本文主要研究内容
作者王灵军（2019）在《高效氯氰菊酯胁迫下冈田绕眼果蝇CYP450基因表达特征研究》一文中研究指出：目的:通过高效氯氰菊酯胁迫遵义地区冈田绕眼果蝇（Phortica okadai,P.okadai）,研究其细胞色素P450（cytochrome P450,CYP450）基因的表达特征,为媒介昆虫对菊酯类杀虫剂的代谢抗性机制研究奠定基础。方法:1.建立P.okadai动物模型:在遵义周边地区诱捕P.okadai,形态学初步鉴定后进行实验室饲养,进一步通过体视镜、扫描电镜等对其卵、幼虫、蛹、成虫四个阶段进行形态学研究,并利用细胞色素C氧化酶亚基1（cytochrome c oxidase subunit 1,cox1）基因进行分子鉴定。2.高效氯氰菊酯胁迫下P.okadai的毒力测定:参照GB/T26350-2010版《蝇类抗药性检测方法家蝇生物测定法》,通过药膜法检测高效氯氰菊酯对P.okadai（实验室饲养未接触任何杀虫剂、羽化3-5 d未交尾的雌蝇）的毒力。3.内参基因筛选:结合课题组前期构建的转录组数据库,挑选18S RNA、EF-1α、GAPDH、β-Actin和β-Tublin五个候选内参基因,通过荧光定量PCR检测,结合△Ct值分析、GeNorm软件分析、NormFinder软件分析和BestKeeper分析四种方法,确定P.okadai在高效氯氰菊酯胁迫下表达稳定的内参基因。4.结合课题组前期构建的转录组数据库,挑选四个与对菊酯类杀虫剂代谢抗性相关的CYP450基因,以筛选到的β-Tublin基因作为内参基因,通过荧光定量PCR分析候选CYP450基因在高效氯氰菊酯LC20（0.061mg/L）胁迫下七个时间点（0、1、2、4、8、12、24 h）的表达差异。5.高效氯氰菊酯胁迫下P.okadai CYP450酶系基因表达差异研究:通过转录组测序比较P.okadai在高效氯氰菊酯作用0 h和1 h CYP450酶系基因的表达差异,并挑选部分CYP450基因进行荧光定量PCR验证。结果:1.遵义地区P.okadai与中国安徽等其他地区P.okadai形态学上无明显差异,二者cox1基因序列一致性为100%;与欧美的变色伏绕眼果蝇（Phortica variegata,P.variegata）形态学上无明显差异,与意大利P.variegata的cox1基因序列一致性为98%。2.毒力回归计算结果表明,高效氯氰菊酯作用于P.okadai的LC20为0.061 mg/L。3.荧光定量PCR结果显示,五个候选内参基因中,β-Tublin基因是高效氯氰菊酯胁迫研究的最适内参基因。4.荧光定量PCR结果表明,四个CYP450基因均在胁迫1 h时就出现显著表达差异（P<0.05）,其中cyp9f2基因表达显著升高,其他三个基因表达显著降低。5.转录组测序分析显示高效氯氰菊酯胁迫P.okadai 1 h时,差异表达的CYP450基因有103个。以差异倍数|log2Ratio|≥1和q值<0.05为标准,筛选出差异表达的CYP450基因有21个,其中表达上调基因5个,表达下调基因16个;荧光定量PCR验证结果与转录组测序结果一致。结论:1.遵义地区P.okadai与P.variegata形态学上一致,但基于cox1基因进行系统进化分析显示二者存在一定差异。2.高效氯氰菊酯胁迫下P.okadai的LC20为0.061 mg/L,表达稳定的内参基因是β-Tublin基因。3.低浓度高效氯氰菊酯胁迫1 h以内,P.okadai对杀虫剂的代谢可能与cyp28d1、cyp28d2、cyp4d2以及cyp49a1等CYP450基因表达上调相关。
Abstract
mu de :tong guo gao xiao lv qing ju zhi xie pai zun yi de ou gang tian rao yan guo ying （Phortica okadai,P.okadai）,yan jiu ji xi bao se su P450（cytochrome P450,CYP450）ji yin de biao da te zheng ,wei mei jie kun chong dui ju zhi lei sha chong ji de dai xie kang xing ji zhi yan jiu dian ding ji chu 。fang fa :1.jian li P.okadaidong wu mo xing :zai zun yi zhou bian de ou you bu P.okadai,xing tai xue chu bu jian ding hou jin hang shi yan shi si yang ,jin yi bu tong guo ti shi jing 、sao miao dian jing deng dui ji luan 、you chong 、yong 、cheng chong si ge jie duan jin hang xing tai xue yan jiu ,bing li yong xi bao se su Cyang hua mei ya ji 1（cytochrome c oxidase subunit 1,cox1）ji yin jin hang fen zi jian ding 。2.gao xiao lv qing ju zhi xie pai xia P.okadaide du li ce ding :can zhao GB/T26350-2010ban 《ying lei kang yao xing jian ce fang fa jia ying sheng wu ce ding fa 》,tong guo yao mo fa jian ce gao xiao lv qing ju zhi dui P.okadai（shi yan shi si yang wei jie chu ren he sha chong ji 、yu hua 3-5 dwei jiao wei de ci ying ）de du li 。3.nei can ji yin shai shua :jie ge ke ti zu qian ji gou jian de zhuai lu zu shu ju ku ,tiao shua 18S RNA、EF-1α、GAPDH、β-Actinhe β-Tublinwu ge hou shua nei can ji yin ,tong guo ying guang ding liang PCRjian ce ,jie ge △Ctzhi fen xi 、GeNormruan jian fen xi 、NormFinderruan jian fen xi he BestKeeperfen xi si chong fang fa ,que ding P.okadaizai gao xiao lv qing ju zhi xie pai xia biao da wen ding de nei can ji yin 。4.jie ge ke ti zu qian ji gou jian de zhuai lu zu shu ju ku ,tiao shua si ge yu dui ju zhi lei sha chong ji dai xie kang xing xiang guan de CYP450ji yin ,yi shai shua dao de β-Tublinji yin zuo wei nei can ji yin ,tong guo ying guang ding liang PCRfen xi hou shua CYP450ji yin zai gao xiao lv qing ju zhi LC20（0.061mg/L）xie pai xia qi ge shi jian dian （0、1、2、4、8、12、24 h）de biao da cha yi 。5.gao xiao lv qing ju zhi xie pai xia P.okadai CYP450mei ji ji yin biao da cha yi yan jiu :tong guo zhuai lu zu ce xu bi jiao P.okadaizai gao xiao lv qing ju zhi zuo yong 0 hhe 1 h CYP450mei ji ji yin de biao da cha yi ,bing tiao shua bu fen CYP450ji yin jin hang ying guang ding liang PCRyan zheng 。jie guo :1.zun yi de ou P.okadaiyu zhong guo an hui deng ji ta de ou P.okadaixing tai xue shang mo ming xian cha yi ,er zhe cox1ji yin xu lie yi zhi xing wei 100%;yu ou mei de bian se fu rao yan guo ying （Phortica variegata,P.variegata）xing tai xue shang mo ming xian cha yi ,yu yi da li P.variegatade cox1ji yin xu lie yi zhi xing wei 98%。2.du li hui gui ji suan jie guo biao ming ,gao xiao lv qing ju zhi zuo yong yu P.okadaide LC20wei 0.061 mg/L。3.ying guang ding liang PCRjie guo xian shi ,wu ge hou shua nei can ji yin zhong ,β-Tublinji yin shi gao xiao lv qing ju zhi xie pai yan jiu de zui kuo nei can ji yin 。4.ying guang ding liang PCRjie guo biao ming ,si ge CYP450ji yin jun zai xie pai 1 hshi jiu chu xian xian zhe biao da cha yi （P<0.05）,ji zhong cyp9f2ji yin biao da xian zhe sheng gao ,ji ta san ge ji yin biao da xian zhe jiang di 。5.zhuai lu zu ce xu fen xi xian shi gao xiao lv qing ju zhi xie pai P.okadai 1 hshi ,cha yi biao da de CYP450ji yin you 103ge 。yi cha yi bei shu |log2Ratio|≥1he qzhi <0.05wei biao zhun ,shai shua chu cha yi biao da de CYP450ji yin you 21ge ,ji zhong biao da shang diao ji yin 5ge ,biao da xia diao ji yin 16ge ;ying guang ding liang PCRyan zheng jie guo yu zhuai lu zu ce xu jie guo yi zhi 。jie lun :1.zun yi de ou P.okadaiyu P.variegataxing tai xue shang yi zhi ,dan ji yu cox1ji yin jin hang ji tong jin hua fen xi xian shi er zhe cun zai yi ding cha yi 。2.gao xiao lv qing ju zhi xie pai xia P.okadaide LC20wei 0.061 mg/L,biao da wen ding de nei can ji yin shi β-Tublinji yin 。3.di nong du gao xiao lv qing ju zhi xie pai 1 hyi nei ,P.okadaidui sha chong ji de dai xie ke neng yu cyp28d1、cyp28d2、cyp4d2yi ji cyp49a1deng CYP450ji yin biao da shang diao xiang guan 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自遵义医科大学的王灵军，发表于刊物遵义医科大学2019-07-23论文，是一篇关于冈田绕眼果蝇论文,高效氯氰菊酯论文,基因论文,转录组测序论文,遵义医科大学2019-07-23论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自遵义医科大学2019-07-23论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
标签：冈田绕眼果蝇论文; 高效氯氰菊酯论文; 基因论文; 转录组测序论文; 遵义医科大学2019-07-23论文;