本文主要研究内容
作者张洪亮（2019）在《我国不同基因亚型新发PRRSV的生物学特性分析及标记疫苗的研究》一文中研究指出：猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是引起猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)的病原。九十年代初期,I型和II型PRRSV几乎同时在欧洲和北美出现。1996年,中国大陆首次分离到PRRSV。经过二十多年的演化,PRRSV的多样性更加复杂。为了了解我国不同基因亚型新发PRRSV的流行情况和生物学特性,本研究在2014-2018年从全国14个省市疑似PRRSV感染的1900份病料中检测分离PRRSV。本研究共测定了321株PRRSV的ORF5基因和50株PRRSV的全基因组序列,鉴定了5种类型的PRRSV,分别是NADC30-like PRRSV(Sublineage 1.8)、NADC34-like PRRSV(1-7-4,Sublineage 1.5)、QYYZ-like PRRSV(Sublineage 3.5)、RespPRRSV MLV like PRRSV(Sublineage 5.1)和Sublineage 8.7 PRRSV,其中NADC34-like PRRSV是首次在中国发现。本章节主要完成了以下6个内容:(1)本研究根据Shi et al(2010)的报道,进一步将Lineage 1 PRRSV分为9个Sublineage(1.1-1.9),NADC30-like PRRSV属于Sublineage 1.8。Sublineage 1.8 PRRSV具有更快的变异速度和更高的重组频率,毒株之间的基因组同源性较低,重组模式复杂多样,重组的位置主要集中于非结构蛋白区和次要结构蛋白区。(2)2017年,本研究首次分离到2株Nsp2蛋白存在100个aa连续缺失的新毒株LNWK96和LNWK130,2株毒株均为重组病毒,遗传演化分析显示,该类毒株属于Sublineage 1.5,它们与美国流行的NADC34毒株同源性最高,也被称为NADC34-like PRRSV或1-7-4分支PRRSV,它们可能起源于北美。(3)本研究对Lineage 3 PRRSV进一步分类,分为Sublineage 3.1-3.5,Sublineage 3.5 PRRSV具有较高的重组频率,与本地毒株重组后广泛存在于我国的南方地区。通过对过度毒株FJ-1和FJFS的遗传演化分析,证实了大陆地区的Sublineage 3.5 PRRSV起源于台湾地区的Sublineage 3.2。(4)Lineage 5 PRRSV疫苗在我国应用较早,我国分离的Lineage 5 PRRSV均属于Sublineage 5.1,它们与ATCC VR2332和疫苗株RespPRRS MLV具有较高的核苷酸同源性。Sublineage 5.1 PRRSV在我国变异较小,这类毒株的出现可能和疫苗的应用有关。(5)本研究将Sublineage 8.7 PRRSV进一步分为Sublineage 8.7.1(CH-1a like PRRSV)、Sublineage 8.7.2(HP-PRRSV like PRRSV)和Sublineage 8.7.3(HP-PRRSV),2006年以后,HP-PRRSV席卷全国各省,然而,近年来Sublineage 8.7.3 PRRSV已经发生较大变异,这类毒株的致病性和当前疫苗的保护效果尚不清楚(6)Sublineage 1.8 PRRSV是我国新出现的PRRSV,而且在短时间内已经成为我国的主要流行毒株,本研究对Sublineage 1.8 PRRSV SD53-1603株进行了致病性和免疫保护效果评估,结果表明SD53-1603株对猪只具有中等致病性,当前商品化疫苗HuN4-F112可以提供一定程度的保护。为了寻找PRRSV的遗传演化规律,本研究对相对封闭的大型养殖集团进行了长达4年的PRRSV监测,从该大型养殖集团的不同猪场共采集了338份疑似PRRSV感染的组织或血清,鉴定并测序了119株PRRSV的ORF5序列和34株PRRSV的全基因组序列。鉴定了4种类型的PRRSV存在于该大型养殖集团,分别是NADC30-like PRRSV(Sublineage 1.8)、QYYZ-like PRRSV(Sublineage 3.5)、RespPRRSV MLV like PRRSV(Sublineage 5.1)和HP-PRRSV(Sublineag 8.7)。发现当前如此复杂的重组模式是逐步形成的,同一毒株在不同的位置发生重组,增加重组的多样性,为病毒的生存提供更多的可能。该集团RespPRRS MLV like PRRSV是RespPRRS MLV疫苗的返强毒株,确定了5个毒力相关位点和4个返强相关位点。大型养殖集团内PRRSV的分布和传播与猪只的运输关系和疫苗的使用密切相关。弱毒疫苗是防控PRRS的主要方法之一,但目前使用PRRS活疫苗的缺陷是疫苗株抗体不能与野毒株抗体有效区分,不利于疫苗免疫效果的评价和疫病的净化。为了解决这一难题,在本实验室已建立的针对M蛋白(1C8表位)的阻断ELISA抗体监测方法基础上,本研究构建了NADC30-like PRRSV SD53-1603株的感染性克隆,并成功拯救出子代病毒。运用该感染性克隆平台,构建了12种M蛋白1C8表位aa缺失或替换的缺陷型质粒,通过病毒拯救,成功获得5种缺失病毒。经过体外验证后,将这5种缺陷型病毒传至65代进行免疫实验,实验结果表明,rSD53-1603-Δ3SΔ4S-M65与母本毒株rSD53-1603-M65产生针对1C8表位的特异性抗体差异极显著,以上结果为PRRSV DIVA疫苗的研制奠定了基础。
Abstract
zhu fan shi yu hu xi zeng ge zheng bing du (Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)shi yin qi zhu fan shi yu hu xi zeng ge zheng (Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)de bing yuan 。jiu shi nian dai chu ji ,Ixing he IIxing PRRSVji hu tong shi zai ou zhou he bei mei chu xian 。1996nian ,zhong guo da liu shou ci fen li dao PRRSV。jing guo er shi duo nian de yan hua ,PRRSVde duo yang xing geng jia fu za 。wei le le jie wo guo bu tong ji yin ya xing xin fa PRRSVde liu hang qing kuang he sheng wu xue te xing ,ben yan jiu zai 2014-2018nian cong quan guo 14ge sheng shi yi shi PRRSVgan ran de 1900fen bing liao zhong jian ce fen li PRRSV。ben yan jiu gong ce ding le 321zhu PRRSVde ORF5ji yin he 50zhu PRRSVde quan ji yin zu xu lie ,jian ding le 5chong lei xing de PRRSV,fen bie shi NADC30-like PRRSV(Sublineage 1.8)、NADC34-like PRRSV(1-7-4,Sublineage 1.5)、QYYZ-like PRRSV(Sublineage 3.5)、RespPRRSV MLV like PRRSV(Sublineage 5.1)he Sublineage 8.7 PRRSV,ji zhong NADC34-like PRRSVshi shou ci zai zhong guo fa xian 。ben zhang jie zhu yao wan cheng le yi xia 6ge nei rong :(1)ben yan jiu gen ju Shi et al(2010)de bao dao ,jin yi bu jiang Lineage 1 PRRSVfen wei 9ge Sublineage(1.1-1.9),NADC30-like PRRSVshu yu Sublineage 1.8。Sublineage 1.8 PRRSVju you geng kuai de bian yi su du he geng gao de chong zu pin lv ,du zhu zhi jian de ji yin zu tong yuan xing jiao di ,chong zu mo shi fu za duo yang ,chong zu de wei zhi zhu yao ji zhong yu fei jie gou dan bai ou he ci yao jie gou dan bai ou 。(2)2017nian ,ben yan jiu shou ci fen li dao 2zhu Nsp2dan bai cun zai 100ge aalian xu que shi de xin du zhu LNWK96he LNWK130,2zhu du zhu jun wei chong zu bing du ,wei chuan yan hua fen xi xian shi ,gai lei du zhu shu yu Sublineage 1.5,ta men yu mei guo liu hang de NADC34du zhu tong yuan xing zui gao ,ye bei chen wei NADC34-like PRRSVhuo 1-7-4fen zhi PRRSV,ta men ke neng qi yuan yu bei mei 。(3)ben yan jiu dui Lineage 3 PRRSVjin yi bu fen lei ,fen wei Sublineage 3.1-3.5,Sublineage 3.5 PRRSVju you jiao gao de chong zu pin lv ,yu ben de du zhu chong zu hou an fan cun zai yu wo guo de na fang de ou 。tong guo dui guo du du zhu FJ-1he FJFSde wei chuan yan hua fen xi ,zheng shi le da liu de ou de Sublineage 3.5 PRRSVqi yuan yu tai wan de ou de Sublineage 3.2。(4)Lineage 5 PRRSVyi miao zai wo guo ying yong jiao zao ,wo guo fen li de Lineage 5 PRRSVjun shu yu Sublineage 5.1,ta men yu ATCC VR2332he yi miao zhu RespPRRS MLVju you jiao gao de he gan suan tong yuan xing 。Sublineage 5.1 PRRSVzai wo guo bian yi jiao xiao ,zhe lei du zhu de chu xian ke neng he yi miao de ying yong you guan 。(5)ben yan jiu jiang Sublineage 8.7 PRRSVjin yi bu fen wei Sublineage 8.7.1(CH-1a like PRRSV)、Sublineage 8.7.2(HP-PRRSV like PRRSV)he Sublineage 8.7.3(HP-PRRSV),2006nian yi hou ,HP-PRRSVxi juan quan guo ge sheng ,ran er ,jin nian lai Sublineage 8.7.3 PRRSVyi jing fa sheng jiao da bian yi ,zhe lei du zhu de zhi bing xing he dang qian yi miao de bao hu xiao guo shang bu qing chu (6)Sublineage 1.8 PRRSVshi wo guo xin chu xian de PRRSV,er ju zai duan shi jian nei yi jing cheng wei wo guo de zhu yao liu hang du zhu ,ben yan jiu dui Sublineage 1.8 PRRSV SD53-1603zhu jin hang le zhi bing xing he mian yi bao hu xiao guo ping gu ,jie guo biao ming SD53-1603zhu dui zhu zhi ju you zhong deng zhi bing xing ,dang qian shang pin hua yi miao HuN4-F112ke yi di gong yi ding cheng du de bao hu 。wei le xun zhao PRRSVde wei chuan yan hua gui lv ,ben yan jiu dui xiang dui feng bi de da xing yang shi ji tuan jin hang le chang da 4nian de PRRSVjian ce ,cong gai da xing yang shi ji tuan de bu tong zhu chang gong cai ji le 338fen yi shi PRRSVgan ran de zu zhi huo xie qing ,jian ding bing ce xu le 119zhu PRRSVde ORF5xu lie he 34zhu PRRSVde quan ji yin zu xu lie 。jian ding le 4chong lei xing de PRRSVcun zai yu gai da xing yang shi ji tuan ,fen bie shi NADC30-like PRRSV(Sublineage 1.8)、QYYZ-like PRRSV(Sublineage 3.5)、RespPRRSV MLV like PRRSV(Sublineage 5.1)he HP-PRRSV(Sublineag 8.7)。fa xian dang qian ru ci fu za de chong zu mo shi shi zhu bu xing cheng de ,tong yi du zhu zai bu tong de wei zhi fa sheng chong zu ,zeng jia chong zu de duo yang xing ,wei bing du de sheng cun di gong geng duo de ke neng 。gai ji tuan RespPRRS MLV like PRRSVshi RespPRRS MLVyi miao de fan jiang du zhu ,que ding le 5ge du li xiang guan wei dian he 4ge fan jiang xiang guan wei dian 。da xing yang shi ji tuan nei PRRSVde fen bu he chuan bo yu zhu zhi de yun shu guan ji he yi miao de shi yong mi qie xiang guan 。ruo du yi miao shi fang kong PRRSde zhu yao fang fa zhi yi ,dan mu qian shi yong PRRShuo yi miao de que xian shi yi miao zhu kang ti bu neng yu ye du zhu kang ti you xiao ou fen ,bu li yu yi miao mian yi xiao guo de ping jia he yi bing de jing hua 。wei le jie jue zhe yi nan ti ,zai ben shi yan shi yi jian li de zhen dui Mdan bai (1C8biao wei )de zu duan ELISAkang ti jian ce fang fa ji chu shang ,ben yan jiu gou jian le NADC30-like PRRSV SD53-1603zhu de gan ran xing ke long ,bing cheng gong zheng jiu chu zi dai bing du 。yun yong gai gan ran xing ke long ping tai ,gou jian le 12chong Mdan bai 1C8biao wei aaque shi huo ti huan de que xian xing zhi li ,tong guo bing du zheng jiu ,cheng gong huo de 5chong que shi bing du 。jing guo ti wai yan zheng hou ,jiang zhe 5chong que xian xing bing du chuan zhi 65dai jin hang mian yi shi yan ,shi yan jie guo biao ming ,rSD53-1603-Δ3SΔ4S-M65yu mu ben du zhu rSD53-1603-M65chan sheng zhen dui 1C8biao wei de te yi xing kang ti cha yi ji xian zhe ,yi shang jie guo wei PRRSV DIVAyi miao de yan zhi dian ding le ji chu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自中国农业科学院的张洪亮，发表于刊物中国农业科学院2019-07-05论文，是一篇关于遗传多样性论文,重组论文,致病性论文,疫苗论文,中国农业科学院2019-07-05论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自中国农业科学院2019-07-05论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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