本文主要研究内容
作者马占兵,党洁,杨继辉,霍正浩,徐广贤（2019）在《基于慢病毒系统的双荧光标记多功能自噬流监测系统建立与应用》一文中研究指出：目的:构建能够用于稳定动态监测细胞自噬流变化和过表达基因的红色荧光蛋白-绿色荧光蛋白-鼠源LC3融合慢病毒多功能表达载体(PCDH-Duo-mRFP-eGFPph-LC3rat,PCDH-Duo),并构建小鼠腹腔巨噬细胞Raw264. 7稳转株观察自噬流变化。方法:应用基于PCR精确合成mRFP-eGFPph-LC3rat融合全基因,将其克隆至慢病毒表达载体PCDH-CMV-MCS-EF1a-GFP中,重组质粒经菌落PCR、酶切及测序分析正确无误后,包装慢病毒,转染Raw264. 7细胞,并利用流式分选术获取稳转株,经氯喹抑制自噬模型及Western blot鉴定eGFP蛋白表达确认其可靠性。结果:成功构建了PCDH-Duo重组慢病毒质粒,包被慢病毒并获得Raw264. 7稳定细胞系（Raw264. 7-PCDHDuo）,可稳定表达双荧光蛋白,经3mmol/L氯喹作用6h后,能够稳定准确指示自噬流变化。结论:成功构建了基于慢病毒系统的双荧光标记多功能自噬流监测系统,为研究细胞自噬与编码基因及非编码基因之间的关系提供了方便有力的工具。
Abstract
mu de :gou jian neng gou yong yu wen ding dong tai jian ce xi bao zi shi liu bian hua he guo biao da ji yin de gong se ying guang dan bai -lu se ying guang dan bai -shu yuan LC3rong ge man bing du duo gong neng biao da zai ti (PCDH-Duo-mRFP-eGFPph-LC3rat,PCDH-Duo),bing gou jian xiao shu fu qiang ju shi xi bao Raw264. 7wen zhuai zhu guan cha zi shi liu bian hua 。fang fa :ying yong ji yu PCRjing que ge cheng mRFP-eGFPph-LC3ratrong ge quan ji yin ,jiang ji ke long zhi man bing du biao da zai ti PCDH-CMV-MCS-EF1a-GFPzhong ,chong zu zhi li jing jun la PCR、mei qie ji ce xu fen xi zheng que mo wu hou ,bao zhuang man bing du ,zhuai ran Raw264. 7xi bao ,bing li yong liu shi fen shua shu huo qu wen zhuai zhu ,jing lv kui yi zhi zi shi mo xing ji Western blotjian ding eGFPdan bai biao da que ren ji ke kao xing 。jie guo :cheng gong gou jian le PCDH-Duochong zu man bing du zhi li ,bao bei man bing du bing huo de Raw264. 7wen ding xi bao ji （Raw264. 7-PCDHDuo）,ke wen ding biao da shuang ying guang dan bai ,jing 3mmol/Llv kui zuo yong 6hhou ,neng gou wen ding zhun que zhi shi zi shi liu bian hua 。jie lun :cheng gong gou jian le ji yu man bing du ji tong de shuang ying guang biao ji duo gong neng zi shi liu jian ce ji tong ,wei yan jiu xi bao zi shi yu bian ma ji yin ji fei bian ma ji yin zhi jian de guan ji di gong le fang bian you li de gong ju 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自中国生物工程杂志的马占兵,党洁,杨继辉,霍正浩,徐广贤，发表于刊物中国生物工程杂志2019年05期论文，是一篇关于自噬流论文,载体构建论文,慢病毒论文,中国生物工程杂志2019年05期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自中国生物工程杂志2019年05期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
标签：自噬流论文; 载体构建论文; 慢病毒论文; 中国生物工程杂志2019年05期论文;