导读:本文包含了截短型表面抗原中蛋白论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:肾小管上皮细胞,截短型表面抗原中蛋白,X蛋白,核转录因子κB
截短型表面抗原中蛋白论文文献综述
洪柳,张静,李青,闵婕,陆建荣[1]（2010）在《乙肝病毒截短型表面抗原中蛋白与X蛋白对肾小管上皮细胞核转录因子的影响》一文中研究指出目的:目的研究167例乙肝病毒截短型表面抗原中蛋白(C-terminally truncated middle size surface proteins,MHBst167)和X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)对肾小管上皮细胞核转录因子κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)活化的影响及其相关机制探讨。方法:肾小管上皮细胞系(HK-2)转染mhbst167或(和)hbx后,蛋白印迹法检测NF-κB核易位及其抑制蛋白(inhibitor of nuclear factor-kappa B,IκBα)磷酸化水平的变化,凝胶电泳迁移率和双萤光素酶报告基因分析进一步检测NF-κB活性;通过对蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)活性和细胞外调节激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)磷酸化水平检测探讨NF-κB活化的机制。结果:HK-2细胞转染mhbst167或(和)hbx基因后,NF-κB核易位、磷酸化IκBα、κB结合活性及κB基因转录均增加(P<0.05);且PKC激酶活性和磷酸化ERK水平也增加(P<0.05),而Raf蛋白均无表达。结论:在肾小管上皮细胞中,MHBst167/HBx可能通过PKC/ERK通路(非Raf依赖性)活化NF-κB。(本文来源于《肾脏病与透析肾移植杂志》期刊2010年02期）
田江克[2]（2007）在《乙型肝炎病毒截短型表面抗原中蛋白结合蛋白基因的筛选研究》一文中研究指出乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染是严重影响我国人民健康的重要传染病，可引起急、慢性病毒性肝炎，导致肝纤维化(LC)，甚至肝细胞癌(HCC)。HBV感染致肝细胞损伤机制，很大程度上与病毒蛋白和宿主细胞蛋白间的相互作用相关。因此，研究HBV抗原成分与宿主细胞蛋白相互作用及其机理能在一定程度上对HBV的致病机制做出解释，为寻找有效防治HBV的方法提供新线索。HBV基因组具有4个主要的开放读码框架(ORF)，分别命名为S、C、P、X区，其中S区通过叁个框架(in-frame)内起始密码子(ATG)分为叁个结构域：前-S1，前-S2和S结构域，由此3个ATG开始编码产生3种大小不同的表面抗原蛋白：主蛋白(SHBs)，中蛋白(MHBs．前-S2+S)和大蛋白(LHBs：前-S1+前-S2+S)。完整的MHBs多肽链是由55个aa的PreS2区和226个aa的S区组成的，研究表明，羧基末端截短形式的HBV表面抗原中蛋白(MHBs~t)具有反式调节功能，在HBV致病(癌)过程中发挥着重要的作用，但MHBs~t与宿主细胞的结合蛋白目前还不十分清楚。为研究羧基末端截短形式的HBV表面抗原中蛋白的结合蛋白，本实验应用酵母双杂交技术筛选表达型cDNA白细胞文库中与MHBs~t的结合蛋白的基因。酵母双杂交是一种研究蛋白-蛋白间相互作用的比较快速、可靠并可大规模筛选的技术。本实验采用酵母双杂交系统-3，利用两种单倍体酵母a和α接合型可以配合形成二倍体，而其中表达的外源蛋白仍能相互作用，免去了低效率文库质粒与诱饵质粒共转染的问题，大大提高了杂交效率；在原技术基础上增加了3个报告基因，降低了假阳性率，保证实验结果的真阳性率达95％。我们首先利用多聚酶链反应(PCR)方法扩增羧基末端167位aa截短的HBV表面抗原中蛋白的基因编码序列，经酶切鉴定正确并连接入酵母表达载体pGBKT7中构建“诱饵”质粒，转化酵母细胞AH109(a型)并在其内表达，Western-blotting验证。然后与转化了人白细胞cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187(α型)进行配合。结果成功克隆出MHBs~t蛋白并在酵母细胞中表达，配合后选出既能在四缺(SD／-Trp-Leu-Ade-His)培养基又能在铺有X-α-半乳糖(X-α-gal)的四缺培养基上生长并变成蓝色的菌落10个。提取阳性酵母菌落的质粒，电穿孔法转化大肠杆菌，接种在氨苄青霉素-LB平板上选择并测序，经生物信息学分析，排除读码框架不正确者，最后得到9种已知基因，ADP核糖基因子2个，RAB6相互作用蛋白1个，CCR4-NOT转录复合体亚基10(CCR4-NOT-10)1个，脂多糖蛋白结合蛋白(LBP)1个，醛缩酶B(ALDOB)1个，补体成分3(C3)1个，丙酮酸脱氢酶(PDH)1个，人类细菌人工染色体(BAC)1个。为进一步确证经酵母双杂交技术筛选出的结合蛋白与诱饵蛋白间在体外也有相互作用，我们扩增出脂多糖结合蛋白(LBP)基因并克隆入酵母表达载体pGADT7，在TNT网织红细胞裂解物体外翻译，掺入同位素~(35)S，与相应的“诱饵”蛋白进行体外免疫共沉淀反应，进一步证实LBP可以与MHBs~t特异性结合。本研究成功克隆出MHBs~t结合蛋白，为进一步研究其在HBV感染中的作用提供了新线索。(本文来源于《中国人民解放军军事医学科学院》期刊2007-05-22）
刘妍,成军,徐东平,戴久增,韩萍[3]（2007）在《羧基末端截短的HBV表面抗原中蛋白反式激活c-myc表达》一文中研究指出目的构建羧基末端截短的乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白(MHBst)反式激活基因的消减文库,并观察其对细胞原癌基因c-myc的反式激活作用。方法以重组表达质粒pcDNA3.1(-)-MHBst和空载体pcDNA3.1(-)瞬时转染HepG2细胞,提取细胞mRNA并逆转录为cDNA,分别标记为实验组与对照组,应用抑制性消减杂交技术,构建MHBst反式激活的cDNA消减文库。针对其中的原癌基因c-myc,进一步克隆其启动子序列并构建报告基因表达载体pCAT3-c-myc,与pcDNA3.1(-)-MHBst共转染HepG2细胞,ELISA法检测报告基因氯霉素乙酰转移酶CAT的表达活性。同时,应用反转录聚合酶链反应和免疫印迹方法检测表达MHBst的细胞中c-myc基因的mRNA转录和蛋白表达水平。结果随机挑选消减文库中的50个阳性克隆进行测序和生物信息学分析,显示19种已知功能基因,涉及细胞代谢、信号转导、细胞凋亡和肿瘤发生等生物学过程。细胞内瞬时表达的MHBst蛋白能够反式激活细胞原癌基因c-myc启动子的转录活性,并且RT-PCR和Western blotting结果也证明了表达MHBst蛋白的细胞中原癌基因c-myc的表达水平明显增强。结论成功构建MHBst反式激活基因的消减文库,MHBst可以反式激活细胞原癌基因c-myc的表达,为深入了解乙型肝炎病毒致癌的分子生物学机制提供理论基础。(本文来源于《胃肠病学和肝病学杂志》期刊2007年01期）
李志群,成军,马英骥[4]（2006）在《酵母双杂交技术筛选肝细胞中与羧基末端截短型乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白MHBst167蛋白结合蛋白的研究》一文中研究指出目的:应用酵母双杂交技术筛选人肝细胞cDNA文库中与羧基末端截短型乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白(MHBst167)具有相互作用的肝细胞蛋白,以探讨MHBst167可能的生物学功能。方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增MHBst167基因,应用酵母双杂交系统3,连接人酵母表达载体pGBKT7中构建诱(本文来源于《中华医学会全国第九次感染病学学术会议论文汇编》期刊2006-10-01）
刘妍,成军,徐东平,戴久增,韩萍[5]（2006）在《羧基末端截短的HBV表面抗原中蛋白反式激活原癌基因c-myc表达的研究》一文中研究指出目的:构建羧基末端截短的乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白(MHBst)反式激活基因的消减文库,并观察其对细胞原癌基因c-myc的反式激活作用。方法:以重组表达质粒pcDNA3．1(-)-MHBst和空载体pcDNA3．1(-)瞬时转染HepG2细胞,提取细胞mRNA并逆转录为cDNA,分别标记为实验组与对照组,应用抑制性消减杂交技术,构建MHBst反式激活的cDNA消减文库。针对其中的原癌基因c-(本文来源于《中华医学会全国第九次感染病学学术会议论文汇编》期刊2006-10-01）
田江克,成军,刘妍,崔玉芳,纪冬[6]（2006）在《乙型肝炎病毒截短型表面抗原中蛋白结合蛋白的筛选》一文中研究指出目的:用酵母双杂交技术筛选白细胞与乙型肝炎病毒截短型表面抗原中蛋白(MHBst)结合蛋白．方法:PCR扩增MHBst基因,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达．后与转化了人白细胞文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基(SD／-Trp-Leu-His-Ade)和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性菌落增菌后提出质粒转化入大肠杆菌(DH5α),并经氨苄青霉素抗性筛选,提取单克隆菌落质粒,酶切鉴定,序列测定后进行生物信息学分析．结果:应用酵母双杂交技术筛选出阳性克隆8个,经生物信息学分析,排除读码框架不正确者,最后得到7种已知基因,分别为ADP核糖基因子2种,RAB6相互作用蛋白(RAB6IP1)1种,CCR4-NOT转录复合体亚基10(CCR4- NOT-10)1种,脂多糖蛋白结合蛋白(LBP)1种,醛缩酶B(ALDOB)1种,补体成分3(C3)1种,丙酮酸脱氢酶(PDH)1种．结论:成功克隆出MHBst结合蛋白．(本文来源于《世界华人消化杂志》期刊2006年24期）
刘妍,徐东平,戴久增,韩萍,陆荫英[7]（2006）在《羧基末端截短的HBV表面抗原中蛋白反式激活原癌基因c-myc表达的研究》一文中研究指出目的:乙型肝炎病毒(HBV)感染不仅引起急、慢性病毒性肝炎,而且与肝细胞癌(HCC)发生密切相关。研究发现,几乎所有HBV相关的HCC都具有HBV DNA的染色体整合现象,整合到染色体上的HBV DNA 能编码两种类型的反式激活因子,即HBxAg和羧基末端截短的HBV表面抗原中蛋白。本课题组前期构建了羧基端167位氨基酸截短的HBV中表面蛋白(MHBst),并证明具有反式激活SV40启动子的功能。为了深入探索MHBst反式激活靶基因的机制,本研究拟构建羧基末端截短的乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白(MHBst)反式(本文来源于《第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议论文汇编》期刊2006-05-01）
李志群,马英骥,成军[8]（2006）在《酵母双杂交技术筛选肝细胞中与羧基末端截短型乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白MHBs~(t167)蛋白结合蛋白的研究》一文中研究指出目的:应用酵母双杂交技术筛选人肝细胞cDNA文库中与羧基末端截短型乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白 (MHBSt167)具有相互作用的肝细胞蛋白,以探讨MHBst167可能的生物学功能。方法:用聚合酶链反应(PCR) 法扩增MHBst167基因,应用酵母双杂交系统3,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转染酵母细胞 AH109并在其内表达,然后与转染了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,于涂有X-α- gal营养缺陷型培养基(SD／-Trp-Leu-His-Ade)上进行双重筛选阳性菌落。挑选阳性克隆,提取此酵母克(本文来源于《第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议论文汇编》期刊2006-05-01）
田江克,崔玉芳,刘妍,纪冬,王琳[9]（2006）在《乙型肝炎病毒截短型表面抗原中蛋白结合蛋白基因的筛选》一文中研究指出目的:用酵母双杂交技术筛选白细胞中与乙型肝炎病毒截短型表面抗原中蛋白(MHBst)结合蛋白。方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增MHBst基因,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109 并在其内表达。然后与转化了人白细胞文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基(SD／-Trp- Leu-His-Ade)和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性菌落增菌后提出质粒转化人大肠杆菌(DH5 α),并经氨苄青霉素抗性筛选,提取单克隆菌落质粒,酶切鉴定,序列测定后进行生物信息学分析。结果:应用酵母双杂交技术筛选出阳性克隆8个,经生物信息学分析,排除读码框架不正确者,最后得到7种已知基因,(本文来源于《第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议论文汇编》期刊2006-05-01）
李志群,马英骥,成军[10]（2006）在《酵母双杂交技术筛选肝细胞中与羧基末端截短型乙型肝炎表面抗原中蛋白MHBs~(t167)蛋白结合蛋白的研究》一文中研究指出目的应用酵母双杂交技术筛选人肝细胞cDNA文库中与羧基末端截短型乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白(MHBst167)具有相互作用的肝细胞蛋白,以探讨MHBst167可能的生物学功能。方法用多聚酶链反应(PCR)法扩增MHBst167基因,应用酵母双杂交系统3,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转染酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转染了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,于涂有Xαgal营养缺陷型培养基(SD/TrpLeuHisAde)上进行双重筛选阳性菌落。挑选阳性克隆,提取此酵母克隆的质粒转化DH5α大肠杆菌并经氨苄青霉素抗性筛选,提取单克隆菌落质粒DNA,酶切鉴定后进行测序,然后进行生物信息学分析。结果成功构建MHBst167酵母表达载体pGBKT7MHBst167。筛选出阳性菌落28个,经生物信息学分析,最后从肝细胞cDNA文库中筛选出7个与MHBst167特异性结合作用的克隆。其中包括人类核糖基化因子1、胎儿肝全长cDNA克隆、人类醛缩酶B果糖二磷酸(ALDOB)、补体3(C3)、人类血清扩散因子(生长调节素B)、人类BAC(细菌人工染色体)克隆GS1306C12。结论成功克隆出MHBst167基因并在酵母细胞中表达,应用酵母双杂交技术筛选出7个能与MHBst167蛋白相互作用的肝细胞结合蛋白基因,根据所克隆到的基因,对以后研究MHBst167的生物学功能及乙型肝炎病毒致癌的分子生物学机制奠定了理论基础。(本文来源于《胃肠病学和肝病学杂志》期刊2006年02期）
截短型表面抗原中蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染是严重影响我国人民健康的重要传染病，可引起急、慢性病毒性肝炎，导致肝纤维化(LC)，甚至肝细胞癌(HCC)。HBV感染致肝细胞损伤机制，很大程度上与病毒蛋白和宿主细胞蛋白间的相互作用相关。因此，研究HBV抗原成分与宿主细胞蛋白相互作用及其机理能在一定程度上对HBV的致病机制做出解释，为寻找有效防治HBV的方法提供新线索。HBV基因组具有4个主要的开放读码框架(ORF)，分别命名为S、C、P、X区，其中S区通过叁个框架(in-frame)内起始密码子(ATG)分为叁个结构域：前-S1，前-S2和S结构域，由此3个ATG开始编码产生3种大小不同的表面抗原蛋白：主蛋白(SHBs)，中蛋白(MHBs．前-S2+S)和大蛋白(LHBs：前-S1+前-S2+S)。完整的MHBs多肽链是由55个aa的PreS2区和226个aa的S区组成的，研究表明，羧基末端截短形式的HBV表面抗原中蛋白(MHBs~t)具有反式调节功能，在HBV致病(癌)过程中发挥着重要的作用，但MHBs~t与宿主细胞的结合蛋白目前还不十分清楚。为研究羧基末端截短形式的HBV表面抗原中蛋白的结合蛋白，本实验应用酵母双杂交技术筛选表达型cDNA白细胞文库中与MHBs~t的结合蛋白的基因。酵母双杂交是一种研究蛋白-蛋白间相互作用的比较快速、可靠并可大规模筛选的技术。本实验采用酵母双杂交系统-3，利用两种单倍体酵母a和α接合型可以配合形成二倍体，而其中表达的外源蛋白仍能相互作用，免去了低效率文库质粒与诱饵质粒共转染的问题，大大提高了杂交效率；在原技术基础上增加了3个报告基因，降低了假阳性率，保证实验结果的真阳性率达95％。我们首先利用多聚酶链反应(PCR)方法扩增羧基末端167位aa截短的HBV表面抗原中蛋白的基因编码序列，经酶切鉴定正确并连接入酵母表达载体pGBKT7中构建“诱饵”质粒，转化酵母细胞AH109(a型)并在其内表达，Western-blotting验证。然后与转化了人白细胞cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187(α型)进行配合。结果成功克隆出MHBs~t蛋白并在酵母细胞中表达，配合后选出既能在四缺(SD／-Trp-Leu-Ade-His)培养基又能在铺有X-α-半乳糖(X-α-gal)的四缺培养基上生长并变成蓝色的菌落10个。提取阳性酵母菌落的质粒，电穿孔法转化大肠杆菌，接种在氨苄青霉素-LB平板上选择并测序，经生物信息学分析，排除读码框架不正确者，最后得到9种已知基因，ADP核糖基因子2个，RAB6相互作用蛋白1个，CCR4-NOT转录复合体亚基10(CCR4-NOT-10)1个，脂多糖蛋白结合蛋白(LBP)1个，醛缩酶B(ALDOB)1个，补体成分3(C3)1个，丙酮酸脱氢酶(PDH)1个，人类细菌人工染色体(BAC)1个。为进一步确证经酵母双杂交技术筛选出的结合蛋白与诱饵蛋白间在体外也有相互作用，我们扩增出脂多糖结合蛋白(LBP)基因并克隆入酵母表达载体pGADT7，在TNT网织红细胞裂解物体外翻译，掺入同位素~(35)S，与相应的“诱饵”蛋白进行体外免疫共沉淀反应，进一步证实LBP可以与MHBs~t特异性结合。本研究成功克隆出MHBs~t结合蛋白，为进一步研究其在HBV感染中的作用提供了新线索。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
截短型表面抗原中蛋白论文参考文献
[1].洪柳,张静,李青,闵婕,陆建荣.乙肝病毒截短型表面抗原中蛋白与X蛋白对肾小管上皮细胞核转录因子的影响[J].肾脏病与透析肾移植杂志.2010
[2].田江克.乙型肝炎病毒截短型表面抗原中蛋白结合蛋白基因的筛选研究[D].中国人民解放军军事医学科学院.2007
[3].刘妍,成军,徐东平,戴久增,韩萍.羧基末端截短的HBV表面抗原中蛋白反式激活c-myc表达[J].胃肠病学和肝病学杂志.2007
[4].李志群,成军,马英骥.酵母双杂交技术筛选肝细胞中与羧基末端截短型乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白MHBst167蛋白结合蛋白的研究[C].中华医学会全国第九次感染病学学术会议论文汇编.2006
[5].刘妍,成军,徐东平,戴久增,韩萍.羧基末端截短的HBV表面抗原中蛋白反式激活原癌基因c-myc表达的研究[C].中华医学会全国第九次感染病学学术会议论文汇编.2006
[6].田江克,成军,刘妍,崔玉芳,纪冬.乙型肝炎病毒截短型表面抗原中蛋白结合蛋白的筛选[J].世界华人消化杂志.2006
[7].刘妍,徐东平,戴久增,韩萍,陆荫英.羧基末端截短的HBV表面抗原中蛋白反式激活原癌基因c-myc表达的研究[C].第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议论文汇编.2006
[8].李志群,马英骥,成军.酵母双杂交技术筛选肝细胞中与羧基末端截短型乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白MHBs~(t167)蛋白结合蛋白的研究[C].第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议论文汇编.2006
[9].田江克,崔玉芳,刘妍,纪冬,王琳.乙型肝炎病毒截短型表面抗原中蛋白结合蛋白基因的筛选[C].第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议论文汇编.2006
[10].李志群,马英骥,成军.酵母双杂交技术筛选肝细胞中与羧基末端截短型乙型肝炎表面抗原中蛋白MHBs~(t167)蛋白结合蛋白的研究[J].胃肠病学和肝病学杂志.2006
标签：肾小管上皮细胞; 截短型表面抗原中蛋白; X蛋白; 核转录因子κB;