导读:本文包含了山羊卵泡刺激素论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:腺病毒,FSH,山羊乳腺上皮细胞,体外重组
山羊卵泡刺激素论文文献综述
李媛[1]（2019）在《腺病毒介导人卵泡刺激素基因在山羊乳腺上皮细胞的表达》一文中研究指出卵泡刺激素(FSH)是动物体内最重要的性激素之一,主要作用于生殖细胞,在个体的发育、成熟以及生殖生理方面发挥着关键作用。市场上的FSH主要分为尿源FSH和细胞工程制备的FSH,前者的产量低、来源不均一,后者生产成本高、价格昂贵,不能满足市场需求。目前,动物乳腺制备蛋白药物具有产量高、价格低的特点,但利用大动物乳腺制备FSH的研究还未见报导,主要是因为动物体内的FSH过多会导致动物体的正常生理紊乱,最终导致动物死亡。由于FSH是通过FSHα与FSHβ亚基蛋白非共价键结合形成的异源二聚体糖蛋白,单独的FSHα和FSHβ亚基在动物体内都不具备生物学活性。因此本研究利用腺病毒将人FSHα与FSHβ亚基蛋白分别在山羊乳腺上皮细胞(GMEC)单独表达,然后将单独表达的FSHα和FSHβ亚基蛋白进行体外重组、纯化得到完整的重组人卵泡刺激素(rhFSH),并利用体外活性试验验证rhFSH具备生物活性。本研究针对山羊乳腺泌乳细胞在体外表达人FSH蛋白进行了探究,为将来利用大动物乳腺制备重组人卵泡刺激素提供技术依据。试验获得如下结果:1.以pIRES-FSH-neo3载体为模板,利用PCR技术,亚克隆得到了FSHα和FSHβ亚基基因。一步克隆法将目的基因分别连接在穿梭载体pAdTrack-CMV上构建了pAdTrack-CMV-FSHα和pAdTrack-CMV-FSHβ腺病毒穿梭载体。穿梭载体经鉴定后,用PmeI酶切使其线性化,与骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中同源重组,获得了pAdEasy-FSHα和pAdEasy-FSHβ重组腺病毒载体。2.将鉴定正确的重组腺病毒载体pAdEasy-FSHα和pAdEasy-FSHβ用PacI酶切线性化,用异丙醇沉淀法纯化之后,利用Lipofectamine 2000转染到HEK293A细胞中包装获得第一代重组腺病毒,经扩繁后得到高浓度的重组腺病毒。LaSRT法测得Ad-FSHα和Ad-FSHβ重组腺病毒浓度滴度均为1×10~9 pfu/mL。3.用重组腺病毒Ad-FSHα和Ad-FSHβ分别感染GMEC细胞,测得重组腺病毒Ad-FSHα的感染复数(MOI)为160,重组腺病毒Ad-FSHβ的MOI值为200。裂解细胞获取蛋白,经Western Blot检测表明,利用重组腺病毒可以在GMEC细胞中有效表达FSHα和FSHβ亚基蛋白。4.将GMEC细胞表达的FSHα与FSHβ亚基蛋白进行体外重组、纯化,利用双抗夹心ELISA法及Western Blot证明FSHα与FSHβ亚基蛋白成功在体外重组成完整的rhFSH。通过观察FSH靶向结合特异性受体(FSHR)及测定HKE-293-FSHR细胞cAMP值,表明体外重组的rhFSH和阳性对照药物Gonal-F同样具备生物活性。综上所述,本研究利用腺病毒介导人卵泡刺激素基因FSHα和FSHβ在山羊乳腺上皮细胞进行表达,产生的FSHα和FSHβ亚基蛋白,经体外重组、纯化得到rhFSH,且验证得出本研究制备的rhFSH具备生物学活性。这就为下一步利用大动物乳腺以及制备转基因动物生产重组人卵泡刺激素奠定了基础。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2019-05-01）
孙曼,郭雅茹,徐永平,金秀芳,杜宜楠[2]（2017）在《卵泡刺激素受体在雌性山羊颈动脉体的分布》一文中研究指出为了检测雌性山羊颈动脉体中是否存在卵泡刺激素受体(FSHR),探讨卵泡刺激素(FSH)是否可以影响雌性山羊颈动脉体的活动,本试验采用免疫组织化学SP法观察卵泡刺激素受体(FSHR)在山羊颈动脉体内的分布特点,利用IPP 6.0图像半定量分析系统分析FSHR在颈动脉体中实质细胞和非实质细胞上的表达量差异。结果显示,FSHR主要分布在颈动脉体的实质细胞(Ⅰ型细胞和Ⅱ型细胞)。Ⅰ型细胞中FSHR强阳性产物分布于细胞核,中等阳性产物分布于细胞膜,弱阳性或阴性产物分布于细胞质;Ⅱ型细胞中有强阳性产物;血管内皮细胞中有中等阳性或强阳性产物。FSHR在颈动脉体的实质细胞与非实质细胞中相对表达量呈显着性差异(P<0.05)。结果表明,证实FSHR在雌性非妊娠山羊颈动脉体内广泛表达,提示颈动脉体可能接受FSH的调节,这为研究FSH作用于非生殖系统及颈动脉体神经内分泌调节机制提供形态学依据。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2017年05期）
金秀芳,王志豪,范洁,徐永平,陈文东[3]（2014）在《卵泡刺激素受体在山羊颈胸神经节的分布》一文中研究指出目的探讨卵泡刺激素(FSH)是否影响心肺功能活动的自主神经调节。方法取雄性和雌性成年山羊的颈胸神经节各5对,经免疫组织化学SP法染色后,观察FSH受体在山羊颈胸神经节的分布特点。结果在颈胸神经节内,FSH受体免疫阳性产物主要存在于神经元的细胞质和细胞膜,为强阳性或中等阳性染色,而细胞核呈空泡状,不着色。此外,在神经节内的支持细胞、过路纤维、施万细胞以及血管内皮细胞中FSH受体呈弱阳性染色,有少量分布。图像分析表明,该神经节内神经元胞体的FSH受体相对表达量极显着高于其他非神经元胞体结构(P<0.01)。结论颈胸神经节中神经元细胞是FSH作用的主要靶细胞,提示FSH可能通过影响该神经节的神经元活动,从而影响其发出的交感节后神经而调节心肺功能活动。(本文来源于《解剖学报》期刊2014年02期）
张莉[4]（2003）在《山羊卵泡刺激素基因的克隆、序列分析及表达载体构建》一文中研究指出当前畜牧业生产中所使用的卵泡刺激素(FSH)产品都是从牛、羊、猪等家畜的脑垂体中直接提取的，由于材料来源有限、纯度差且常有其它激素的污染，影响了FSH的广泛应用。用基因工程方法可大量生产高纯度的FSH，降低生产费用，这对畜牧业生产具有重要意义。 本试验是从新屠宰的母山羊脑垂体中提取总RNA，反转录获得cDNA，以此cDNA为模板，PCR扩增目的基因片段，分别获得长为360bp的山羊FSH-α亚基DNA片段和长为390bp的山羊FSH-β亚基DNA片段，与预期的目的基因片段大小一致。将它们分别克隆至pMD 18-T，随机挑选几个阳性重组子进行测序。将测序结果与绵羊等多种哺乳动物该基因及相应的氨基酸进行同源性比较、分析。结果显示山羊FSH-α、β亚基基因及其各自对应的氨基酸与其他哺乳动物的同源性都非常高，一般均在80％以上，验证了在同一种内，甚至在所有的哺乳动物中FSH-α亚基是极为保守的；而FSH-β亚基尽管具有种属特异性，但也是相当保守的。将所得的山羊FSH-α、β亚基基因分别用加相应限制性内切酶酶切位点的引物大量扩增，回收后与pMD 18-T连接，筛选出阳性重组子，大量双酶切回收获得带粘性末端的山羊FSH-α、β亚基基因，将它们分别与同两个酶大量双酶切回收获得的带粘性末端的PF质粒进行连接，筛选阳性重组子。依此方法分别构建了FSH单亚基真核表达载体gFSH-α-PF、gFSH-β-PF和FSH双亚基真核表达载体gFSH-α-β-PF、dFSH-α-gFSHβ-PF。 本研究首次进行了山羊FSH的基因克隆、序列分析及表达载体构建方面的探索，填补了国内外重组山羊FSH基础研究的空白，为今后重组山羊FSH的大量生产应用提供了理论基础和实验依据。(本文来源于《东北农业大学》期刊2003-06-01）
张莉,李庆章,关洪斌[5]（2002）在《山羊卵泡刺激素β-亚基cDNA的分子克隆与序列分析》一文中研究指出从新屠宰的母山羊脑垂体中提取总RNA,反转录获得cDNA,以此cDNA为模板用PCR法扩增目的片段,获得长为390bp的山羊卵泡刺激素β-亚基cDNA片段,与预期的目的片段大小一致。将它克隆至pMD-18-T-Verctor中,随机挑选2个阳性重组子进行测序,并将测序结果与绵羊、牛等多种哺乳动物该基因的核苷酸序列及相应氨基酸序列进行比较。结果表明,山羊的卵泡刺激素β-亚基基因与绵羊的该基因氨基酸同源性最高,达99.9%,只有1个氨基酸不同;与牛、猪、马、虎、人、大鼠的该基因氨基酸同源性分别为92.5%、91.7%、89.9%、89.1%、86.0%、83.7%。从核苷酸同源性来看,山羊的卵泡刺激素β-亚基基因与绵羊该基因的同源性最高,达98%;与牛、猪、马、虎、人、大鼠的核苷酸同源性为95%、90%、90%、88%、86%、84%。结果表明,尽管β-亚基基因有种的特异性,但在哺乳动物中其同源性还是很高的。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2002年06期）
张莉,李庆章,关洪斌[6]（2002）在《山羊卵泡刺激素α亚基cDNA的分子克隆与序列分析》一文中研究指出从新屠宰的雌山羊脑垂体中提取总RNA ,反转录获得cDNA .以此cDNA为模板用PCR法扩增目的片段 ,获得长为 380bp的山羊卵泡刺激素α亚基cDNA片段 .将它克隆至pMD 18 T Verctor.随机挑选 3个阳性重组子进行测序 ,将测序结果与绵羊、牛、猪等多种哺乳动物该基因的核苷酸序列及相应氨基酸序列进行比较 .结果表明 ,山羊卵泡刺激素α亚基基因氨基酸序列与绵羊、水牛的同源性最高 ,达 96 % ,与牛的同源性达 95 % ,与人的同源性较低 ,为 74 % .山羊卵泡刺激素α亚基基因编码区的核苷酸与绵羊的同源性最高 ,达 95 % ,与水牛、牛的同源性达 94 % ,与马和大鼠的同源性较低 ,为 85 % .总体来看 ,在哺乳类动物中FSHα亚基基因同源性还是很高的 .(本文来源于《中国生物化学与分子生物学报》期刊2002年06期）
山羊卵泡刺激素论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了检测雌性山羊颈动脉体中是否存在卵泡刺激素受体(FSHR),探讨卵泡刺激素(FSH)是否可以影响雌性山羊颈动脉体的活动,本试验采用免疫组织化学SP法观察卵泡刺激素受体(FSHR)在山羊颈动脉体内的分布特点,利用IPP 6.0图像半定量分析系统分析FSHR在颈动脉体中实质细胞和非实质细胞上的表达量差异。结果显示,FSHR主要分布在颈动脉体的实质细胞(Ⅰ型细胞和Ⅱ型细胞)。Ⅰ型细胞中FSHR强阳性产物分布于细胞核,中等阳性产物分布于细胞膜,弱阳性或阴性产物分布于细胞质;Ⅱ型细胞中有强阳性产物;血管内皮细胞中有中等阳性或强阳性产物。FSHR在颈动脉体的实质细胞与非实质细胞中相对表达量呈显着性差异(P<0.05)。结果表明,证实FSHR在雌性非妊娠山羊颈动脉体内广泛表达,提示颈动脉体可能接受FSH的调节,这为研究FSH作用于非生殖系统及颈动脉体神经内分泌调节机制提供形态学依据。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
山羊卵泡刺激素论文参考文献
[1].李媛.腺病毒介导人卵泡刺激素基因在山羊乳腺上皮细胞的表达[D].西北农林科技大学.2019
[2].孙曼,郭雅茹,徐永平,金秀芳,杜宜楠.卵泡刺激素受体在雌性山羊颈动脉体的分布[J].中国兽医学报.2017
[3].金秀芳,王志豪,范洁,徐永平,陈文东.卵泡刺激素受体在山羊颈胸神经节的分布[J].解剖学报.2014
[4].张莉.山羊卵泡刺激素基因的克隆、序列分析及表达载体构建[D].东北农业大学.2003
[5].张莉,李庆章,关洪斌.山羊卵泡刺激素β-亚基cDNA的分子克隆与序列分析[J].生物技术通讯.2002
[6].张莉,李庆章,关洪斌.山羊卵泡刺激素α亚基cDNA的分子克隆与序列分析[J].中国生物化学与分子生物学报.2002