1.云南白药工程师执业药师2.云南盟生药业高级工程师执业药师研究生
[摘要]目的：建立一种测定湿疹消中盐酸小檗碱含量的测定方法。方法:高效液相色谱法，色谱柱为C18柱，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（40:60）（每100ml流动相中加入十二烷基磺酸钠0.1g），柱温30℃，流速1ml/min，进样量20μl，检测波长265nm。结果:按本方法检测结果线性关系良好。结论:此方法准确、简捷，适用于湿疹消中盐酸小檗碱的含量测定。
[关键词]湿疹消；盐酸小檗碱；含量测定；HPLC
概述：湿疹消洗剂具有清热燥湿、消痈散结、止痒之功效，用于预防和治疗各型湿疹，尤其适用于婴幼儿湿疹。
1.处方和制法
马齿苋860g败酱草717g地肤子430g
黄柏430g土茯苓430g蛇床子430g
苍术430g玄明粉145g青黛145g
制成1000g(按20g/袋分装)
制法：将苍术粉碎，过一号筛，备用；取马齿苋、败酱草、地肤子、黄柏、土茯苓和蛇床子加11倍量的水提取3次，每次1小时，提取液合并，滤过，在50-60℃的条件下减压浓缩至所提取原料重量1倍的浸膏，边搅拌边加入1倍量的乙醇，静置过夜，取上清液回收乙醇，并减压浓缩（50-60℃）至比重为1.25-1.30的稠膏；玄明粉、青黛和苍术粉混合10分钟后加入到稠膏中混合15-20分钟，使其混合均匀，在50-60℃的条件下干燥至水分低于10%，粉碎，过一号筛，用热封型茶叶滤纸按20g/袋分装，即得。
2.仪器与试药
Agilent1260高效液相色谱仪；梅特勒MET05电子天平；超声仪；盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号：110713—200911，纯度100.1%）；湿疹消样品（自制）。
3.方法与结果
3.1色谱条件
十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（40׃60）（每100ml流动相中加入庚烷磺酸钠0.1g）[8]；柱温30℃；流速：1ml/min；检测波长：265nm；进样量：20μl；理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4000。
3.2流动相的配制
取2.0g庚烷磺酸钠，用0.1%磷酸溶液（取1.2ml磷酸，加纯化水稀释至1200ml）溶解并混匀，再加800ml乙腈，混匀，过滤，超声，即得。
3.3溶液的配制
供试品溶液取湿疹消粉末0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相25ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。
对照品溶液取盐酸小檗碱对照品2mg，精密称定，用流动相定容至100ml，摇匀，制成每1ml中含有20μg的对照品溶液，即得。
阴性对照溶液按湿疹消的处方配比及制法，取除黄柏外的其他药材，按制备工艺制成阴性样品后，取0.25g，精密称定，具塞锥形瓶中，精密加入流动相25ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。
3.4含量测定方法的验证
3.4.1专属性试验在上述色谱条件下，分别取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，结果见下图。
结果表明：在相应的保留时间处，供试品与对照品均有盐酸小檗碱色谱峰，而阴性对照无，故高效液相色谱法测定湿疹消中盐酸小檗碱的含量无干扰。
3.4.2线性关系的测定分别精密取盐酸小檗碱对照品溶液（0.0201mg/ml）5、10、15、20、25、30μl[5]，测定，结果见下表。
从试验结果可以看出，盐酸小檗碱在0.1005μg~0.6030μg范围内具有良好的线性关系。
3.4.3精密度考察取对照品溶液（0.0201mg/ml），测定6次，结果RSD=0.45%<2%，结果表明高效液相色谱法测定盐酸小檗碱精密度良好。
3.4.4重复性试验分别平行配制同一批供试品溶液6份，测定6次，平均含量为33.6164mg/g，RSD=0.09%（n=6）。结果表明，方法重复性良好。
3.4.5加样回收试验精密称取供试品溶液4ml，用流动相定容至100ml，摇匀，取9份，每份5ml，分成3组，第一组每份加入对照品溶液(0.0201mg/ml)3.0ml，第二组每份加入对照品溶液(0.0201mg/ml)3.5ml，第三组每份加入对照品溶液(0.0201mg/ml)4ml，均用流动相定容至10ml；测定，平均回收率为98.21%，RSD=1.52%，结果表明该方法准确度良好。
3.4.6稳定性试验取供试品溶液，在室温下放置8小时，分别于0h、2h、4h、6h、8h测定[3]，RSD=0.11%试验结果表明，供试品溶液在8h内稳定。
3.4.7试验条件优选
3.4.7.1柱温优选取供试品溶液和对照品溶液，分别于柱温25℃、30℃、35℃时，测定，保留时间随柱温的升高而缩短，峰面积及理论塔板数变化不大，故柱温选用30℃。
3.4.7.2流速优选取供试品溶液和对照品溶液，分别于流速0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min时，测定，试验结果表明流速改变时供试品和对照品峰面积的比值变化不大，对样品含量测定的结果影响很小，故流速优选1.0ml/min。
3.4.7.3样品提取时间优选取样品4份，每份0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相25ml，密塞，称定重量，分别超声处理10min、20min、30min、40min，放冷，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。分别取上述各份供试品溶液，测定，从试验结果可以看出，当超声时间达20min后，峰面积变化不大，但为确保样品中的盐酸小檗碱被充分提取，故优选超声提取时间为30min。
3.4.8湿疹消样品的含量测定取3批自制湿疹消产品，分别研细，取粉末0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相25ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，用流动相补足减失的重量，摇匀，测定，计算，
测定结果表明，3批湿疹消产品中盐酸小檗碱的含量分别为32.7，32.6，33.0(mg/g)，在制备工艺不改变的情况下，该方法能有效地控制该产品的质量。
4.结果与讨论
本方法简单易行，用时较短，对于快速测定湿疹消中盐酸小檗碱的含量具有很好的可操作性。适宜快速检测湿疹消中盐酸小檗碱的含量。
试验中，为防止盐酸小檗碱的色谱峰出现漂移和对称性较差的情况，在流动相中的加入了离子对试剂庚烷磺酸钠[6]，庚烷磺酸钠是一种表面活性剂，在溶液中黏度大且易产生气泡，使用时应该注意新鲜配制和过滤[3]。
参考文献
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