导读:本文包含了克隆与重组表达论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:脂蛋白磷脂酶A2,原核表达,单克隆抗体
克隆与重组表达论文文献综述
欧兰香,陈振,王佳颖,解光宁,王岩[1]（2019）在《重组人脂蛋白相关磷脂酶A2的原核表达及单克隆抗体制备》一文中研究指出目的构建重组人脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)的原核表达质粒,制备重组人Lp-PLA2,并通过免疫诱导获得人Lp-PLA2的单克隆抗体。方法以人cDNA文库为模板,通过PCR的方法获得PLA2G7基因的编码区序列,并与原核表达载体pET32a进行连接,构建原核表达质粒,转化大肠杆菌Rostta(DE3)。通过在30℃0.2mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)条件下诱导蛋白表达,经过纯化获得重组人Lp-PLA2;免疫Balb/c小鼠,制备单克隆抗体;并通过酶联免疫吸附试验法测定效价,检测抗体特异性。结果通过NotⅠ和SalⅠ双酶切及测序证实原核表达质粒构建成功;经纯化得到47×103左右的蛋白,与Lp-PLA2抗体进行蛋白免疫印迹法杂交呈阳性,表明已得到重组人Lp-PLA2。通过对小鼠免疫,最终获得单克隆抗体,效价为1∶2×106,与纤维蛋白原、C-反应蛋白无交叉反应。结论成功获得重组人Lp-PLA2,并制备得到了效价较高的单克隆抗体,为后续Lp-PLA2检测试剂盒的开发奠定了基础。(本文来源于《国际检验医学杂志》期刊2019年22期）
周旭红,桂敏,莫锡君,李进昆,李姝影[2]（2019）在《香石竹减数分裂重组相关基因DcRAD51D克隆及表达分析》一文中研究指出RAD51基因在减数分裂过程中起着十分重要的作用,能够编码一种重组酶,在DNA单链入侵完整双链过程中起作用。利用RT-PCR结合RACE技术,从香石竹(Dianthus caryophyllus)的花药中分离克隆了1个减数分裂重组相关基因RAD51D的全长cDNA序列,命名为DcRAD51D (GenBank登录号MK733915)。该基因全长1 375bp,包含1个编码327个氨基酸长为984bp的开放阅读框。蛋白序列比对显示,DcRAD51D基因编码蛋白包含walker motif A和B基序,与藜麦的遗传关系较近。荧光定量PCR结果显示, DcRAD51D的表达量随着减数分裂进程而呈递减趋势,在花粉母细胞时期表达量最高。研究推测, DcRAD51D基因可能在香石竹减数分裂过程中起重要作用。(本文来源于《植物生理学报》期刊2019年10期）
王静,高利[3]（2019）在《重组牛LAP-CATHL2融合抗菌肽的克隆及原核表达》一文中研究指出从牛舌鳞状上皮细胞和股骨骨髓细胞中分别克隆出牛β-防御素LAP和牛CATHL2抗菌肽,然后利用重迭延伸PCR克隆得到重组牛LAP-CATHL2抗菌肽,将其克隆进pGEX-4T-1载体,构建了重组牛LAP-CATHL2抗菌肽的原核表达载体,并转进感受态大肠杆菌BL21进行诱导表达,并加以纯化,得到了重组牛LAP-CATHL2抗菌肽产量是2.83 mg·mL~(-1)培养液。(本文来源于《黑龙江八一农垦大学学报》期刊2019年04期）
薛士鹏,王涵,薛婷,党颍徐,夏西超[4]（2019）在《结核菌重组基因rBCG-Rv2029c的克隆表达及免疫原性分析》一文中研究指出目的:用结核分枝杆菌特异性抗原Rv2029构建结核重组疫苗(BCG-Rv2029),在C57BL/6小鼠体内评估其免疫效应,并初步探讨其免疫机制。方法:PCR扩增基因Rv2029,构建重组质粒pMV261-Rv2029,转入卡介苗感受态细胞中,诱导表达并纯化Rv2029蛋白。以重组的rBCG-Rv2029c活疫苗为免疫原,皮下免疫C57BL/6小鼠,间接ELISA方法检测小鼠血抗原特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体滴度水平,XTT检测脾淋巴细胞抗原特异性增殖反应,流式细胞仪观察CD4~+T和CD8~+T细胞比例变化,IFN-γ、IL-2检测试剂盒检测细胞培养基中细胞因子表达水平。结果:成功构建重组疫苗BCG-Rv2029C,并诱导表达重组蛋白。经免疫小鼠后,重组卡介苗rBCG-Rv2029c能诱导较BCG更高的IgG、IgG1和IgG2a抗体滴度水平,IgG2a/IgG1的变化提示rBCG-Rv2029c可诱导Th1型免疫反应。与BCG相比,rBCG-Rv2029c可诱导产生更强的特异性细胞增殖反应、刺激产生更多的杀伤性CD8~+ T细胞和CD4~+ T细胞、能诱导产生更高水平的IFN-γ、IL-2细胞因子。结论:重组结核病疫苗rBCG-Rv2029c可诱导产生较BCG更强且针对休眠MTB的特异性体液免疫和细胞免疫,是一株值得深入研究的新型结核病疫苗。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2019年13期）
孜拉吉古丽·西克然木,马纪,库尔班·吐松,刘小宁[5]（2019）在《小胸鳖甲胞外铜锌超氧化物歧化酶重组蛋白的原核表达及多克隆抗体制备》一文中研究指出超氧化物歧化酶(SOD)是清除生物体内超氧阴离子自由基的主要抗氧化酶家族。基于原核表达系统,成功表达了拟步甲科Tenebrionidae小胸鳖甲Micordera punctipennis胞外铜锌SOD的重组蛋白(本文定义为Trx-His-MpecCu/Zn-SOD)。经Ni~(2+)亲和层析法纯化重组蛋白后,研究了重组蛋白的部分酶学性质。通过足垫加皮下注射法3次免疫小鼠后,分别用ELISA和Western blot的方法检测抗体效价和抗体特异性。结果表明,重组蛋白主要以包涵体形式存在,纯化后的重组蛋白浓度为1.33 mg·mL~(-1),酶活力为27.52 U·mg~(-1)。Trx-His-MpecCu/Zn-SOD在25～45℃具有比较稳定的酶活性,在35℃最高,同时表现出比较广泛的酸碱耐受性(pH3～12),最适pH为9.0,表明重组蛋白的酶活性相对比较稳定。蛋白免疫法制备的鼠抗MpecCu/Zn-SOD多克隆抗体滴度高于1∶819 200。Western blot结果显示,该抗体能免疫结合重组蛋白Trx-His-MpecCu/Zn-SOD和小胸鳖甲体内天然MpecCu/Zn-SOD,但不能与黄粉虫Tenebrio molitor的总蛋白结合,说明制备的抗体效价较高且特异性较好。本研究结果为小胸鳖甲ecCu/Zn-SOD功能的深入研究奠定了基础。(本文来源于《四川动物》期刊2019年04期）
熊丹,杜勇,张华,武薇,莫红梅[6]（2019）在《NMHC-ⅡA蛋白的重组表达、多克隆抗体制备及其功能的初步探讨》一文中研究指出目的对人源非肌肉肌球蛋白重链ⅡA(NMHC-ⅡA)蛋白进行重组表达、纯化并制备其多克隆抗体,初步探讨其生物学功能。方法将MYH9编码基因克隆于原核表达载体pGEX-4T-1,IPTG诱导重组表达。以谷胱甘肽琼脂糖凝胶珠纯化产物为免疫原制备兔抗NMHC-ⅡA多克隆抗体,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析和免疫印迹(Western-blot)检测抗体特异性;采用酶联免疫吸附法(ELISA)对纯化抗体的活性进行评价;采用抗体阻断试验进一步证实NMHC-ⅡA在EB病毒(EBV)感染鼻咽上皮细胞中的作用。结果本研究生产和纯化两株多克隆NMHC-ⅡA抗体的浓度分别是600μg/mL和1.35mg/mL。制备的NMHC-ⅡA多克隆抗体以剂量依赖性的方式抑制EB病毒感染上皮细胞。结论本研究成功实现NMHC-ⅡA的重组表达、抗体制备,实现了对其功能的初步研究,为其在鼻咽癌的发生发展过程中进一步深入研究奠定了基础。(本文来源于《国际检验医学杂志》期刊2019年11期）
霍超,卢海强,刘晓宇,李琪,高洁[7]（2019）在《短小芽孢杆菌漆酶基因的克隆表达及重组漆酶降解黄曲霉毒素M_1研究》一文中研究指出为明确短小芽孢杆菌Cot A漆酶的酶学性质,探究其在黄曲霉毒素M_1降解中的应用潜力。经分析,短小芽孢杆菌E-1-1-1中cotA基因全长1 486 bp,编码495个氨基酸,无信号肽序列,分子质量约为58 kDa。该重组漆酶最适反应温度为40℃,最适pH 4.0;K_m为3.01 mmol/L,V_(max)为0.795 mmol/(L·min);金属离子和化学试剂会对酶活力造成不同程度影响,K~+、Na~+、乙醇和十二烷基硫酸钠对该酶有明显的抑制作用,抑制率分别为31.0%、13.6%、64.5%和100%,而Mn~(2+)和Zn~(2+)则表现出明显的促进作用,酶活力分别提高了33.0%和23.9%;该酶与牛奶中的黄曲霉毒素M_1反应72 h后,黄曲霉毒素M_1降解率为54.3%,毒性降低9.1%。结果表明,短小芽孢杆菌CotA漆酶作为黄曲霉毒素M_1降解酶具有巨大的应用潜力。(本文来源于《食品科学》期刊2019年10期）
李振[8]（2019）在《基于Red/ET同源重组的基因簇克隆、修饰和异源表达平台的构建与应用》一文中研究指出微生物是天然产物的重要来源,随着合成生物学的快速发展和基因组测序技术的进步,越来越多的微生物基因组测序工作已完成,人们在这些微生物基因组发现了大量的微生物次级代谢产物生物合成基因簇尚未被开发和研究,但是很多微生物很难进行遗传操作或者在实验室内无法培养。将基因簇转入遗传背景清晰、易操作的宿主菌进行异源表达是开发生物合成资源的一种重要手段。但是微生物次级代谢产物基因簇一般大于20 kb,很难通过PCR的方式获得。获得基因簇的传统方法是构建基因组文库,但是周期长、操作复杂,不能满足高通量克隆基因簇的要求。符军等于2012年根据RecE和RecT蛋白能高效介导线性DNA分子之间发生同源重组的特性,开发了能够将目的DNA片段从基因组直接捕获至载体上的直接克隆技术。目前RecET直接克隆技术已被广泛应用于次级代谢产物基因簇的异源表达研究。次级代谢产物在异源表达时经常需要对表达载体进行修饰以添加基因转移元件、插入正调控基因、敲除负调控基因等。基于酶切和连接的传统DNA重组方法由于受到酶切位点和DNA分子大小的限制,难以完成这些遗传修饰。张友明等于1998年利用大肠杆菌Redαβ蛋白能够高效介导线性DNA分子和环状DNA分子之间发生同源重组的特性,建立了不受DNA分子大小和限制性酶切位点制约的DNA重组工程技术(Recombineering)。该技术能够精确、高效地对质粒、黏粒和细菌人工染色体等DNA分子进行基因插入、基因敲除、点突变和模块替换等操作,尤其适合天然产物基因簇的遗传改造。本研究将RecET DNA直接克隆系统和Redαβ DNA修饰系统整合到一个大肠杆菌宿主中,并通过克隆载体和DNA转移元件的标准化,建立了生物合成途径高通量直接克隆、修饰和异源表达的技术平台。在该技术平台中,我们针对不同大小基因簇和不同DNA序列特点构建了便于操作的直接克隆载体,同时将接合转移和转座元件、位点特异性重组元件、广宿主多拷贝复制子两侧的序列进行了标准化,使其都能通过Redαβ重组快速插入上述所有克隆载体中,使一个载体可以适用于细菌接合转移,转座和位点特异性重组等不同遗传操作手段,便于快速的进行异源表达研究。该技术平台实现了生物合成途径克隆、转移和异源表达的无缝对接,只需要一周就能完成生物合成途径的克隆及基因转移元件的插入,大大简化了DNA克隆、修饰、转移和异源表达的流程。利用该技术平台,我们对波赛链霉菌ATCC 27952、刺糖多孢菌NRRL18395和阿维链霉菌DSM 46492基因组中的次级代谢产物基因簇进行了克隆和异源表达研究。土壤和海洋宏基因组中的次级代谢产物基因簇由于浓度低而很难通过直接克隆获得,从头合成是克隆宏基因组中基因簇的有效方法,但是该方法对DNA组装效率的要求较高。本研究通过结合寡核苷酸体外退火和RecET介导的线性DNA分子间的同源重组建立了头合成基因簇的方法。该方法的策略是:(1)首先将10个两端带有20 nt互补配对序列的60 nt寡核苷酸组装成420 bp的双链DNA片段;(2)把10个两端带有40 bp同源序列的420 bp片段组装成4020 bp的中等长度DNA片段;(3)把两端带有40 bp同源序列的4020 bp片段组装成最终目的基因簇。我们利用该方法从头合成了在海鞘共生蓝细菌中发现的非核糖体多肽patellamide A的12.7 kb基因簇,并在大肠杆菌中进行了异源表达研究。本论文构建的基于Red/ET同源重组的基因簇克隆、修饰和异源表达技术平台为微生物基因组的开发利用提供了便利。(本文来源于《山东大学》期刊2019-05-21）
李缜,邹洋,黄敏君,贾永根,闫爱霞[9]（2019）在《恶性疟原虫自噬相关蛋白8基因原核重组表达及多克隆抗体制备》一文中研究指出目的通过pET-41 Ek/LIC载体在大肠杆菌工程菌中重组表达恶性疟原虫自噬相关蛋白8(PfAtg8)基因的重组蛋白GST-PfAtg8-6×His,并用蛋白免疫法制备小鼠抗自噬相关蛋白8(PfAtg8)的多克隆抗体,并验证其效价。方法体外培养恶性疟原虫3D7株,并提取DNA,PCR扩增PfAtg8序列全长,与pET-41 Ek/LIC载体通过基因重组直接连接,在大肠杆菌Rosetta~(TM)(DE3)PLysS工程菌中诱导表达重组蛋白GST-PfAtg8-6×His,蛋白免疫法制备鼠抗PfAtg8的多克隆抗体并用Western blots和酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)进行效价验证。结果 PCR扩增PfAtg8基因并插入pET-41 Ek/LIC载体,转化入大肠杆菌。诱导表达并纯化重组蛋白,进而利用该蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,经验证该抗体可对重组蛋白进行特异性识别,且效价可达1∶100 000。结论成功表达、纯化了GST-PfAtg8-6×His重组蛋白,并免疫小鼠获得多克隆抗体血清。(本文来源于《中国热带医学》期刊2019年05期）
李华,杨玲玲,杜红旗[10]（2019）在《重组Tth DNA聚合酶基因的克隆表达及活性鉴定》一文中研究指出Tth DNA聚合酶具有聚合酶与反转录酶两种功能,而且耐高温,但是国内并未实现高效生产.本研究以粗提的嗜热栖热菌Thermus thermophilus基因组为模板,采用PCR分段扩增和酶切连接的方法获得Tth DNA聚合酶基因全长序列;然后构建重组质粒pXT99b/Tth并转化表达菌E.coli DH5α,利用IPTG诱导Tth基因表达,并采用热处理、Ni2+柱纯化融合His-tag的Tth DNA聚合酶,最后利用PCR、RT-PCR鉴定其活性.结果显示,本研究获得Tth DNA聚合酶基因全长2 505bp,成功表达并获得高纯度高活性的重组Tth DNA聚合酶,1L发酵液所得粗酶液中,酶活性约有800 000U,酶的比活约为6 315U/mg.本研究最终实现了Tth DNA聚合酶的高效国产化并降低了实验成本.(本文来源于《河南大学学报(自然科学版)》期刊2019年03期）
克隆与重组表达论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
RAD51基因在减数分裂过程中起着十分重要的作用,能够编码一种重组酶,在DNA单链入侵完整双链过程中起作用。利用RT-PCR结合RACE技术,从香石竹(Dianthus caryophyllus)的花药中分离克隆了1个减数分裂重组相关基因RAD51D的全长cDNA序列,命名为DcRAD51D (GenBank登录号MK733915)。该基因全长1 375bp,包含1个编码327个氨基酸长为984bp的开放阅读框。蛋白序列比对显示,DcRAD51D基因编码蛋白包含walker motif A和B基序,与藜麦的遗传关系较近。荧光定量PCR结果显示, DcRAD51D的表达量随着减数分裂进程而呈递减趋势,在花粉母细胞时期表达量最高。研究推测, DcRAD51D基因可能在香石竹减数分裂过程中起重要作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
克隆与重组表达论文参考文献
[1].欧兰香,陈振,王佳颖,解光宁,王岩.重组人脂蛋白相关磷脂酶A2的原核表达及单克隆抗体制备[J].国际检验医学杂志.2019
[2].周旭红,桂敏,莫锡君,李进昆,李姝影.香石竹减数分裂重组相关基因DcRAD51D克隆及表达分析[J].植物生理学报.2019
[3].王静,高利.重组牛LAP-CATHL2融合抗菌肽的克隆及原核表达[J].黑龙江八一农垦大学学报.2019
[4].薛士鹏,王涵,薛婷,党颍徐,夏西超.结核菌重组基因rBCG-Rv2029c的克隆表达及免疫原性分析[J].中国免疫学杂志.2019
[5].孜拉吉古丽·西克然木,马纪,库尔班·吐松,刘小宁.小胸鳖甲胞外铜锌超氧化物歧化酶重组蛋白的原核表达及多克隆抗体制备[J].四川动物.2019
[6].熊丹,杜勇,张华,武薇,莫红梅.NMHC-ⅡA蛋白的重组表达、多克隆抗体制备及其功能的初步探讨[J].国际检验医学杂志.2019
[7].霍超,卢海强,刘晓宇,李琪,高洁.短小芽孢杆菌漆酶基因的克隆表达及重组漆酶降解黄曲霉毒素M_1研究[J].食品科学.2019
[8].李振.基于Red/ET同源重组的基因簇克隆、修饰和异源表达平台的构建与应用[D].山东大学.2019
[9].李缜,邹洋,黄敏君,贾永根,闫爱霞.恶性疟原虫自噬相关蛋白8基因原核重组表达及多克隆抗体制备[J].中国热带医学.2019
[10].李华,杨玲玲,杜红旗.重组TthDNA聚合酶基因的克隆表达及活性鉴定[J].河南大学学报(自然科学版).2019