淮安市第一人民医院病理科江苏淮安223300
摘要：目的观察基底细胞型乳腺癌患者肿瘤内抗肿瘤免疫并探讨其临床意义。方法应用免疫组织化学二步法检测基底细胞型乳腺癌患者肿瘤组织内S一100蛋白阳性的树突状细胞及呈HLA-DR抗原阳性表达的细胞并探讨其临床意义。结果基底细胞型乳腺癌患者肿瘤组织内缺乏树突状细胞(2/22)，数量明显少于非基底细胞型乳腺癌患者(138/138)，癌细胞的HLA—DR抗原阳性表达（4/22）明显少于非基底细胞型乳腺癌（106/138）。结论基底细胞型乳腺癌患者肿瘤组织缺乏由树突状细胞、淋巴细胞及HLA—DR抗原阳性表达的癌细胞引起的特异性抗肿瘤免疫，这与基底细胞型乳腺癌患者预后差可能密切相关。
关键词：基底细胞型乳腺癌；抗肿瘤免疫；树突状细胞；HLA-DR抗原表达；预后
Abstract：ObjectiveToobservetheanti-tumorimmunityintumortissuesofpatientswithbasal–likebreastcarcinoma
andtoexploreclinicsignificance．MethodsS-100proteinpositivedendriticcells(DC)andHLA-DRantigenpositiveexpressioncellsintumortissuesofpatientswithbasal–likebreastcarcinomawerestudiedbyimmunohistochemiealmethod．ResultsDCandDRantigenpositiveexpressionswerelackofinbasal–likebreastcarcinomaandthenumberwerelessthanthoseofnon-basal–likebreastcarcinoma，ConclusionsTherewerelackofanti—tumorimmunitycausedbytheinfiltrationofDC，DRantigenpositiveexpressioncarcinomacellsintumortissuesofpatientswithbasal–likebreastcarcinomaandmaybecloselyrelatedtopostoperativeprognosis．
Keywords：basal–likebreastcarcinoma；anti-tumorimmunity；dendriticcell；HLA—DRantigen；prognosis．
基底细胞样型乳腺癌(BasallikebreastcarcinomaBLBC)是新近引起广泛关注的一个乳腺癌亚型，近年来，一些学者通过基因芯片或免疫组织化学研究，并结合患者的预后，将乳腺癌分为5种类型：即腺腔A型、腺腔B型、正常乳腺样型、HER2过表达型和基底细胞样型。自从Perou等【1】首次明确提出BLBC的概念开始，BLBC就被认为具有具有独特的基因表达特点及较差的预后。影响BLBC肿瘤预后因素很多，但关于患者肿瘤内抗肿瘤免疫与预后关系未见研究报道。已知树突状细胞(dendriticcells，DC)在诱导T淋巴细胞产生特异性抗肿瘤免疫中起着重要作用及HLA—DR抗原呈阳性表达的细胞与免疫反应密切相关，而免疫反应又与肿瘤的发生、发展和生物学特性密切相关，因此我们对BLBC患者肿瘤组织内DC及HLA—DR抗原呈阳性表达的细胞进行观察研究，探讨肿瘤内抗肿瘤免疫并讨论其临床意义。
1资料与方法
收集2006年1月一2010年1月本院乳腺手术病理诊断为浸润性导管癌158例、髓样癌2例存档蜡块。所有标本经过4％甲醛固定，常规石蜡包埋，HE染色，光镜观察。应用免疫组织化学二步法对蜡块进行S-100蛋白阳性的树突状细胞和HLA—DR抗原呈阳性表达细胞的检测。用已知S-100蛋白阳性的神经鞘瘤作为阳性对照，淋巴结作为HLA-DR抗原阳性对照。TBS代替一抗作为空白对照，兔血清作为阴性对照。BLBC诊断参照Kim[2]免疫组织化学(IHC)标准：检测ER、PR、HER2、CK5／6的表达。ER(-)、PR(-)、HER2(-)、CK5／6(+)为BLBC。随访采用电话和通信方式。随访时间1年-5年。
2结果
158例乳腺浸润性导管癌中有20例为BLBC、2例乳腺髓样癌均为BLBC，BLBC占13.75%（22/160）。随访结果：160例中有随访病例96例，其中20例BLBC和76例非BLBC。复发率BLBC为22.72%（5/22），非BLBC为5.26%（4/76），差异有统计学意义，P<0.05。转移率BLBC为9.09%（2/22），非BLBC为5.26%（4/76）差异有统计学意义，P<0.05。
S一100蛋白阳性的DC及表达状况:
S一100蛋白阳性的DC表现为细胞浆和细胞核均呈深棕色的树突状细胞。138例非BLBC肿瘤内可见大量DC(138/138)，呈簇状分布于癌细胞间，DC树状突起插入癌细胞之间并与之接触，其周围可见淋巴细胞浸润。在DC分布多处，癌细胞有崩解破坏现象，癌细胞可见退变、坏死，而DC分布少处癌细胞崩解破坏、坏死现象则较少见。22例BLBC中仅2例可见DC(2／22)，且数量极少，未见胞浆突起与癌细胞接触，很少有癌细胞的退变、坏死。两者差异有统计学意义，P<0.01。
HLA-DR抗原阳性表达的细胞及表达状况:
HLA—DR抗原阳性细胞表现为细胞浆呈棕黄色。138例BLBC中106L例可见癌细胞及淋巴细胞呈不同程度DR抗原阳性表达(106/138)，22例BLBC仅4例癌细胞可见DR抗原阳性表达(4/22),两者差异有统计学意义，P<0.01。
3讨论
实验和临床研究均证明与肿瘤内抗肿瘤免疫状态有关的主要是DC，DC接触肿瘤抗原后能诱导同源T淋巴细胞产生特异性抗肿瘤免疫效应【3/4】,DC是体内抗原递呈细胞(antigenpresentingcells，APC)之一，在免疫反应中起始动和调节作用，在抗肿瘤免疫中，DC可能起着对肿瘤抗原的摄取、递呈从而引发机体抗肿瘤免疫反应。可能的过程是：获得肿瘤抗原的DC首先激活CD4+T淋巴细胞，然后在CD4+T淋巴细胞分泌各种细胞因子作用下，进一步激活CD8+T淋巴细胞，CD8+T淋巴细胞激活后增殖分化成细胞毒T淋巴细胞(cytotoxicTlymphocyte，CTL)，CTL进而杀伤肿瘤细胞【5】。本观察发现在BLBC缺乏DC的存在，而非BLBC肿瘤内存在大量DC，癌细胞有退变、坏死并且DC分布越多则癌细胞坏死越多。两者呈现正相关。这表明非BLBC患者肿瘤局部存在着由DC引起的抗肿瘤免疫并且癌细胞的退变、坏死与DC数量有关。而BLBC22例中仅2例可见少量DC，且数量极少，表明BLBC缺乏由DC引起的抗肿瘤免疫形态学证据。已有研究表明异常表达HLA—DR抗原的细胞可使本身变成被免疫活性细胞攻击的靶细胞而造成坏死、崩解【6】。本观察发现在非BLBC患者中106例患者肿瘤细胞呈DR抗原阳性表达，这提示癌细胞本身也具有了APC能力，可引发对自身的免疫杀伤作用从而造成癌细胞本身的坏死、崩解。22例BLBC中仅2例见HLA—DR抗原阳性的癌细胞，这表明BLBC患者肿瘤内缺乏由HLA-DR抗原阳性的癌细胞引发的对自身的免疫杀伤。
上述结果表明在非BLBCHT患者肿瘤内存在着由DC、HLA-DR抗原阳性的癌细胞引起的抗肿瘤免疫，而肿瘤内抗肿瘤免疫状态直接影响患者在肿瘤切除后清除体内残留的微小癌灶，甚至复发的早期病灶，延缓、降低肿瘤复发和起到阻止、甚至根除肿瘤的目的从而提高生存率。并且肿瘤的复发与生存与肿瘤局部DC数量呈正相关，即DC多，预后好，复发低[8]。可见肿瘤内抗肿瘤免疫是影响其预后的重要因素之一。临床观察及本组随访资料表明BLBC预后较非BLBC易复发和转移，而BLBC肿瘤局部缺乏DC及癌细胞很少表达HLA-DR，因此BLBC缺乏由上述两者引导的肿瘤内抗肿瘤免疫，这可能是其预后差的重要因素。
参考文献：
[1]PerouCM，SrlieT，EisenMB，et81．Molecularportraitsof
humanbreasttulnoul∞．Nature。2000，406(6797)：747-752．[J[2】
[2]Kim，RoJY。AlanSH，ela1．Clinicopathologiesignificanceofthebasal-likesubtypeofbreastcancer：acomparisonwithhormonereceptorandHer2／neu—overexpre∞ingphenotypes．HumPathol，2006，37(9)：1217．1226．
[3】AviganD．DendriticceHs：development，functionandpotentialUSeforcancerimmunotherapy[J】．BloodBey。1999．13(1)：51一64.
[4]CeHuzziCM。MayordamoJI，StorkusWJ。eta1．Peptide·pulseddendriticcellsinduceantigen—specificCTL·mediatedprotectivetumorimmunity[J]．JExpMed，1996，183(1)：283—287．
[5]苏敏。牛恕淼．自身免疫性甲状腺炎和甲亢原位免疫电镜研究
[J]．西安医科大学学报，1991，12(3)：214—216．
[6]殷晓煜．吕明德．梁力建，等．肝癌组织内树突状细胞及淋巴细胞浸润的临床意义[J]．中华外科杂志，2002，40(5)：336—338．
[7]SchottM，SeisslerJ．Dendriticcellvaccination：newhopeforthetreatmentofmetastasizedendocrinemalignancies[J]．TrendsEndocri．nolMetab。2003，14(4)：156—162．
[8]AmbeK，MoriM，EnjojiM．S一100protein—positivedendriticceHsincalorectedadenoearcinoma：Distributionandrelationtotheclinicalprognosis[J】．Cancer，1989，(3)：496—503．