导读:本文包含了多克隆抗体制备论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:纤毛,IFT80,抗体制备,血清分离纯化
多克隆抗体制备论文文献综述
冯雳,丁梅,邢俊俏,李丽丽,蒋俊龙[1]（2019）在《莱茵衣藻中IFT80蛋白多克隆抗体的制备及其应用》一文中研究指出IFT80蛋白是莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)纤毛内运输蛋白(intraflagellar transport, IFT)复合体中的一个重要组分,获得IFT80蛋白抗体为研究该蛋白作用机理提供有力的实验材料。通过构建大肠杆菌重组表达载体pGEX-4T-ift 80,将重组表达载体转化到大肠杆菌E.coli Rosetta中,构建表达IFT80蛋白的重组菌株;在合适的时间点加入浓度适当的IPTG诱导重组菌株表达IFT80蛋白;将收集的蛋白上清液过柱纯化,再以纯化后的IFT80蛋白作为抗原免疫新西兰白兔,动脉取血后,将血清分离纯化获得莱茵衣藻IFT80多克隆抗体。结果:经ELISA法测定该抗体效价达到512 000,Westernblot测定该抗体特异性好。该抗体可用于莱茵衣藻IFT80蛋白的检测和功能鉴定,对于研究莱茵衣藻IFT80蛋白的作用机理及生物学功能研究等具有重要意义。(本文来源于《湖北师范大学学报(自然科学版)》期刊2019年04期）
刘雁霞,刘思佳,王慧,黄梦倩,王岩[2]（2019）在《莱茵衣藻BBS1蛋白的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备》一文中研究指出Bardet-Biedlsyndrome-1(BBS1)是一种与纤毛信号传导相关的蛋白,关于其如何在信号传导中发挥作用以及作用机理目前尚不清楚.莱茵衣藻(Chlamydomonasreinhardtii)是研究纤毛信号传导的模式生物,因此制备莱茵衣藻BBS1蛋白多克隆抗体对阐明其作用机理意义重大.采用RT-PCR技术从C.reinhardtiiCC-125中提取总RNA,扩增1 731 bp的目的基因bbs1,插入到pET-28a(+)原核表达载体,成功构建pET-28a(+)-bbs1重组质粒,转入大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21(DE3)经IPTG诱导后成功表达6×His-BBS1融合蛋白,融合蛋白经亲和纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,间接ELISA法测得抗血清效价达到1∶102 400,经免疫印迹实验(Westernblot)对C. reinhardtii CC-125检测具有较高特异性.实现了莱茵衣藻BBS1蛋白的原核表达,制备出一支兔抗莱茵衣藻BBS1蛋白的多克隆抗体,为研究BBS1蛋白在莱茵衣藻中的结构功能及在纤毛信号传导中的相互作用奠定了基础.(本文来源于《天津科技大学学报》期刊2019年06期）
任肖,吴竞,于海男,林伟东,侯绍华[3]（2019）在《非洲猪瘟病毒Georgia 2007/1株CD2v蛋白的原核表达及多克隆抗体制备》一文中研究指出本研究旨在通过原核表达系统表达非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)Georgia 2007/1株EP402R基因,获得其编码的CD2v重组蛋白,并针对纯化的CD2v重组蛋白制备多克隆抗体。将ASFV EP402R全长基因进行密码子优化后连入pET-28a(+)表达载体,构建原核重组表达质粒,经1 mmol/L IPTG于16℃诱导12 h后,利用SDS-PAGE和Western blotting对重组蛋白进行表达鉴定和反应原性分析。以纯化的CD2v重组蛋白为免疫原制备鼠源抗CD2v多克隆抗体,随后以间接ELISA方法、间接免疫荧光试验及Western blotting分别检测多克隆抗体的效价和特异性。结果显示,ASFV EP402R基因克隆至pET-28a(+)获得pET-28a-EP402R重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后经诱导表达获得CD2v重组蛋白,其大小约为47 ku,重组蛋白主要以包涵体形式存在,部分也可以融合表达蛋白形式存在。Western blotting结果显示,其可溶性上清经镍柱纯化后能被ASFV阳性血清识别,具有良好的反应原性。间接ELISA检测该多克隆抗体效价可达1∶512 000,间接免疫荧光试验和Western blotting表明该多克隆抗体可特异性识别真核表达的CD2v蛋白。以上结果表明,通过原核表达的ASFV CD2v重组蛋白具有较好的免疫原性,利用重组蛋白制备的多克隆抗体具有较高的抗体效价和特异性,为进一步研究ASFV EP402R生物学功能及基因缺失毒株的鉴别诊断和疫苗开发提供技术储备。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2019年12期）
杨延辉,董利军,梁忠喆,刘通,张炜[4]（2019）在《结核分枝杆菌Rv0674蛋白的表达及其多克隆抗体的制备》一文中研究指出目的在大肠埃希菌(E. coli)中表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)Rv0674蛋白,纯化后制备多克隆抗体,并检测抗体效价。方法用PCR技术从MTB H37Rv基因组中扩增Rv0674基因,克隆至p EASYBlunt E1表达载体后,转化入E. coli BL21(DE3)中,用优化后的IPTG诱导表达条件表达Rv0674蛋白,His trap TM HP亲和层析柱纯化目的蛋白;将纯化的蛋白腹腔注射BALB/c小鼠制备多克隆抗体,ELISA和Western blot法检测抗体效价及特异性。结果成功获得了Rv0674序列正确的重组质粒p EASY-E1-Rv0674,挑选出了高表达Rv0674基因的菌株,确定的最适表达条件为1. 0 mmol/L IPTG 28℃诱导表达8 h,获得了相对分子质量约26 500的可溶性蛋白;免疫BALB/c小鼠后,能刺激小鼠产生多克隆抗体,获得的抗血清具有良好的抗原结合特性,且效价大于1∶51 200。结论成功获得了高纯度的Rv0674蛋白,并首次制备出小鼠抗Rv0674蛋白的多克隆抗体,为进一步研究Rv0674蛋白的功能和临床诊断结核病(tuberculosis,TB)的应用奠定了基础。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2019年12期）
冯雳,魏志新,花梦婷,邢俊俏,陈龙[5]（2019）在《莱茵衣藻IFT144蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备》一文中研究指出为后续研究纤毛相关蛋白IFT144的功能,通过构建重组表达载体获取IFT144抗原蛋白,利用纯化过后带有His标签的IFT144抗原蛋白免疫新西兰白兔,收集4次免疫后的血清,间接ELISA法测定抗血清效价为1∶521 000。经Western blot及免疫荧光技术检测表明,纯化后的抗血清能够与Chlamydomonas reinhardtii 21gr(CC1690)鞭毛IFT144蛋白特异性结合,说明anti-IFT144特异性良好。该抗体效价高,特异性良好,为IFT144蛋白的功能及其相关机制的研究提供了实验材料。(本文来源于《湖南师范大学自然科学学报》期刊2019年06期）
储双凤,陈志,罗卫星,蔡惠芬,朱方超[6]（2019）在《贵州黑山羊GFI1B基因的原核表达、蛋白纯化及多克隆抗体制备》一文中研究指出独立生长因子1 (GFI1)及其同源物GFI1B是造血所需的谱系特异性转录因子,定位到人类基因组的9号染色体(9q34.13),编码一种331个氨基酸的多肽,GFI1和GFI1B均有6个C末端C2H2锌指和1个N末端SNAG (SNAIL/GFI1)转录抑制结构域。为进一步探索GFI1B的基因功能,公开一种贵州黑山羊新基因GFI1B多克隆抗体的制备方法,将在实验室中克隆的山羊GFI1B基因序列首先用于在原核载体中表达,并进行原核表达载体pET32a-GFI1B的构建,再进行GFI1B蛋白的原核表达,最后进行GFI1B蛋白的纯化和大白兔GFI1B多克隆抗体的制备与纯化。结果表明:高效表达了原核表达载体pET32a-GFI1B,纯化的His-GFI1B融合蛋白可满足制备多克隆抗体的要求; ELISA检测结果显示,GFI1B多克隆抗体可与His-GFI1B融合蛋白进行特异性结合,制备出高度特异的山羊GFI1B多克隆抗体。该方法获得的多克隆抗体效价高、特异性好,弥补了GFI1B羊上的多克隆抗体的研究空白。(本文来源于《扬州大学学报(农业与生命科学版)》期刊2019年06期）
张康,张璇,闫遵祥,王磊,张凯[7]（2019）在《牛病毒性腹泻病毒Core蛋白的原核表达及多克隆抗体制备》一文中研究指出为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的Core蛋白及其多克隆抗体,根据Core蛋白的编码基因序列,设计合成一对特异性引物,利用RT-PCR扩增BVDV Core基因并定向插入Pet30a载体中,构建重组质粒Pet30a-Core,经酶切鉴定后转化大肠埃希菌TOP 10感受态细胞,筛选获得阳性重组菌,以IPTG进行诱导后成功表达出分子质量为20 ku的重组Core蛋白。将诱导表达的蛋白产物经融合蛋白的Ni柱亲和法进行纯化,利用纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,并利用间接ELISA法测出多克隆抗体效价达到1∶512 000。蛋白质印迹法(Western blot)和间接免疫荧光试验(IFA)证实,多克隆抗体可与细胞中的BVDV抗原发生反应,具有良好的免疫原性和特异性。本实验成功制备了BVDV重组Core蛋白的兔源多克隆抗体,为BVDV的检测及其Core蛋白功能研究奠定了基础。(本文来源于《浙江农业学报》期刊2019年11期）
连凯琪,周玲玲,张明亮,张杰,王英杰[8]（2019）在《猪圆环病毒3型Rep蛋白的表达与多克隆抗体制备》一文中研究指出为研究猪圆环病毒3型(PCV3)Rep基因在大肠杆菌中表达产物的反应原性和免疫原性,本试验对Rep基因进行原核表达和纯化,鉴定表达产物与PCV3阳性血清的反应性;制备重组Rep蛋白的多克隆抗体,Western blot鉴定多克隆抗体与重组Rep蛋白的特异性识别能力,通过ELISA测定多克隆抗体的效价。结果显示,Rep在大肠杆菌中获得大量表达,且主要以包涵体形式存在,重组蛋白相对分子质量约为32 000,经纯化后得到单一条带。表达的重组Rep蛋白可以与PCV3阳性血清发生反应。制备的大鼠抗Rep血清与表达的重组Rep蛋白发生特异性反应,且效价大于1∶32 000。表明本试验表达的Rep具有良好的免疫原性和反应原性,为PCV3的ELISA诊断试剂盒研制提供依据。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2019年11期）
魏晓雷,叶汉梅,罗智[9]（2019）在《黄颡鱼自噬相关基因LC3B和Beclin1的原核表达及多克隆抗体制备》一文中研究指出为深入研究黄颡鱼Pelteobagrus fulvidraco自噬的发生过程和机制,从黄颡鱼cDNA中克隆获得372和1344 bp的黄颡鱼LC3B(PfLC3B)和Beclin1(PfBeclin1)基因编码序列,并成功构建了pET32a(+)-PfLC3B和pET32a(+)-PfBeclin1重组表达载体,分别采用亲和层析和包涵体纯化的方法得到了纯度较高的重组PfLC3B和PfBeclin1蛋白;以重组PfLC3B和PfBeclin1蛋白免疫Balb/C小鼠,制备多克隆抗体。通过Western blot鉴定了PfLC3B和PfBeclin1抗血清可以分别特异性识别重组PfLC3B和PfBeclin1蛋白; PfLC3B抗血清可以特异性识别黄颡鱼内源性LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ蛋白, PfBeclin1抗血清可以特异性识别黄颡鱼内源性Beclin1蛋白。蛋白水平的组织分布显示,黄颡鱼LC3和Beclin1蛋白在肝脏中表达水平均较高,在肾脏和脾脏中的表达水平较低。综上所述,研究成功制备了黄颡鱼LC3B和Beclin1的多克隆抗体,为深入研究黄颡鱼自噬机制提供了有力工具。(本文来源于《水生生物学报》期刊2019年06期）
卓严玲,吕其壮,邓家华,梁小梅,梁小妹[10]（2019）在《猪P58~(IPK)蛋白多克隆抗体的制备》一文中研究指出P58IPK(58 kD inhibitor of PKR)作为宿主细胞分子伴侣蛋白,在调节机体抗病毒反应和免疫应答方面发挥着重要作用。本研究拟克隆猪(Sus scrofa) P58IPK基因CDS序列并构建其原核表达载体,纯化P58IPK蛋白并以此为抗原制备多克隆抗体,以期为后续研究猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)与宿主之间的互作关系提供基础材料。根据猪P58IPK全基因序列(GenBank No. HQ287801.1)设计引物,以反转录PCR (reverse transcription PCR, RT-PCR)方法扩增P58IPK基因CDS序列(去除信号肽序列),经NdeⅠ/XbaⅠ双酶切后定向克隆至原核表达载体pCzn1;将其转化Arctic-Express TM大肠杆菌(Escherichia coli)进行诱导表达;表达产物经变性、复性及His-Band Ni+层析柱亲和纯化,将纯化产物HisP58IPK重组蛋白作为抗原免疫兔子(Oryctolagus cuniculus)制备多克隆抗体。抗体纯化后,分别利用间接ELISA和Western blot方法对其效价和特异性进行检测。结果显示,克隆所得的猪P58IPK基因CDS序列长度为1 425 bp,表达产物His-P58IPK重组蛋白主要以包涵体形式存在,分子量约为54.44 kD;由此蛋白制备的多抗效价在1∶512 000以上,能够特异性识别目标蛋白(包括重组蛋白His-P58IPK和猪P58IPK蛋白)。本研究成功克隆了猪P58IPK多克隆抗体,可为深入研究猪P58IPK蛋白功能和PCV2病毒与宿主之间的互作机制提供基础资料。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2019年11期）
多克隆抗体制备论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
Bardet-Biedlsyndrome-1(BBS1)是一种与纤毛信号传导相关的蛋白,关于其如何在信号传导中发挥作用以及作用机理目前尚不清楚.莱茵衣藻(Chlamydomonasreinhardtii)是研究纤毛信号传导的模式生物,因此制备莱茵衣藻BBS1蛋白多克隆抗体对阐明其作用机理意义重大.采用RT-PCR技术从C.reinhardtiiCC-125中提取总RNA,扩增1 731 bp的目的基因bbs1,插入到pET-28a(+)原核表达载体,成功构建pET-28a(+)-bbs1重组质粒,转入大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21(DE3)经IPTG诱导后成功表达6×His-BBS1融合蛋白,融合蛋白经亲和纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,间接ELISA法测得抗血清效价达到1∶102 400,经免疫印迹实验(Westernblot)对C. reinhardtii CC-125检测具有较高特异性.实现了莱茵衣藻BBS1蛋白的原核表达,制备出一支兔抗莱茵衣藻BBS1蛋白的多克隆抗体,为研究BBS1蛋白在莱茵衣藻中的结构功能及在纤毛信号传导中的相互作用奠定了基础.
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
多克隆抗体制备论文参考文献
[1].冯雳,丁梅,邢俊俏,李丽丽,蒋俊龙.莱茵衣藻中IFT80蛋白多克隆抗体的制备及其应用[J].湖北师范大学学报(自然科学版).2019
[2].刘雁霞,刘思佳,王慧,黄梦倩,王岩.莱茵衣藻BBS1蛋白的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备[J].天津科技大学学报.2019
[3].任肖,吴竞,于海男,林伟东,侯绍华.非洲猪瘟病毒Georgia2007/1株CD2v蛋白的原核表达及多克隆抗体制备[J].中国畜牧兽医.2019
[4].杨延辉,董利军,梁忠喆,刘通,张炜.结核分枝杆菌Rv0674蛋白的表达及其多克隆抗体的制备[J].中国生物制品学杂志.2019
[5].冯雳,魏志新,花梦婷,邢俊俏,陈龙.莱茵衣藻IFT144蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备[J].湖南师范大学自然科学学报.2019
[6].储双凤,陈志,罗卫星,蔡惠芬,朱方超.贵州黑山羊GFI1B基因的原核表达、蛋白纯化及多克隆抗体制备[J].扬州大学学报(农业与生命科学版).2019
[7].张康,张璇,闫遵祥,王磊,张凯.牛病毒性腹泻病毒Core蛋白的原核表达及多克隆抗体制备[J].浙江农业学报.2019
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[9].魏晓雷,叶汉梅,罗智.黄颡鱼自噬相关基因LC3B和Beclin1的原核表达及多克隆抗体制备[J].水生生物学报.2019
[10].卓严玲,吕其壮,邓家华,梁小梅,梁小妹.猪P58~(IPK)蛋白多克隆抗体的制备[J].农业生物技术学报.2019