导读:本文包含了改变培养条件论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:干细胞,组织工程,碱性磷酸酶,脂肪干细胞
改变培养条件论文文献综述
孙仕晨,董腾哲,黄昕,张云龙,陈刚[1]（2016）在《Transwell共培养条件下诱导脂肪干细胞成骨能力的改变》一文中研究指出背景:在共培养条件下,间充质干细胞可调节成骨细胞的分化和成骨能力。目的:研究成骨细胞前体与未分化的骨髓间充质干细胞、脐带间充质干细胞和胎盘间充质干细胞在矿化培养液中共培养对其成骨效能的影响。方法:脂肪干细胞成骨诱导7 d后获得诱导后的脂肪干细胞,将其分别与上述骨髓、其脐带和胎盘来源的间充质干细胞在Transwell小室中进行间接共培养。实验组根据间充质干细胞种类不同将其分为骨髓来源组、脐带来源组和胎盘来源组,对照组为诱导后的脂肪干细胞单独培养。在不同实验间期通过检测碱性磷酸酶活性以及定量分析钙基质沉积情况,观察不同组织来源的间充质干细胞对诱导后脂肪干细胞成骨效能的影响。结果与结论:(1)碱性磷酸酶表达活性:间接共培养条件下实验组各组碱性磷酸酶活性显着高于对照组(P<0.05),实验组中骨髓来源组碱性磷酸酶活性高于脐带来源组和胎盘来源组(P<0.05);(2)钙化基质定量分析:实验组各组均显着高于对照组(P<0.05),实验组中脐带来源组高于骨髓来源组和胎盘来源组(P<0.05);(3)结果表明:诱导后的脂肪干细胞在间接共培养条件下受间充质干细胞的调节成骨能力明显提高。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2016年28期）
孙仕晨[2]（2016）在《共培养条件下脂肪干细胞成骨能力的改变》一文中研究指出目的以体外培养的经成骨诱导后的脂肪间充质干细胞(i ASCs)为研究对象,观察i ASCs分别与骨髓间充质干细胞(BMSCs)、脐带间充质干细胞(UC-MSCs)、胎盘间充质干细胞(PDMSCs)共同培养时,i ASCs成骨能力的变化。初步探究体内MSCs对骨祖细胞分化的调节作用。材料和方法1、ASCs提取无菌条件下吸取新鲜的人皮下吸脂术所得的脂肪组织20m L,PBS冲洗,向脂肪组织悬液中加入I型胶原酶进行震荡消化,通过贴壁法获得原代ASCs。DMEM/F-12培养液中原代培养7天,每3天换液一次,融合度达到70%-80%时传代,应用含0.02%EDTA的0.25%胰蛋白酶消化,计数。2、cck-8检测ASCs、BMSCs、UC-MSCs和PDMSCs在0-7天时的增殖曲线。3、实验分组直接共培养组:取生长良好的第3代ASCs,于成骨诱导培养液中进行7天诱导(i ASCs)。经0.25%胰蛋白酶消化后,调整i ASCs密度至2×104/ml。将BMSCs、UC-MSCs和PDMSCs,0.25%胰酶消化,调整各MSCs密度至1×104/ml。将100μL i ASCs分别与100μL的BMSCs、UC-MSCs和PDMSCs混合加入96孔板,设实验组,即为d-BMSCs组、d-UC-MSCs组和d-PDMSCs组,每组设6复孔。对照组为3×103个i ASCs单独接种于96孔板,所设复孔数如实验组。在不同的时间间期,检测各组细胞磷酸酶活性和浓度。另设上述四组细胞,每组6孔,检测不同时间间期各组细胞矿化基质形成情况。所有细胞在24h后更换为矿化培养液。间接共培养组:生长良好的i ASCs经消化后,细胞密度如上组。将100μL i ASCs含细胞2×103个加入96孔板中,分别用BMSCs、UC-MSCs和PDMSCs的条件培养液培养,设为实验组,即为ind-BMSCs组、ind-UC-MSCs组和ind-PDMSCs组,24h后各组更换为相对应的条件培养液。对照组为2×103个i ASCs培养于96孔板,为ind-i ASCs。上述四组细胞,每组6孔,检测各组细胞磷酸酶活性和浓度。另设上述四组细胞,每组6孔,检测不同时间间期各组细胞矿化基质形成情况。4、检测分析将上述96孔板置于细胞培养箱内培养,分别于第3,5,7,10,12,14天的同一时间点,每组取6孔,利用碱性磷酸酶试剂盒操作要求测定四组细胞光密度(OD)值,计数其碱性磷酸酶浓度和活性。分别于第7,10,12,14天的同一时间点,每组取6孔,利用茜素红进行染色。同时利用茜素红染料可溶于氯化十六烷基吡啶(cetylpyridinium chloride,CPC)溶液重新析出的特点,定量分析矿化基质形成情况。实验所得数据利用SPSS 20.0软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA),以P<0.05为差异具有统计学意义。结果1、对于提取的ASCs,细胞具有类似成纤维细胞的形态,具有典型的MSCs相关表面分子,同时具有向中胚层组织分化的潜能。BMSCs、UC-MSCs和PDMSCs与ASCs具有相似的形态。通过绘制增殖曲线可知,增值能力UC-MSCs>PDMSCs>ASCs>BMSCs。2、ALP表达情况,不同组织来源的MSCs表现有差别。在直接共培养时,BMSCs促进i ASCs表达ALP的能力最强,其表达水平和活性均为最高,显着高于其他两种MSCs。UC-MSCs组和PDMSCs组表现相近。在间接共培养时,UC-MSCs和PDMSCs条件培养液促进i ASCs表达ALP的能力强于BMSCs。3、矿化基质形成情况,不同组织来源的MSCs同样表现不同。共培养时各实验组均高于对照组。在直接共培养时,PDMSCs组在各时间点矿化基质形成最多,UC-MSCs组矿化基质形成多于BMSCs组,但无统计学差异。在间接共培养组中,UC-MSCs条件培养液组矿化基质形成多于BMSCs和PDMSCs条件培养液组,PDMSCs条件培养液组多于BMSCs条件培养液组。结论1、采用胶原酶消化法获得的皮下脂肪来源的ASCs具有MSCs的特征。2、皮下脂肪来源的ASCs具有与BMSCs、UC-MSCs和PDMSCs相似的细胞形态,生长方式和增殖特性。3、ASCs经成骨诱导7天后获得的i ASCs具有与骨祖细胞(成骨细胞前体)相似的特征,可为骨组织工程研究提供充足的细胞来源。4、BMSCs、UC-MSCs和PDMSCs均可促进i ASCs向成骨细胞分化。又有各自不同的特点:BMSCs可促进并维持i ASCs高表达ALP,使i ASCs处于成骨早期阶段;UC-MSCs和PDMSCs在促进ALP表达方面能力弱于BMSCs,但UC-MSCs和PDMSCs可加快i ASCs向成骨细胞分化的速度,并可促进i ASCs分泌细胞外基质。5、BMSCs、UC-MSCs和PDMSCs通过直接或间接接触均可调节i ASCs向成骨细胞分化,但其中直接接触调节起主要作用,直接接触时所形成的ALP和矿化基质多于间接接触时所形成的量。6、无论是否接触,共培养状态下促进i ASCs向成骨细胞分化的能力均比单独培养强。MSCs在调控骨祖细胞向成骨细胞分化过程中起重要作用。(本文来源于《天津医科大学》期刊2016-05-01）
王倩,熊永洁,张苏明,甘莉,李珍[3]（2014）在《离体神经干细胞氧糖剥夺模型的建立及改变培养条件对神经干细胞的影响分析》一文中研究指出目的:建立离体神经干细胞(NSCs)氧糖剥夺(OGD)模型,并观察缺氧、缺糖等不同培养条件对NSCs存活和增殖的影响。方法:体外培养小鼠NSCs,制备OGD模型。将NSCs分为OGD组和正常组,每组分别干预2、4、6、8、10 h。采用MTT法检测OGD干预不同时间对NSCs活性的影响。通过MTT法观察正常培养、单独缺氧、单独缺糖、缺氧缺糖、高糖各组干预8 h对NSCs活性的影响。结果:OGD组干预8、10 h的NSCs OD值低于相应时点的正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。单独缺氧、单独缺糖、缺氧缺糖、高糖培养组的NSCs OD值均低于正常对照组(P<0.05)。单独缺糖、高糖培养组与氧糖剥夺组的NSCs OD值比较,差异无统计学意义。结论:OGD≥8 h对NSCs造成明显的损伤。缺糖是OGD模型造成NSCs损伤的主要因素。葡萄糖浓度是影响NSCs存活和增殖的关键培养条件。(本文来源于《神经损伤与功能重建》期刊2014年02期）
瞿娟娟[4]（2014）在《不同来源空肠弯曲菌在4℃饥饿条件下能否进入活的但非可培养状态及其形态随时间的改变》一文中研究指出目的：1本实验室保存的不同来源空肠弯曲菌在4℃饥饿条件下在35天的观察期内能否进入活的但非可培养状态。2观察本实验室保存的不同来源空肠弯曲菌在4℃饥饿条件下在35天的观察期内其革兰染色形态随时间的变化。方法:1空肠弯曲菌菌株的复苏和传代：取自神经病学实验室（河北医科大学第二医院）-80℃冰箱中保存的格林-巴利综合征患者分离培养出的空肠弯曲菌菌株LC株，lulei株，由鸡粪便中分离培养出的chicken株和非GBS源的NCTC11168株，待冻存的菌株自然消融后，接种于哥伦比亚血平板（含7%无菌脱纤维羊血）上，放置于42℃微需氧（10%CO2、5%O2、85%N2）条件的叁气培养箱中，所有菌株培养24小时对应的P1代菌株回收，取P1代菌落叁区划线接种于含7%无菌脱纤维羊血的哥伦比亚血平板上，放置于叁气培养箱，42℃微需氧（10%CO2、5%O2、85%N2）条件下，培养24小时获得各菌株相应的P2代菌株，取P2代菌落叁区划线接种法接种于含7%无菌脱纤维羊血的哥伦比亚血平板培养基上，置于叁气培养箱，42℃微需氧（10%CO2、5%O2、85%N2）条件下，培养24小时得到各菌株相应的P3代菌株。2鉴定空肠弯曲菌：革兰染色法显示菌株为革兰阴性杆状菌，马尿酸水解试验结果显示为阳性。3收菌用无菌接种环分别刮取4株空肠弯曲菌少量P3代细菌于盛有3ml PBS（PH为7.2+-0.1）液的无菌西林瓶内，振荡器振荡充分摇匀制成菌悬液，每株菌株做4个备份菌悬液并做好记号，所有的菌悬液浓度用细菌浊度仪定量在3*108cfu/ml。4饥饿状态：将上述盛有菌悬液的无菌西林瓶置于4℃冰箱内，不需要振荡。5分别在菌悬液置于冰箱内的第0天，第5天，第10天......用CTC-DAPI双染法计数总的细菌数，活细菌数，平板直接计数法（HPC）计数可培养细菌数。分别对每株空肠弯曲菌的一个备份同时计数总细菌数，活细菌数及可培养细菌数。6平板直接计数法用无菌双蒸水连续稀释的菌悬液样本（0.1ml）一式叁份接种到含7%无菌脱纤维羊血的哥伦比亚血平板培养基上。微需氧（10%CO2、5%O2、85%N2）42℃条件下孵育48h，计数在适当的稀释度下的CFUs，并可以计数原来起初的样本中的CFUs。当可培养细胞少于300/ml时，0.1ml水样本涂布在10个含5%马血的哥伦比亚血平板培养皿上。7CTC-DAPI双染法在相应的时间点，取出来自空肠弯曲菌悬浮液中的样本并根据Cappelier et al.(1997)技术用CTC和DAPI染色细胞。为了激发细胞呼吸，0.5ml脑心浸液和100μl的0.05g/mL丙酮酸溶液加入到要进行分析的0.5ml菌悬液中。CTC用双蒸水稀释到最终浓度即5mmol/L,然后混合液在微需氧42℃下孵育4h。接着细胞会经多聚黑碳膜过滤（0.2μm/孔，直径25mm），并用5μg/mL DAPI液覆盖5min，目的是复染。最后，染色剂会被真空抽滤，在盖玻片盖上前会滴上非荧光的油。405nm的激发滤光片和455nm二色镜的Olympus BX53荧光显微镜来观察，这样可以同时看到这两种染色。随机计数每个滤片的20个显微视野。每个样本，计数4个滤片。呼吸的细胞计数RCCs显示CTC甲腊晶体，总细胞计数TCCs是用DAPI染色的。结果可以换成相应的原始样本中每mL细菌数，并可以计算出RCCs和TCCs的比例。实验一式叁份进行。8根据菌株的状态计数（细菌总数，和培养的菌数的活菌数）绘制随时间变化的曲线，当平板计数（HPC）计数活细胞数不为零时，细菌便进入了VBNC状态。9相应时间点，取平板计数法后平板上生长的单菌落，进行革兰染色。在相应的时间点，于干净的载玻片上滴一小滴生理盐水，用接种环挑取单菌落于生理盐水中涂布均匀；自然干燥室温；在酒精灯火焰幻灯片固定3~4次，每次1~2S；将载玻片置于支架上，顺次使用结晶紫1min，自来水冲刷，卢戈氏碘液1min，自来水冲洗，95%酒精脱色0.5min，自来水冲洗，稀释复红1min，自来水冲洗（每次自来水充分冲洗）。于室温自然干燥后用1000倍油镜观察。结果：1检测的4株空肠弯曲菌菌株在35天观察期均进入了活的但非可培养（VBNC）状态。2空肠弯曲菌lulei菌株的VBNC状态在饥饿20天后进入了活的但非可培养（VBNC）状态。3空肠弯曲菌11168，lc，chicken菌株VBNC状态在25天后进入了活的但非可培养（VBNC）状态。4被观察的4株空肠弯曲菌显示出了空肠弯曲菌在4℃PBS液中出现不同形态改变。空肠弯曲菌11168,chicken，LC菌株在25天的观察期其形态经历了杆状与球状相互转化，空肠弯曲菌11168菌株在第0天革兰染色呈现出红色杆菌，到第11天可见到大部分革兰染色呈现出红色球菌，第21天开始革兰染色呈现出红色杆菌。空肠弯曲菌Lc菌株在第0天革兰染色呈现出红色杆菌，在第10天开始革兰染色呈现出红色球状，第14天革兰染色呈现出红色短杆状菌，第20天革兰染色呈现出红色杆菌。空肠弯曲菌chicken菌株在第0天革兰染色呈现出红色杆菌，在第15天变革兰染色呈现出红色球菌，第20天杆菌。空肠弯曲菌Lulei菌株在第0天革兰染色呈现出红色杆菌，在第11天革兰染色呈现出紫色球菌。结论：1检测的4株空肠弯曲菌菌株在35天观察期均进入了活的但非可培养（VBNC）状态。其中空肠弯曲菌lulei菌株的VBNC状态在饥饿20天后进入了活的但非可培养（VBNC）状态。空肠弯曲菌11168，lc，chicken菌株VBNC状态在25天后进入了活的但非可培养（VBNC）状态。2空肠弯曲菌11168,chicken，LC菌株在25天的观察期其形态经历了杆状与球状相互转化，空肠弯曲菌11168菌株在第0天革兰染色呈现出红色杆菌，到第11天可见到大部分革兰染色呈现出红色球菌，第21天开始革兰染色呈现出红色杆菌。空肠弯曲菌Lc菌株在第0天革兰染色呈现出红色杆菌，在第10天开始革兰染色呈现出红色球状，第14天革兰染色呈现出红色短杆状菌，第20天革兰染色呈现出红色杆菌。空肠弯曲菌chicken菌株在第0天革兰染色呈现出红色杆菌，在第15天变革兰染色呈现出红色球菌，第20天杆菌。空肠弯曲菌Lulei菌株在第0天革兰染色呈现出红色杆菌，在第11天革兰染色呈现出紫色球菌。(本文来源于《河北医科大学》期刊2014-03-01）
刘凤彩,吕建明,吴秀祯,张卫[5]（2013）在《诱导培养条件显着改变甘草愈伤组织次生代谢产物的多样性》一文中研究指出采用化学分析和高效液相色谱(HPLC)相结合的方法评价典型愈伤组织诱导培养条件对甘草愈伤组织次生代谢产物多样性的影响,这些诱导培养条件包括甘草种属(胀果甘草和光果甘草)、外植体(胚轴和子叶)、光照条件(24 h光照和24 h黑暗)和2种激素组合。以化学成分总黄酮为指标,采用单因素方差分析法(One-way ANOVA)评价不同诱导培养条件下获得的甘草愈伤组织的总黄酮含量,结果显示甘草种属、外植体和光照条件对甘草愈伤组织中总黄酮的含量影响显着(P<0.05)。采用HPLC指纹图谱的差异度评价不同诱导培养条件对甘草愈伤组织次生代谢产物多样性的影响发现:诱导培养条件对愈伤组织的次生代谢产物的多样性有显着影响,激素组合(差异度=0.37)和光照条件(差异度=0.45)对甘草愈伤组织次生代谢产物的多样性影响最大。上述结果对选择合适的愈伤组织和细胞系培养生产甘草药用次生代谢产物或活性组分具有重要的指导意义。(本文来源于《中国中药杂志》期刊2013年23期）
杨晶,李天航,熊立东,付宏歧,李校堃[6]（2010）在《外界条件的改变对红花离体培养的影响》一文中研究指出目的研究外界培养条件的变化对红花离体培养过程中不同发育阶段培养物的影响。方法以红花种子诱导的无菌苗子叶为外植体,分别接种至含有不同碳氮源、不同PH值、不同温度、不同湿度和不同光照的培养基中,观察其生长情况。结果通过实验筛选出蔗糖浓度为3%,KNO3浓度为MS培养基中KNO3浓度的2倍,最佳pH为6.2,红花离体培养体系在24℃,30%的相对湿度,16 h光照,8 h黑暗交替培养的条件下,最利于红花的分化。结论3%的蔗糖作为碳源,最适合愈伤组织的生长;2倍于MS培养基中的KNO3含量有利于愈伤组织的生长和不定芽的分化;pH值为6.2时,最适宜红花不同阶段培养物的生长;24℃为红花离体培养的最适温度,生根时的温度为21℃较好;湿度为50%时,适于愈伤组织鲜重积累,30%的湿度适于不定芽分化和生根;黑暗培养利于鲜重积累,16 h光照,8 h黑暗交替培养有利于不定芽的分化,8 h光照,16 h黑暗交替培养有利于生根。(本文来源于《时珍国医国药》期刊2010年03期）
吴祖芳,堵国成,陈坚[7]（2005）在《从代谢流量分析角度探讨培养条件改变下对放射型根瘤菌WSH2601合成辅酶Q_(10)的影响》一文中研究指出分析了放射型根瘤菌 (R .radiobacter)WSH2 6 0 1生物合成辅酶Q1 0 的代谢途径网络 ,并在溶氧条件改变和培养基中添加玉米浆条件下对辅酶Q1 0 发酵细胞内代谢途径流量变化作定量的分析 ,结果表明 :提高溶氧浓度 (2 0 % ) 5_磷酸核酮糖 (Ru5P)物流 (r7)增加 2 6 6 ,即糖酵解途径 (EMP)途径向磷酸戊糖途径 (HMP)转移 ;添加 1%玉米浆r7增加17 2 ,EMP与HMP途径物流比值与叁羧酸循环 (TCA)途径物流都下降 ,而癸异戊烯基焦磷酸 (DPP)生成物流通量 (绝对值 )变化都较小 ,即辅酶Q1 0 的生物合成更大程度地取决于辅酶Q1 0 生物合成途径中催化DPP的合成和 4_羟基苯甲酸(PHB)与DPP的缩合反应的两种关键酶活性。 6_磷酸葡萄糖 (G6P)节点是辅酶Q1 0 生物合成代谢途径的柔性节点 ,而丙酮酸节点是半柔性节点。细胞生物量的提高与HMP途径物流增加有关。(本文来源于《微生物学报》期刊2005年02期）
孙峰,丁艳,郭爱英[8]（2004）在《改变Vero细胞培养条件对狂犬病毒收率的影响》一文中研究指出目的 为了获得较大的狂犬病毒收获量。方法 利用 15L培养瓶旋转培养Vero细胞 ,观察不同培养条件下 ,对细胞形态及病毒释放的影响。结果 发现在改变培养条件的情况下 ,多加入 199培养基 ,不影响细胞的生长及狂犬病毒的毒力滴度 (LD50 ) ,而增加了狂犬病毒收获量。结论 此方法可以增加狂犬病毒收率。(本文来源于《泰山医学院学报》期刊2004年04期）
吴利平[9]（2000）在《改变命题条件探索结论培养学生的发散思维》一文中研究指出在教学实践中，我们发现学生在解题时，常常是去寻找熟知的相似题型获取解题方法．倘若对命题形式或命题条件作出某种改变，往往就显得束手无策，不知从何入手．本文仅就改变教材中一习题的条件，启发学生，探索性地寻求结论进行剖析，以期能激发学生的求知欲和进取精神，培养(本文来源于《黔东南民族师专学报》期刊2000年03期）
郑赞源[10]（1981）在《改变和引伸命题的条件培养学生能力》一文中研究指出在数学教学中,引导学生去研究和发现新问题,是培养学生分析问题和解决问题的能力不可缺少的方面。现在就命题条件的改变与引伸的研究谈几个例子。例一、等腰叁角形底边上任意一点到两腰的距离之和等于腰上的高。如下图,在△ABC中,AB=AC,P是BC边上任一点,PD⊥AB,PE⊥AC,CF⊥AB。求证:PD+PE=CF。这个问题的证明一般可以通过△ABC的面积=△APB的面积+△APC的面积(本文来源于《数学教学通讯》期刊1981年06期）
改变培养条件论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的以体外培养的经成骨诱导后的脂肪间充质干细胞(i ASCs)为研究对象,观察i ASCs分别与骨髓间充质干细胞(BMSCs)、脐带间充质干细胞(UC-MSCs)、胎盘间充质干细胞(PDMSCs)共同培养时,i ASCs成骨能力的变化。初步探究体内MSCs对骨祖细胞分化的调节作用。材料和方法1、ASCs提取无菌条件下吸取新鲜的人皮下吸脂术所得的脂肪组织20m L,PBS冲洗,向脂肪组织悬液中加入I型胶原酶进行震荡消化,通过贴壁法获得原代ASCs。DMEM/F-12培养液中原代培养7天,每3天换液一次,融合度达到70%-80%时传代,应用含0.02%EDTA的0.25%胰蛋白酶消化,计数。2、cck-8检测ASCs、BMSCs、UC-MSCs和PDMSCs在0-7天时的增殖曲线。3、实验分组直接共培养组:取生长良好的第3代ASCs,于成骨诱导培养液中进行7天诱导(i ASCs)。经0.25%胰蛋白酶消化后,调整i ASCs密度至2×104/ml。将BMSCs、UC-MSCs和PDMSCs,0.25%胰酶消化,调整各MSCs密度至1×104/ml。将100μL i ASCs分别与100μL的BMSCs、UC-MSCs和PDMSCs混合加入96孔板,设实验组,即为d-BMSCs组、d-UC-MSCs组和d-PDMSCs组,每组设6复孔。对照组为3×103个i ASCs单独接种于96孔板,所设复孔数如实验组。在不同的时间间期,检测各组细胞磷酸酶活性和浓度。另设上述四组细胞,每组6孔,检测不同时间间期各组细胞矿化基质形成情况。所有细胞在24h后更换为矿化培养液。间接共培养组:生长良好的i ASCs经消化后,细胞密度如上组。将100μL i ASCs含细胞2×103个加入96孔板中,分别用BMSCs、UC-MSCs和PDMSCs的条件培养液培养,设为实验组,即为ind-BMSCs组、ind-UC-MSCs组和ind-PDMSCs组,24h后各组更换为相对应的条件培养液。对照组为2×103个i ASCs培养于96孔板,为ind-i ASCs。上述四组细胞,每组6孔,检测各组细胞磷酸酶活性和浓度。另设上述四组细胞,每组6孔,检测不同时间间期各组细胞矿化基质形成情况。4、检测分析将上述96孔板置于细胞培养箱内培养,分别于第3,5,7,10,12,14天的同一时间点,每组取6孔,利用碱性磷酸酶试剂盒操作要求测定四组细胞光密度(OD)值,计数其碱性磷酸酶浓度和活性。分别于第7,10,12,14天的同一时间点,每组取6孔,利用茜素红进行染色。同时利用茜素红染料可溶于氯化十六烷基吡啶(cetylpyridinium chloride,CPC)溶液重新析出的特点,定量分析矿化基质形成情况。实验所得数据利用SPSS 20.0软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA),以P<0.05为差异具有统计学意义。结果1、对于提取的ASCs,细胞具有类似成纤维细胞的形态,具有典型的MSCs相关表面分子,同时具有向中胚层组织分化的潜能。BMSCs、UC-MSCs和PDMSCs与ASCs具有相似的形态。通过绘制增殖曲线可知,增值能力UC-MSCs>PDMSCs>ASCs>BMSCs。2、ALP表达情况,不同组织来源的MSCs表现有差别。在直接共培养时,BMSCs促进i ASCs表达ALP的能力最强,其表达水平和活性均为最高,显着高于其他两种MSCs。UC-MSCs组和PDMSCs组表现相近。在间接共培养时,UC-MSCs和PDMSCs条件培养液促进i ASCs表达ALP的能力强于BMSCs。3、矿化基质形成情况,不同组织来源的MSCs同样表现不同。共培养时各实验组均高于对照组。在直接共培养时,PDMSCs组在各时间点矿化基质形成最多,UC-MSCs组矿化基质形成多于BMSCs组,但无统计学差异。在间接共培养组中,UC-MSCs条件培养液组矿化基质形成多于BMSCs和PDMSCs条件培养液组,PDMSCs条件培养液组多于BMSCs条件培养液组。结论1、采用胶原酶消化法获得的皮下脂肪来源的ASCs具有MSCs的特征。2、皮下脂肪来源的ASCs具有与BMSCs、UC-MSCs和PDMSCs相似的细胞形态,生长方式和增殖特性。3、ASCs经成骨诱导7天后获得的i ASCs具有与骨祖细胞(成骨细胞前体)相似的特征,可为骨组织工程研究提供充足的细胞来源。4、BMSCs、UC-MSCs和PDMSCs均可促进i ASCs向成骨细胞分化。又有各自不同的特点:BMSCs可促进并维持i ASCs高表达ALP,使i ASCs处于成骨早期阶段;UC-MSCs和PDMSCs在促进ALP表达方面能力弱于BMSCs,但UC-MSCs和PDMSCs可加快i ASCs向成骨细胞分化的速度,并可促进i ASCs分泌细胞外基质。5、BMSCs、UC-MSCs和PDMSCs通过直接或间接接触均可调节i ASCs向成骨细胞分化,但其中直接接触调节起主要作用,直接接触时所形成的ALP和矿化基质多于间接接触时所形成的量。6、无论是否接触,共培养状态下促进i ASCs向成骨细胞分化的能力均比单独培养强。MSCs在调控骨祖细胞向成骨细胞分化过程中起重要作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
改变培养条件论文参考文献
[1].孙仕晨,董腾哲,黄昕,张云龙,陈刚.Transwell共培养条件下诱导脂肪干细胞成骨能力的改变[J].中国组织工程研究.2016
[2].孙仕晨.共培养条件下脂肪干细胞成骨能力的改变[D].天津医科大学.2016
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