导读:本文包含了重组猪痘病毒论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:鸡痘病毒载体,GFP基因,重组病毒包装
重组猪痘病毒论文文献综述
郑阳臣,尹丽娟,刘大才[1]（2019）在《表达绿色荧光蛋白的重组鸡痘病毒的构建》一文中研究指出[目的]旨在构建表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组鸡痘病毒。[方法]使用overlap PCR进行表达载体质粒的构建,使用菌液PCR和测序技术进行了鉴定;使用鸡胚成纤维细胞作为重组鸡痘病毒同源重组的介质,尝试了可能影响重组鸡痘病毒构建的不同条件;最后使用PCR和Western Blot方法对重组病毒进行了鉴定。[结果]将人工合成的痘苗病毒早晚期启动子SP与绿色荧光蛋白基因一同插入到鸡痘病毒载体质粒的多克隆位点,挑取LA平板上的重组子,菌液PCR及测序验证鉴定结果为阳性;利用重组质粒转染被野生鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞制备重组病毒,利用倒置荧光显微镜观察到含有重组病毒的在激发光下呈绿色的细胞;改进重组质粒转染的条件以达到更好的重组病毒包装成效,研究得出被野生痘病毒感染的细胞进行重组质粒传染制备重组病毒的效率是用野生痘病毒感染已转染重组质粒的细胞的6倍,且感染用野生病毒滴度高时重组病毒的制备效果更好;最后,用PCR方法和Western Blot方法对重组病毒进行鉴定,鉴定结果为阳性。[结论]成功构建了表达GFP的重组鸡痘病毒。(本文来源于《生物技术》期刊2019年05期）
施晋升,李峰,吴思慧,俞力超,刘黎琼[2]（2019）在《携带抗FAP×抗CD3双特异性抗体重组溶瘤痘病毒的构建及其抗癌活性观察》一文中研究指出目的:构建携带抗成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activation protein,FAP)和抗小鼠CD3分子的双特异性抗体溶瘤痘病毒(r VVDD-BiTE. FAP),并体外检测该病毒对过表达FAP小鼠肺癌细胞株抑制作用。方法:利用同源重组技术将PF17R启动子调控的Bi TE-FAP基因和PSEL启动子调控的DsRed基因克隆入缺失痘苗生长因子(vaccinia growth factor,VGF)基因的v SC20亲本病毒TK基因处,经软琼脂空斑筛选获得VGF和TK双基因缺失的重组溶瘤痘病毒r VVDD-BiTE. FAP。采用空斑计数法比较重组溶瘤病毒和亲本病毒v SC20在小鼠肺癌细胞株中的复制能力;采用MTS法检测重组溶瘤病毒r VVDD-BiTE. FAP和r VVDD-GFP对小鼠肺癌LLC细胞株的抑制效果,并用MTS、LDH实验进一步检测溶瘤病毒和小鼠脾脏T细胞对靶细胞的协同杀伤效果,采用ELISA法检测细胞因子IL-2和IFN-γ的表达。结果:通过同源重组技术和软琼脂空斑法筛选获得r VVDD-BiTE. FAP重组溶瘤痘病毒。r VVDD-BiTE. FAP与亲本病毒具有同等复制能力;小鼠T细胞能够增强r VVDD-BiTE. FAP抗肿瘤效果。结论:r VVDD-BiTE. FAP具有高效抗肿瘤活性。(本文来源于《江苏大学学报(医学版)》期刊2019年04期）
米丽开姆·托合提尼亚孜[3]（2019）在《山羊痘病毒KLP2基因缺失的重组病毒的纯化及ANK基因缺失病毒的构建》一文中研究指出山羊痘呈世界性流行,疫苗注射免疫是预防本病较为有效的方法。但是由于使用的是弱毒苗,使用过程中往往产生一些副作用,例如孕羊流产、毒力返强等。为了进一步降低疫苗毒性,本研究对以细胞重组法得到的缺失毒力因子KLP2的重组羊痘病毒疫苗株进行纯化,以获得更加安全的羊痘疫苗。同时为了研究山羊痘的另一毒力因子ANK的作用,构建了缺失该基因病毒的表达载体,为进一步研究更安全有效的羊痘疫苗提供了依据。首先无菌采取2~3月龄的健康小公羊睾丸和健康发育的胎羊,分别分离睾丸组织和胎羊皮肤组织,用剪碎组织和胰酶消化分散细胞法培养并获得生长良好的睾丸和胎羊皮肤原代细胞,并对其培养特性进行研究。细胞贴壁生长至80%~90%时接种山羊痘病毒疫苗株,培养并观察其细胞病变。其次,提取KLP2缺失的转移载体质粒,用Lipofectamine ~TMM 2000转染至山羊痘病毒感染的羊睾丸原代细胞,培养并定期显微镜下观察带绿色荧光的重组病毒。挑取带荧光细胞接种原代细胞用4种方法纯化重组病毒。并用荧光密度及PCR方法确定重组病毒是否纯化。再次,接种纯化的重组病毒于羊睾丸原代细胞,观察其生长速度、细胞病变程度等评价其效果,并以疫苗株和流行毒株做对照;以皮肤刮擦点种结合皮下注射的方式接种重组病毒于小鼠,同时以疫苗株和流行株做对照,观察小鼠临床变化,在动物水平评价重组病毒的效果。另外,采用融合PCR的方法,将ANK基因两侧同源臂连接在报告基因GFP两侧,并与pET42b载体连接得到ANK基因缺失的表达载体,将其转染至羊痘病毒疫苗株感染的羊睾丸原代细胞,镜检确定是否带绿色荧光的重组病毒。结果成功的制备了羔羊睾丸原代细胞和胎羊皮肤原代细胞,睾丸细胞培养特性较优,作为本研究后续实验所用细胞。KLP2基因缺失的重组病毒的纯化方法以第四种最为有效,传3~4代即可得到纯化病毒。重组病毒毒力效果与疫苗株和流行株相比,在细胞水平上有肉眼可见的减弱效果,在小鼠试验中没有明显的临床效果。本试验成功构建了ANK基因山羊痘病毒THX株GTPV-138和GTPV-141.2两个基因缺失的转移载体,并得到目的基因缺失的重组病毒。本研究得到了一种较快构建羊痘基因缺失重组病毒和带荧光标记病毒的纯化方法为后期羊痘病毒生物学特性研究奠定基础。(本文来源于《塔里木大学》期刊2019-06-01）
辛佳亮[4]（2019）在《表达山羊痘病毒N1L基因重组痘苗病毒的构建及其生物学特性研究》一文中研究指出为探究山羊痘病毒(Goatpox virus,GTPV)N1L基因(gN1L)的生物学功能,本研究以痘苗病毒天坛株(vaccinia virus Tiantan,VTT)N1L基因(vN1L)片段为左右同源重组臂,构建了含有VACV早/晚期强复合启动子(PE/L)、绿色荧光蛋白(EGFP)基因及大肠杆菌黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(gpt)基因的转移载体质粒pLR-EGFP-gpt。分别向pLR-EGFP-gpt插入vN1L和gN1L基因表达盒,构建了转移载体质粒pLR-EGFP-gpt-N1Lrev和pLR-EGFP-gpt-gN1L。将上述构建的叁个转移载体分别与VTT共转染于BHK-21细胞中,通过逐代对表达绿色荧光蛋白的重组病毒蚀斑进行筛选和鉴定,最终获得了缺失vN1L基因的重组毒株VTTΔN1L、缺失后再拯救vN1L基因的重组毒株VTTN1Lrev及用gN1L基因替换vN1L基因的毒株VTTgN1L。通过体外细胞试验和动物体内试验评估重组病毒与亲本毒株的稳定性、宿主范围、复制以及毒力的差异。结果显示:构建的叁种重组病毒均可在BHK-21细胞中稳定遗传15代以上,且宿主范围无明显差异;VTT N1Lrev在BHK-21细胞中的复制速度最快,其次分别为VTTgN1L、VTT和VTTΔN1L。初步证实vN1L和N1L基因具有促进病毒复制速度的功能。体内外毒力试验显示:VTTN1Lrev毒力最强,其次分别为VTTgN1L、VTT和VTTΔN1L,其中VTTgN1L和VTT的毒力并无明显差异,VTTΔN1L毒力最低。结论,vN1L和gN1L基因均是病毒复制和毒力的相关基因,且gN1L基因可部分恢复gN1L基因的功能。(本文来源于《广西大学》期刊2019-06-01）
他蕾[5]（2019）在《表达鸡传染性喉气管炎病毒不同长度的gB基因重组鸡痘病毒的构建及其免疫效力评价》一文中研究指出鸡传染性喉气管炎(Infectious laryngotracheitis,ILT)是由传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV)所引起的急性呼吸道传染病。该病具有传播快,死亡率高,且能引起产蛋鸡的产蛋率迅速下降等特点,在我国有进一步扩大流行的趋势。目前主要通过细胞或鸡胚传代致弱的弱毒活疫苗来预防本病,但弱毒活疫苗存在毒力返强的风险,有的弱毒活疫苗还能使鸡发病,引起ILT的爆发和流行。因此,急需研制开发出新一代高效安全的疫苗来防控ILT。鸡痘病毒载体具有外源基因容量大,能产生针对外源基因的免疫应答,宿主范围窄,不会向环境中散毒以及能区分自然感染和免疫接种的动物等独特优越性。因此,在本研究中,我们构建了表达ILTV保护性抗原gB全长或部分截短的3种重组鸡痘病毒的转移载体,分别以两种鸡痘病毒(Fowlpox virus,FPV)282E4株和LP株为母本毒株转染获得了 6种重组鸡痘病毒,评价了其免疫效力,为针对ILTV的鸡痘病毒载体疫苗的研制奠定了基础。1.ILTV gB基因的原核表达及多克隆抗体的制备根据GenBank发表的ILTV gB基因全长序列,用DNAStar软件分析其氨基酸序列的亲水性、抗原性和表面可及性,选择了两段主要抗原区域,分别为861bp和972bp,扩增后连接原核表达载体pET-32a(+)进行原核表达,获得大小约为48kDa的gBa蛋白和51kDa的gBb蛋白,这两种蛋白均为包涵体蛋白。纯化蛋白免疫小鼠,获得gBa和gBb多抗血清。Western-blot结果显示这两种血清具有良好的反应性,能检测LMH细胞中繁殖的ILTV,可用为gB蛋白表达检测的抗血清。2.表达ILTV不同长度gB基因的重组鸡痘病毒的构建利用点突变试剂盒,同义突变了 gB基因上两处与FPV转录终止信号序列相吻合的位点。分别将ILTV gB全长基因和两个抗原性强的gB截短基因(gB1:439-1362bp;gB2:439-2094bp)克隆到鸡痘病毒转移载体p12LS中,获得转移载体p12LS-gB、p12LS-gB1和p12LS-gB2,用脂质体法分别转染已感染鸡痘母本病毒wt-FPVLP和wt-FPV282E4的鸡胚成纤维细胞(CEF),利用蓝白斑筛选,获得纯化的6种重组鸡痘病毒rFPVLP-gB,rFPVLP-gB1,rFPVLP-gB2,rFPV282E4-gB,rFPV282E4-gB1 和 rFPV282E4-gB2。PCR 验证目的基因已成功插入鸡痘病毒基因组;间接免疫荧光试验(IFA)和Western-blot试验证实,gB基因在重组鸡痘病毒载体中表达良好。3.表达ILTV不同长度gB基因的重组鸡痘病毒的免疫效力试验80只28日龄SPF鸡随机分成8组,每组10只,于颈部皮下免疫rFPVLP-gB、rFPVLP-gB2、rFPV282E4-gB、rFPV282E4-gB2、wt-FPVLP和 wt-FPV282E4,剂量为 105PFU/只;同时设商品化ILTV重组鸡痘病毒基因工程疫苗对照组,剂量为105PFU/只;PBS对照组,剂量为0.2 mL/只。免疫后21d,用105EID50/只的ILTV的野毒株119株喉头攻毒,观察各疫苗对鸡的免疫保护效果,并采集喉拭子测定排毒情况。结果表明,rFPVLP-gB和rFPV282E4-gB病毒组的保护率均为100%,高于商品化疫苗组的83.3%,而rFPVLP-gB2和rFPV282E4-gB2病毒组的保护率分别为33.3%和16.7%,低于商品化rFPV基因工程疫苗;排毒结果显示所有疫苗组均排毒。综上所述,在构建的6株rFPVs中,ILTV gB全长基因的表达及免疫效果最好,可作为ILTV的疫苗候选株。(本文来源于《扬州大学》期刊2019-05-01）
高晓磊,韩明宝,刘思桐,赵丽霞,朱秀同[6]（2019）在《1日龄雏鸡免疫鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗安全性及效力的研究》一文中研究指出将鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗以皮下注射和皮下刺种2种不同免疫途径免疫1日龄雏鸡,评价其安全性和效力。以10羽份/只剂量接种后,两组鸡均未观察到全身反应。以1羽份/只剂量接种后28d攻毒,两种免疫方式均可以使免疫鸡产生较强免疫力,能够抵抗传染性喉气管炎病毒(ILTV)WG株强毒和鸡痘病毒(FPV)102株的攻击。以上结果显示,鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗以皮下注射和皮下刺种2种不同途径免疫1日龄雏鸡,具有良好的安全性和有效性。(本文来源于《中国动物保健》期刊2019年04期）
柴茂,刘礼杰,冉晓龙,李蛟,苑述友[7]（2019）在《重组鸡痘病毒研究进展》一文中研究指出目前,病毒疫苗研究分为全病毒灭火疫苗、重组活载体疫苗、DNA疫苗、亚单位疫苗等,每种类型疫苗都有自身的优势和特点,就重组活载体疫苗中的重组鸡痘疫苗研究进展进行阐述,以期对疫苗的研究提供参考。(本文来源于《畜禽业》期刊2019年03期）
杨俊,聂福平,周庆,王昱,史梅梅[8]（2019）在《绵羊痘病毒和山羊痘病毒实时荧光重组酶聚合酶检测方法的建立》一文中研究指出为建立一种快速、敏感鉴别诊断绵羊痘病毒(SPPV)和山羊痘病毒(G TPV)的方法,本研究根据SPPV和GTPV基因组保守区,分别设计特异性引物和探针,建立了SPPV和GTPV实时荧光RPA (real-time fluorescent recombinase polymerase amplification)检测方法。结果显示,该方法仅对SPPV和GTPV的靶基因扩增呈阳性,而对牛结节性皮肤病病毒(LSDV)、传染性脓疱病毒(O RFV)、蓝舌病病毒(BTV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、水疱性口炎病毒(VSV)、A型口蹄疫病毒(FM DV type A)、O型口蹄疫病毒(FMDV type O)、亚洲1型口蹄疫病毒(FMDV Asia 1)等相关病毒检测结果均为阴性,特异性良好;对SPPV和GTPV检测的灵敏度分别为4.72×10~2copies/μL和4.35×10~2 copies/μL;利用该方法对临床样品进行检测,与OIE推荐的普通PCR检测结果符合率为100%。结果表明,建立的SPPV和GTPV实时荧光RPA方法灵敏、快速、特异性强,为SPPV和GTPV感染的早期诊断提供了技术支持,适用于SPPV和GTPV的检疫、疫情监测及流行病学调查,对疫情暴发后相应控制方案的制定具有重要意义。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2019年05期）
张紫璇,韩明子,高旭,李远超,孟媛[9]（2018）在《表达鹅γ干扰素重组禽痘病毒的构建及其抗病毒活性的初步研究》一文中研究指出为研究表达鹅γ干扰素(GoIFN-γ)基因重组禽痘病毒的抗病毒活性,本研究构建了在禽痘病毒(FPV)早晚期启动子LP2EP2控制下的IFN-γ基因重组禽痘病毒转移载体,将其转染至亲本禽痘病毒S-FPV-017预感染的鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblasts,CEF),使其与禽痘病毒基因组进行同源重组,经过9轮筛选和纯化并进行PCR和间接免疫荧光检测,获得能稳定表达外源基因的重组病毒r FPV-IFNγ-LacZ。利用细胞病变抑制法检测抗病毒活性结果显示,在鸡胚成纤维细胞中重组禽痘病毒表达的IFN-γ对鹅细小病毒的复制具有显著抑制作用。本研究为制备共表达保护性抗原和γ干扰素基因的重组基因工程疫苗研究奠定基础。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2018年12期）
程松,王和兴,郑敏,罗满林,单芬[10]（2018）在《大熊猫犬瘟热病毒H基因重组山羊痘病毒的构建和鉴定》一文中研究指出本研究参照GenBank上已公布的大熊猫犬瘟热病毒(CDV)H编码的基因序列,对其抗原保守结构和识别区域进行修饰,将CDV保护性抗原H基因克隆到pMDTK-pEL载体中,然后运用酶切、连接将表达盒PELH构建到pTK-Eg载体中,从而获得重组转移载体质粒pTK-H-Eg。将重组转移载体质粒pTK-H-Eg与GTPV AV41株共转染BHK细胞,使其在细胞内发生同源重组,获得重组CDV的H基因的山羊痘病毒,然后在Vero细胞上加压筛选,利用gpt培养基筛选到稳定表达EGFP的重组病毒。通过PCR、免疫荧光以及Western Blot鉴定,证明CDVH基因成功构建到GTPV基因组中,并且在细胞中获得了正确表达。本研究获得了表达CDVH基因重组山羊痘病毒,并命名为vpTK-H-Eg。(本文来源于《病毒学报》期刊2018年04期）
重组猪痘病毒论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:构建携带抗成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activation protein,FAP)和抗小鼠CD3分子的双特异性抗体溶瘤痘病毒(r VVDD-BiTE. FAP),并体外检测该病毒对过表达FAP小鼠肺癌细胞株抑制作用。方法:利用同源重组技术将PF17R启动子调控的Bi TE-FAP基因和PSEL启动子调控的DsRed基因克隆入缺失痘苗生长因子(vaccinia growth factor,VGF)基因的v SC20亲本病毒TK基因处,经软琼脂空斑筛选获得VGF和TK双基因缺失的重组溶瘤痘病毒r VVDD-BiTE. FAP。采用空斑计数法比较重组溶瘤病毒和亲本病毒v SC20在小鼠肺癌细胞株中的复制能力;采用MTS法检测重组溶瘤病毒r VVDD-BiTE. FAP和r VVDD-GFP对小鼠肺癌LLC细胞株的抑制效果,并用MTS、LDH实验进一步检测溶瘤病毒和小鼠脾脏T细胞对靶细胞的协同杀伤效果,采用ELISA法检测细胞因子IL-2和IFN-γ的表达。结果:通过同源重组技术和软琼脂空斑法筛选获得r VVDD-BiTE. FAP重组溶瘤痘病毒。r VVDD-BiTE. FAP与亲本病毒具有同等复制能力;小鼠T细胞能够增强r VVDD-BiTE. FAP抗肿瘤效果。结论:r VVDD-BiTE. FAP具有高效抗肿瘤活性。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
重组猪痘病毒论文参考文献
[1].郑阳臣,尹丽娟,刘大才.表达绿色荧光蛋白的重组鸡痘病毒的构建[J].生物技术.2019
[2].施晋升,李峰,吴思慧,俞力超,刘黎琼.携带抗FAP×抗CD3双特异性抗体重组溶瘤痘病毒的构建及其抗癌活性观察[J].江苏大学学报(医学版).2019
[3].米丽开姆·托合提尼亚孜.山羊痘病毒KLP2基因缺失的重组病毒的纯化及ANK基因缺失病毒的构建[D].塔里木大学.2019
[4].辛佳亮.表达山羊痘病毒N1L基因重组痘苗病毒的构建及其生物学特性研究[D].广西大学.2019
[5].他蕾.表达鸡传染性喉气管炎病毒不同长度的gB基因重组鸡痘病毒的构建及其免疫效力评价[D].扬州大学.2019
[6].高晓磊,韩明宝,刘思桐,赵丽霞,朱秀同.1日龄雏鸡免疫鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗安全性及效力的研究[J].中国动物保健.2019
[7].柴茂,刘礼杰,冉晓龙,李蛟,苑述友.重组鸡痘病毒研究进展[J].畜禽业.2019
[8].杨俊,聂福平,周庆,王昱,史梅梅.绵羊痘病毒和山羊痘病毒实时荧光重组酶聚合酶检测方法的建立[J].中国兽医科学.2019
[9].张紫璇,韩明子,高旭,李远超,孟媛.表达鹅γ干扰素重组禽痘病毒的构建及其抗病毒活性的初步研究[J].中国预防兽医学报.2018
[10].程松,王和兴,郑敏,罗满林,单芬.大熊猫犬瘟热病毒H基因重组山羊痘病毒的构建和鉴定[J].病毒学报.2018