本文主要研究内容
作者郭思呈（2019）在《斑马鱼ANO1蛋白的基因克隆、真核表达及细胞功能初鉴》一文中研究指出：钙激活的氯离子通道（calcium-activated chloride channels,CaCCs）是一类在多种细胞中广泛表达的阴离子通道蛋白,并介导一系列重要的生理功能。本研究以斑马鱼受精卵为实验材料,通过PCR的方法成功克隆得到斑马鱼ANO1（zeb-ANO1）基因CDS区序列,并利用生物信息学手段对其进行了系统分析,选取了22个不同物种的ANO1氨基酸序列进行了同源性分析,使用N-J法建立了物种进化树。构建了zeb-ANO1的慢病毒过表达载体,稳定转染至Fisher大鼠甲状腺上皮（FRT）细胞,分别在mRNA和蛋白水平上检测了其过表达效率。通过qPCR、Western blot的方法检测了zeb-ANO1蛋白在斑马鱼各组织中的分布情况;利用免疫荧光实验检测了zeb-ANO1蛋白在细胞中的表达与定位情况。通过短路电流实验测定了zeb-ANO1蛋白的电生理学特性,同时验证了CaCCs的抑制剂和激活剂对zeb-ANO1活性的影响。生物信息学预测结果显示,zeb-ANO1蛋白氨基酸序列全长925aa,具有9次跨膜结构;含有多个活性功能位点,包括磷酸化位点、糖基化位点等;zeb-ANO1蛋白的跨膜区域多为α-螺旋构象,组成螺旋桶状;不同物种ANO1蛋白的跨膜域保守性较高,N端和C端的胞内域变化较大;ANO1蛋白的进化过程与生物学物种进化相符。实验结果表明,zeb-ANO1蛋白在斑马鱼的心脏、肝脏、肾脏、腮腺、肠道、脾脏、肌肉中均有表达,其中在肾脏、腮腺、肠道、脾脏这些具有液体分泌功能的组织中表达量更高;zeb-ANO1的慢病毒真核过表达载体被构建成功,并获得稳定转染的FRT细胞;zeb-ANO1蛋白主要定位在细胞膜和细胞质;其蛋白活性由钙离子激活,CaCCs的经典抑制剂CaCCinh-A01和ANO1激活剂Eact对zeb-ANO1活性的影响与已验证的其他CaCCs通道相似。综上,斑马鱼ANO1蛋白在分子结构和功能表达等诸多方面均与现已知的其他物种ANO1蛋白相似,因而认为zeb-ANO1蛋白的分子功能也是CaCC。本研究首次将ANO1蛋白及其分子身份研究从较原始的两栖类前推至更原始的硬骨鱼类,为ANO1蛋白及其分子身份的进化研究奠定了实验基础并提供了理论线索。
Abstract
gai ji huo de lv li zi tong dao （calcium-activated chloride channels,CaCCs）shi yi lei zai duo chong xi bao zhong an fan biao da de yin li zi tong dao dan bai ,bing jie dao yi ji lie chong yao de sheng li gong neng 。ben yan jiu yi ban ma yu shou jing luan wei shi yan cai liao ,tong guo PCRde fang fa cheng gong ke long de dao ban ma yu ANO1（zeb-ANO1）ji yin CDSou xu lie ,bing li yong sheng wu xin xi xue shou duan dui ji jin hang le ji tong fen xi ,shua qu le 22ge bu tong wu chong de ANO1an ji suan xu lie jin hang le tong yuan xing fen xi ,shi yong N-Jfa jian li le wu chong jin hua shu 。gou jian le zeb-ANO1de man bing du guo biao da zai ti ,wen ding zhuai ran zhi Fisherda shu jia zhuang xian shang pi （FRT）xi bao ,fen bie zai mRNAhe dan bai shui ping shang jian ce le ji guo biao da xiao lv 。tong guo qPCR、Western blotde fang fa jian ce le zeb-ANO1dan bai zai ban ma yu ge zu zhi zhong de fen bu qing kuang ;li yong mian yi ying guang shi yan jian ce le zeb-ANO1dan bai zai xi bao zhong de biao da yu ding wei qing kuang 。tong guo duan lu dian liu shi yan ce ding le zeb-ANO1dan bai de dian sheng li xue te xing ,tong shi yan zheng le CaCCsde yi zhi ji he ji huo ji dui zeb-ANO1huo xing de ying xiang 。sheng wu xin xi xue yu ce jie guo xian shi ,zeb-ANO1dan bai an ji suan xu lie quan chang 925aa,ju you 9ci kua mo jie gou ;han you duo ge huo xing gong neng wei dian ,bao gua lin suan hua wei dian 、tang ji hua wei dian deng ;zeb-ANO1dan bai de kua mo ou yu duo wei α-luo xuan gou xiang ,zu cheng luo xuan tong zhuang ;bu tong wu chong ANO1dan bai de kua mo yu bao shou xing jiao gao ,Nduan he Cduan de bao nei yu bian hua jiao da ;ANO1dan bai de jin hua guo cheng yu sheng wu xue wu chong jin hua xiang fu 。shi yan jie guo biao ming ,zeb-ANO1dan bai zai ban ma yu de xin zang 、gan zang 、shen zang 、sai xian 、chang dao 、pi zang 、ji rou zhong jun you biao da ,ji zhong zai shen zang 、sai xian 、chang dao 、pi zang zhe xie ju you ye ti fen bi gong neng de zu zhi zhong biao da liang geng gao ;zeb-ANO1de man bing du zhen he guo biao da zai ti bei gou jian cheng gong ,bing huo de wen ding zhuai ran de FRTxi bao ;zeb-ANO1dan bai zhu yao ding wei zai xi bao mo he xi bao zhi ;ji dan bai huo xing you gai li zi ji huo ,CaCCsde jing dian yi zhi ji CaCCinh-A01he ANO1ji huo ji Eactdui zeb-ANO1huo xing de ying xiang yu yi yan zheng de ji ta CaCCstong dao xiang shi 。zeng shang ,ban ma yu ANO1dan bai zai fen zi jie gou he gong neng biao da deng zhu duo fang mian jun yu xian yi zhi de ji ta wu chong ANO1dan bai xiang shi ,yin er ren wei zeb-ANO1dan bai de fen zi gong neng ye shi CaCC。ben yan jiu shou ci jiang ANO1dan bai ji ji fen zi shen fen yan jiu cong jiao yuan shi de liang qi lei qian tui zhi geng yuan shi de ying gu yu lei ,wei ANO1dan bai ji ji fen zi shen fen de jin hua yan jiu dian ding le shi yan ji chu bing di gong le li lun xian suo 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自辽宁师范大学的郭思呈，发表于刊物辽宁师范大学2019-07-15论文，是一篇关于斑马鱼论文,钙离子激活的氯离子通道论文,慢病毒载体论文,辽宁师范大学2019-07-15论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自辽宁师范大学2019-07-15论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。