XRORγt Perm buffer重悬细胞,室温避光孵肓15分钟,离心去上清,再将细胞重悬在100ul的1×RORγt Perm buffer中。最后加入RORγt抗体,室温避光孵育30分钟。加入2ml细胞染色缓冲液,1200r/分钟离心5分钟,去上清。加入500ul细胞染色缓冲液,Millpore Guava EasyCyte流式细胞仪检测。Tregs细胞评估采取了同样的方案,所使用的抗体为CD4抗体、FoxP3抗体。5.Th17细胞分选制备小鼠肾组织细胞悬液,进行计数与测定细胞活力。选取适宜细胞密度,采用免疫磁珠法分离纯化小鼠CD4+CD62L+初始T细胞,筛选得到阳性初始T细胞。收集细胞,用1ml 11X FOXP3 Fix/Perm buffer重悬细胞,混匀,室温避光孵育20分钟,1000r/分钟离心5分钟,弃上清。加入1ml cell staining buffer,1000r/分钟离心5分钟,弃上清。加入1ml 1 × FOXP3 Perm buffer,混匀,1000r/分钟离心5分钟,弃上清。用1ml 1× FOXP3 Perm buffer重悬细胞,室温避光孵肓15分钟,1000r/分钟离心5分钟,弃上清,再将细胞重悬在100ul的11X FOXP3 Perm buffer中。加入RORγt和IL-17抗体,室温避光孵育30分钟,1000r/分钟离心5分钟,弃上清。200uL PBS重悬细胞,流式鉴定Th17细胞比例。6.Western Blot使用RIPA提取Th17总蛋白,并用BCA法测定样品蛋白浓度。制备10%SDS-PAGE,将变性后的样品蛋白(20ug)进行电泳分离,然后转到PVDF膜上。用含5%脱脂奶粉的TBST液封闭PVDF膜,与一抗(抗-SGK1、抗-p-Foxo1和抗IL-23r)在4℃摇床上孵育过夜。接下来将PVDF膜与HRP标记的二抗孵育1小时。在暗房内用ECL发光液孵育膜5分钟,最后拍照并用凝胶图像分析系统分析结果。所有Western Blots结果至少重复3次,使用ImageJ软件进行半定量分析。7.统计分析本论文所有统计数据结果采用平均数±标准差表示。单向方差分析用于多样本方差齐性比较,SNK法及Dunnett法用于多样本间两两比较。统计分析使用的是IBM SPSS Statistics 22,以P<0.05为显着性差异。结果1.达格列净对db/db小鼠蛋白尿及肾脏纤维化的影响的研究与野生型小鼠相比,db/db小鼠尿蛋白/肌酐比值明显升高,与此同时,其肾脏纤维化程度亦更显严重。而达格列净能降低db/db小鼠尿蛋白/肌酐比值,同时改善肾脏纤维化。2.达格列净对db/db小鼠Th17/Tregs失衡的影响的研究与野生型小鼠相比,db/db小鼠血液及肾脏中Th17数目明显升高,而Tregs数目明显下降,两者之间存在失衡。使用达格列净干预后,db/db小鼠Th17/Tregs失衡得到纠正,肾脏纤维化亦得到改善。3.达格列净对db/db小鼠肾脏T细胞分化的研究与野生型小鼠相比,db/db小鼠肾脏Th17中,SGK1、p-FOXO1、IL-23R表达量明显增多,这提示在db/db小鼠肾内Th17细胞分化活跃。而使用达格列净干预后,SGK1、p-FOXO1、IL-23R表达均受抑制。结论1.达格列净能改善糖尿病肾脏纤维化病变2.达格列净扭转糖尿病肾脏疾病小鼠血液和肾脏Th17/Tregs失衡3.达格列净能抑制糖尿病肾脏疾病小鼠肾脏Th17细胞SGK1/p-FOXO1/IL-23R通路激活,从而抑制Th17细胞分化。(本文来源于《南方医科大学》期刊2019-04-29）
宋文[3]（2018）在《超声观察妊娠高血压孕妇肾脏大小及肾皮质回声的变化分析》一文中研究指出目的探讨分析应用超声观察妊娠高血压孕妇肾脏大小及肾皮质回声的变化特征。方法选取该院2016-03~2017-03收治的600例孕妇,分为正常妊娠组和妊娠高血压组,各300例。妊娠高血压组应用超声检查肾脏大小及肾皮质回声情况,与正常妊娠组进行对比分析。结果妊娠高血压组肾脏大小、形状及肾皮质回声均有变化,且肾脏大小比正常妊娠组小,但差异无统计学意义(P>0.05)。双肾形态变化情况及肾皮质回声均比正常妊娠组强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论妊娠高血压孕妇应用超声测量,能够准确观察肾脏大小及肾皮质回声变化情况,对正确判断肾脏损害程度有较大的帮助,临床上有较高的诊断价值。(本文来源于《中国临床新医学》期刊2018年06期）
李娜,刘晓娜,郑海宁,温朝阳[4]（2018）在《肾脏中部及下极皮质杨氏模量值差异的动物实验研究》一文中研究指出目的研究兔肾脏中部与下极皮质杨氏模量值差异。方法 10只日本大耳白兔,结扎肾静脉,结扎前、结扎后15 min、30 min、60 min、90 min,超声剪切波弹性成像技术检测肾脏中部及下极皮质杨氏模量值。采用独立样本t检验,比较同一时间点肾中部与肾下极杨氏模量值之间的差异;采用单因素方差分析方法,比较同一部位不同时间点杨氏模量值之间的差异。结果结扎肾静脉前,肾中部、下极皮质杨氏模量值分别为(15.93±1.70)k Pa、(4.66±1.4)k Pa,结扎后15 min分别为(34.84±4.91)k Pa、(10.95±3.09)k Pa,30 min分别为(41.55±3.19)k Pa、(20.39±4.06)k Pa,60 min分别为(50.63±2.73)k Pa、(30.96±4.98)k Pa;90 min分别为(56.61±2.96)k Pa、(42.40±5.79)k Pa。结扎肾静脉前后,肾中部皮质杨氏模量值均显着高于肾下极,差异有统计学意义(t=21.63、7.44、7.19、5.26、2.41,P均<0.05),结扎后各时点两部位的杨氏模量值均显着高于结扎前(t=-3.30、3.38、-2.47、1.83,P均<0.05),且随时间延长逐渐增加(t=-5.31、8.26、-7.81、3.65,P均<0.05)。结论超声剪切波弹性成像技术测量的兔肾中部皮质杨氏模量值高于肾下极,提示兔肾脏皮质存在各向异性。结扎兔肾静脉后90 min内,肾脏中部皮质杨氏模量值也高于下极。(本文来源于《中华医学超声杂志(电子版)》期刊2018年04期）
雷蕾,熊维建,杨敬,张玲,钟锦[5]（2018）在《国医大师郑新分期论治糖皮质激素在肾脏疾病应用的不良反应》一文中研究指出糖皮质激素是现代治疗肾脏病最常用的药物之一,它在取得良好临床疗效的同时,常会带来各种不良反应。国医大师郑新从事中医临床及研究50余年,在治疗中医肾病方面成绩斐然,他以中医脏腑经典理论为基础,提出"肾病叁因论",对治疗糖皮质激素在肾病应用中的不良反应进行中医分期论治探讨:(1)激素起始期;(2)激素减量期;(3)激素维持期。总结了这叁期的中医辨证施治及常用的方药,运用中医中药优势,综合提高临床疗效,供临床参考和推广。(本文来源于《中华中医药杂志》期刊2018年01期）
范植全,杨伟成,方宏,兰敏,陈平[6]（2018）在《糖皮质激素联合免疫抑制剂治疗肾脏疾病后并发肺部感染的临床研究》一文中研究指出目的:探讨糖皮质激素联合免疫抑制剂治疗肾脏疾病后并发肺部感染患儿的临床特点。方法:回顾性分析我院收治的100例肾脏疾病患儿应用糖皮质激素联合免疫抑制剂治疗后并发肺部感染的临床资料。结果:所有患儿肺部呼吸系统感染均在联合用药治疗8周后出现,感染出现时间中位数为2.5个月,其中治疗后3个月内发生者71例(71.0%),3~6个月发生者19例(19.0%),>6个月发生者10例(10.0%)。临床症状以进行性呼吸困难为主要表现,其中同时出现发热者81例(81.0%),胸闷气促者38例(38.0%),咳嗽52例(52.0%),病情进展快,43例(43.0%)出现呼吸衰竭。胸部X线片和高分辨CT影像学均显示两肺弥漫性病变。免疫学检查示100例感染患儿免疫功能基本正常,所有患儿病原学检查中HIV抗体阴性,33例患儿(33.0%)检出病原体,共检出65例次,其中23例次(35.4%)为真菌,28例次(43.1%)为细菌,14例次(21.5%)为病毒。患儿明确感染后均停用免疫抑制剂或降低剂量,分别积极给予抗细菌、抗真菌及抗病毒或联合治疗,加强支持治疗,并根据患儿病情予以呼吸机辅助呼吸。14例患儿死亡,病死率为14.0%,其余86例患儿感染得到控制,病情好转出院并门诊随访1个月~1年,患儿肺功能逐渐恢复正常。结论:肾脏疾病患儿应用糖皮质激素联合免疫抑制剂并发肺部感染多发于用药治疗后3个月内,早诊断、早治疗并及时调整免疫治疗方案有利于改善患儿的预后。(本文来源于《儿科药学杂志》期刊2018年01期）
齐振强,胡洪贞,李伟[7]（2017）在《中医药辨证辅助糖皮质激素治疗肾脏疾病的思路与方法》一文中研究指出糖皮质激素是治疗肾脏疾病的常用药物,但长期大剂量应用会带来诸多毒副作用。分别概述中医、西医对糖皮质激素的认识,在此基础上总结肾脏疾病激素治疗所致的中医病机证候学特点为伤阴损阳、加重肾虚,助热生燥、耗气伤阴,助湿生热,伤血致瘀、加重血瘀;提出中医药在肾脏疾病激素治疗中的辨治策略,即根据激素使用量分阶段论治及按具体病证论治,并将补肾活血法贯穿疾病治疗始终,为中医药辅助激素辨治肾脏疾病提供思路。(本文来源于《中医杂志》期刊2017年20期）
郑伟平,梁翔,邹原方,刘玉峰,苏晓燕[8]（2017）在《氧化应激拮抗剂对1型糖尿病大鼠肾脏皮质血管紧张素原表达的影响》一文中研究指出目的研究1型糖尿病大鼠早期肾脏皮质血管紧张素原(angiotensinogen,AGT)表达的改变以及抗氧化应激干预对其表达的影响,分析肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)与氧化应激作用的关系。方法将正常雄性SD大鼠随机分为两组,糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠组腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)造1型糖尿病大鼠模型,需鉴定其成模,非糖尿病(Non-DM)大鼠组腹腔注射同等剂量的载体溶剂(1 ml/100 g),观察至4周末;对比2组大鼠体质量、血糖水平、血压水平及肾脏皮质AGT的表达水平。分别选用氯沙坦、肼屈嗪以及氧化应激反应拮抗剂作为干预手段,对成模后的DM大鼠进行干预,持续至4周末,与阳性对照组相比,对比各干预组糖尿病大鼠体质量、血糖水平、血压水平及肾脏皮质AGT的表达水平。结果与Non-DM组大鼠比较,4周末DM大鼠体质量、血糖水平均有显着性差异(P<0.05),而血压水平无显着性差异(P>0.05);肾脏皮质AGT表达水平显着升高(P<0.05);与阳性对照组比较,4周末各干预组大鼠体质量、血糖水平、血压水平均无显着性差异(P>0.05);氯沙坦和氯化应激反应拮抗剂组肾脏皮质AGT的表达有所下调(P<0.05),肼屈嗪组AGT表达没有显着改变(P>0.05)。结论 1型糖尿病大鼠早期肾脏皮质AGT表达有所上调,抗氧化应激干预与RAS受体阻断剂干预均能降低AGT的表达水平,这说明RAS和氧化应激作用有一定的关联性。(本文来源于《临床肾脏病杂志》期刊2017年05期）
赵巍,唐柳平[9]（2017）在《糖皮质激素联合免疫抑制剂治疗儿童肾脏风湿性疾病的临床分析》一文中研究指出目的探讨糖皮质激素联合免疫抑制剂治疗儿童免疫风湿性疾病的临床效果。方法选取2015年6月-2016年11月间柳州市工人医院收治的44例儿童肾脏风湿性疾病患者,采用随机数字表法分为实验组与对照组,每组各22例,对照组患者接受糖皮质激素治疗,实验组患者采用糖皮质激素联合免疫抑制剂治疗,分析比较两组患儿临床治疗效果。结果治疗后1个月-5个月,两组患儿均有肺部感染发生,试验组患儿3个月内感染发生率为68.18%,低于对照组的90.91%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后及末次随访时,试验组患儿尿蛋白水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后两组患儿肌酐清除率间差异无统计学意义(P>0.05)。所有患儿治疗过程中均有发热发生,治疗8周后均出现进行性呼吸困难,其中气促22例,轻咳9例,剧烈咳嗽9例,6例患儿肺部可闻及少许干啰音,3例可闻及密集细湿啰音。所有患儿随着病情进展都出现气促,其中4例需要呼吸机辅助通气。结论糖皮质激素联合免疫抑制剂治疗儿童肾脏风湿性疾病过程中,应注意警惕肺部感染的发生,及早诊断、治疗,改善患者预后。(本文来源于《临床检验杂志(电子版)》期刊2017年01期）
乔智蔚[10]（2016）在《超声动态评估组织灌注技术评价糖尿病患者肾脏皮质血流灌注》一文中研究指出目的超声动态评估组织灌注技术用于评价糖尿病患者肾脏皮质血流灌注的效果。方法选择2013年3月—2015年9月期间该院收治的60例2型糖尿病患者作为观察组研究对象。按照其肾小球的过滤情况进行分组:A组20例(正常),B组40例(下降),另选择30名正常者作为对照组研究对象。该组患例采用彩超仪器,并使用Pixel Flux软件对图像进行进一步的分析与研究。结果观察组A组与对照组相比较,平均灌注强度、平均血流速度均差异有统计学意义(P<0.05),但是组织阻力指数差异无统计学意义(P>0.05);观察组B组与对照与患者相互比较,平均灌注强度、平均血流速度、组织阻力指数的统计学差异P均小于0.05差异有统计学意义。结论超声动态评估组织灌注技术可以更加准确的评价ROI内的血流参数指标,因此糖尿病患者接受超声动态检查可以明确其肾脏功能情况,这对于治疗方案的尽早确定以及患者的生活质量水平的改善均具有重要的意义。(本文来源于《糖尿病新世界》期刊2016年11期）
肾脏皮质论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
糖尿病肾脏疾病(Diabetic Kidney Disease,DKD)是糖尿病最常见的慢性并发症之一,也是导致终末期肾病的最主要原因之一。目前关于糖尿病肾脏疾病发生发展机制并不是完全清楚。有研究表明,T细胞免疫在糖尿病肾脏疾病发生发展过程中起到重要作用,而其中辅助性T细胞17(Helper T cell 17,Th17)与调节性T细胞(Regulatory T cell,Tregs)比例的失衡能促进糖尿病肾脏疾病的发生及发展。血清/糖皮质激素调节激酶1(Serum/Glucocorticoid Regulated Kinase 1,SGK1)是一种广泛表达于各个组织器官的丝氨酸-苏氨酸激酶,其可被高盐环境所激活,有研究表明活化的血清/糖皮质激素调节激酶1能促进初始T细胞向辅助性T细胞17分化,进而导致组织中辅助性T细胞17与调节性T细胞比例的失衡,这与Foxol/IL-23R通路激活相关。钠离子/葡萄糖同向转运体2(Sodium/Glucose cotransporter 2,SGLT2)是一类广泛表达于肾小管上皮细胞的转运蛋白,高糖环境下,肾小管上皮细胞中钠离子/葡萄糖同向转运体2表达明显升高,促进了肾小管上皮细胞对钠离子及葡萄糖的重吸收,进而导致肾脏组织钠离子浓度升高,形成局部高盐环境。因此,本研究旨在探讨钠离子/葡萄糖同向转运体2是否能通过增加肾小管上皮细胞重吸收钠离子,激活血清/糖皮质激素调节激酶1进而引起肾组织中辅助性T细胞17与调节性T细胞比例的失衡,最终促进糖尿病肾脏疾病进展。并进一步探讨达格列净对上诉机制的抑制作用。方法1、动物实验实验使用8周龄db/db小鼠(n=18)及8周龄C57L6野生型小鼠(n=6)。将db/db小鼠随机均分为糖尿病对照组(DM组)、糖尿病+达格列净组(Dap组)和糖尿病+伏格列波糖组(Vog组),分别每天以生理盐水(1mg/kg·d)、达格列净(1 mg/kg·d)和伏格列波糖(0.6 mg/kg·d)进行灌胃。C57L6小鼠作为空白对照组,每天以生理盐水(1 mg/kg·d)灌胃。药物干预前、干预后第6和12周收集24 h尿。所有小鼠于22周龄时处死,处死前眼眶采血收集外周血。2.肾组织病理与免疫组化小鼠处死后取其肾脏组织,使用4%多聚甲醛固定24小时后用石蜡包埋、切片机切片(3um)。病理检验方面,组织切片使用PAS染色及Masson染色处理后显微镜下拍照。免疫组化方面,组织切片经兔-抗人SGLT2多克隆抗体或兔-抗人SGK1多克隆抗体孵育过夜后,使用辣根过氧化酶标记的兔二抗孵育,最后用苏木紫染色,显微镜下拍照。3.ELISA小鼠尿液样本经过3000r/分钟离心10分钟后取上清液,分别使用小鼠肌酐ELISA检测试剂盒及小鼠尿蛋白ELISA检测试剂盒检测小鼠尿液中肌酐及尿蛋白含量。小鼠血液样本经2%EDTA抗凝处理后,于4℃ 3000r/分钟离心10分钟,取上清液,分别使用IL-17及IL-10 ELISA检测试剂盒检测上清液中IL-17及IL-10含量。操作按说明书进行,Bio-Rad iMark酶标仪测量各孔的吸光度(OD值)。4.外周血和肾组织流式细胞术在单细胞悬液中加适量的IL-17A抗体,室温避光孵育20分钟后加入2ml细胞染色缓冲液,250g离心5分钟,去上清。加入1ml 1×RORγt Fix/Perm buffer重悬细胞室温避光孵育20分钟,250g离心5分钟,去上清。加入2ml细胞染色缓冲液,250g离心5分钟,去上清。加入1ml 1 ×RORγt Permbuffer,250g离心5分钟,去上清后加入1ml 1 XRORγt Perm buffer重悬细胞,室温避光孵肓15分钟,离心去上清,再将细胞重悬在100ul的1×RORγt Perm buffer中。最后加入RORγt抗体,室温避光孵育30分钟。加入2ml细胞染色缓冲液,1200r/分钟离心5分钟,去上清。加入500ul细胞染色缓冲液,Millpore Guava EasyCyte流式细胞仪检测。Tregs细胞评估采取了同样的方案,所使用的抗体为CD4抗体、FoxP3抗体。5.Th17细胞分选制备小鼠肾组织细胞悬液,进行计数与测定细胞活力。选取适宜细胞密度,采用免疫磁珠法分离纯化小鼠CD4+CD62L+初始T细胞,筛选得到阳性初始T细胞。收集细胞,用1ml 11X FOXP3 Fix/Perm buffer重悬细胞,混匀,室温避光孵育20分钟,1000r/分钟离心5分钟,弃上清。加入1ml cell staining buffer,1000r/分钟离心5分钟,弃上清。加入1ml 1 × FOXP3 Perm buffer,混匀,1000r/分钟离心5分钟,弃上清。用1ml 1× FOXP3 Perm buffer重悬细胞,室温避光孵肓15分钟,1000r/分钟离心5分钟,弃上清,再将细胞重悬在100ul的11X FOXP3 Perm buffer中。加入RORγt和IL-17抗体,室温避光孵育30分钟,1000r/分钟离心5分钟,弃上清。200uL PBS重悬细胞,流式鉴定Th17细胞比例。6.Western Blot使用RIPA提取Th17总蛋白,并用BCA法测定样品蛋白浓度。制备10%SDS-PAGE,将变性后的样品蛋白(20ug)进行电泳分离,然后转到PVDF膜上。用含5%脱脂奶粉的TBST液封闭PVDF膜,与一抗(抗-SGK1、抗-p-Foxo1和抗IL-23r)在4℃摇床上孵育过夜。接下来将PVDF膜与HRP标记的二抗孵育1小时。在暗房内用ECL发光液孵育膜5分钟,最后拍照并用凝胶图像分析系统分析结果。所有Western Blots结果至少重复3次,使用ImageJ软件进行半定量分析。7.统计分析本论文所有统计数据结果采用平均数±标准差表示。单向方差分析用于多样本方差齐性比较,SNK法及Dunnett法用于多样本间两两比较。统计分析使用的是IBM SPSS Statistics 22,以P<0.05为显着性差异。结果1.达格列净对db/db小鼠蛋白尿及肾脏纤维化的影响的研究与野生型小鼠相比,db/db小鼠尿蛋白/肌酐比值明显升高,与此同时,其肾脏纤维化程度亦更显严重。而达格列净能降低db/db小鼠尿蛋白/肌酐比值,同时改善肾脏纤维化。2.达格列净对db/db小鼠Th17/Tregs失衡的影响的研究与野生型小鼠相比,db/db小鼠血液及肾脏中Th17数目明显升高,而Tregs数目明显下降,两者之间存在失衡。使用达格列净干预后,db/db小鼠Th17/Tregs失衡得到纠正,肾脏纤维化亦得到改善。3.达格列净对db/db小鼠肾脏T细胞分化的研究与野生型小鼠相比,db/db小鼠肾脏Th17中,SGK1、p-FOXO1、IL-23R表达量明显增多,这提示在db/db小鼠肾内Th17细胞分化活跃。而使用达格列净干预后,SGK1、p-FOXO1、IL-23R表达均受抑制。结论1.达格列净能改善糖尿病肾脏纤维化病变2.达格列净扭转糖尿病肾脏疾病小鼠血液和肾脏Th17/Tregs失衡3.达格列净能抑制糖尿病肾脏疾病小鼠肾脏Th17细胞SGK1/p-FOXO1/IL-23R通路激活,从而抑制Th17细胞分化。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
肾脏皮质论文参考文献
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标签：糖皮质激素; 免疫抑制剂; 小儿肾脏风湿性疾病并发重症肺炎;