导读:本文包含了亚欧型论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:口蹄疫病毒,荧光RT-PCR,体外转录cRNA,检测
亚欧型论文文献综述
吴绍强,查成刚,邓俊花,林祥梅,刘建[1]（2010）在《亚欧型及南非型口蹄疫一步法多重荧光RT-PCR检测方法建立》一文中研究指出【目的】口蹄疫是一种严重的"政治经济病",世界各国面临的口岸疫情防控形势均十分严峻。针对南非型(SATⅠ,SATⅡ,SATⅢ型)潜在入侵中国的严峻态势,为了防止疫情跨境传播,迫切需要建立有效甄别亚欧型(A、O、C及亚洲Ⅰ型)与南非型口蹄疫的检测方法,以进一步提高防控工作的准确性。【方法】选择口蹄疫病毒(FMDV)基因组保守的5'非翻译区(5'UTR)基因为靶序列,分别设计亚欧型及南非型FMDV特异的荧光PCR引物及Taqman探针,通过对反应体系和反应条件的优化,以插入扩增目的片段的阳性克隆质粒为模板,建立多重荧光PCR检测体系;进一步以体外转录cRNA作为阳性质控品,建立亚欧型及南非型FMDV一步法多重荧光RT-PCR鉴别方法,并进行敏感性、特异性确定及田间样本检测。【结果】本研究建立的FMDV多重荧光PCR检测方法,对亚欧型及南非型FMDV阳性质粒的扩增效率均在90%以上;以倍比稀释的体外转录cRNA作为模板,进行敏感性测试表明,本方法最低可检测至7.6×10-9ng南非型cRNA和6.3×10-8ng亚欧型cRNA;特异性试验结果显示本方法可以有效甄别亚欧型与南非型FMDV;田间样本检测结果与样品实际感染情况一致。【结论】本研究建立的FMDV一步法多重荧光RT-PCR检测方法敏感、特异而且快速,为亚欧型与南非型口蹄疫的鉴别诊断及流行病学调查提供了新的方法。(本文来源于《中国农业科学》期刊2010年14期）
查成刚[2]（2009）在《亚欧型与南非型口蹄疫病毒多重实时荧光RT-PCR检测方法的建立》一文中研究指出口蹄疫(Foot-and-mouth disease, FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,主要侵害偶蹄兽,偶见于人和其他动物。由于FMDV是单股RNA病毒,有很高的变异能力,其抗原性的变异非常频繁,故给口蹄疫的防制带来了很大的困难。快速准确地诊断FMD对于及时控制扑灭疫情极其重要,因此,FMDV快速检测方法一直都是各国学者研究的热点问题。口蹄疫分为7个血清型(O、A、C、亚洲Ⅰ型、南非1、2、3型),鉴于目前我国发生的口蹄疫疫情主要是由亚欧型(A、O及Asia-Ⅰ型等)口蹄疫病毒引起的,本试验从Genebank中获得7种血清型FMDV RNA基因组序列,应用MegALign软件分析其序列,根据Taqman探针设计原则,利用软件Beacon designer 7.0在5’端非翻译区保守区设计亚欧型(Prime:L6/U6;Probe:P6)与南非型(Prime:AY48U/AY48L;Probe:AY48P特异的引物与探针,建立了快速检测亚欧型与南非型FMDV的多重实时荧光PCR方法,同时将目的片段插入T载体,构建重组质粒,为所建立的多重荧光PCR方法提供阳性物质,特异性试验显示,2套引物／探针可以有效区分亚欧型与南非型代表株,敏感性试验结果显示,在多重荧光PCR体系下,检测亚欧型及南非型阳性质粒的灵敏度可达20个拷贝。同时用梯度稀释的质粒制作标准曲线,线性范围较宽(2.0×107-2.0×10拷贝),亚欧型质粒标准曲线的扩增效率92.9%,相关系数为0.991,标准方程为y=-3.506x+41.697；南非型质粒标准曲线的扩增效率91.8%,相关系数为0.992,标准方程为y=-3.535x+42.935,曲线斜率和扩增效率均可满足定量要求。为了更快速、简便的检测亚欧型与南非型FMDV,建立了一步法多重Real Time RT-PCR方法。为获得荧光RT-PCR检测方法的阳性模板,在上游引物U6、AY48L的5’端导入T7启动子序列,PCR扩增后得到带有T7启动子序列的产物片段,利用Promega公司体外转录试剂盒合成cRNA,对生成的cRNA进行质控试验,确定无质粒DNA残留；同时对Script Reverse Transcriptase酶、引物／探针浓度与退火温度等进行了优化,确定了反应体系与反应条件,对倍比稀释的cRNA进行敏感性检测,南非型FMDV最低可检测至7.6×10-9ng／μL,亚欧型FMDV最低可检测值为6.3×10-8ng/μL。对直接提取的7种血清型FMDV的RNA进行特异性试验,结果显示本方法可以有效区分亚欧型与南非型FMDV的核酸,本研究为亚欧型与南非型口蹄疫的快速诊断和流行病学调查提供了新的方法,也为亚欧型与南非型FMDV检测试剂盒的研制提供了有效的技术支持。(本文来源于《南京农业大学》期刊2009-05-01）
查成刚,吴绍强,林祥梅,韩雪清,刘建[3]（2009）在《应用荧光RT-PCR检测亚欧型口蹄疫病毒》一文中研究指出根据口蹄疫病毒基因组的5'非翻译区序列比较保守的特点,采用软件设计亚欧型(A、O、C及Asia-1型)FMDV通用的引物和探针,经对反应条件和反应体系进行优化,建立了亚欧型FMDV的实时荧光RT-PCR检测方法。研究表明,该方法检测阳性质粒模板的线性范围为1.9×107-1.9×10拷贝,最低可检测19个拷贝。通过对FMDV各血清型(A、O、C、Asia-1及SAT-1,2,3型)的检测,证实该方法对亚欧型FMDV具有良好的特异性,能有效区分亚欧型和南非型FMDV感染。本研究为亚欧型口蹄疫的快速诊断和流行病学调查提供了新的方法。(本文来源于《中国动物检疫》期刊2009年01期）
查成刚,吴绍强,林祥梅,韩雪清,刘建[4]（2008）在《应用荧光RT-PCR检测亚欧型口蹄疫病毒》一文中研究指出为了满足口蹄疫病毒(Foot-And-Mouth Disease virus,FMDV)检测、监测及防控工作的需要,本研究选择在FMDV的5′非翻译区设计亚欧型FMDV(包括O、A、C、Asia-1型)通用的荧光RT-PCR引物和探针,经对反应体系和反应条件进行优化,建立了亚欧型FMDV的实时荧光RT-PCR检测方法,该方法的线性范围为1.9×10~7～1.9×10拷贝/μL,最低可检测19个拷贝的质粒。通过对FMDV各血清型(O、C、A、Asia-1、SAT-1,2,3)的检测,证实该方法有良好的特异性,能有效区分亚欧型和南非型FMDV。本方法可用于亚欧型口蹄疫的快速诊断和流行病学调查。(本文来源于《中国畜牧兽医学会2008年学术年会暨第六届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集》期刊2008-11-01）
亚欧型论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
口蹄疫(Foot-and-mouth disease, FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,主要侵害偶蹄兽,偶见于人和其他动物。由于FMDV是单股RNA病毒,有很高的变异能力,其抗原性的变异非常频繁,故给口蹄疫的防制带来了很大的困难。快速准确地诊断FMD对于及时控制扑灭疫情极其重要,因此,FMDV快速检测方法一直都是各国学者研究的热点问题。口蹄疫分为7个血清型(O、A、C、亚洲Ⅰ型、南非1、2、3型),鉴于目前我国发生的口蹄疫疫情主要是由亚欧型(A、O及Asia-Ⅰ型等)口蹄疫病毒引起的,本试验从Genebank中获得7种血清型FMDV RNA基因组序列,应用MegALign软件分析其序列,根据Taqman探针设计原则,利用软件Beacon designer 7.0在5’端非翻译区保守区设计亚欧型(Prime:L6/U6;Probe:P6)与南非型(Prime:AY48U/AY48L;Probe:AY48P特异的引物与探针,建立了快速检测亚欧型与南非型FMDV的多重实时荧光PCR方法,同时将目的片段插入T载体,构建重组质粒,为所建立的多重荧光PCR方法提供阳性物质,特异性试验显示,2套引物／探针可以有效区分亚欧型与南非型代表株,敏感性试验结果显示,在多重荧光PCR体系下,检测亚欧型及南非型阳性质粒的灵敏度可达20个拷贝。同时用梯度稀释的质粒制作标准曲线,线性范围较宽(2.0×107-2.0×10拷贝),亚欧型质粒标准曲线的扩增效率92.9%,相关系数为0.991,标准方程为y=-3.506x+41.697；南非型质粒标准曲线的扩增效率91.8%,相关系数为0.992,标准方程为y=-3.535x+42.935,曲线斜率和扩增效率均可满足定量要求。为了更快速、简便的检测亚欧型与南非型FMDV,建立了一步法多重Real Time RT-PCR方法。为获得荧光RT-PCR检测方法的阳性模板,在上游引物U6、AY48L的5’端导入T7启动子序列,PCR扩增后得到带有T7启动子序列的产物片段,利用Promega公司体外转录试剂盒合成cRNA,对生成的cRNA进行质控试验,确定无质粒DNA残留；同时对Script Reverse Transcriptase酶、引物／探针浓度与退火温度等进行了优化,确定了反应体系与反应条件,对倍比稀释的cRNA进行敏感性检测,南非型FMDV最低可检测至7.6×10-9ng／μL,亚欧型FMDV最低可检测值为6.3×10-8ng/μL。对直接提取的7种血清型FMDV的RNA进行特异性试验,结果显示本方法可以有效区分亚欧型与南非型FMDV的核酸,本研究为亚欧型与南非型口蹄疫的快速诊断和流行病学调查提供了新的方法,也为亚欧型与南非型FMDV检测试剂盒的研制提供了有效的技术支持。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
亚欧型论文参考文献
[1].吴绍强,查成刚,邓俊花,林祥梅,刘建.亚欧型及南非型口蹄疫一步法多重荧光RT-PCR检测方法建立[J].中国农业科学.2010
[2].查成刚.亚欧型与南非型口蹄疫病毒多重实时荧光RT-PCR检测方法的建立[D].南京农业大学.2009
[3].查成刚,吴绍强,林祥梅,韩雪清,刘建.应用荧光RT-PCR检测亚欧型口蹄疫病毒[J].中国动物检疫.2009
[4].查成刚,吴绍强,林祥梅,韩雪清,刘建.应用荧光RT-PCR检测亚欧型口蹄疫病毒[C].中国畜牧兽医学会2008年学术年会暨第六届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集.2008