一、卵巢大小及发育状况与牛腔前卵泡采集数量的关系（论文文献综述）
杨静[1]（2021）在《促卵泡激素对小鼠腔前卵泡离体培养的影响研究》文中研究指明随着现代医疗技术的发展,癌症以及其他危及生命的疾病治疗后的存活率逐渐增加。在挽救生命的同时,治疗药物可能会伤害卵巢内的卵母细胞,最终导致不孕。随着试管婴儿的出现,辅助生殖技术在解决不孕不育方面取得了显着成效。雌性哺乳动物卵巢内储存着大量的卵泡,其发育受到自分泌因子和旁分泌因子调控,所以影响腔前卵泡在体外发育的因素有很多。大多数卵泡在发育的不同时期受体内外影响,会逐渐闭锁走向退化,离体腔前卵泡培养可挽救这些卵泡。本研究以小鼠卵泡为研究对象,以小鼠卵泡体内发育的研究为基础,探索小鼠腔前卵泡体外分离培养的最适方案。（1）小鼠卵巢和卵泡在体内的生长发育。为探究小鼠卵泡体内的自然发育情况,本研究采用机械方法,剥离1 d-21 d小鼠的卵巢和卵泡,观察小鼠卵巢和卵泡的生长发育情况。通过测量小鼠卵巢面积和直径,发现21 d内小鼠卵巢面积和直径逐渐上升。随着日龄的不断增长,小鼠卵泡也不断地生长发育。对21 d内小鼠卵巢组织学分析发现,小鼠在出生时卵巢内只有原始卵泡。随着日龄不断增加,原始卵泡逐渐发育为初级卵泡、次级卵泡、有腔卵泡和成熟卵泡。小鼠卵巢内存在着多个发育阶段的卵泡。分析不同发育阶段的小鼠卵泡和卵母细胞面积比值,发现卵泡的生长发育分为两个阶段:第一阶段为腔前卵泡,小鼠卵泡和卵母细胞面积呈比例增长;第二阶段为有腔卵泡时期,卵母细胞略有增长,卵泡显着增大,在此阶段卵泡液不断积累。（2）促卵泡激素（follicle-stimulating hormone,FSH）对离体培养的小鼠卵泡生长发育的影响。本研究分别在培养基中添加六个不同浓度的FSH（0 m IU/ml、10 m IU/ml、50 m IU/ml、100 m IU/ml、150 m IU/ml、200 m IU/ml）,离体培养小鼠卵泡10 d,观察FSH对小鼠卵泡生长发育的影响。研究发现未添加FSH的卵泡生长缓慢,且未能发育出卵泡腔;添加FSH的卵泡均发育出卵泡腔。添加FSH培养的卵泡生长面积极显着高于未添加FSH的卵泡（P<0.01）。FSH对卵泡生长的促进作用与其浓度并未呈现出正相关。50 m IU/ml FSH培养的卵泡面积最大,并且显着高于150 m IU/ml FSH和200m IU/ml FSH的卵泡（P<0.05）。10 m IU/ml FSH培养的卵泡成功排出颗粒细胞-卵母细胞复合体,卵母细胞成功排出第一极体。这说明FSH在一定浓度范围可促进卵泡的生长发育。（3）FSH对小鼠卵泡类固醇激素合成酶的影响。在体外培养2 d、4 d、6 d、8 d、10 d和11 d,六个时间点,探究FSH对卵泡基因表达的影响以及雌二醇的分泌。研究发现,FSH在一定时间内可以上调17β-HSD、CYP19A1和3β-HSD的表达,3β-HSD的表达水平与小鼠卵泡的生长发育有关。在培养前期,雌二醇的分泌与FSH具有剂量依赖性;培养后期,FSH与雌二醇没有严格的剂量依赖性,过高的FSH会影响雌二醇的分泌。研究说明FSH能促进卵泡的体外发育,10 m IU/ml的FSH最适宜卵泡体外的发育,这些研究结果可以为濒危动物的保护和人类繁殖医学的研究增添理论和实践数据。
张志鹏[2]（2019）在《马胚胎移植及克隆胚体外构建技术》文中研究表明我国是世界马业大国,但并非马业强国。马存栏量虽大,却在现代马术的国际竞技场上未见身影。现代马术用马的匮乏,成为我国马产业发展的重要制约因素。胚胎移植技术已成熟应用于牛、羊等家畜的繁育生产,但马胚胎移植的各环节技术尚不完全成熟,相关研究与应用与马产业的发展不相适应。因此,本研究针对我国马业发展的技术需求,开展其发情鉴定、人工授精、非手术法胚胎采集和胚胎移植等马胚胎移植关键生物技术的研究。在此基础上,开展了卵巢的运输、卵母细胞采集、卵母细胞体外成熟、体细胞系的建立、细胞融合、体细胞核移植等马克隆胚胎体外构建技术的研究,其研究结果如下:1、母马发情的准确鉴别。摸索了 3种发情方法,发现B超检查法鉴定母马发情的成功率达到100%,显着高于外部观察法（47.3%）和直肠触摸法（85%）,P<0.05。2、母马发情的有效诱导。建立了母马发情和同期发情的有效诱导方法,母马排卵第5 d,肌肉注射0.2 mg PGF2α后的发情率为63.2%,高于肌肉注射1500 IU PMSG和自然发情的比例（47.2%、0）,P<0.05。有效的诱导6个品种马的发情,发情周期显着缩短,分别为 11.7±3.1、12.2±2.8、11.5±1.9、12.8±2.1、11.8±2.5 和 12.7±2.3 d。注射0.2 mg黄体酮和PGF2α方法母马的同期发情率为76.4±2.6%,显着高于单纯注射黄体酮组的62.8±2.1%和对照组的16.7± 1.2%,P<0.05。3、母马排卵的有效调控。建立了母马排卵的有效调控方法,关键在卵泡发育、激素类型和剂量的选择。当卵泡直径≥30 mm,静脉注射1500 IU hCG,48 h内的排卵比例为84.3%,显着高于FSH+LH组（31.6%）和对照组（15.8%）（P<0.05）,6 个品种马分别在 41.2±2.3、43.9±2.7、42.3±1.6、39.7±3.1、40.9±2.9 和 39.8±2.4 h 时排卵。发现左侧卵巢的排卵率比右侧的高,59.5%排卵发生在左侧,高于右侧的40.5%（P<0.05）。4、马精液的保存与授精。建立了马精液的常温、低温和超低温保存的方法,常温（22℃）保存20 min,HN-SD（本实验室制备）和INRA96（IMV商品）组的精子活率分别为65.6±2.3%和68.6±1.2%,显着高于脱脂牛奶组的53.5±3.2%（P<0.05）。低温（0～4℃）保存24 h,HN-SD和INRA96组的精子活率分别是65.5±2.3%和67.7±2.1%,高于脱脂牛奶组的49.5±3.4%（P<0.05）。液氮（-196℃）保存精液1d后,INRA96组的精子活率为44.3±2.2%,HN-SD组为36.2±2.3%,高于脱脂牛奶组的21.3±1.8%（P<0.05）。摸索出了最适的输精部位,发现输精的不同部位对母马受胎率的影响不同,子宫角输精的母马情期受胎率为85.4%,显着高于子宫输精（78.4%）和自然交配（25%）（P<0.05）。保鲜精液的情期受胎率为61.1%,低于鲜精的84%,但高于冷冻精液的40%（P<0.05）。5、马胚胎的非手术法采集。建立了马胚胎的非手术采集方法,选取乳酸钠林格注射液作为冲胚液,在马受孕后5～8 d进行冲胚,采集的时间是关键环节。本研究胚胎采集成功率为72.8%。不同时间采集胚胎的成功率不同,5月份的胚胎采集成功率最高,为88.9%,10月份成功率最低,为42.9%。桑椹胚采集成功率为70.6%。6、马胚胎的非手术法移植。建立了马胚胎的非手术移植方法,选择排卵后4～7 d的受体马,选取IMV胚胎保存液进行子宫体移植。试验组HN-EHM和IMV胚胎保存液的胚胎移植成功率分别为80%和83.3%,高于乳酸钠林格注射液试验组（75%）。胚胎低温保存24 h后,移植成功率为60%。桑椹胚移植成功率为90.9%。7、马卵巢的运输。本试验获得马卵巢体外运输过程中保存液的合适温度,夏季为33～37℃,冬季为30～35℃。8、马卵丘-卵母细胞复合体（COCs）的采集。抽吸法+切割法的采集成功率最高,为73.3%,高于切割法（64.6%）和抽吸法（54.8%）的成功率（P<0.05）。发现繁殖季节的卵巢中大、中、小卵泡的比例分别是20.9%、51%和28.1%,非繁殖季节的比例分别是3.1%、51.9%和45%。9、马卵母细胞的体外成熟。摸索了马卵母细胞体外培养成熟的条件,5%CO2、37℃、饱和湿度培养,紧凑型（Cp）卵母细胞培养32～36 h,扩展型（Ex）培养24～28 h。结果发现不同类型的COC其成熟率不同,不同繁殖季节,卵母细胞的成熟率也不同。繁殖季节,马扩展型（Ex）的成熟率为58.6%,高于紧凑型（Cp）的成熟率36.5%（P<0.05）,非繁殖季节,成熟率分别为29.1%和49.2%（P<0.05）。添加ActA能提高紧凑型（Cp）卵母细胞的成熟率,在繁殖、非繁殖季节卵母细胞成熟率分别达到 47.3%和 42.2%。10、马卵母细胞的孤雌激活。摸索了马卵母细胞孤雌激活的条件,本试验选取离子霉素进行孤雌激活,结果发现ActA促进马Cp型卵母细胞孤雌激活胚胎的发育,2-细胞（57.9%）、4-细胞（36.8%）的比例分别高于对照组（P<0.05）。不同的卵母细胞类型对卵母细胞孤雌激活后胚胎的发育没有影响。在马的繁殖季节,孤雌激活胚胎发育到2-细胞期、4-细胞、8-细胞和桑椹胚的比例分别是50%（42/80）、35.7%（30/84）、13.1%（11/84）和6%（5/84）,高于非繁殖季节同时期的比例,（P<0.05）。在马的非繁殖季节,孤雌激活的胚胎与颗粒细胞共培养后,发育到2-细胞、4-细胞的比例分别为41.7%和25%,显着高于对照组的比例（P<0.05）,获得1枚桑椹胚（2.8%）。11、马体细胞克隆胚的构建及体外培养。摸索了不同融合电压对重构胚胎融合率的影响,克隆胚胎置于38.5℃、5%C02、饱和湿度培养箱中培养,结果发现采用140 V,20μs,融合2次,重构胚胎融合成功率达到72%。马驹成纤维细胞的融合率、2-细胞,4-8细胞和桑椹胚的比例分别为77.4%、41.5%、33.9%和15.1%,高于成年马体细胞的相应比率（P<0.05）。用非手术法将构建好的8枚桑椹胚移植到受体马的子宫体中,没有获得克隆马。通过上述研究,本研究获得成熟的马胚胎移植技术体系,为实现规范化、商业化、市场化的繁殖现代马术用马提供的技术方案。在此基础上,研究体外诱导成熟的马卵母细胞构建克隆胚胎的技术,为我国突破马克隆技术奠定基础。
文冬梅[3]（2019）在《E2与FSH对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞增殖和凋亡的影响》文中指出卵泡发育主要是卵泡颗粒细胞（GCs）和内膜细胞（TCs）增殖的结果,卵泡颗粒细胞和内膜细胞的增殖主要依赖于雌二醇（E2）和促卵泡素（FSH）的共同作用。水牛的繁殖率低,超数排卵效果一直很不理想。为提高水牛的超数排卵效果,本研究探讨了E2和FSH对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞增殖和凋亡的影响,以便为建立水牛超数排卵的技术方法奠定理论依据。研究取得结果如下:1.不同浓度FSH对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞增殖的影响采用FSH（0、2、8、14、20、26μg/mL）处理水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞24 h后,检测细胞的增殖情况,结果显示:14、20、26 μg/mL组的细胞增殖水平显着高于对照组、2μg/mL和8μg/mL组（p<0.05）,而14、20、26μg/mL三组间无显着差异（p>0.05）。2.E2和FSH联合作用对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞增殖的影响不同浓度的E2（0、0.5、1、2、4ng/mL）联合FSH（14μg/mL）分别处理水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞24h,E2=0ng/mL、FSH=00μg/mL为对照组,检测细胞的增殖情况,结果发现:E2（1 ng/mL）+FSH组的颗粒细胞增殖水平显着高于对照组、FSH（14 μg/mL）单独处理组和E2（0.5 ng/mL）+FSH组（p<0.05）;而E2（1 ng/mL）+FSH组的内膜细胞增殖水平显着高于其余各组（p<0.05）。因此,以下所有试验主要以E2=0ng/mL、FSH=0 μg/mL为对照组,分别对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞进行FSH（14μg/mL）单独处理和E2（1 ng/mL）+FSH（14 μg/mL）联合处理。3.E2和FSH联合作用对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞凋亡的影响24小时后,检测细胞凋亡情况,结果显示:E2+FSH联合处理组的细胞死亡率和早期凋亡率显着低于FSH单独处理组和对照组（p<0.05）,而存活率显着高于FSH单独处理组和对照组（p<0.05）。4.E2和FSH联合作用对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞受体基因表达的影响24小时后,检测受体基因的表达情况,结果显示:E2+FSH联合处理组细胞中FSHR、LHR的mRNA表达量显着高于对照组和FSH单独处理组;而颗粒细胞中ER-β的mRNA表达量显着低于对照组（p<0.05）,但与FSH单独处理组无显着差异（p>0.05）;内膜细胞中ER-β的mRNA表达量显着低于对照组和FSH单独处理组（p<0.05）。5.E2和FSH联合作用对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞增殖基因表达的影响24小时后,检测细胞增殖基因的表达情况,结果显示:E2+FSH联合处理组细胞中PCNA、Cyclin D1、Cyclin D2的mRNA表达量显着高于对照组和FSH单独处理组（p<0.05）。6.E2和FSH联合作用对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞凋亡基因表达的影响24小时后,检测凋亡基因的表达情况,结果显示:E2+FSH联合处理组水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞中Bcl-2的mRNA表达量显着高于对照组和FSH单独处理组,且Bax、Caspase-3和Caspase-9的mRNA表达量显着低于对照组（p<0.05）。以上结果表明,FSH（14 μg/mL）或E2（1 ng/mL）+FSH（14 μg/mL）联合作用均能够促进水牛GC和TC的增殖,并抑制细胞凋亡,但E2+FSH联合作用的效果优于FSH单独处理。E2+FSH的联合作用可能是通过提高激素受体FSHR、LHR mRNA的表达,抑制ER-β mRNA的表达,提高了水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞对FSH和LH的应答能力,从而促进增殖基因PCNA、Cyclin D1、Cyclin D2和凋亡抑制基因Bcl-2的表达,抑制促凋亡基因Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达,最终促进水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞增殖,且抑制细胞的凋亡。因此,在应用FSH对水牛进行超数排卵处理时,注射E2将有望提高水牛的超数排卵效果。
原敏[4]（2016）在《C型钠肽对牛腔前卵泡体外生长发育作用的研究》文中研究指明胚胎工程相关技术的发展提高了卵母细胞的利用效率,改善了雌性动物的生殖性能。然而,目前卵母细胞体外成熟（in vitro maturation,IVM）、体外受精（in vitro fertilization,IVF）等胚胎工程相关技术,只限于从卵巢表面的有腔卵泡中获取卵母细胞,因此其数量非常有限。众所周知,雌性动物的卵巢中含有大量腔前卵泡,如果能成功体外培养动物的腔前卵泡至有腔卵泡阶段,再从这些有腔卵泡中收集卵母细胞,用于体外受精等胚胎工程技术研究与应用,进一步促进这些胚胎工程技术的研发和应用范围。C型钠肽（C-type natriuretic peptide,CNP）是哺乳动物卵泡内天然存在的,钠肽受体2（natriuretic peptide receptor 2,NPR2）是其特异性受体。有关CNP的报道大部分集中在其对哺乳动物卵母细胞减数分裂阻滞和体外成熟中的作用,大量研究发现C型钠肽可以维持哺乳动物卵母细胞减数分裂的阻滞,使卵母细胞核成熟和胞质成熟同步化,进而提高卵母细胞的成熟率和后期胚胎的发育能力。最近有研究表明,CNP能促进小鼠腔前卵泡发育。本研究以牛卵巢为试验材料,从牛卵巢上采用刮梳法分离牛腔前卵泡。在基础培养液中添加100 ng/mL CNP或联合添加100 ng/mL FSH和100 ng/mL CNP体外培养150300μm直径的牛腔前卵泡12 d,结合FSH对牛腔前卵泡体外发育的作用,初步探索CNP对牛腔前卵泡体外生长发育、存活、成腔以及卵泡发育相关基因和凋亡相关基因表达的影响,以期为哺乳动物腔前卵泡的体外培养提供基础。试验研究内容及结果如下:1.从屠宰场收集牛卵巢,分离腔前卵泡,进行体外培养试验。结果显示,基础培养液α-MEM+中体外培养牛腔前卵泡12 d,卵泡存活率达到58.33±4.04%。这一结果为后续研究CNP对牛腔前卵泡体外生长发育的影响提供了可能。2.基础培养液中分别添加FSH、CNP以及FSH+CNP,体外培养牛腔前卵泡12 d,测量其在第0,4,8,12 d的卵泡直径,统计卵泡直径生长变化情况。结果表明,FSH组和α-MEM+组的卵泡,随着培养天数的增加卵泡直径不断增大;CNP组和FSH+CNP组的卵泡直径随着培养天数的增加,呈现递减的趋势,但CNP组和FSH+CNP组牛腔前卵泡体外培养12 d后,卵泡腔形成率显着高于FSH组和α-MEM+组（P<0.05）。从以上结果我们分析,在体外培养条件下CNP可能促进了未充分生长发育的卵泡过早成腔。3.基础培养液中分别添加FSH、CNP以及FSH+CNP,体外培养牛腔前卵泡12 d,统计卵泡存活率。结果显示,FSH+CNP组腔前卵泡存活率显着低于其他三组（α-MEM+、CNP和FSH组）（P<0.05）,而CNP组卵泡存活率显着低于FSH组（P<0.05）,略低于α-MEM+组但差异不显着（P>0.05）。以上研究结果说明CNP可能降低了体外培养牛腔前卵泡存活率。4.利用反转录PCR（reverse transcription PCR,RT-PCR）技术和实时定量PCR（quantificational real-time PCR,qRT-PCR）技术检测牛腔前卵泡Npr2 mRNA以及发育和凋亡相关基因的表达。结果显示,牛腔前卵泡体外培养12 d,CNP组Npr2 mRNA相对表达量高于其他三组（α-MEM+、FSH和FSH+CNP组）,但差异不显着（P>0.05）;发育相关基因FSHR、CYP19A1 mRNA相对表达量随着培养天数的增加,呈现先升高后降低的趋势;而PCNA mRNA相对表达量则逐渐升高;体外培养第12 d,CNP组和FSH+CNP组FSHR、CYP19A1、PCNA mRNA相对表达均低于其他两组（α-MEM+和FSH组）。凋亡相关基因Bax和Apaf-1 mRNA相对表达量都随着培养天数增加而逐渐增加,FSH+CNP组和CNP组相对表达量均显着高于α-MEM+组和FSH组（P<0.05）。根据以上研究结果,基础培养液添加CNP体外培养牛腔前卵泡12天,卵泡发育相关基因表达降低,而凋亡相关基因表达升高,由此我们推测CNP可能不利于牛腔前卵泡生长以及存活。以上研究结果表明,在体外培养条件下CNP能显着促进牛腔前卵泡成腔。然而,CNP显着降低卵泡存活率,不利于体外培养的牛腔前卵泡生长。因此,CNP在体外培养的牛腔前卵泡中的作用机制有待进一步的试验研究。
孙婧[5]（2014）在《牛初级卵泡体外培养体系的建立和miR-27a在小鼠颗粒细胞中的功能的研究》文中指出体外培养145-170gm牛腔前卵泡能够形成卵泡腔已有人报道,但体外培养50-70μm的牛初级卵泡能否发育成腔仍没有报道。为了建立适合牛初级卵泡体外生长发育的培养体系,同时进一步揭示牛腔前卵泡体外发育的相关机制,本实验以屠宰场获取的牛卵巢为材料,以机械分离法获取直径50-70μm的牛初级卵泡,以α-MEM为基础培养基,调整不同浓度促卵泡素（FSH）、促黄体素（LH）和雌二醇（E2）激素配比以及优化碱性成纤维生长因子（bFGF）和表皮生长因子（EGF）添加量等试验,使用胶原包被的三维培养方法对牛初级卵泡进行体外培养13或21天（d）,观察卵泡直径以及成腔的变化,并用Real-Time PCR检测卵泡发育及成熟相关基因：芳香化酶（CYP19A1）、抗缪勒激素（AMH）、生长分化因子9（GDF-9）、骨形成蛋白15（BMP-15）以及m型转化生长因子p受体（TGFβR3）的表达。结果发现,以α-MEM为基础培养基,0.25μg/mL FSH+5IU/mL LH+0.1μg/mL E2+50ng/mL bFGF组以及FSH+LH+E2+bFGF和25ng/mL EGF联合处理组卵泡直径在体外培养21d时显着高于其他组（p<0.05）,并且在培养第19d和17d形成小的卵泡腔,成腔率分别为16.7%和33.3%。卵泡发育、成熟相关基因CYP19A1,AMH, GDF-9,BMP-15和TGFβR3的表达也有显着变化。综上,我们建立了一套有效的体外促进牛初级卵泡生长和成熟的培养体系,即α-MEM+FSH（0.25μg/mL）+LH（5IU/mL）+E2（0.1μg/mL）+bFGF（50ng/mL）+EGF（25ng/mL）;MicroRNA（miRNA）是近年来发现的一类长度为20-25nt的小干扰RNA,它通过对基因的转录后调控,在细胞的增殖、分化、凋亡等方面发挥重要作用。本实验在之前牛初级卵泡培养的基础上,发现miR-27a在牛卵巢中表达较高,但由于条件限制,我们利用小鼠模型来探讨miR-27a对颗粒细胞功能的影响。我们发现,miR-27a在小鼠腔前卵泡颗粒细胞中表达较高,但在有腔卵泡颗粒细胞中表达明显下降。因此,本实验通过体外高效转染技术,将miR-27a模拟物（mimics）和抑制剂（inhibitor）转入小鼠颗粒细胞中,利用Real-Time PCR、流式细胞术等实验方法检测miR-27a和相关基因的表达以及观察其对颗粒细胞增殖和激素分泌的影响。结果发现：miR-27a有促进颗粒细胞凋亡、抑制颗粒细胞增殖、抑制颗粒细胞分泌雌激素的功能,它可能是通过下游的靶基因CREB1来影响颗粒细胞的凋亡和雌激素分泌,但具体机理还需进一步验证。
张桂枝,靳双星,焦喜兰[6]（2010）在《分离方法及卵巢状况对猪次级卵泡采集数量的影响》文中研究表明【目的】探讨影响猪腔前卵泡分离的因素,建立有效分离猪腔前卵泡的方法。【方法】以猪次级卵泡为对象,比较4种分离方法和11种卵巢状况对猪次级卵泡采集数量的影响。【结果】针刮法分离猪次级卵泡的数量（（14.37±2.29）枚）极显着高于剪碎法（（5.62±2.67）枚）、显微分离法（（8.28±2.53）枚）和酶消化-机械分离法（（8.86±1.91）枚）,而且针刮法的处理时间（（15.29±1.82）min）较其他3种方法短（（20.51±1.99）min（、59.24±4.59）min（、40.59±2.67）min）,分离得到的次级卵泡体外培养3 d后,存活率在针刮法（53.29%）、剪碎法（51.08%）、显微分离法（49.87%）之间无明显差异,但均极显着高于酶消化-机械分离法（28.31%）。从不同质量卵巢中采集的次级卵泡数量有较大差异,质量为>3.0≤8.0 g（（15.36±2.32）枚）的卵巢得到的次级卵泡数量较≤3.0g（（6.31±2.19）枚）和>8.0 g（（7.83±2.71）枚）多。卵巢有无黄体与次级卵泡的采集数量无明显关系;卵巢上不同大小的可见卵泡数量和分布与腔前卵泡的采集数量相关,卵巢上可见卵泡均衡分布,中、小卵泡较多而无大卵泡,无论黄体存在与否,均可获得较多次级卵泡。【结论】针刮法是分离猪次级卵泡的一种有效方法;在分离卵泡时,要选择质量在3.08.0 g,且有可见中、小卵泡均衡分布而无大卵泡的卵巢。
张耀君[7]（2010）在《小鼠和牛腔前卵泡体外分离培养的研究》文中认为哺乳动物卵巢含有大量处于不同发育阶段的卵母细胞,其中多数卵母细胞存在于无腔阶段的卵泡中,但大部分卵泡在无腔阶段（腔前卵泡）中闭锁、退化,没有得到相应的利用,这无疑是动物遗传和育种资源的极大浪费。因此,腔前卵泡的开发无疑是解决这一难题的有效途径。腔前卵泡的体外培养技术已取得了一定的发展,建立了多种培养体系,有其各自的优缺点,研究者一直在摸索合适的培养模型,以期找到一种能够模拟体内卵泡发育的环境条件和模式。影响腔前卵泡体外培养的因素很多,总结以前的成功经验,本研究从其中几个方面进行研究,旨在摸索出一套适合小鼠腔前卵泡体外生长发育的分离培养体系。1.通过石蜡切片-HE染色技术,研究不同发育时期小鼠卵巢内卵泡的分布状况及发育规律,选择适合发育时期的小鼠,为高效地将腔前卵泡分离出来奠定基础,还可为体外培养过程中卵泡发育结果鉴定的提供参考。研究结果显示：随着小鼠的发育,卵巢发育由最初的无皮质髓质之分到皮质髓质明显可分,卵泡发育从只能看见聚集呈条索状到发育成原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡,直至有腔卵泡的形成。从数量上看,原始卵泡逐渐减少,初次级卵泡逐渐增多,有腔卵泡数量也从无到有从少到多。卵巢由最初的无卵泡发育到有许多大小不等、处于不同发育时期的卵泡、大部分有腔样结构。生后10天～15天的小鼠的腔前卵泡最多,且此时的卵巢结缔组织、脂肪组织等都比较少,易于分离得到数量多且结构完整的腔前卵泡。另外,各级卵泡的分布在卵巢中具有区域性,卵巢皮质的最外层分布有大量的原始卵泡,密度较高,初级卵泡次之,次级卵泡则多数位于最内层,在皮髓的交界处分布相对较多。三级卵泡和成熟卵泡会突出于表皮。从本实验研究结果来看,选择生后15天左右的小鼠的卵巢作为本研究体外分离腔前卵泡的材料比较理想。2.通过腔前卵泡的分离时间、数量、正常率、回收率等评价标准来比较酶-机械结合法和显微分离法这两种分离方法,旨在找出一种适合于从生后15天小鼠卵巢中分离腔前卵泡的有效分离方法,为更好地进行小鼠腔前卵泡的体外培养做好关键的第一步。研究结果显示：酶-机械分离法回收得到腔前卵泡的数量明显多于单纯的机械分离方法（显微分离法）,且选择胶原酶浓度为0.1%分离的数量更多且正常卵泡数多。显微分离法所需时间较长,数量少,但体外培养6天后卵泡存活率更高。综合考虑,本实验选择采用显微分离方法分离生后15天小鼠腔前卵泡用做体外培养。3.通过建立一个适于小鼠腔前卵泡体外发育无血清培养系统,探索添加FSH、LH、VC对小鼠卵泡／卵母细胞体外生长发育的影响,旨在摸索一套适合小鼠腔前卵泡体外生长发育的培养体系。结果表明：腔前卵泡随着体外培养时间的延长,卵泡越来越大,卵泡直径和其中的卵母细胞直径都增加,但是卵母细胞增长的没有卵泡增长的快。且各浓度组在培养的第4天时,卵泡及卵母细胞直径增长最快。且第4天与第2,6,8天的卵泡增长值存在显着性差异（P<0.05）。无血清基础培养液中联合添加FSH400+LH 200、VC50ug/ml能够较大程度的促进卵泡及其中的卵母细胞增长,提高卵泡的存活率及成腔率,第八天后添加hCG和EGF进行培养24h,发生的GVBD率和排出PB1率比对照组要高。4.运用DNA琼脂糖凝胶电泳技术和RT-PCR技术来分别检测上述所选的无血清培养系统培养的不同时间的腔前卵泡凋亡情况及其Bcl-2/Bax在mRNA层次的基因表达情况,从分子生物学方面对该无血清培养系统进行评价。结果表明：在卵泡培养的第0天和第2,第6天,无论基础培养液还是上述的联合添加的完全培养液,bax和bcl-2基因都有表达,且随着培养时间的延长其表达越来越强,但是在培养的初中期bax的表达与bcl-2相当。只是在第6天时,对照组中表达稍强些。从培养的效果来看,实验组与对照组在培养的同期相比,实验组的Bax、Bcl-2基因表达均比对照组要强。DNA琼脂糖凝胶电泳检测卵泡凋亡结果显示：不论对照组还是实验组,都没出现典型的细胞凋亡的特征。表明本实验采用的基础培养液中联合添加FSH400mIU/mL、LH200mIU/mL和VC50ug/ml后用于体外腔前卵泡的培养是可行的。5.本研究还对牛卵巢中腔前卵泡和有腔卵泡的分布和形态学特征进行了研究,同时对牛卵巢中的腔前卵泡进行了体外分离和体外成熟培养,结果表明：牛卵泡的分布具有明显的区域性,与小鼠卵巢中卵泡的分布一致。体外培养试验中得到了释放第一极体的成熟卵母细胞。
彭夏雨[8]（2010）在《绵羊卵巢组织体外培养与冷冻保存试验研究》文中进行了进一步梳理哺乳动物卵巢组织内有大量处于休眠状态的原始卵泡,但目前对这部分卵泡的利用率却很小本研究旨在用组织学,免疫组化（细胞核增殖抗原检测和细胞凋亡检测）,透射电镜观察以及对培养液中雌激素,妊娠,抑制素的测定等手段,对不同生理状态绵羊卵巢组织生理结构,影响体外培养效果的基础条件,以及抗坏血酸,促卵泡素,表皮生长因子,碱性成纤维生长因子,生长分化因子-9对绵羊卵巢组织体外培养的影响,做系统的研究。在这些研究的基础上以动态连续添加多种成分的方式,建立了可供绵羊皮质卵泡发育到窦腔阶段的综合培养体系,此外还对绵羊卵巢组织的玻璃化冷冻进行了对比研究,建立了适合绵羊卵巢组织快速冷冻的方法,主要取得了以下结果：1、通过对绵羊各阶段卵巢的生理构造研究发现,卵巢中原始卵泡位于皮质的最外层,紧靠白膜下方,密度较大,而发育卵泡位于皮质里层。青年母羊卵巢内发育程度较高,各级卵泡直径都较大,老龄母羊中闭锁卵泡增多,而胎儿和羔羊卵巢中原始卵泡数量较多,直径较小,且构成相对单一。有黄体卵巢中原始卵泡比例低于无黄体卵巢,而次级卵泡比例高于无黄体卵巢。左侧卵巢原始卵泡数量高于右侧卵巢。2、通过对各种培养条件的对比研究,发现绵羊卵巢卵泡在金属格栅+3mg/ml的胶原蛋白,以100μl/cm2的密度铺层的滤膜或膜硝酸纤维素膜的培养支架上,以α-MEM+3mg/mlBSA+胰岛素10μg/ml+转铁蛋白6.25μg/ml+亚硒酸钠6.25ng/ml+0.23 mM丙酮酸钠+2 mM谷氨酰胺+2mM次黄嘌呤+100IU/ml双抗为基础培养液,在38.6℃,5%CO2的增湿培养箱中能长期存活与发育。3、培养中添加50ng/mlVC,能维持卵泡存活和卵泡结构完整。50ng/mlFSH能够促进卵泡和卵母细胞直径的增长,动态添加FSH能促进绵羊原始卵泡在体外的发育和存活,促进卵泡雌激素的分泌和颗粒细胞增殖。添加100ng/mlEGF促进原始卵泡发育和存活,高浓度EGF添加对绵羊卵泡体外发育不利；bFGF呈剂量依赖性促进绵羊原始卵泡的体外发育和生长,培养21天后显着的提高次级卵泡的比例,以及雌激素的分泌；200ng/mlGDF-9显着的促进初级卵泡向次级卵泡的转变,促进颗粒细胞增殖,维持卵泡存活。4、通过对对各种因子的不同组合添加发现,FSH与EGF或VC共同作用可以促进羊原始卵泡的激活和生长,VC与EGF一起时则抑制卵泡的发育和生长,FSH可以消除这种抑制,且增强它们对细胞增殖活性的影响bFGF,GDF-9,EGF,FSH以及VC之间存在着相互促进作用,共同作用能促进卵泡的存活和发育。在添加有VC,BSA,ITS等的α-MEM培养液中,动态连续添加起始高浓度的bFGF和GDF-9以及起始低浓度的EGF和FSH培养18天后,能有效的支持羔羊皮质内卵泡大量启动发育到次级阶段甚至窦腔阶段,促进颗粒细胞增殖,抑制间质细胞凋亡,促进雌激素和抑制素的分泌。5、通过对卵巢组织常规短期保存和冷冻保存研究发现,卵巢组织在生理盐水和α-MEM中4。C保存2小时,或者20℃保存2-6小时不影响卵泡的后续发育潜力。以20%DMSO+20%EG作为冷冻保护剂,梯度平衡后,用金属固体表面玻璃化冷冻方法冷冻绵羊卵巢组织,对卵泡的后续发育和卵巢活性的保持没有影响。
张耀君,王昭晖,文瑞丽,师红,吴民耀[9]（2009）在《家畜类腔前卵泡体外分离方法及其影响因素研究进展》文中进行了进一步梳理回顾腔前卵泡体外分离方法的研究历史,着重论述牛、羊、猪等家畜的腔前卵泡体外分离方法及其影响因素,以期为建立一种更为有效的分离方法提供理论基础。
李卫华[10]（2006）在《牛体外受精中四个关键技术的研究》文中进行了进一步梳理本研究的目的是为了优化牛胚胎体外生产体系。对卵巢内卵母细胞体外成熟和体外受精进行了研究。结果表明,将卵巢内卵母细胞和2-8mm卵泡内的卵母细胞共培养时,可以显着的提高卵裂率和6-8细胞发育率（P<0.05）;向成熟培养液中添加不同浓度（10%、20%、30%）的牛卵泡液（BFF）与不添加组的卵裂率和6-8细胞发育率差异不显着（P>0.05）,但牛卵泡液（BFF）可以有效的促进卵巢内卵母细胞的发育,各组中以添加10%（BFF）效果最好;受精前脱去卵丘细胞将会显着降低卵巢内卵母细胞随后的卵裂率（P<0.05）。性别分离精子采用上游法和Percoll法处理后发现,卵裂率和囊胚率差异不显着（P>0.05）,但Percoll法处理效果较好;分离精子和未分离精子体外受精效果表明,两者的卵裂率和囊胚率差异不显着（P>0.05）。研究了不同浓度的牛磺酸对牛早期胚胎体外发育的影响。结果表明,添加牛磺酸有利于牛胚胎的早期发育,但添加牛磺酸各组与不添加组之间差异不显着（P>0.05）,添加7mmol/L的牛磺酸的效果最好。比较了不同浓度的氨基酸对早期牛胚胎体外发育的影响。结果显示,氨基酸恰当的比例可以较好的促进牛胚胎的发育, 3×EAA+1×NEAA最适合牛胚胎的体外培养。研究了TCM199和mSOF培养液对牛胚胎早期发育的影响。发现TCM199和mSOF培养液都能够很好的促进牛胚胎的发育,两者的卵裂率和囊胚率差异不显着（P>0.05）, mSOF可以代替TCM199用于牛胚胎的发育培养。分别研究了两种培养基对牛腔前卵泡的体外培养。结果表明,这两组培养液都能促进腔前卵泡的体外发育,但存活率和成腔率差异不显着（P>0.05）。比较了不同培养密度（每孔培养1枚、每孔培养2枚、每孔培养3枚）对牛腔前卵泡体外培养的影响.研究发现,存活率和成腔率差异不显着（P>0.05）。
二、卵巢大小及发育状况与牛腔前卵泡采集数量的关系（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、卵巢大小及发育状况与牛腔前卵泡采集数量的关系（论文提纲范文）
（1）促卵泡激素对小鼠腔前卵泡离体培养的影响研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 研究进展 |
| 1.1 卵泡发育过程 |
| 1.2 卵泡离体培养 |
| 1.3 卵泡刺激素对卵泡发育的调控 |
| 1.3.1 FSH的分子结构与功能 |
| 1.3.2 FSH对卵泡内类固醇激素的调控 |
| 1.4 研究思路与内容 |
| 第二章 卵泡体内发育 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验动物 |
| 2.3 实验仪器 |
| 2.4 实验试剂 |
| 2.5 实验方法 |
| 2.5.1 实验器械消毒 |
| 2.5.2 小鼠卵巢采集 |
| 2.5.3 小鼠卵泡采集 |
| 2.5.4 小鼠卵巢组织培养 |
| 2.5.5 小鼠卵巢组织切片 |
| 2.5.6 统计学分析 |
| 2.6 实验结果 |
| 2.6.1 小鼠卵巢体内生长发育 |
| 2.6.2 小鼠卵泡体内发育 |
| 2.6.3 小鼠卵巢的组织形态 |
| 2.6.4 小鼠卵泡组织学分析 |
| 2.6.5 小鼠卵泡发育过程的组织学分析 |
| 2.6.6 小鼠卵泡闭锁状态的组织学特征 |
| 2.6.7 小鼠卵泡在体内增长情况 |
| 2.6.8 小鼠卵泡和卵母细胞增长情况 |
| 2.7 讨论 |
| 2.8 小结 |
| 第三章 不同浓度FSH对卵泡培养的影响 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验动物 |
| 3.3 实验仪器 |
| 3.4 实验试剂 |
| 3.5 实验试剂配制 |
| 3.6 实验方法 |
| 3.6.1 卵泡分离和培养 |
| 3.6.2 卵母细胞的体外成熟 |
| 3.6.3 数据分析 |
| 3.7 实验结果 |
| 3.7.1 小鼠卵泡体外发育 |
| 3.7.2 不同浓度FSH对小鼠卵泡体外生长速率的影响 |
| 3.7.3 不同浓度FSH对小鼠卵泡体外生长趋势的影响 |
| 3.7.4 不同浓度FSH对小鼠颗粒细胞-卵母细胞复合体的体外成熟的影响 |
| 3.7.5 卵母细胞成熟率 |
| 3.8 讨论与小结 |
| 3.9 小结 |
| 第四章 FSH对小鼠卵泡类固醇合成酶的影响 |
| 4.0 前言 |
| 4.1 实验动物 |
| 4.2 实验仪器 |
| 4.3 实验试剂 |
| 4.4 实验方法 |
| 4.4.1 收集细胞和培养基 |
| 4.4.2 提取颗粒细胞内总RNA |
| 4.4.3 c DNA的合成 |
| 4.4.4 PCR引物设计 |
| 4.4.5 PCR扩增 |
| 4.4.6 琼脂糖凝胶电泳 |
| 4.4.7 实时定量PCR |
| 4.4.8 雌二醇的测定 |
| 4.4.9 数据分析 |
| 4.5 实验结果 |
| 4.5.1 琼脂糖电泳结果 |
| 4.5.2 不同浓度FSH在培养天数相同的卵泡中基因的表达差异 |
| 4.5.3 不同浓度FSH培养的卵泡分泌雌二醇的差异 |
| 4.6 讨论 |
| 4.7 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士期间科研成果 |
（2）马胚胎移植及克隆胚体外构建技术（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.1.1 国外马业现状 |
| 1.1.2 我国马业现状 |
| 1.1.3 存在的主要问题 |
| 1.2 马的生殖生理特点 |
| 1.2.1 生殖活动 |
| 1.2.2 生殖行为 |
| 1.2.3 生殖激素的调节 |
| 1.3 国内外研究进展 |
| 1.3.1 马胚胎移植技术 |
| 1.3.2 精液冷冻与授精 |
| 1.3.3 胚胎冷冻与移植 |
| 1.3.4 体外受精(IVF) |
| 1.3.5 单精子卵胞浆显微注射技术(ICSI) |
| 1.3.6 卵母细胞成熟 |
| 1.3.7 马的体细胞核移植(SCNT) |
| 1.4 本研究的目的意义及内容 |
| 1.4.1 研究目的意义 |
| 1.4.2 研究内容 |
| 1.4.3 技术路线 |
| 2 试验一: 马胚胎移植技术的研究 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 动物饲养 |
| 2.1.3 试剂 |
| 2.1.4 试验设备 |
| 2.1.5 试剂制备 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 种马的选择 |
| 2.2.2 母马发情鉴别 |
| 2.2.3 母马发情调控 |
| 2.2.4 排卵调控 |
| 2.2.5 精液品质检测 |
| 2.2.6 精液的保存 |
| 2.2.7 人工授精 |
| 2.2.8 非手术法冲胚 |
| 2.2.9 胚胎的鉴定与保存 |
| 2.2.10 胚胎移植 |
| 2.2.11 妊娠诊断 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 母马的发情检查结果 |
| 2.3.2 不同激素诱导母马发情的试验结果 |
| 2.3.3 不同激素调控马排卵的比例 |
| 2.3.4 不同精液稀释液对精液品质的影响 |
| 2.3.5 不同输精方式对母马受孕率的影响 |
| 2.3.6 不同冲胚液对胚胎收集效率的对比与应用 |
| 2.3.7 不同胚胎移植方法的成功率 |
| 2.3.8 桑椹胚的收集与移植结果 |
| 2.3.9 不同妊娠诊断方法的比较 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 种马的选择 |
| 2.4.2 发情与卵泡生长的关系 |
| 2.4.3 超数排卵 |
| 2.4.4 采精与授精 |
| 2.4.5 马的胚胎移植 |
| 2.5 小结 |
| 3 马克隆胚胎体外构建技术的研究 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 试验对象 |
| 3.1.2 试剂 |
| 3.1.3 设备 |
| 3.1.4 试剂制备 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 卵巢的采集 |
| 3.2.2 马卵巢卵母细胞的收集 |
| 3.2.3 卵母细胞体外成熟 |
| 3.2.4 成纤维细胞培养 |
| 3.2.5 孤雌激活 |
| 3.2.6 体细胞核移植 |
| 3.2.7 构建胚胎的移植 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 不同季节卵巢的最佳运输温度 |
| 3.3.2 马、驴卵巢、COCs形态的对比 |
| 3.3.3 COCs回收率 |
| 3.3.4 卵母细胞体外成熟 |
| 3.3.5 不同年龄马的成纤维细胞系的建立 |
| 3.3.6 孤雌激活胚胎的成功率 |
| 3.3.7 马体细胞核移植的试验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 卵巢体外运输 |
| 3.4.2 母体的营养情况对卵母细胞成熟率的影响 |
| 3.4.3 ActA对卵母细胞的作用 |
| 3.4.4 体细胞系的建立 |
| 3.4.5 体细胞核移植 |
| 3.5 小结 |
| 4 全文总结 |
| 4.1 全文结论 |
| 4.2 本研究创新点 |
| 4.3 有待进一步研究的内容 |
| 4.3.1 胚胎移植技术的推广 |
| 4.3.2 马卵母细胞体外成熟技术 |
| 4.3.3 克隆胚胎的构建与体外发育 |
| 附录 |
| 1 胚胎移植马的选择标准(LH-201-2018) |
| 2 胚胎移植马选择结果 |
| 3 马人工授精技术规程(LH-202-2018) |
| 4 马胚胎移植技术规程(LH-203-2018) |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
（3）E2与FSH对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞增殖和凋亡的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一部分 文献综述 |
| 哺乳动物卵泡生长发育和水牛超数排卵的研究进展 |
| 1 哺乳卵泡生长发育过程概述 |
| 1.1 原始生殖细胞的形成 |
| 1.2 原始卵泡的活化和生长 |
| 1.3 初级卵泡到次级卵泡阶段 |
| 1.4 三级卵泡至排卵前阶段 |
| 1.5 排卵 |
| 2 颗粒细胞和卵泡膜细胞在卵泡发育过程中的研究进展 |
| 2.1 颗粒细胞在卵泡发育过程中的研究进展 |
| 2.2 卵泡膜细胞在卵泡发育过程中的研究进展 |
| 3 FSH和E_2在颗粒细胞/卵泡膜细胞增殖和凋亡过程中的研究进展 |
| 3.1 细胞增殖和凋亡的概述 |
| 3.2 促卵泡素(FSH)和雌二醇(E_2)对颗粒细胞/卵泡膜细胞增殖和凋亡的影响 |
| 4 水牛超数排卵的研究进展 |
| 5 研究目的与意义 |
| 第二部分 试验研究 |
| E_2与FSH对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞增殖和凋亡的影响 |
| 前言 |
| 1 试验设备和试验试剂 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 主要试验仪器设备和耗材 |
| 1.3 主要试剂和配制方法 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞的分离和纯化 |
| 2.2 水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞的冻存与复苏 |
| 2.3 细胞无菌培养的注意事项和污染的处理方法 |
| 2.4 水牛卵泡颗粒细胞和卵泡内膜细胞的无血清培养 |
| 2.5 细胞增殖检测方法 |
| 2.6 细胞凋亡检测——流式细胞分析技术 |
| 2.7 引物的设计和合成 |
| 2.8 水牛卵泡颗粒细胞和卵泡内膜细胞RNA样品的制备 |
| 2.9 样品RNA浓度的测定和电泳 |
| 2.10 反转录PCR |
| 2.11 相对荧光定量PCR |
| 3 试验设计 |
| 3.1 无血清培养基对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞生长情况的影响 |
| 3.2 FSH对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞增殖的影响 |
| 3.3 E_2和FSH联合作用对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞增殖的影响 |
| 3.4 E_2和FSH联合作用对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞凋亡的影响 |
| 3.5 E_2和FSH联合作用对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞受体基因表达的影响 |
| 3.6 E_2和FSH联合作用对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞增殖基因表达的影响 |
| 3.7 E_2和FSH联合作用对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞凋亡基因表达的影响 |
| 4 统计方法 |
| 5 试验结果与分析 |
| 5.1 无血清培养基对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞生长情况的影响 |
| 5.2 不同浓度的FSH对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞增殖的影响 |
| 5.3 E_2和FSH联合作用对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞增殖的影响 |
| 5.4 E_2和FSH联合作用对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞凋亡的影响 |
| 5.5 E_2和FSH联合作用对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞受体基因表达的影响 |
| 5.6 E_2和FSH联合作用对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞增殖基因表达的影响 |
| 5.7 E_2和FSH联合作用对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞凋亡基因表达的影响 |
| 6 讨论 |
| 7 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 英文缩略词 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表论文及专利 |
（4）C型钠肽对牛腔前卵泡体外生长发育作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 文献综述 |
| 第一章 哺乳动物卵泡发育 |
| 1.1 哺乳动物卵泡的发生 |
| 1.1.1 原始卵泡形成 |
| 1.1.2 原始卵泡的激活与生长 |
| 1.1.3 卵泡的生长发育 |
| 1.2 卵泡发育、闭锁调控机制 |
| 1.2.1 原始卵泡的发育调控 |
| 1.2.2 卵泡发育的调控机制 |
| 1.2.3 卵泡闭锁调控机制 |
| 1.3 哺乳动物腔前卵泡体外培养 |
| 1.3.1 腔前卵泡分离与选择 |
| 1.3.2 腔前卵泡体外培养方法 |
| 1.3.3 腔前卵泡培养液 |
| 第二章 C型钠肽在动物生殖调控中的作用 |
| 2.1 C型钠肽及其受体 |
| 2.2 C型钠肽与动物生殖调控 |
| 2.2.1 CNP的表达 |
| 2.2.2 CNP与卵母细胞减数分裂 |
| 2.2.3 C型钠肽调控动物卵泡发育 |
| 2.3 激素与细胞因子对CNP/NPR2表达水平的调控 |
| 2.4 C型钠肽的作用机制 |
| 试验研究 |
| 第三章 C型钠肽对牛腔前卵泡体外发育的影响 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试验材料 |
| 3.1.2 试验方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 不同处理牛腔前卵泡体外生长动态 |
| 3.2.2 不同处理牛腔前卵泡直径变化 |
| 3.2.3 体外培养牛腔前卵泡存活鉴定与存活结果 |
| 3.2.4 体外培养牛腔前卵泡成腔结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 C型钠肽对牛腔前卵泡发育及凋亡相关基因表达的影响 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试验材料 |
| 4.1.2 试验方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 不同处理牛腔前卵泡Npr2 mRNA的相对表达水平 |
| 4.2.2 不同处理牛腔前卵泡发育相关基因的相对表达水平 |
| 4.2.3 不同处理牛腔前卵泡凋亡相关基因的相对表达水平 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 不同处理牛腔前卵泡中Npr2 mRNA的表达变化 |
| 4.3.2 不同处理牛腔前卵泡中发育相关基因的表达变化 |
| 4.3.3 不同处理牛腔前卵泡中凋亡相关基因的表达变化 |
| 4.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（5）牛初级卵泡体外培养体系的建立和miR-27a在小鼠颗粒细胞中的功能的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 目录 |
| 缩略词表 |
| 第一篇 文献综述 |
| 前言 |
| 第一章 哺乳动物腔前卵泡体外培养研究进展 |
| 1 卵泡和卵母细胞体内发育概述 |
| 2 卵泡和卵母细胞的体外培养研究进展 |
| 第二章 miRNA在卵巢中的研究进展 |
| 1 miRNA概述 |
| 2 miRNA在卵巢中的功能 |
| 第二篇 研究论文 |
| 第一章 牛初级卵泡体外培养体系的建立 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 第二章 miR-27a在小鼠颗粒细胞中的功能的研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（6）分离方法及卵巢状况对猪次级卵泡采集数量的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 仪器与试剂 |
| 1.2 卵巢来源及处理 |
| 1.3 次级卵泡的分离 |
| 1.3.1 剪碎法 |
| 1.3.2 针刮法 |
| 1.3.3 显微分离法 |
| 1.3.4 酶消化-机械分离法 |
| 1.4 次级卵泡的培养 |
| 1.5 次级卵泡存活力的鉴定 |
| 1.5.1 形态学鉴定 |
| 1.5.2 台盼蓝染色鉴定 |
| 1.6 各项指标的测定方法及取样 |
| 1.6.1 检卵泡方法 |
| 1.6.2 处理时间的确定 |
| 1.6.3 存活率计算 |
| 1.6.4 取 |
| 1.7 统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 猪次级卵泡的形态特点 |
| 2.2 分离方法对猪次级卵泡采集数量、处理时间及存活率的影响 |
| 2.3 卵巢质量对猪次级卵泡采集数量的影响 |
| 2.4 卵巢发育状况对猪次级卵泡采集数量的影响 |
| 3 讨 论 |
（7）小鼠和牛腔前卵泡体外分离培养的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 文献综述 |
| 1.卵泡生长发育的一般规律和动态模式 |
| 2.动物腔前卵泡体外培养的研究概况 |
| 3 影响动物腔前卵泡体外分离效果的因素 |
| 3.1 动物的品种和年龄 |
| 3.2 卵巢大小、发育状况及处理时间 |
| 3.3 分离方法 |
| 4 影响动物腔前卵泡体外发育的因素 |
| 4.1 气相环境和温度 |
| 4.2 培养基和血清 |
| 4.3 培养时卵泡的大小和数量 |
| 4.4 培养体系 |
| 4.5 添加物 |
| 5.Bcl-2家族与卵泡的生长发育 |
| 6.存在的问题及其应用前景 |
| 7.本研究的意义及总体设计 |
| 第2章 小鼠卵巢不同发育时期腔前卵泡的分布及形态学研究 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 卵巢来源及处理 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 主要试剂及其他实验用品 |
| 1.4 主要溶液的配置 |
| 1.5 材料处理及卵巢组织切片的制作 |
| 1.6 卵泡分类 |
| 1.7 试验设计及方法 |
| 1.8 测量标准 |
| 2 统计分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 小鼠卵巢的一般形态结构 |
| 3.2 小鼠不同发育时期卵巢卵泡的分布 |
| 3.3 小鼠腔前卵泡直径、卵母细胞直径和颗粒细胞层厚度的测量 |
| 3.4 小鼠腔前卵泡在卵巢中的分布 |
| 4.分析和讨论 |
| 5.结论 |
| 第3章 小鼠腔前卵泡分离方法的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 卵巢来源 |
| 1.2 主要溶液的配置 |
| 1.3 卵泡分离方法 |
| 1.4 小鼠腔前卵泡的评定标准及卵母质量判断 |
| 1.5 小鼠腔前卵泡存活力鉴定 |
| 1.6 试验设计 |
| 2 统计分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 不同胶原酶浓度对小鼠腔前卵泡分离的影响 |
| 3.2 两种分离法分离小鼠腔前卵泡所得数量、质量及处理时间的比较 |
| 3.3 两种分离方法对卵泡存活率的影响 |
| 4.分析与讨论 |
| 5.结论 |
| 第4章 小鼠腔前卵泡的无血清体外培养研究 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 主要试剂及仪器 |
| 1.2 腔前卵泡的分离 |
| 1.3 主要溶液的配制 |
| 1.4 小鼠腔前卵泡无血清培养系统的建立 |
| 1.5 腔前卵泡的培养 |
| 1.6 腔前卵泡的测量 |
| 1.7 腔前卵泡发育过程中质量的评定标准 |
| 1.8 试验设计 |
| 2.统计分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 小鼠腔前卵泡体外培养形态结构的变化 |
| 3.2 基础培养液中添加不同浓度FSH对小鼠腔前卵泡及其卵母细胞体外生长的影响 |
| 3.3 基础培养液中添加不同浓度LH对小鼠腔前卵泡及其卵母细胞体外生长的影响 |
| 3.4 基础培养液中联合添加FSH、LH对小鼠腔前卵泡及其卵母细胞体外生长的影响 |
| 3.5 不同浓度的维生素C对小鼠腔前卵泡及其卵母细胞体外生长的影响 |
| 3.6 联合添加物对小鼠腔前卵泡及其卵母细胞体外生长的影响 |
| 4. 分析与讨论 |
| 4.1 小鼠腔前卵泡的体外生长 |
| 4.2 促性腺激素对小鼠腔前卵泡及其卵母细胞体外发育的影响 |
| 4.3 抗氧化剂对小鼠腔前卵泡及其卵母细胞体外发育的影响 |
| 5. 结论 |
| 第5章 小鼠腔前卵泡体外培养过程中Bcl-2/Bax基因表达的研究 |
| 1.实验材料 |
| 2.所需的主要试剂及主要仪器 |
| 3.所需主要溶液的配置 |
| 4 试验设计 |
| 5 实验方法 |
| 5.1 DNA琼脂糖凝胶电泳检测卵泡凋亡 |
| 5.2 RT-PCR检测凋亡相关基因bcl-2,bax的表达 |
| 6. 结果 |
| 6.1 DNA琼脂糖凝胶电泳检测卵泡凋亡 |
| 6.2 RT-PCR检测卵泡凋亡相关基因bcl-2,bax的表达 |
| 7.分析与讨论 |
| 8.结论 |
| 第6章 牛腔前卵泡的分布、形态学及体外分离的研究 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 卵巢来源及处理 |
| 1.2 腔前卵泡分类 |
| 1.3 腔前卵泡的体外分离方法 |
| 1.4 试验设计及方法 |
| 2.结果、分析与讨论 |
| 2.1 牛各级卵泡的形态学特征及分布特点 |
| 2.2 牛腔前卵泡的体外分离和体外成熟培养 |
| 小结 |
| 附图及附图说明 |
| 附录 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间研究成果 |
（8）绵羊卵巢组织体外培养与冷冻保存试验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语中英文对照 |
| 第一部分 文献综述 |
| 第一章 卵巢组织体外培养研究概况 |
| 1. 卵巢生理结构及功能 |
| 2 卵子的发生 |
| 3. 卵泡发生 |
| 4. 卵巢组织体外培养研究进展 |
| 4.1 卵巢组织体外培养方法 |
| 4.2 培养条件对卵巢卵泡体外发育的影响 |
| 4.3 激素对卵泡发育的影响 |
| 4.4 生长因子对卵泡发育的影响 |
| 4.5 总结 |
| 5. 卵巢组织体外培养的应用 |
| 5.1 用于研究卵泡发育规律和调节机制 |
| 5.2 转基因动物 |
| 5.3 毒理学研究 |
| 5.4 作为评估卵巢组织冷冻效果的手段 |
| 6. 展望 |
| 第二章 卵巢组织的冷冻保存 |
| 1. 卵巢组织冷冻的目的与优点 |
| 2. 卵巢组织冷冻的影响因素 |
| 2.1 冷冻前处理 |
| 2.2 组织切片的大小 |
| 2.3 植冰温度的影响 |
| 2.4 冷冻保护剂 |
| 2.5 冷冻方法 |
| 3. 冷冻效果的评估 |
| 4. 展望 |
| 第二部分 试验研究 |
| 第三章 绵羊卵巢组织基础生理研究 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验设计 |
| 1.3 组织切片与染色,以及卵泡计数 |
| 1.4 卵泡超微结构观察 |
| 1.5 数据分析 |
| 2. 结果 |
| 2.1 绵羊卵巢组织中卵泡数量 |
| 2.2 各年龄阶段绵羊卵巢中腔前卵泡的构成 |
| 2.3 各年龄阶段绵羊卵巢中各级卵泡的大小 |
| 2.4 左右侧卵巢之间的差异 |
| 2.5 黄体卵巢与无黄体卵巢中卵泡构成差异 |
| 2.6 各年龄阶段绵羊卵巢中卵泡的分布及各级卵泡的组织学特征 |
| 2.7 各级卵泡的超微结构特征 |
| 3. 讨论 |
| 3.1 各年龄阶段绵羊卵巢的生理特征 |
| 3.2 各级卵泡的超微结构特征 |
| 4. 结论 |
| 第四章 绵羊卵巢组织的体外培养基础培养条件的筛选 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验设计 |
| 1.3 组织学分析 |
| 1.4 数据分析 |
| 2. 结果 |
| 2.1 培养支持体系对卵巢组织体外培养的影响 |
| 2.2 胶原蛋白浓度与铺层厚度对卵巢组织体外培养的影响 |
| 2.3 培养温度对卵巢体外培养的影响 |
| 2.4 培养基对卵巢组织体外培养的影响 |
| 2.5 血清及血清替代物添加对卵巢组织体外培养的影响 |
| 2.6 ITS体系对卵巢卵泡体外培养的影响 |
| 2.7 组织块形状对卵巢卵泡体外培养的影响 |
| 2.8 营养与髓质对原始卵泡激活的影响 |
| 3. 讨论 |
| 3.1 培养支持体系对卵巢组织体外培养的影响 |
| 3.2 培养液对卵巢组织体外培养的影响 |
| 3.3 培养温度对卵巢组织体外培养的影响 |
| 3.4 培养添加成分对卵巢组织体外培养的影响 |
| 3.5 培养试验取材对卵巢组织体外培养的影响 |
| 4. 结论 |
| 第五章 卵巢组织体外培养基础添加因子浓度的筛选 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验设计 |
| 1.3 组织学分析 |
| 1.4 免疫组化PCNA分析 |
| 1.5 培养液中雌激素含量的测定 |
| 1.6 超微结构观察 |
| 1.7 数据分析 |
| 2. 结果 |
| 2.1 不同浓度VC对卵巢卵泡体外培养的影响 |
| 2.2 不同FSH添加方式对卵巢卵泡体外培养的影响 |
| 2.3 不同浓度EGF对卵巢卵泡体外培养的影响 |
| 2.4 bFGF对卵巢皮质体外培养的影响 |
| 2.5 各筛选的因子浓度在同一体系中长期培养的结果 |
| 3. 讨论 |
| 3.1 VC的添加 |
| 3.2 FSH的添加 |
| 3.3 EGF的添加 |
| 3.4 BFGF的添加 |
| 3.5 各因子的对比 |
| 4 结论 |
| 第六章 绵羊卵巢组织综合体外培养体系的建立 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验设计 |
| 1.3 组织学分析 |
| 1.4 超微结构观察 |
| 1.5 免疫组化PCNA检测 |
| 1.6 组织细胞凋亡TUNEL检测 |
| 1.7 培养液中激素含量的检测 |
| 1.8 数据分析 |
| 2. 试验结果 |
| 2.1 VC,EGF,FSH组合对绵羊卵巢组织体外培养的影响 |
| 2.2 动态体系的效果 |
| 3. 讨论 |
| 3.1 VC,FSH,EGF之间的相互关系 |
| 3.2 综合体系的评估 |
| 4. 结论 |
| 第七章 绵羊卵巢组织的冷冻与保存 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验设计 |
| 1.3 组织学分析 |
| 1.4 超微结构观察 |
| 1.5 激素测定 |
| 1.6 数据统计 |
| 2. 结果 |
| 2.1 不同保存条件对卵巢卵泡的影响 |
| 2.2 冷冻对卵巢卵泡的影响 |
| 3. 讨论 |
| 3.1 常规保存 |
| 3.2 冷冻保存 |
| 4. 结论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 创新之处 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
| 导师评语 |
（9）家畜类腔前卵泡体外分离方法及其影响因素研究进展（论文提纲范文）
| 1 家畜类腔前卵泡体外分离方法研究概况 |
| 2 家畜类腔前卵泡的体外分离方法 |
| 2.1 酶消化法 |
| 2.2 机械分离法 |
| 2.2.1 剪碎法 |
| 2.2.2 梳刮法 |
| 2.2.3 显微分离法 |
| 2.2.4 研磨法 |
| 2.3 酶-机械分离结合法 |
| 3 影响家畜类腔前卵泡体外分离方法的因素 |
| 3.1 动物的品种和年龄 |
| 3.2 卵巢大小及发育情况 |
| 3.3 时间 |
| 4 结语与展望 |
（10）牛体外受精中四个关键技术的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 主要符号表 |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 一、牛体外受精技术研究进展 |
| 1. 牛卵母细胞体外受精研究概况 |
| 2. 牛IVF—ET技术各项技术指标现状及经济效益评估 |
| 3. 卵母细胞的体外培养 |
| 4. 精子的获能和体外受精 |
| 5. 受精卵体外培养 |
| 6. 展望 |
| 二、牛腔前卵泡的研究进展 |
| 1. 腔前卵泡的获取 |
| 2. 腔前卵泡的体外成熟培养 |
| 3. 添加物对腔前卵泡的影响 |
| 4. 展望 |
| 实验部分 |
| 实验一 牛卵巢内卵母细胞体外成熟与受精的研究 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 主要仪器和设备 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 有关溶液配制 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.5 实验设计 |
| 1.6 统计分析 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 4. 结论 |
| 实验二 性别分离的精子和未分离的精子体外受精效果的比较 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 主要仪器和设备 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 有关溶液配制 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.5 实验设计 |
| 1.6 统计分析 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 4. 结论 |
| 实验三 牛体外受精胚胎培养液的研究 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 主要仪器和设备 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 有关溶液配制 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.5 实验设计 |
| 1.6 统计分析 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 4. 结论 |
| 实验四 牛腔前卵泡体外培养的研究 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 主要仪器和设备 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 卵巢的采集 |
| 1.4 腔前卵泡的采集 |
| 1.5 卵泡生长和健康卵泡地评价 |
| 1.6 卵泡培养 |
| 1.7 腔前卵泡培养液的配制 |
| 1.8 试验设计 |
| 1.9 统计分析 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 4. 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 作者简介 |
| 导师评语 |
四、卵巢大小及发育状况与牛腔前卵泡采集数量的关系（论文参考文献）
- [1]促卵泡激素对小鼠腔前卵泡离体培养的影响研究[D]. 杨静. 西北大学, 2021(12)
- [2]马胚胎移植及克隆胚体外构建技术[D]. 张志鹏. 内蒙古农业大学, 2019(08)
- [3]E2与FSH对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞增殖和凋亡的影响[D]. 文冬梅. 广西大学, 2019(01)
- [4]C型钠肽对牛腔前卵泡体外生长发育作用的研究[D]. 原敏. 西北农林科技大学, 2016(11)
- [5]牛初级卵泡体外培养体系的建立和miR-27a在小鼠颗粒细胞中的功能的研究[D]. 孙婧. 中国农业大学, 2014(08)
- [6]分离方法及卵巢状况对猪次级卵泡采集数量的影响[J]. 张桂枝,靳双星,焦喜兰. 西北农林科技大学学报(自然科学版), 2010(05)
- [7]小鼠和牛腔前卵泡体外分离培养的研究[D]. 张耀君. 陕西师范大学, 2010(03)
- [8]绵羊卵巢组织体外培养与冷冻保存试验研究[D]. 彭夏雨. 石河子大学, 2010(05)
- [9]家畜类腔前卵泡体外分离方法及其影响因素研究进展[J]. 张耀君,王昭晖,文瑞丽,师红,吴民耀. 四川动物, 2009(06)
- [10]牛体外受精中四个关键技术的研究[D]. 李卫华. 石河子大学, 2006(11)