导读:本文包含了上皮间叶表型转化论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:自噬,增殖性玻璃体视网膜病变(PVR),视网膜色素上皮细胞(RPE),EMT
上皮间叶表型转化论文文献综述
冯浩[1]（2019）在《自噬抵抗细胞上皮—间叶样表型转化进程维持视网膜色素上皮稳态》一文中研究指出目的:增殖性玻璃体视网膜病变(Proliferative vitreoretinopathy,PVR)是孔源性视网膜脱离(Rhegmatogenous retinal detachments,RD)术后的严重并发症,也是造成手术失败的最主要原因。从其最初被详细阐述至目前为止,尚无有效的相关临床治疗进展。虽然PVR可以发生在术前,但其在任何种类的眼内RD手术干预后,都具有更高的发病率,PVR在所有RD术后的发病率为5-10%。脱离的视网膜及玻璃体后界膜表面的增殖膜为PVR的病理特征,其收缩导致的视网膜扭曲及持续脱离将孔源性视网膜脱离转变为牵引性视网膜脱离。在这种病理进程中,视网膜色素上皮细胞(Retinal pigment epithelium,RPE)通过上皮-间叶样表型转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)丢失上皮特征,而获得间叶细胞表型,增加了细胞的迁徙能力、侵袭性、抵抗凋亡能力、以及细胞外基质的生成,使RPE转变为成纤维样细胞。基于PVR的这种最主要的细胞学特征,很多研究者付出了40余年的努力去探索,但仍未找到有效的预防及治疗PVR的方法。因此,我们推测,RD及PVR形成过程中有多种分子生物学机制参与其中。自噬是调节降解非必需或者功能障碍细胞器或蛋白质的细胞内分解代谢过程。通过自噬机制细胞可以消化损伤的蛋白质分子或者细胞器,从而确保维持细胞内环境稳态。然而,自噬也被认为是细胞对抗细胞内或者环境压力的策略,这包括营养剥夺,缺氧及药物影响。降解细胞器是细胞获得能量供给及基本代谢物质的替代机制。在眼内,从最前部的角膜到后部的给视网膜提供保护屏障的RPE,几乎所有的细胞类型都依赖一种或多种类型的自噬去维持正常的结构及生理功能。而且,自噬相关蛋白在眼部不同细胞中的表达也阐明了自噬进程在维持健康视功能中的重要性。相反,相关自噬基因的突变也可直接导致眼部疾病的发生,同时,眼内细胞稳态也依赖于通过基础与压力的相互作用诱导的自噬通路进行调节。视网膜RPE细胞及光感受器细胞中,自噬是被高度激活的,自噬功能的损害可导致RPE细胞早期退化变性。RPE的这些特征将自噬与视网膜衰老性疾病及光损伤导致的视网膜退行性疾病紧密关联。这使得自噬与视网膜疾病的研究热点集中在例如年龄相关性黄斑变性(Age-related macular degeneration,AMD)等退行性病变中。自噬与EMT因为各自相对独立的作用机制,导致疏远的关联性,而不能被联系起来。然而,近来研究揭示,这两种重要进程可通过复杂的关系相互调控。我们发现,在视网膜疾病的发生发展过程中,自噬除了可以保护RPE细胞抵御氧化应激等压力刺激,阻止视网膜退化变性外,自噬也参与了RPE细胞的EMT进程。在TGF-β体外诱导RPE细胞EMT进程中,促进了细胞自噬行为的发生,但这种非生存压力导致的细胞自噬行为的作用机制尚不清楚,需要进一步论证,这也是本研究尚需解决的关键问题。我们推测自噬通路可能在PVR病理进程中起到重要调控作用,而这种调控机制的阐明将为PVR的预防及治疗提供新思路。方法:1、构建自噬相关基因7(Atg7)缺失的视网膜色素上皮细胞系,应用Western blot检测细胞中occludin,ZO-1表达的变化,观察细胞平面及叁维空间中生长状态,检测α-SMA表达及定位的变化,初步探讨自噬与RPE细胞EMT的关系。2、TGF-β诱导RPE细胞EMT模型的建立:体外培养人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19,给予不同浓度及时间梯度TGF-β刺激,通过Western blot及细胞免疫荧光实验分别检测,上皮表型因子:Claudin-1,间叶样表型因子:N-cadherin,及细胞骨架结构蛋白、应力纤维蛋白:α-SMA、Vimentin,的表达变化,寻找TGF-β诱导RPE细胞发生EMT的适合浓度及时间,确定RPE细胞上皮表型及间叶表型特征分子。3、检测RPE细胞EMT进程中自噬流的变化:不同时间梯度TGF-β刺激条件下,Western blot检测自噬相关蛋白Atg7表达变化;通过检测p62及LC3变化探讨自噬流及自噬体形成的影响,构建GFP-LC3真核表达载体,并外转入ARPE-19,荧光倒置显微镜观察并记录活体细胞中GFP-LC3点状聚集情况;应用溶酶体抑制剂CQ阻断自噬-溶酶体复合物降解,通过Western blot检测,明确TGF-β在RPE细胞中对自噬流的影响。4、检测自噬在调控RPE细胞EMT进程的作用:4.1分别以Serum starvation及Rapamycin为刺激条件,诱导细胞自噬的发生,检测自噬相关蛋白Atg7,p62及LC3表达变化,Western blot及细胞免疫荧光实验检测上皮表型因子Claudin-1,间叶样表型因子N-cadherin表达变化,探讨其与自噬行为的相关性。4.2体外构建Atg7 RNAi及control RNAi干扰载体,经质粒纯化提取,慢病毒载体包装系统共转染病毒包装细胞293T,感染RPE细胞,构建稳定沉默Atg7基因表达的ARPE-19细胞系。从而得到自噬缺陷的RPE细胞,检测Claudin-1及N-cadherin蛋白的表达;Transwell检测细胞迁移能力;体外凝胶收缩实验检测RPE细胞收缩能力。4.3构建Myc-Atg7质粒表达载体,分别于野生型ARPE-19细胞系及Atg7shRNA细胞系瞬时转染Atg7,检测Claudin-1及N-cadherin蛋白的表达。通过挽救实验进一步明确自噬对RPE细胞EMT的调控作用。4.4应用TGF-β及自噬诱导剂Rapamycin,Western blot及细胞免疫荧光实验分别检测自噬诱导剂Rapamycin对TGF-β引起EMT的挽救作用;Transwell实验检测细胞迁移能力的改变;体外凝胶收缩实验检测RPE细胞收缩能力的改变。5、探索自噬调控EMT发展的分子机制:提取小鼠WT MEF及Atg7~(-/-)MEF细胞,应用免疫共沉淀方法检测在TGF-β及HBSS饥饿条件刺激下,EMT上游关键转录调控因子Twist与p62的结合变化。结果:1、Atg7缺失导致RPE细胞纤维化发生。2、成功构建RPE上皮细胞层EMT模型,TGF-β刺激条件下,细胞间紧密连接蛋白Claudin-1表达降低,间叶性标志物:N-cadherin、α-SMA、Vimentin表达升高。细胞显纤维样改变。3、RPE发生EMT进程中,细胞自噬被激活,p62表达下降,LC3-II表达升高,细胞内GFP-LC3发生聚集。4、成功构建了Atg7的真核表达载体;构建了Atg7稳定敲减的ARPE-19细胞系,Atg7的敲减效率在70%以上。5、在通过敲减Atg7获得自噬缺陷的RPE细胞中,Claudin-1表达降低,间叶性标志物:N-cadherin,α-SMA、Vimentin表达升高;细胞迁移能力增强,收缩能力增强。6、给与自噬缺陷的RPE细胞过表达Atg7,Claudin-1的表达增加,而N-cadherin,α-SMA、Vimentin表达降低;给与正常RPE细胞无血清饥饿刺激,也可见细胞上皮特征的增强。7、在正常RPE单细胞层EMT进程中,通过给与Rapamycin促进细胞自噬,可以逆转TGF-β引起的Claudin-1降低,阻止N-cadherin、α-SMA、Vimentin表达升高,降低细胞迁移能力及收缩能力。8、Atg7敲除小鼠MEF细胞中,对比野生型小鼠MEF细胞,p62明显积累,LC3-II型表达明显减弱;同时间叶性蛋白表达明显升高。9、野生型小鼠MEF细胞给与HBSS或无血清饥饿刺激,可见细胞间叶性蛋白标志物的明显降低。对比Atg7~(-/-)MEF细胞,同时给与无血清饥饿刺激,可见WT MEF细胞间叶性蛋白降低,而自噬功能缺陷细胞无明显改变。10、免疫共沉淀实验结果揭示,在TGF-β作用下,p62与Twist结合不增加,而在HBSS饥饿条件下与Twist结合明显增加。结论:1、自噬是维持视网膜色素上皮细胞正常上皮形态的关键通路。2、促进自噬可以保护RPE抵抗EMT压力,维持正常细胞间紧密连接结构,逆转细胞纤维化进程,维持RPE细胞内环境稳态。3、p62介导的选择性自噬,通过与Twist结合,介导Twist的降解,从而抵抗EMT的发展进程。我们的研究为自噬与视网膜色素上皮细胞纤维化性疾病的关系提供了更完整的理解,为自噬可能成为PVR治疗靶点提供了新观点。(本文来源于《中国医科大学》期刊2019-05-01）
杨吉龙,杜晓玲,王国文,杨蕴[2]（2014）在《恶性间叶肿瘤的间叶-上皮表型转化研究进展》一文中研究指出相对于上皮性肿瘤的上皮-间叶表型转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)及间叶-上皮表型转化(mesen-chymal to epithelial transition,MET)的研究,恶性间叶性肿瘤中MET相关研究较少。MET在分子水平上反映为上皮性标志物如E-钙粘素E-cadherin的上调和间叶性标志物如波形蛋白Vimentin的下调,其过程涉及始动信号、转录因子调节、表面标志物的改变、信号通路改变等多个环节。本文概述了恶性间叶肿瘤中与MET紧密相关的TGF-β等始动因素、SNAI等关键转录因子、mi RNA调节因素对重要细胞信号通路等影响及MET对肿瘤的演进及转归的影响等方面的研究,为针对MET的临床应用奠定基础。(本文来源于《中国肿瘤临床》期刊2014年24期）
刘公伟[3]（2014）在《Toll样受体在LPS诱导的胆管上皮—间叶样表型转化过程中的作用实验研究》一文中研究指出目的：检测胆管上皮细胞与脂多糖（LPS）共培养情况下，Toll样受体（TLR4，Toll-likereceptor4）、上皮标志物细胞角蛋白（CK7，Cytokeratin7）以及间叶标志物波形蛋白（Vimentin）的表达变化，从而探讨TLR4在LPS诱导胆管上皮细胞上皮-间叶样表型转化中的可能作用。方法：用最适浓度LPS（2μg/ml）诱导胆管上皮细胞24小时、48小时、72小时，用实时荧光定量PCR检测目的基因TLR4、CK7、以及Vimentin在mMRA水平的表达变化情况，用SPSS17.0统计软件进行统计分析。结果：LPS诱导胆管上皮细胞，不同时间点检测TLR4、CK7以及Vimentin，实验结果显示：TLR4在LPS刺激24小时后表达明显上升，48小时达高峰，72小时表达降低，但扔维持较高水平。72小时内上皮标志物CK7目的基因在mRNA上表达明显下降（P﹤0.05），且随诱导时间的增加而逐渐降低。间叶标志Vimentin目的基因在mRNA上表达明显上升（P﹤0.05），且随诱导时间的增加而逐渐增加。同时，TLR4表达量的增加伴随着CK7表达的下降和Vimentin表达的升高。结论：LPS刺激下，胆管上皮细胞可发生上皮-间质转变（Epithelial-mesenchymaltransitions，EMT），且TLR4在LPS诱导的胆管上皮细胞EMT过程中可能发挥了重要作用。(本文来源于《遵义医学院》期刊2014-05-01）
曹晓正,杨小红,曹建国,向红琳[4]（2014）在《8-溴-7-甲氧基白杨素逆转人宫颈癌SiHa细胞系球形成细胞上皮-间叶样表型转化》一文中研究指出目的研究8-溴-7-甲氧基白杨素(8-bromo-7-methoxychrysin,BrMC)能否有效逆转人宫颈癌SiHa细胞系球形成细胞上皮-间叶样表型转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)。方法体外培养SiHa细胞系细胞,干细胞条件培养基悬浮培养得到球形成细胞(sphere forming cells,SFCs)。以BrMC处理SFCs后,通过单层贴壁培养观察细胞形态。Western blot分析SFCs的E-cadherin、N-cadherin和Twist1蛋白表达水平。结果与亲本细胞比较,SiHa细胞系SFCs呈现间叶样细胞(梭形细胞)形态,并低表达E-cadherin和高表达N-cadherin蛋白。BrMC(1.0μmol·L-1)处理72 h后,SFCs由梭形细胞转变为多边形细胞;BrMC(0.1和1.0μmol·L-1)作用24 h,SFCs中E-cadherin表达上调,N-cadherin和Twist1蛋白表达降低。结论 BrMC具有逆转SiHa细胞系SFCs的EMT作用,其机制涉及降低Twsit1蛋白表达。(本文来源于《中国药理学通报》期刊2014年05期）
易世杰[5]（2013）在《Toll样受体4在人胆管上皮细胞上皮—间叶样表型转化中作用的实验研究》一文中研究指出目的探讨Toll样受体4(TLR4),上皮-间叶样表型转化相关标志物MMP-2、CK19,核转录因子Snail在肝胆管结石患者胆管上皮细胞中的表达及意义。材料与方法1、临床标本：选取2010年9月至2012年10月在遵义医学院附属医院因肝内外胆管结石行部分肝切除之标本25例作为实验组。选取同期因肝血管瘤行部分肝脏切除术之标本10例作为正常对照组。所有标本均为术中获取的新鲜标本。临床标本的应用得到遵义医学院伦理委员会批准,并获得病人知情同意。2、检测方法：应用免疫组化方法检测TLR4、上皮标志物CK19、间叶标志物MMP-2、核转录因子Snail在实验组及对照组胆管上皮细胞中的表达。结果1、TLR4在正常对照组胆管上皮细胞中仅少量表达；而在肝胆管结石组胆管上皮细胞中表达较强,其表达量显着高于正常对照组(P<0.05)。2、CK19在正常对照组肝内胆管上皮细胞中表达较强,而在肝胆管结石标本的胆管上皮细胞中表达显着下降,两组间CK19表达量的比较有显着差异(P<0.05); MMP-2、Snail在肝胆管结石标本胆管上皮细胞中的表达显着强于正常肝胆管上皮组织中的表达(P<0.05)。3、相关性分析显示,胆管上皮细胞中TLR4的表达量与CK19呈负相关(P=0.00,r=-0.96),而与MMP-2、Snail的表达呈正相关(P=0.00,r=0.965,0.975)。结论1、胆管结石患者胆管上皮细胞中上皮标志物表达下调或缺失,间叶标志物升高,且促上皮-间叶样表型转化(EMT)的核转录因子表达也显着升高,表明者胆管上皮细胞可能发生了EMT。2、TLR4在胆管结石患者胆管上皮细胞中表达明显增强,且与上皮标志物表达呈负相关,而与间叶标志物及促EMT的核转录因子的表达呈正相关,提示TLR4可能在胆管上皮细胞EMT的发生中起着重要作用。(本文来源于《遵义医学院》期刊2013-05-01）
梁垲[6]（2013）在《LPS诱导胆管上皮细胞Toll样受体4及上皮—间叶样表型转化相关标志物表达变化的实验研究》一文中研究指出目的：通过检测体外培养胆管上皮细胞株在脂多糖(LPS)刺激下,Toll样受体4(TLR4)、上皮标志物细胞角蛋白7(CK7)和间叶标志物基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达变化,探讨TLR4在LPS诱导胆管上皮细胞上皮-间叶样表型转化中的可能作用。方法：选用胆管上皮细胞株作为研究对象,以LPS (2μg/ml)处理24h、48h、72h,用荧光实时定量PCR检测CK7、MMP-2及TLR4的mRNA表达水平变化情况。采用SPSS17.0统计软件进行统计分析。结果：胆管上皮细胞株经LPS刺激后,TLR4的mRNA在刺激后24h显着表达,48h达高峰,至72h后开始下降,但仍维持较高水平；上皮标志物CK7的mRNA表达显着下调(P<0.01),且培养时间越长下降越明显；而MMP-2mRNA表达明显上调(P<0.01)。结论：LPS刺激下,TLR4表达升高,且与上皮标志物表达下降和间叶标志物表达上调同时存在,提示TLR4可能在LPS诱导下胆管上皮细胞发生EMT的过程中具有重要意义。(本文来源于《遵义医学院》期刊2013-05-01）
毛先海[7]（2012）在《Fascin基因在胆管癌中诱导上皮间叶样表型转化及相关信号通路的初步研究》一文中研究指出第一章Fascin、E-cadherin、Vimentin在胆管癌组织中的表达及相关性研究目的探讨Fascin、E-cadherin、Vimentin在胆管癌组织中的表达,临床意义及叁者之间的相关性方法应用免疫组化SABC法检测142例胆管癌及20例良性胆管组织中Fascin、E-cadherin、Vimentin表达情况。结果1.胆管癌Fascin阳性率显着高于对照组(P<0.01)。胆管癌E-cadherin胞膜缺失率显着高于对照组(P<0.01),胆管癌中Vimentin膜阳性表达率显着高于对照组(P<0.01),差异均有统计学意义；2. Fascin与胆管癌组织分化程度、门静脉侵润、淋巴结转移、脏器转移、术后生存率等因素有关(P<0.05)；E-cadherin蛋白缺失与患者肿瘤分化程度有关(P<0.05)；Vimentin表达与分化程度、门静脉侵犯、肝炎病毒携带以及术后生存率相关(P<0.05)；3.胆管癌中Fascin表达与E-cadherin表达呈负相关(r=-0.464,P<0.01), Fascin表达与Vimentin表达呈正相关(r=0.313,P<0.01),E-cadherin膜表达与Vimentin膜表达呈负相关(r=-0.241,P<0.01)。结论1.在胆管癌组织中Fascin呈阳性表达,E-cadherin呈现膜缺失,Vimentin呈阳性表达,提示与肿瘤的侵袭和转移有关,叁者联合应用是预测胆管癌预后的有价值的分子生物学指标；2.胆管癌的中发生了上皮间叶表型样转化(epithelialto-mesenhymal transition, EMT),并与其侵袭转移密切相关；3.胆管癌中,fascin表达上调可能诱导了EMT现象,从而促进胆管癌侵袭转移。第二章Fascin基因干扰慢病毒载体构建、包装及稳定转染胆管癌细胞系的建立目的运用RNA干扰技术建立fascin低表达的胆管癌细胞系方法1.实时定量PCR(RT-PCR)检测胆管癌细胞系(RBE, QBC939)中fascin表达量,根据结果选择最合适本实验细胞；2.设计合成4条fascin-siRNA靶序列,同时设计1条阴性对照序列,构建重组shRNA穿梭质粒,经阳性克隆测序结果分析鉴定后,将它们分别与包装质粒混合物共感染293T细胞,荧光法测定感染效率；3.选择感染效率最高1组慢病毒颗粒感染给胆管癌细胞；4.应用RT-PCR及western bolt检测各组细胞中fascin的表达水平。结果1. RT-PCR检测发现QBC939中fascin基因mRNA的相对含量较高,选择QBC939进行后续试验2.测序结果显示,4组慢病毒颗粒均通过检测,重组成功；3.荧光法测定发现QBC939细胞的感染效率均达到80%以上；4. RT-PCR及western blot检测发现,加RNAi靶点病毒感染的细胞组fascin基因的表达明显下降,其中KD2组效果最佳,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1.本研究通过慢病毒载体构建及包装,内源性靶筛,病毒感染胆管癌细胞QBC939,成功构建了稳定fascin低表达胆管癌细胞,为进一步研究fascin在胆管癌中的作用奠定了基础；2.胆管癌细胞中,运用RNA干扰技术能沉默fascin基因。第叁章RNA干扰沉默fascin表达对胆管癌细胞生物学行为的影响目的在胆管癌细胞中RNA干扰沉默fascin表达后,检测胆管癌细胞增殖及侵袭力的变化方法1.MTT检测RNA干扰沉默fascin表达前后增殖能力变化；2. Transwell实验检测RNA干扰沉默fascin表达前后侵袭力变化；3.细胞划痕实验检测RNA干扰沉默fascin表达前后转移能力变化。结果1.MTT检测发现RNA干扰沉默fascin表达后细胞生长的速度明显降低,差异有统计学意义(p<0.05))；2. Transwell实验检测RNA干扰沉默fascin表达后转移率显着下降,差异有统计学意义(p<0.05)；3.划痕实验可见RNA干扰沉默fascin表达后细胞迁移速率明显下降,差异有统计学意义(p<0.05)。结论1.RNA干扰沉默fascin基因的表达使胆管癌细胞QBC939增殖能力下降；2.RNA干扰沉默fascin基因的表达使胆管癌细胞QBC939侵袭能力下降；3.RNA干扰沉默fascin基因的表达使胆管癌细胞QBC939迁移能力下降。第四章Fascin基因对胆管癌EMT的作用及相关信号通路的探讨目的探讨fascin在胆管癌中是否诱导EMT及相关信号转导通路方法1. western blot检测E-cadherin、vimentin表达变化,判断fascin是否诱导EMT。2.运用免疫荧光分析P-catenin (Wnt通路调节物)在肿瘤细胞中的分布变化,western blot检测β-catenin在细胞核,细胞浆及细胞膜蛋白量的变化,同时western blot检测下游靶基因MMP7,cyclin D1表达变化,判断fascin是否作用于Wnt信号通路。结果1. western blot检测发现,RNA干扰fascin表达组中E-cad的表达明显高于非特异性对照组及对照组,差异有统计学意义(P<0.05)；2. western blot检测发现,RNA干扰fascin表达组中vimentin的表达明显低于非特异性对照组及对照组,差异有统计学意义(P<0.05)；3.免疫荧光分析发现P-catenin在细胞核的分布明显减少,而在胞浆及包膜中分布增加,同时western blot检测发现P-catenin在细胞核的蛋白量也减少,胞浆及包膜的蛋白量稍有增加,但总蛋白量无明显变化；4. Western blot检测发现,RNA干扰fascin低表达组中MMP7、 cyclin D1的表达均明显低于非特异性对照组及对照组,其差异有统计学意义(P<0.05)。结论1.在胆管癌中的沉默Fascin基因表达导致E-cadherin表达上调、vimentin表达下降,提示fascin可诱导胆管癌细胞发生上皮-间叶样表型转化；2.在胆管癌中的沉默Fascin基因表达导致P-catenin在胞核及胞浆内的表达减少、在包膜的表达增加,而沉默fascin表达后E-cadherin的表达上调,提示fascin与P-catenin可能在包膜上竞争性与E-cadherin结合；3.在胆管癌中沉默fascin基因表达后,Wnt/β-catenin信号通路下游指标MMP7及Cyclin D1表达下降、β-catenin在胞核中分布减少,提示Wnt/β-catenin信号通路是fascin诱导胆管癌EMT发生的重要信号通路。第五章Fascin基因对胆管癌裸鼠移植瘤增殖能力的影响目的建立胆管癌裸鼠移植瘤模型,观察fascin在体内对胆管癌增殖的影响方法1.采用皮下注射法建立胆管癌裸鼠移植瘤模型；2.分别使用fascin基因的干扰慢病毒(实验组)和阴性对照组病毒(非特异性对照组)、PBS(对照组)进行瘤体局部注射给药,观察移植瘤生长情况。3. Western blot检测叁组中fascin, vimentin, E-cadherin的表达情况结果1.本实验成功建立裸鼠体内胆管癌皮下移植瘤模型；2.实验组肿瘤体积明显小于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)；3. western blot检测发现,实验组中E-cad的表达明显高于非特异性对照组及对照组,差异有统计学意义(P<0.05)；4. western blot检测发现,实验组中vimentin的表达明显低于非特异性对照组及对照组,差异有统计学意义(P<0.05)；结论1.在体内试验中,fascin基因的干扰慢病毒能有效抑制胆管癌细胞QBC939移植瘤的生长；2.在体内实验中进一步证实fascin基因能诱导EMT发生。(本文来源于《中南大学》期刊2012-12-01）
田蔚,杨吉龙,王国文,朱雄增[8]（2012）在《间叶上皮表型转化在肿瘤发生及演进中的作用》一文中研究指出间叶上皮表型转化是指"间叶"向"上皮"细胞表型的可逆性转化,而非不同组织来源细胞间的转变。体内外实验证明,间叶上皮表型转化在恶性肿瘤侵袭和转移中发挥重要作用,现本文就其发展过程、研究现状进行综述。(本文来源于《中国癌症杂志》期刊2012年02期）
赵礼金[9]（2010）在《LPS诱导胆管上皮细胞上皮—间叶样表型转化及其分子机制初步探讨》一文中研究指出原发性肝内胆管结石(primary Hepaticlithiasis),即肝胆管结石病,特指始发于肝内胆管系统的结石。是我国常见病、多发病,主要分布在华东、西南、中南地区。肝胆管结石病的病因目前还不完全清楚。已有临床和实验研究资料表明肝胆管结石的形成与胆道慢性炎症、细菌感染等因素有关。以往对原发性肝胆管结石病的基础研究多集中在胆石的成因方面,而从胆管上皮细胞去探讨原发性肝胆管结石的成因机制较少报道。胆管纤维化是肝胆管结石病的基本病理过程,其机制不清。EMT是具有极性的上皮细胞转换成具有活动能力、能够在细胞基质间自由移动的间质细胞过程。它以上皮细胞极性的丧失及间质特性的获得为重要特征,具体包括:细胞粘附分子(E-钙粘蛋白)表达减少;角蛋白为主的细胞骨架转变为波形蛋白(Vimentin)为主的细胞骨架,从而引起细胞形态的改变。TGF-β1是一种公认的的诱导EMT发生的细胞因子,它对细胞侵袭能力的促进作用往往伴随着细胞形态特征从上皮细胞向间叶细胞的转化。由于EMT与肿瘤的浸润及转移有关,因此关于EMT在肿瘤方面研究较多,也有关于EMT在良性病变的报道与研究,如在肝脏纤维化、肾小管纤维化等方面。Helen等人最近报告了在肝移植术后,肝内胆管上皮细胞存在着EMT现象,并且用相应的阻断剂能抑制EMT发生或逆转。Ho-Soon Choi等报告,用LPS剌激胆囊上皮细胞,能使胆囊上皮细胞中TGF-β1mRNA表达增加。这些研究说明在胆道系统中,胆管上皮细胞在特定的环境中(LPS)可能发生EMT。因此我们推测在原发性肝胆管结石形成机制中胆管上皮细胞可能发生EMT。为了检验我们的假想,本实验设计如下:首先,在肝胆管结石组织标本中,采用免疫组织化学的方法检测了上皮性标志物(E-cadherin、α-catenin)、间叶性标志物(Vimentin、α-SMA)在胆管上皮细胞中的的表达,并评价其临床意义;然后,在体外用人肝胆管上皮细胞(HIBEpiC)与LPS共培养,模仿胆道感染早期的变化,观察胆管上皮细胞能否发生EMT转化,分别用阻断及RNA干扰技术,来检测胆管上皮细胞发生EMT是否经过TGF-β1/Smads信号通路,以期探讨肝胆管上皮细胞发生EMT的可能机制。为了检验在活体内LPS能否使肝胆管上皮细胞发生EMT,我们选用SD大鼠,从胆总管注入一定剂量的LPS,在相应时段取胆管组织标本,用免疫组化方法检测上皮标志物和间叶标志物的表达情况。结果:1.31例原发性肝胆管结石胆管上皮细胞中E-cadherin、α-catenin表达阳性主要表现为胞膜呈棕黄色连续线性染色,也可见在胞浆中表达。呈正常阳性表达率分别为67.7%、74.2%,表达缺失率为32.3%、25.8%。Vimentin在中、大等胆管上皮细胞中11例表达阳性,阳性率为35.5%。α-SMA有9例表达阳性,阳性率为29.0%。TGF-β1阳性表达率为38.7%,Smad2/3阳性率为48.4%。Smad 2/3蛋白主要在小胆管上皮细胞核中表达。以上表明,在肝胆管结石胆管上皮细胞中上皮标志物表达缺失,间叶标志物表达阳性,提示原发性肝胆管结石形成过程中胆管上皮细胞可能发生了EMT,且可能是通过TGF-β1-Smad 2/3信号通路传导的。2.LPS刺激人肝内胆管上皮(HIBEpiC )24 h后可测到明显的TGF-β1表达,继续培养至48 h,TGF-β1 mRNA表达到高峰,72 h后开始下降,但仍维持较高水平。说明LPS可促使胆管上皮细胞TGF-β1的释放,且在48 h释放达高峰。3.PCR检测:上皮标志物E-cadherin mRNA的表达随培养时间的延长,其表达逐渐降低,在72 h时更明显。而S100A4和α-SMA的mRNA随培养时间的延长,其表达明显上调。Western blot结果显示,LPS刺激后,E-cadherin蛋白表达明显下调,S100A4和α-SMA蛋白表达明显上调与其mRNA表达水平一致。提示:LPS能诱导HIBEpiC发生上皮-间叶样表型转化。4.在加入LPS的细胞培养基中用紫杉醇(PT)预处理后,TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达明显下降,特别是在48 h最明显,与处理前相比,分别下降了60%、36%和28%。这说明,TGF-β1的特异阻断剂PT能阻断其信号通路TGF-β1- Smad2/3中TGF-β1的表达。表明:LPS诱导HIBEpiC发生EMT可能是通过TGF-β1- Smad2/3信号通路传导的。5.转染siRNA Smad2/3 DNA片断48 h后,荧光强度最强,72 h荧光强度逐渐减弱,细胞转染效率78%。荧光定量PCR发现,siRNA Smad2/3 DNA片断转染的胆管上皮细胞中的Smad2/3 mRNA的表达与对照组相比明显下降,而其上皮标志物E-cadherin在转染后表达明显上调,在48、72 h分别上调了64%和20%,间叶标志物S100A4和α-SMA表达明显下调。其中以Smad2/3基因沉默效果最好,在2时相点转染后,其表达下调90%以下。Western blot结果示:与干扰以前相比,48、72 h E-cadherin蛋白表达升高,分别升高了40%、20% ,S100A4和α-SMA表达则下降,在48 h分别下降了20%、35%,在72 h S100A4和α-SMA表达分别下降了21%、44%。48 h与72 h相比,72 h的S100A4和α-SMA沉默效果最好。进一步提示:LPS诱导HIBEpiC发生EMT可能是通过TGF-β1- Smad2/3传导的,而且,Smad2/3为该信号通路中的关健基因。6.LPS剌激SD大鼠胆管上皮细胞后,胆管上皮细胞中间叶标志物(S100A4、α-SMA)蛋白异常阳性表达,而上皮标志物表达缺失。提示:LPS在体内可以诱导胆管上皮细胞发生上皮-间叶样表型转化。结论:1.在原发性肝胆管结石胆管上皮细胞中存在上皮-间叶样表型转化。2.LPS可诱导人肝内胆管上皮细胞发生上皮-间叶样表型转化,并且可能是通过TGF-β1-Smad2/3信号传导的。3.在活体内,LPS可诱导胆管上皮细胞发生上皮-间叶样表型转化。(本文来源于《第叁军医大学》期刊2010-05-01）
卢倩,闫军,熊燕,蔡磊,董家鸿[10]（2009）在《Snail1外源性过表达诱导HepG2细胞上皮间叶样表型转化的实验研究》一文中研究指出目的探讨Snail1蛋白诱导肝癌细胞发生上皮间叶表型转化并增强其侵袭转移能力的效应。方法利用重组腺病毒载体pAdEasy-SNAI1高效感染HepG2肝癌细胞株,诱导外源性Snail1蛋白过表达,以空载腺病毒pAdEasy-GFP作为对照。利用RT-PCR、Western blot和细胞免疫组织化学的方法,检测转染后HepG2细胞Snail1、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的mRNA转录和蛋白表达水平。随机运动实验及侵袭实验检测HepG2细胞转染目的基因后运动侵袭能力的改变。结果①pAdEasy-SNAI1高效感染HepG2细胞,与对照组相比SNAI1mRNA和Snail1蛋白表达均显着增强(分别为1.591±0.090、0.414±0.031,0.995±0.009、0.423±0.002,P<0.01),Snai1蛋白在胞浆和胞核着色明显强化。②实验组HepG2细胞,在mRNA和蛋白水平E-cadherin表达均显着受到抑制(分别为0.528±0.037、1.668±0.065,0.284±0.003、1.067±0.011,P<0.01),N-cadhrein、Vimentin表达则明显上调(N-cadhrein:0.945±0.029、0.600±0.015,0.655±0.007、0.226±0.007,P<0.01;Vimentin:1.630±0.123、0.291±0.024,0.692±0.009、0.219±0.005,P<0.01);③实验组随机运动实验中各观察时相点细胞空白区均小于对照组;侵袭实验中,实验组穿膜细胞数多于对照组(59.4±7.48、23.9±4.15,P<0.01)。结论外源性Snail1蛋白过表达能诱导HepG2细胞出现EMT样变化,细胞运动、侵袭能力增强。(本文来源于《实用临床医药杂志》期刊2009年09期）
上皮间叶表型转化论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
相对于上皮性肿瘤的上皮-间叶表型转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)及间叶-上皮表型转化(mesen-chymal to epithelial transition,MET)的研究,恶性间叶性肿瘤中MET相关研究较少。MET在分子水平上反映为上皮性标志物如E-钙粘素E-cadherin的上调和间叶性标志物如波形蛋白Vimentin的下调,其过程涉及始动信号、转录因子调节、表面标志物的改变、信号通路改变等多个环节。本文概述了恶性间叶肿瘤中与MET紧密相关的TGF-β等始动因素、SNAI等关键转录因子、mi RNA调节因素对重要细胞信号通路等影响及MET对肿瘤的演进及转归的影响等方面的研究,为针对MET的临床应用奠定基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
上皮间叶表型转化论文参考文献
[1].冯浩.自噬抵抗细胞上皮—间叶样表型转化进程维持视网膜色素上皮稳态[D].中国医科大学.2019
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[9].赵礼金.LPS诱导胆管上皮细胞上皮—间叶样表型转化及其分子机制初步探讨[D].第叁军医大学.2010
[10].卢倩,闫军,熊燕,蔡磊,董家鸿.Snail1外源性过表达诱导HepG2细胞上皮间叶样表型转化的实验研究[J].实用临床医药杂志.2009
标签：自噬; 增殖性玻璃体视网膜病变(PVR); 视网膜色素上皮细胞(RPE); EMT;