马红丽1于燕1李慕白1王丽2王秀霞1
(1黑龙江中医药大学附属第一医院150000)
(2黑龙江中医药大学07级中医七年制专业150000)
【摘要】目的研究祛瘀生新法代表方剂生化止血饮对药流后蜕膜中子宫自然杀伤细胞（uNK）表达的影响，探讨其减少药物流产后出血的机制。方法将80例纳入病例随机分为4组，应用免疫组化方法检测蜕膜组织中子宫自然杀伤细胞（uNK）的表达。结果生化止血饮能够显著降低蜕膜组织中uNK的表达。生化止血饮组与负压吸宫组、单纯药物流产组及益母草组相比差异显著，具有统计学意义（P<0.05）。结论生化止血饮可通过减少蜕膜组织中uNK细胞的数量，从而减少异常血管生成，阻止蜕膜组织生存，而达到止血的目的。
【关键词】生化止血饮药物流产子宫自然杀伤细胞
【中图分类号】R96【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2014）20-0057-01
米非司酮配伍米索前列醇是目前临床上最常用药物流产方式，是终止早期妊娠的一个安全有效的非手术的途径。而药物流产后出血时间长、出血量多是其最主要的并发症，其中蜕膜残留是导致药物流产后出血的最主要的原因。因中医药治疗药流后出血疗效显著，且有质优价廉、痛苦小、副作用少等优势，受到广大患者好评。全国名中医王秀霞教授根据多年临床经验总结的减少药物流产后出血的有效方剂生化止血饮，疗效显著。本实验研究生化止血饮对药物流产后子宫蜕膜组织中子宫自然杀伤细胞（uNK）表达的影响，以探讨生化止血饮调控药物流产后出血的机制。
1实验材料
1.1病例来源
2012年5月至2013年08月到黑龙江中医药大学附属第一医院妇科门诊自愿进行药物流产及人工流产的妇女。诊断标准符合：(1)停经49天以内；(2)尿妊娠试验阳性；(3)超声检查确诊为正常宫内妊娠，囊胚最大径线（AID）≤30mm；(4)具有终止妊娠的要求。
1.2药品
米非司酮及米索前列醇由北京紫竹药业有限公司提供；益母草颗粒由江阴天江药业有限公司提供；生化止血饮颗粒：当归、川芎、泽兰、山楂、红花、桃仁、炙甘草等，由江阴天江药业有限公司提供。
1.3病例分组
采取随机分组法，将纳入的80例研究对象，分为负压吸宫组、单纯药物流产组、益母草组、生化止血饮组，共四组，每组各20例。
2实验方法
2.1采用常规免疫组化二步法，获取组织切片。
3统计方法
3.1图像分析与处理
结果用MoticMed6.0数码医学图像分析系统进行分析。使用显微摄像系统，200倍镜下每张切片均随机选取5个视野，将图像输入计算机，选择免疫组化模块并通过灰度调节，区分视野内阳性信号面积，得出阳性目标总面积与统计场总面积比值，取其平均值±标准差（-X±S）进行统计分析。数值越大，阳性越强。
3.2统计学分析
实验结果采用SPSS17.0软件进行分析，所得计量数据资料用单因素方差分析，各组间比较用LSD-t检验。以P<0.05认为有显著差异，有统计学意义。P＞0.05无显著差异，无统计学意义。
4结果
4.1各组蜕膜中uNK细胞表面抗原CD56表达结果比较
经免疫组织化学法检测，从所采集图片中可以看出各组蜕膜细胞均有CD56的表达，其表达部位主要分布在细胞膜及细胞浆中，阳性表达呈黄色或棕黄色染色。结果见表1：
表1：各组流产蜕膜组织CD56表达比较
组别NCD56
负压吸宫组2010.23±2.35△
单纯药流组204.91±1.51
益母草组203.55±1.16*
生化止血饮组201.2±1.06▲
注：与单纯药流组比较*P<0.05；△P<0.05；▲P<0.05；与益母草组比较▲P<0.05
经过统计学分析结果显示生化止血饮组能显著降低CD56的阳性表达，与单纯药流组、负压吸宫组及益母草组比较差异具有统计学意义。
5讨论
5.1生化止血饮的现代药理学研究
当归的主要化学成分为挥发油、有机酸、多糖、黄酮等[1]。李曦等[2]认为当归的水提物为兴奋子宫的主要活性成分。川芎浸膏能增强子宫收缩,形成痉挛;大剂量反而使子宫麻痹,收缩停止。泽兰中能够增强子宫平滑肌收缩的作用[3]。还有研究发现山楂有收缩子宫、促进子宫复原的作用[4]。牛彩琴等[5]研究发现王不留行可作用于L钙通道和M型受体，使细胞内的Ca2+升高，促进子宫肌的收缩，从而发挥抗早孕的作用。吴建华等[6]发现炮姜水煎液可显著缩短小鼠出血时间和凝血时间。
5.2生化止血饮抑制蜕膜异常血管生成
uNK细胞是妊娠后子宫内膜中增加最明显的免疫职能细胞，占蜕膜免疫细胞的75%，又名大颗粒淋巴细胞，主要存在于人类子宫内膜分泌期及早孕期蜕膜。正常妊娠时，uNK细胞对胚胎的双重作用处于一种平衡状态，这种平衡倾向于使子宫免疫微环境有利用胚胎的免疫营养作用，任何因素破坏了这种平衡，均可激发uNK的活性，使其免疫杀伤作用增强，表现为免疫排斥作用而导致流产的发生。李国华等[7]研究发现人类蜕膜的uNK细胞能够表达VEGFmRNA,认为uNK细胞通过表达VEGF,在蜕膜化过程和胎盘早期形成时的血管生成中发挥重要作用。胡婷等[8]研究发现uNK细胞及VEGF在早期自然流产蜕膜间质中的阳性表达率明显降低,蜕膜微血管数量明显减少,并出现狭窄、闭锁，甚至断裂，血管内皮细胞肿胀，排列紊乱等微血管异常。
正常妊娠时Ｐ通过孕酮诱导的封闭因子（PIBF）抑制母体对胚胎的免疫排斥反应。封闭因子能抑制NK细胞的活性，使其发挥免疫营养作用。米非司酮与P竞争PR，使P无法发挥其生物学作用，PIBF对uNK活性的抑制作用减弱，uNK细胞活性增强，发生免疫排斥反应，从而导致流产。而米非司酮对PR的封闭不全，使残余的PR与P结合，抑制uNK细胞的活性，而发挥免疫营养作用分泌VEGF等促进血管异常生成，从而导致蜕膜剥脱不全。
本实验以uNK细胞表面抗原CD56为实验指标，发现生化止血饮可明显降低药物流产后残留蜕膜组织中的CD56的表达，且疗效优于益母草组。证实生化止血饮能够减少uNK细胞数量，减少异常血管生成，促进蜕膜排出。
参考文献
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[2]李曦，张丽宏，王晓晓等.当归化学成分及药理作用研究进展[J].中药材，2013,36（6）:1023-1028
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[7]李国华，黄薇，夏庆杰等.子宫自然杀伤细胞在人类早孕蜕膜血管生成中的作用研究[J].中国科学，2007,37（6）：652-659
[8]胡婷，黄薇，朱慧莉等.子宫自然杀伤细胞与人类早期自然流产患者蜕膜血管生成[J].中华妇幼临床医学杂志，2009,5（5）：505-509
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