本文主要研究内容
作者陈雅婷（2019）在《西农萨能奶山羊乳腺α-S1-酪蛋白基因功能的初步研究》一文中研究指出：αs1-酪蛋白（Alpha S1 Casein,CSN1S1）是乳蛋白中一种重要的蛋白质,可以为动物体的生长发育提供活性肽、必需氨基酸等营养物质,也能够调节乳腺上皮细胞等多种细胞的生理状态及功能。因此,探究αs1-酪蛋白基因对奶山羊乳蛋白合成的调控作用有极其重要的意义。本研究通过克隆得到奶山羊CSN1S1基因的CDS区,并构建了CSN1S1基因重组腺病毒过表达载体,同时在线设计并合成靶向CSN1S1基因的特异性siRNA。在山羊乳腺上皮细胞中分别对CSN1S1基因进行过表达和干扰,通过RT-qPCR和Western Blot等方法检测乳蛋白相关基因表达量及部分乳蛋白表达量的变化,为进一步明确αs1-酪蛋白基因在乳蛋白合成中的功能奠定一定的理论基础。以下为本研究主要结果:1.采集泌乳盛期西农萨能奶山羊乳腺组织,提取总RNA,根据GenBank中收录的Capra hircus的CSN1S1基因序列（KT253650.1）来设计引物,利用RT-PCR技术克隆得到山羊CSN1S1基因CDS序列,其长度为642bp,编码213个氨基酸。生物信息学分析得出,山羊CSN1S1基因CDS区序列与Ovis aries（FJ440845.1）、Bos taurus（EU908730.1）、Mus musculus（AF275367.1）、Sus scrofa（NM001004029.2）、Homo sapiens（NM001890.2）的同源性分别为:98.91%、97.83%、84.87%、92.52%以及85.69%。2.构建含目的基因的同源重组质粒pAdEasy-CSN1S1,转染293A细胞,感染扩增四代得到高滴度腺病毒,滴度为108 U/mL。通过不同体积的病毒液感染山羊乳腺上皮细胞,确定病毒最佳感染复数（MOI）为200。病毒感染山羊乳腺上皮细胞48 h后收集细胞总RNA或总蛋白,RT-qPCR结果显示,CSN1S1基因表达量显著上调（P<0.01）,CSN2基因表达显著下调（P<0.05）,CSN1S2、CSN3、LALBA、BLG的表达水平无显著变化;Western blot结果显示,过表达CSN1S1基因后,αs1-酪蛋白表达量显著升高（P<0.05）,β-酪蛋白表达量显著下降（P<0.05）,αs2-酪蛋白、κ-酪蛋白及β-乳球蛋白表达水平无显著变化。3.根据CSN1S1基因CDS区序列,设计靶向CSN1S1基因的特异性siRNA,并转染山羊乳腺上皮细胞,筛选得到干扰效率最佳的siR-507（P<0.01）。干扰CSN1S1基因后,RT-qPCR结果显示,CSN2基因表达水平显著上调（P<0.05）,CSN1S2、CSN3、LALBA、BLG基因的mRNA水平无显著变化;Western blot结果显示,αs1-酪蛋白表达量被抑制（P<0.05）;β-酪蛋白表达水平显著上调（P<0.05）,αs2-酪蛋白、κ-酪蛋白及β-乳球蛋白的表达无明显变化。综上所述,本研究成功克隆得到了奶山羊αs1-酪蛋白基因的CDS区,构建了腺病毒过表达载体,并感染山羊乳腺上皮细胞以过表达CSN1S1基因,可导致CSN2基因的mRNA表达水平及蛋白表达显著下调,干扰αs1-酪蛋白基因能够显著上调CSN2基因及β-酪蛋白表达。本研究为明确CSN1S1基因在西农萨能奶山羊乳腺细胞乳蛋白合成中的调控作用提供理论依据。
Abstract
αs1-lao dan bai （Alpha S1 Casein,CSN1S1）shi ru dan bai zhong yi chong chong yao de dan bai zhi ,ke yi wei dong wu ti de sheng chang fa yo di gong huo xing tai 、bi xu an ji suan deng ying yang wu zhi ,ye neng gou diao jie ru xian shang pi xi bao deng duo chong xi bao de sheng li zhuang tai ji gong neng 。yin ci ,tan jiu αs1-lao dan bai ji yin dui nai shan yang ru dan bai ge cheng de diao kong zuo yong you ji ji chong yao de yi yi 。ben yan jiu tong guo ke long de dao nai shan yang CSN1S1ji yin de CDSou ,bing gou jian le CSN1S1ji yin chong zu xian bing du guo biao da zai ti ,tong shi zai xian she ji bing ge cheng ba xiang CSN1S1ji yin de te yi xing siRNA。zai shan yang ru xian shang pi xi bao zhong fen bie dui CSN1S1ji yin jin hang guo biao da he gan rao ,tong guo RT-qPCRhe Western Blotdeng fang fa jian ce ru dan bai xiang guan ji yin biao da liang ji bu fen ru dan bai biao da liang de bian hua ,wei jin yi bu ming que αs1-lao dan bai ji yin zai ru dan bai ge cheng zhong de gong neng dian ding yi ding de li lun ji chu 。yi xia wei ben yan jiu zhu yao jie guo :1.cai ji bi ru cheng ji xi nong sa neng nai shan yang ru xian zu zhi ,di qu zong RNA,gen ju GenBankzhong shou lu de Capra hircusde CSN1S1ji yin xu lie （KT253650.1）lai she ji yin wu ,li yong RT-PCRji shu ke long de dao shan yang CSN1S1ji yin CDSxu lie ,ji chang du wei 642bp,bian ma 213ge an ji suan 。sheng wu xin xi xue fen xi de chu ,shan yang CSN1S1ji yin CDSou xu lie yu Ovis aries（FJ440845.1）、Bos taurus（EU908730.1）、Mus musculus（AF275367.1）、Sus scrofa（NM001004029.2）、Homo sapiens（NM001890.2）de tong yuan xing fen bie wei :98.91%、97.83%、84.87%、92.52%yi ji 85.69%。2.gou jian han mu de ji yin de tong yuan chong zu zhi li pAdEasy-CSN1S1,zhuai ran 293Axi bao ,gan ran kuo zeng si dai de dao gao di du xian bing du ,di du wei 108 U/mL。tong guo bu tong ti ji de bing du ye gan ran shan yang ru xian shang pi xi bao ,que ding bing du zui jia gan ran fu shu （MOI）wei 200。bing du gan ran shan yang ru xian shang pi xi bao 48 hhou shou ji xi bao zong RNAhuo zong dan bai ,RT-qPCRjie guo xian shi ,CSN1S1ji yin biao da liang xian zhe shang diao （P<0.01）,CSN2ji yin biao da xian zhe xia diao （P<0.05）,CSN1S2、CSN3、LALBA、BLGde biao da shui ping mo xian zhe bian hua ;Western blotjie guo xian shi ,guo biao da CSN1S1ji yin hou ,αs1-lao dan bai biao da liang xian zhe sheng gao （P<0.05）,β-lao dan bai biao da liang xian zhe xia jiang （P<0.05）,αs2-lao dan bai 、κ-lao dan bai ji β-ru qiu dan bai biao da shui ping mo xian zhe bian hua 。3.gen ju CSN1S1ji yin CDSou xu lie ,she ji ba xiang CSN1S1ji yin de te yi xing siRNA,bing zhuai ran shan yang ru xian shang pi xi bao ,shai shua de dao gan rao xiao lv zui jia de siR-507（P<0.01）。gan rao CSN1S1ji yin hou ,RT-qPCRjie guo xian shi ,CSN2ji yin biao da shui ping xian zhe shang diao （P<0.05）,CSN1S2、CSN3、LALBA、BLGji yin de mRNAshui ping mo xian zhe bian hua ;Western blotjie guo xian shi ,αs1-lao dan bai biao da liang bei yi zhi （P<0.05）;β-lao dan bai biao da shui ping xian zhe shang diao （P<0.05）,αs2-lao dan bai 、κ-lao dan bai ji β-ru qiu dan bai de biao da mo ming xian bian hua 。zeng shang suo shu ,ben yan jiu cheng gong ke long de dao le nai shan yang αs1-lao dan bai ji yin de CDSou ,gou jian le xian bing du guo biao da zai ti ,bing gan ran shan yang ru xian shang pi xi bao yi guo biao da CSN1S1ji yin ,ke dao zhi CSN2ji yin de mRNAbiao da shui ping ji dan bai biao da xian zhe xia diao ,gan rao αs1-lao dan bai ji yin neng gou xian zhe shang diao CSN2ji yin ji β-lao dan bai biao da 。ben yan jiu wei ming que CSN1S1ji yin zai xi nong sa neng nai shan yang ru xian xi bao ru dan bai ge cheng zhong de diao kong zuo yong di gong li lun yi ju 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自西北农林科技大学的陈雅婷，发表于刊物西北农林科技大学2019-07-11论文，是一篇关于奶山羊论文,乳腺上皮细胞论文,酪蛋白论文,酪蛋白论文,西北农林科技大学2019-07-11论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自西北农林科技大学2019-07-11论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
标签：奶山羊论文; 乳腺上皮细胞论文; 酪蛋白论文; 西北农林科技大学2019-07-11论文;