导读:本文包含了抑制性差减杂交法论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:襄麦冬,SMART法,甾体皂苷,抑制性差减杂交
抑制性差减杂交法论文文献综述
余海忠,王海燕,赵慧君,孙永林[1]（2018）在《基于甾体皂苷的襄麦冬块根抑制性差减杂交文库的构建》一文中研究指出【目的】甾体皂苷是襄麦冬块根主要活性成分之一,为了能在分子水平上实现对相关基因的表达调控,从而使甾体皂苷含量的提高成为可能,筛选参与甾体皂苷合成的蛋白或酶就非常必要。【方法】本实验以襄麦冬始见期块根和采收期块根作为实验样品,构建了不同生育期襄麦冬块根抑制性差减杂交(SSH)文库。【结果】构建的始见期和采收期块根差减文库的外源片段,有效基因序列308条,长度主要分布在250~1000 bp左右,片段平均长度586.99 bp;文库样本序列注释上NR、SWISS-PROT、TREMBL、CDD、PFAM库的基因分别有65.26%、34.42%、63.96%、26.30%、14.94%;样本中分别有23和103个Unigene可注释上12个COG分类与19个KOG分类中;样本中有81个预测基因,可以注释到48种酶与映射到92个代谢通路上;样本基因功能在Biological Process分类中聚集于cellular process和metabiolic process,在Cellular Component主要聚集于cell、cell part和intracellular,在Molecular Function分类中主要聚集于catalytic activity,binding和transferase activity。【结论】本实验成功构建了基于甾体皂苷的襄麦冬块根抑制性差减杂交文库,筛选出一批差异表达目的基因。(本文来源于《西南农业学报》期刊2018年02期）
焦小利,杨卉芯,宋晓斌[2]（2017）在《应用抑制性差减杂交技术研究枣缩果病病程相关基因》一文中研究指出【目的】了解细交链孢菌侵染枣果实过程的差异表达基因。【方法】以白熟期‘蜂蜜罐’枣的果实为材料,人工接种细交链孢菌,分别在接种0.5、1、2、3和4 d后取样,通过抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)构建了病原菌诱导的差异表达的c DNA消减文库。【结果】PCR鉴定随机挑取的阳性克隆,显示插入片段大小为200~900 bp。随机挑选200个阳性克隆进行测序,利用BLASTx在Gen Bank Nr数据库进行序列比对分析,共获得118个Unigenes。对这些ESTs进行功能分类发现细交链孢菌侵染下诱导表达基因涉及植物细胞内的多种代谢和应答过程,其中包括抗病/防御类、信号传导途径类、新陈代谢类、蛋白质合成和加工类及细胞结构的组成等,尤其以抗病/防御类基因所占比例最大(27.17%)。【结论】通过SSH研究了缩果病病原侵染果实过程的差异表达基因,鉴定到一些与枣缩果病相关的基因,为进一步研究相关基因及今后筛选防治枣缩果病提供理论基础。(本文来源于《果树学报》期刊2017年12期）
王楠,潘喆,袁宏[3]（2016）在《抑制性差减杂交技术分离白血病多药耐药基因》一文中研究指出目的分离及鉴定与白血病多药耐药性相关的差异表达基因。方法采用抑制性差减杂交(SSH)技术分离非耐药细胞株K562与耐药细胞株K562/DOX差异表达基因。提取总RNA,逆转录合成cDNA,经限制性内切酶RsaⅠ酶切后,分别与不同的接头(adopter1和adopter2R)连接;连接产物插入pMD19-T载体后转入大肠埃希菌中,构建cDNA差减文库;挑取阳性克隆提取质粒进行测序及同源序列分析,确定差异表达基因。结果筛选获得220个差异表达基因,包括血红蛋白、核糖体和线粒体等相关基因,以及热休克因子结合蛋白(HSPB1)基因等其他基因。结论采用SSH技术及分子克隆技术可构建耐药及非耐药肿瘤细胞株差异表达基因的差减cDNA文库,能够为进一步筛选、克隆肿瘤细胞多药耐药性相关差异表达基因奠定基础。(本文来源于《国际检验医学杂志》期刊2016年06期）
梅冰,陆翔,窦法楷,汪慧莲,李显秋[4]（2016）在《抑制性差减杂交技术(SSH)及其应用研究进展》一文中研究指出抑制性差减杂交技术是一种差异性基因克隆的新技术,它对研究细胞生殖、发育、分化、衰老及死亡等生命过程中有关基因的差异表达及相关基因的分子克隆提供了有力的技术工具。简要概述了抑制性差减杂交技术的基本原理、优越性、缺陷及其在相关基因克隆方面的应用研究进展。(本文来源于《山西农业科学》期刊2016年02期）
俞慧,邢林林,祁晶晶,倪欣涛,姜盼[5]（2015）在《应用抑制性差减杂交筛选鸭疫里默氏杆菌强弱菌株基因组的差异片段》一文中研究指出为了分析鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)强毒菌株HXb2和弱毒菌株NJ-1基因组之间的差异基因,以HXb2株基因组为待测菌株,以NJ-1株基因组为驱动菌株,构建了两株细菌基因组间的抑制性差减文库。经过dot-blot杂交和PCR验证,共鉴定到34个强弱毒株基因组差异片段。测定的序列经BLAST、DNAStar和PSORTb分析,结果表明有2个片段所在基因编码的蛋白为外膜蛋白,有2个片段所在基因编码的蛋白为胞质膜蛋白如磷酸盐转运蛋白,11个片段所在基因编码的蛋白为胞内蛋白如丙氨酸脱氢酶、β-内酰胺酶及一些假定蛋白等,有19个片段所在基因编码的蛋白(大部分为假定蛋白)定位未知。这些差异基因编码的蛋白可能与鸭疫里默氏杆菌的毒力及HXb2株特异蛋白等有关。本研究为下一步鉴定新的毒力基因及其他特异蛋白的功能奠定了基础。(本文来源于《中国动物传染病学报》期刊2015年03期）
郑礼洲[6]（2014）在《抑制性差减杂交技术筛选HPS潜在毒力基因及鉴别HPS潜在毒力菌株二重PCR方法的建立》一文中研究指出副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis，HPS)可引起猪浆液纤维素性胸膜炎、心包炎、腹膜炎、关节炎及脑膜脑炎等症状。副猪嗜血杆菌病在全世界范围内广泛流行，成为威胁养猪业的重要疫病之一。本试验在2011年12月-2013年2月期间，对江西省多个地区的疑似病料进行HPS的分离鉴定及血清分型，从中选择代表菌株进行抑制性差减杂交来筛选差异基因，并进行分布调查，最后根据调查结果建立二重PCR用于临床上该菌的鉴定与毒力检测，具体如下：1、副猪嗜血杆菌的分离鉴定及血清分型在2011年12月-2013年2月期间，从江西多个地区的疑似病料中共分离鉴定出了39株HPS，这些菌株主要分离自肺脏（51.28%）、心脏（30.77%）、关节液（15.38%）和肝脏（2.56%）。将各分离株通过传统的Kielstein-Rapp-Gabrielson（KRG）分型方法进行血清分型，结果表明江西省HPS流行的血清型为5型（25.64%），13型（20.51%），4型（10.26%），12型（5.13%），15型（5.13%）。2、副猪嗜血杆菌潜在毒力基因的筛选采用抑制性差减杂交技术分别筛选高毒力13型菌株JX1108和无毒力7型菌株HS197间及高毒力12型菌株HPJX9和无毒力3型菌株HS81间的差异基因。结果从菌株JX1108中筛选到了26个差异基因，从菌株HPJX9中筛选到了28个差异基因。这些差异基因编码的蛋白主要与限制性修饰系统、噬菌体相关蛋白、假定蛋白、新陈代谢蛋白、分泌蛋白、转运蛋白、结构蛋白和重组酶等具有较高的同源性。3、副猪嗜血杆菌潜在毒力基因的分布调查选择部分差异基因对15种血清型参考菌株进行PCR检测，选取其中有毒力菌株偏向性的基因，调查其在39株江西地方分离株的分布情况。结果表明，从菌株JX1108筛选出的15个基因中有9个在参考菌株中表现出了毒力偏向性，其在江西地方分离株中出现的频率为23.08-56.41%；从菌株HPJX9中筛选出的17个基因中有11个在参考菌株中表现出了毒力偏向性，其在江西地方分离株中出现的频率为20.51-97.44%4、鉴别副猪嗜血杆菌潜在毒力菌株的二重PCR方法的建立针对副猪嗜血杆菌16SrRNA及其毒力相关基因VtaA1建立一个鉴别该菌潜在毒株的二重PCR方法，最终确定二重PCR中16SrRNA引物终浓度为0.2μmol/L，VtaA1引物终浓度为0.1μmol/L，最佳退火温度为61.4℃，敏感度为10-5ng/mL。通过对39株江西地方分离株进行检测，结果发现各分离株16SrRNA基因扩增均为阳性，VtaA1基因的阳性率达到97.44%（38/39）。(本文来源于《江西农业大学》期刊2014-06-01）
曾绍华,张聪,李明,屈会娟,张敏[7]（2014）在《黑斑病菌诱导的紫薯抑制性差减杂交文库构建及ESTs分析》一文中研究指出本研究以紫薯1号为材料,运用抑制性差减杂交(SSH)技术,构建了经黑斑病菌诱导12、24、36、48、60 h后的甘薯块根混合SSH cDNA文库。随机挑取103个cDNA克隆进行5'端测序,共获得87个非重复序列,其中包括29个重迭群,58个独立的ESTs,利用tblastx对87个序列在NCBI数据库中进行同源性比对。结果表明,在编号为14的EST中找到了"蔷薇"黑斑抗性muRdr1基因位点,基因全序列包括muRdr1A、muRdr1B、muRdr1C、muRdr1D、muRdr1E、muRdr1F、muRdr1G、muRdr1H、muRdr1I共9个基因。另外有2类基因的含量较高,一类是紫薯组织特异性相关基因,另一类是紫薯受干旱胁迫的抗逆相关基因。构建cDNA文库,应用EST技术并结合生物信息学技术,对紫薯抗病相关基因的表达分析,从基因水平上来研究紫薯抗病机制,为今后的紫薯抗病遗传育种及抗病机理奠定论基础。(本文来源于《西南农业学报》期刊2014年01期）
程春振,曾继吾,贝学军,吴波,阳佳位[8]（2013）在《应用抑制性差减杂交技术筛选锦橙CTV应答基因》一文中研究指出【目的】探讨易感柑橘衰退病病毒(Citrus tristeza virus,CTV)品种锦橙CTV应答分子机理,筛选和分析CTV应答基因。【方法】以嫁接CTV强毒株TRL514的锦橙阳性材料叶片为试验方(Tester),用嫁接无毒枝条的CTV阴性锦橙叶片为驱动方(Driver),构建CTV侵染的锦橙的正向差减文库。【结果】随机挑选850个阳性克隆测序,其中742条测序成功,去除载体片段和接头序列后得到有效EST 692条。将所有EST序列对应到柑橘的预测基因组转录物,共涉及137个柑橘基因。应用BLAST2GO对这些特异性表达的基因进行功能归类和KEGG分析。结果表明,受CTV侵染的影响,锦橙能量代谢相关基因上调明显,与光合器官碳固定、氮代谢、淀粉和蔗糖代谢等途径相关的EST出现频率较高。另外,与抗逆防御以及苯基丙氨酸合成、类苯基丙烷代谢、类胡萝卜素合成等与植物防御素类物质合成密切相关的代谢途径相关基因较多。【结论】由于CTV的侵染,CTV易感品种锦橙基础代谢改变明显,须通过增强能量代谢和提高自身防御能力来维持自身生长和发育。(本文来源于《中国农业科学》期刊2013年16期）
曾绍华[9]（2013）在《黑斑病菌诱导的紫薯抑制性差减杂交文库构建及ESTs分析》一文中研究指出甘薯是世界上重要的粮食、饲料、工业原料和生物能源用作物,中国是世界上种植甘薯量最大的国家。甘薯营养丰富,其块根中不仅含有大量淀粉类物质、可溶性糖、多种氨基酸和维生素外,还含有脂肪、蛋白质、食物纤维以及铁、钙等矿物质,可与水稻、小麦的营养价值媲美。紫薯是一种甘薯新品种,其表皮呈紫黑色、肉质呈紫色或深紫色,由我国甘薯研究人员于20世纪90年代从日本成功引进。紫薯除了具有普通红薯的营养成分外,还富含蛋白质、淀粉、果胶、纤维素、氨基酸、维生素及多种矿物质,同时还富含硒元素和花青素,因而受到世界范围农业研究者的充分重视,发展前景相当广阔。黑斑病是为害紫薯最普遍而严重的病害,在我国每年由黑斑病造成的紫薯产量损失在10%左右。发生黑斑病的紫薯中所含毒素耐热,人和家畜生吃或熟吃有黑斑的红薯,都会引起中毒,甚至死亡。病原菌可随种苗、种薯的调运而远距离传播,防治难度较大,对储存与培育优质紫薯品种造成了严重的困扰。紫薯黑斑病不易彻底防治,并且传播途径较多,基本上没有完全对黑斑病菌免疫的材料,因而利用常规育种方法选育紫薯抗病品种难度比较大。现今的防御方法多数采用薯块储藏时对其进行药剂浸种,但是防治该病害最有效且经济的手段是通过分子生物技术方法创造抗病材料从而获得抗病品种。因此构建受黑斑病菌侵染的紫薯块根cDNA文库并进行ESTs分析,对于研究紫薯与黑斑病互作过程中的基因表达,克隆紫薯抗黑斑病基因,明了紫薯的抗病机理具有重要指导意义。本试验第一部分从发病甘薯块根中通过薯片法分离得到甘薯黑斑病菌并纯化,再对紫薯进行黑斑病室内鉴定,调查山川紫、渝紫263、徐13-4等20个紫薯品种的综合病斑直径,以52-45、徐薯18和胜利百号为参试对照种,与对照品种的抗性表现相结合,确定20个紫薯品种的抗感性。本试验结果表明徐紫0602为高抗品种,渝紫263、烟紫薯2号等为中抗品种,徐薯20-1、宁紫薯1号等为感病品种,越紫、宁33-1等为高感品种。本试验第二部分以紫薯1号为材料运用抑制性差减杂交(SSH)技术,构建了经黑斑病菌诱导12h、24h、36h、48h、60h后的紫薯块根混合SSH cDNA文库。随机挑取103个cDNA克隆进行5端测序,共获得87个非重复序列,其中包括29个重迭群,58个独立的ESTs。利用tblastx对87个序列在NCBI数据库中进行同源性比对,在编号为9的EST中找到了“蔷薇”黑斑抗性muRdr1基因位点,基因全序列包括muRdr1A、 muRdr1B、muRdr1C、muRdr1D、muRdr1E、 muRdr1F、muRdr1G、muRdr1H、muRdr1I共9个基因。另外有两类基因的含量较高,一类是紫薯组织特异性相关基因,另一类是紫薯受干旱胁迫的抗逆相关基因。本试验研究运用抑制性差减杂交(SSH)技术对受黑斑病菌诱导的紫薯构建cDNA文库,应用EST技术并结合生物信息学技术,通过对紫薯抗病相关基因的表达分析,从基因水平来研究紫薯抗病机制,为今后的紫薯抗病遗传育种及抗病机理奠定理论基础。(本文来源于《四川农业大学》期刊2013-04-01）
谭玉梅,王海,刘永翔,刘作易[10]（2013）在《利用抑制性差减杂交技术鉴定谢瓦氏曲霉间型变种产孢相关的基因》一文中研究指出谢瓦氏曲霉间型变种Aspergillus chevalieri var.intermedius俗称"金花菌",是茯砖茶发酵中的优势菌种,该菌在不同的渗透压胁迫下产生不同类型的孢子。采用抑制性差减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH),以低渗条件下产生的子囊孢子和高渗条件下产生的分生孢子为材料分别与营养菌丝体构建两个正反向文库。每个库随机挑选400个阳性克隆进行测序。然后将所得到的基因片段在GenBank进行BLASTx和BLASTn同源比对,筛选出的差异表达的基因涉及蛋白质代谢、细胞代谢、转录调控等多个方面,其中可能参与有性产孢调控的基因有13条,可能参与无性产孢调控的基因有10条。(本文来源于《菌物学报》期刊2013年01期）
抑制性差减杂交法论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
【目的】了解细交链孢菌侵染枣果实过程的差异表达基因。【方法】以白熟期‘蜂蜜罐’枣的果实为材料,人工接种细交链孢菌,分别在接种0.5、1、2、3和4 d后取样,通过抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)构建了病原菌诱导的差异表达的c DNA消减文库。【结果】PCR鉴定随机挑取的阳性克隆,显示插入片段大小为200~900 bp。随机挑选200个阳性克隆进行测序,利用BLASTx在Gen Bank Nr数据库进行序列比对分析,共获得118个Unigenes。对这些ESTs进行功能分类发现细交链孢菌侵染下诱导表达基因涉及植物细胞内的多种代谢和应答过程,其中包括抗病/防御类、信号传导途径类、新陈代谢类、蛋白质合成和加工类及细胞结构的组成等,尤其以抗病/防御类基因所占比例最大(27.17%)。【结论】通过SSH研究了缩果病病原侵染果实过程的差异表达基因,鉴定到一些与枣缩果病相关的基因,为进一步研究相关基因及今后筛选防治枣缩果病提供理论基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
抑制性差减杂交法论文参考文献
[1].余海忠,王海燕,赵慧君,孙永林.基于甾体皂苷的襄麦冬块根抑制性差减杂交文库的构建[J].西南农业学报.2018
[2].焦小利,杨卉芯,宋晓斌.应用抑制性差减杂交技术研究枣缩果病病程相关基因[J].果树学报.2017
[3].王楠,潘喆,袁宏.抑制性差减杂交技术分离白血病多药耐药基因[J].国际检验医学杂志.2016
[4].梅冰,陆翔,窦法楷,汪慧莲,李显秋.抑制性差减杂交技术(SSH)及其应用研究进展[J].山西农业科学.2016
[5].俞慧,邢林林,祁晶晶,倪欣涛,姜盼.应用抑制性差减杂交筛选鸭疫里默氏杆菌强弱菌株基因组的差异片段[J].中国动物传染病学报.2015
[6].郑礼洲.抑制性差减杂交技术筛选HPS潜在毒力基因及鉴别HPS潜在毒力菌株二重PCR方法的建立[D].江西农业大学.2014
[7].曾绍华,张聪,李明,屈会娟,张敏.黑斑病菌诱导的紫薯抑制性差减杂交文库构建及ESTs分析[J].西南农业学报.2014
[8].程春振,曾继吾,贝学军,吴波,阳佳位.应用抑制性差减杂交技术筛选锦橙CTV应答基因[J].中国农业科学.2013
[9].曾绍华.黑斑病菌诱导的紫薯抑制性差减杂交文库构建及ESTs分析[D].四川农业大学.2013
[10].谭玉梅,王海,刘永翔,刘作易.利用抑制性差减杂交技术鉴定谢瓦氏曲霉间型变种产孢相关的基因[J].菌物学报.2013