导读:本文包含了诱饵载体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:酵母双杂交,诱饵载体,RBBP4基因
诱饵载体论文文献综述
赵梅,杨俊宝[1]（2019）在《视网膜母细胞瘤结合蛋白4基因酵母双杂交诱饵载体的构建》一文中研究指出视网膜母细胞瘤结合蛋白4(RBBP4)是WD-40蛋白家族的成员之一,其在组蛋白乙酰化、细胞周期进展及肿瘤干细胞的分化等方面具有重要功能,研究与RBBP4互作的新蛋白质和认识RBBP4在疾病包括肿瘤的发生发展过程中的分子机制有重要意义。通过RT-PCR扩增获得了RBBP4基因的CDS序列,经双酶切后与pGBKT7酵母诱饵载体连接构建了pGBKT7-RBBP4载体,再通过双酶切鉴定和测序验证,结果表明此酵母双杂交诱饵载体被成功构建,为后续利用酵母双杂交技术筛选与RBBP4蛋白相互作用的新蛋白提供了参考。(本文来源于《西昌学院学报(自然科学版)》期刊2019年02期）
万岩然,郑晓斌,袁江江,张友军,吴青君[2]（2019）在《西花蓟马酵母双杂交文库及TSWV膜蛋白诱饵载体的构建》一文中研究指出【目的】为筛选西花蓟马Frankliniella occidentalis与番茄斑萎病毒的互作蛋白。【方法】利用MakeYour Own"Mate&Plate?"Library System构建西花蓟马酵母双杂交初级cDNA文库以及Y187酵母次级文库,利用Matchmaker Gold Yeast Two-Hybrid System构建TSWV膜蛋白GN及GC诱饵载体。【结果】建立的西花蓟马初级cDNA文库库容为5.6×106 cfu,其插入片段平均长度大于1 000 bp,重组率约为100%。建立的Y187酵母次级文库转化效率为5×106cfu/μg,文库滴度为2.97×108。构建的pGNKT7-GN及pGBKT7-GC诱饵载体能够在Y2HGold酵母菌株中正确表达,无自激活活性且无毒性。【结论】成功构建了西花蓟马酵母双杂交文库以及番茄斑萎病毒膜蛋白诱饵载体,可用于后续筛库实验。(本文来源于《应用昆虫学报》期刊2019年01期）
白雪琪,谭艳平,覃永华,王亚楠,杨武[3]（2018）在《水稻OsVDAC4诱饵蛋白载体的构建及鉴定》一文中研究指出[目的]获得可用于筛选膜蛋白酵母双杂交文库的诱饵蛋白载体。[方法]在对Os VDAC4进行生物信息学分析的基础上,将Os VDAC4全长ORF分别与p BT3-N和p BT3-SUC连接,构建2个诱饵蛋白载体p BT3-Os VDAC4-N-Cub和p BT3-SUC-Os VDAC4-C-Cub,利用膜蛋白酵母双杂交技术鉴定出可用于筛库的诱饵蛋白载体。[结果]p BT3-Os VDAC4-N-Cub和p BT3-SUC-Os VDAC4-C-Cub都可以与目标蛋白互作,但由于Os VDAC4的N端有约50个可自由伸展的氨基酸残基导致p BT3-Os VDAC4-N-Cub本底反应非常强,Os VDAC4的C端存在于膜中而没有可自由伸展的氨基酸残基,p BT3-SUC-Os VDAC4-C-Cub的本底反应很弱。[结论]p BT3-SUC-Os VDAC4-CCub可用于文库筛选,这为获取Os VDAC4的互作蛋白提供了基础。(本文来源于《安徽农业科学》期刊2018年36期）
马生健,刘耀光[4]（2018）在《酵母双杂诱饵表达载体pGBKT7-S1-G/pGBKT7-S1-J的构建》一文中研究指出S1是水稻(Oryza sativa L.)种间杂种不育一个最重要的基因座,对杂种的雌雄配子都有选择性杀灭作用。通过构建S1基因的酵母诱饵载体,进行相应水稻品种酵母表达文库的筛选,得到S1蛋白作用的下游因子,对S1基因如何控制杂种不育的分子机理了解有重要意义。本研究通过RT-PCR扩增获得了S1基因CDS序列,测序后与pGBKT7酵母诱饵载体连接构建了p GBKT7-S1-G/pGBKT7-S1-J,再双酶切鉴定并转化酵母菌株AH109,S1蛋白在酵母菌株中能正确稳定表达,未表现出毒性和自激活性。此酵母诱饵蛋白表达载体被成功构建,为后续蛋白互作筛选提供理论参考。(本文来源于《分子植物育种》期刊2018年21期）
徐萍萍,房宸曦,梁丽娜,王亚鹏,张宁[5]（2018）在《马铃薯StERF5转录因子酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定》一文中研究指出为了筛选与马铃薯StERF5转录因子相互作用的宿主蛋白,构建其诱饵载体,本研究利用PCR方法扩增得到马铃薯StERF5基因的编码序列,克隆至载体p MD18-T,验证正确后插入到酵母双杂交系统诱饵表达载体pGBKT7,经双酶切、PCR反应及测序验证其正确后,利用PEG/LiAc法将构建好的重组诱饵载体pGBKT7-StERF5及空载体pGBKT7分别转化到酵母Y2HGlod感受态细胞中,检测其对酵母菌株是否有毒性作用和自激活活性。结果表明:扩增得到StERF5基因,成功构建了诱饵表达载体pGBKT7-StERF5,此诱饵载体对酵母宿主细胞无毒性且不具自主激活报告基因的功能。研究结果可为进一步利用酵母双杂交技术筛选与ERF5基因互作的宿主蛋白及功能研究提供科学依据。(本文来源于《分子植物育种》期刊2018年19期）
路遥,周东,郑银英[6]（2018）在《加工番茄PVY~(N:O) HC-Pro、STV RdRp酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活验证》一文中研究指出马铃薯Y病毒(potato virus Y,简称PVY)和南方番茄病毒(southern tomato virus,简称STV)是加工番茄上非常普遍的病毒,以从加工番茄c DNA文库中筛选与病毒功能蛋白互作的基因为目标,构建PVY HC-Pro、STV RdRp Cyto Trap酵母双杂交诱饵载体,为抗病基因的筛选工作奠定基础。通过PCR技术,扩增PVY HC-Pro、STV RdRp片段分别克隆到诱饵载体p Sos,用酶切、测序结果正确的2个诱饵载体重组质粒转化酵母感受态cdc25H,进行自激活检测及毒性验证。将不同组合的酵母转化液涂布于SD/Glu(-UL)培养基(SD/Glu指含有葡萄糖的SD培养基,-UL指缺失尿嘧啶、亮氨酸2种氨基酸)平板上,于25℃培养4 d后,挑取3个单菌落分别划线于2个SD/Glu(-UL)和2个SD/Gal(-UL)培养基上,并分别置于25、37℃继续培养5 d。结果表明,在25℃培养条件下,SD/Glu(-UL)和SD/Gal(-UL)培养基上酵母菌生长正常;在37℃培养条件下,SD/Glu(-UL)培养基上无酵母菌的生长,SD/Gal(-UL)培养基上阳性组合酵母生长正常,阴性组合酵母均不生长。构建的p Sos-HC-Pro、p Sos-RdRp诱饵载体没有转录自激活活性和毒害作用,可用于Cyto Trap酵母双杂交系统。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2018年17期）
吴保义,陈正鹏,李红旺,金春梅,梁晚枫[7]（2018）在《新孢子虫NcGRA7基因酵母双杂交诱饵载体的构建与鉴定》一文中研究指出为筛选能与新孢子虫NcGRA7蛋白相互作用的靶蛋白,构建了酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-NcGRA7。应用PCR技术从新孢子虫基因组DNA中扩增出NcGRA7基因,将其克隆至pMD-19T(simple)中,经过酶切鉴定后再连接至酵母双杂交诱饵载体pGBKT7上。结果表明:试验成功获得了NcGRA7基因片段,测序结果中序列无碱基突变,与目标基因序列同源为100%。试验成功构建的酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-NcGRA7,为使用酵母双杂交技术筛选与NcGRA7蛋白相互作用的蛋白奠定基础。(本文来源于《延边大学农学学报》期刊2018年02期）
高兴红,贾仁勇[8]（2018）在《鸭肠炎病毒UL24/C基因酵母双杂交诱饵载体构建及鉴定》一文中研究指出为构建DEV UL24/C蛋白的酵母双杂交的诱饵载体,本研究以DEV CHv株基因组DNA为模板,经一步法克隆构建pGBKT7-UL24/C诱饵质粒,质粒转化酵母菌株后进行自激活活性检测、免疫印迹检测和毒性检测。结果显示,诱饵质粒pGBKT7-UL24/C插入片段大小为510 bp,且未发生基因突变;pGBKT7-UL24/C质粒转化Y2HGold菌株后的自激活检测显示诱饵菌株无自激活活性,免疫印迹检测表明该诱饵菌株成功表达DEV UL24/C蛋白,毒性检测表明该诱饵蛋白对宿主菌Y2HGold无毒性作用。综上表明,未研究正确构建了UL24/C基因酵母双杂交诱饵载体Y2HGold(pGBKT7-UL24/C),为筛选与DEV UL24蛋白相互作用蛋白、探究DEV UL24蛋白功能及分子机制奠定了基础。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2018年06期）
李红旺[9]（2018）在《新孢子虫酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-NcGRA7的构建及其与Vero细胞相互作用蛋白的初步筛选》一文中研究指出新孢子虫病是由犬新孢子虫寄生于牛、羊和犬等多种动物有核细胞内引起的一种原虫病。机体感染犬新孢子虫后几天内会发生的坏死性病变,并通过细胞内速殖子的增殖导致细胞死亡。典型症状是母畜流产,死胎以及新生胎儿运动障碍。该病是一种世界范围性的疾病,分布广泛,在澳大利亚,日本,韩国以及我国的多个省份都有发现,给畜牧业的经济发展带来了巨大影响。但现今仍缺乏有效的疫苗来预防新孢子虫病,研究新孢子虫的入侵机制和抗原蛋白对新孢子虫病的预防和诊断有参考价值。酵母双杂交技术是目前广泛应用研究一种已知蛋白与另一种已知或未知蛋白之间的相互作用情况,具有简洁性和高敏感性。构建诱饵载体是本试验的重要步骤,首先构建pGBKT7-NcGRA7载体,为进一步研究与NcGRA7基因互作的蛋白奠定基础。本试验通过PCR方法扩增NcGRA7基因,回收的NcGRA7基因先与pMD19T Simple载体连接,转化到DH5α中,进行PCR鉴定和酶切鉴定,以获得含有EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ两种限制性内切酶酶切位点的正确的NcGRA7基因。将pGBKT7载体用EcoRⅠ和Sal Ⅰ两种限制性内切酶酶切,获得两端分别含有这两种酶切位点的pGBKT7载体。并将含有相同酶切位点的NcGRA7基因和pGBKT7载体进行连接,转化到DH5α中,筛选出PCR鉴定和酶切鉴定均正确的pGBKT7-NcGRA7重组质粒,进行测序,与GenBank上的NcGRA7基因序列有100%的同源性。本试验成功地构建了 pGBKT7-NcGRA7诱饵载体,为下一步NcGRA7相互作用蛋白的初步筛选奠定基础。为了保证后续筛选实验中能获得理想的结果,首先要对之前构建的诱饵载体pGBKT7-NcGRA7进行自转录活性和细胞毒性检测。鉴定结果显示构建的诱饵载体pGBKT7-NcGRA7无自转录活性,无细胞毒性。将诱饵载体pGBKT7-NcGRA7与Vero细胞cDNA文库进行杂交筛选,获得234个蓝斑克隆,经PCR鉴定,质粒提取,转化测序等操作后,获得4个阳性质粒,分别为18S核糖体RNA,70kDa热休克蛋白8,NADH脱氢酶亚基1(线粒体),低聚糖转移酶复合物。(本文来源于《延边大学》期刊2018-05-16）
张高阳,邓接楼,黄思齐,李德芳[10]（2018）在《红麻酮脂酰辅酶A合成酶(KCS)酵母双杂交诱饵载体构建及自激活检测》一文中研究指出酮脂酰辅酶A合成酶(KCS)是超长链脂肪酸合成过程中的限速酶,参与超长链脂肪酸和蜡质的合成,在植物抗旱和应对生物胁迫反应中发挥重要调控作用。研究采用PCR方法从红麻中(茎皮)分离KCS基因片段,将该基因按正确方式插入酵母双杂交表达质粒pGBKT7中,酶切鉴定正确后,用PEG/Li Ac方法转化酵母MaV203,经抗性筛选后,用X-Gal对转化酵母进行自激活检测。结果表明,KCS基因的DNA结合结构域与酵母GAL4转录因子的上游激活位点(UAS)结合,可激活报告基因半乳糖苷酶的表达。经删除KCS基因DNA binding区域后重新转化酵母,结果表明,不携带KCS基因DNA binding区域的截短蛋白可以作为诱饵蛋白来研究与之相互作用的蛋白。(本文来源于《中国麻业科学》期刊2018年02期）
诱饵载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
【目的】为筛选西花蓟马Frankliniella occidentalis与番茄斑萎病毒的互作蛋白。【方法】利用MakeYour Own"Mate&Plate?"Library System构建西花蓟马酵母双杂交初级cDNA文库以及Y187酵母次级文库,利用Matchmaker Gold Yeast Two-Hybrid System构建TSWV膜蛋白GN及GC诱饵载体。【结果】建立的西花蓟马初级cDNA文库库容为5.6×106 cfu,其插入片段平均长度大于1 000 bp,重组率约为100%。建立的Y187酵母次级文库转化效率为5×106cfu/μg,文库滴度为2.97×108。构建的pGNKT7-GN及pGBKT7-GC诱饵载体能够在Y2HGold酵母菌株中正确表达,无自激活活性且无毒性。【结论】成功构建了西花蓟马酵母双杂交文库以及番茄斑萎病毒膜蛋白诱饵载体,可用于后续筛库实验。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
诱饵载体论文参考文献
[1].赵梅,杨俊宝.视网膜母细胞瘤结合蛋白4基因酵母双杂交诱饵载体的构建[J].西昌学院学报(自然科学版).2019
[2].万岩然,郑晓斌,袁江江,张友军,吴青君.西花蓟马酵母双杂交文库及TSWV膜蛋白诱饵载体的构建[J].应用昆虫学报.2019
[3].白雪琪,谭艳平,覃永华,王亚楠,杨武.水稻OsVDAC4诱饵蛋白载体的构建及鉴定[J].安徽农业科学.2018
[4].马生健,刘耀光.酵母双杂诱饵表达载体pGBKT7-S1-G/pGBKT7-S1-J的构建[J].分子植物育种.2018
[5].徐萍萍,房宸曦,梁丽娜,王亚鹏,张宁.马铃薯StERF5转录因子酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定[J].分子植物育种.2018
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[7].吴保义,陈正鹏,李红旺,金春梅,梁晚枫.新孢子虫NcGRA7基因酵母双杂交诱饵载体的构建与鉴定[J].延边大学农学学报.2018
[8].高兴红,贾仁勇.鸭肠炎病毒UL24/C基因酵母双杂交诱饵载体构建及鉴定[J].中国预防兽医学报.2018
[9].李红旺.新孢子虫酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-NcGRA7的构建及其与Vero细胞相互作用蛋白的初步筛选[D].延边大学.2018
[10].张高阳,邓接楼,黄思齐,李德芳.红麻酮脂酰辅酶A合成酶(KCS)酵母双杂交诱饵载体构建及自激活检测[J].中国麻业科学.2018