（嘉祥县人民医院检验科，山东济宁272400）
【摘要】目的：探讨应用流式细胞仪检测网织血小板的临床应用价值。方法：2012年7月～2016年12月，本研究选取我院64例门诊和血液科住院患者的外周血标本，利用流式细胞仪测定外周血RP(％)，利用全自动血液分析仪测定血小板计数。结果：健康体检组经检测后RP(％)值为7.33±2.17，ITP患者组RP(％)值为21.13±6.27，明显高于健康体检组（P<0.01）。CAA患者组RP(％)值为5.82±1.26，明显低于健康体检组（P<0.05）。AML患者组和MDS患者组RP(％)值分别为8.26±2.45、8.12±2.59，与健康体检组相比差异无统计学意义(P>0．05)。
结论：利用流式细胞仪检测网织血小板的方法，为网织血小板更准确的诊断各类血小板减少性疾病的应用创造了条件，网织血小板在血液病中的检测具有重要的应用价值。
【关键词】流式细胞仪；网织血小板；检测；临床应用价值
网织血小板(reticdatedplatelet，RP)是来源于巨核细胞的细胞颗粒，这种细胞颗粒不含核或DNA成分，却含有少量的RNA，并且保持了合成少量蛋白质的能力人们把这种RNA含量较高的年轻的血小板称之为网织血小板。网织血小板是骨髓新释放进入血液循环的血小板，它可以相对准确地反映骨髓血小板生成情况[1]。本研究近年来利用流式细胞仪检测网织血小板的方法，以发现网织血小板的变化规律，为网织血小板更准确的诊断各类血小板减少性疾病的应用中创造条件。现将有关结果分析报告如下：
1资料与方法
1．1临床资料
2012年7月～2016年12月，本研究选取此时间段嘉祥县人民医院门诊和血液科住院患者的外周血标本64例，64例患者中32例为原发性血小板减少性紫癜(ITP)患者，15例为慢性再生障碍性贫血(CAA)患者，10例为急性非淋巴细胞白血病(AML)患者，7例为骨髓增生异常综合征(MDS)患者，选取同期的来本院体检中心进行健康体检者40例为对照组，血小板检测结果在(100~300)×109／L，肝肾功能正常，排除心血管疾病、高脂血症、糖尿病和其他内分泌疾病患者[2]。
1．2仪器与试剂
本研究实验仪器为美国BD公司的FACSCalibur型流式细胞仪，流式细胞仪所用试剂均为美国BD公司产品。CD41-PE及TO染液(贮存液为1mg／ml溶解于乙醇，使用前无钙无镁PBS稀释，均购自上海优蒙生物科技有限公司)，工作浓度为1％(质量／体积)的甲醛。
实验方法：首先取患者的正常全血和待测全血，分别加入5μ1全血+5μ1抗体+50μ1／mlTO工作液，室温避光孵育15min；加入1ml甲醛工作液，45min内上机分析；先上正常全血染色管，调解电压使血小板阳性率控制在1％左右，然后检测样品管读出经TO染色的荧光强度，结果以百分率(％)表示，即网织血小板百分比。
1．3统计学分析
采用SPSS软件对结果进行统计学分析，对全血和血浆结果的比较采用成对样本的t检验。
2结果
两组分别进行检测后进行统计学分析比较，结果显示，健康体检组经检测后RP(％)值为7.33±2.17，ITP患者组RP(％)值为21.13±6.27，明显高于健康体检组，差异具有显著性（P<0.01）。CAA患者组RP(％)值为5.82±1.26，明显低于健康体检组（P<0.05）。AML患者组和MDS患者组RP(％)值分别为8.26±2.45、8.12±2.59，与健康体检组相比差异无统计学意义(P>0．05)。
3讨论
血小板减少性疾病临床上比较多见，其主要原因包括：①血小板生成减少；②血小板破坏增多；③血小板分布异常[3]。在一些兔疫性血小板减少的疾病中，由于血小板破坏增多，网织血小板代偿性增加，即RP的值相对增高。因此。检测网织血小板可以反应出血小板减少的原因，对临床治疗起着一定的指导作用。
近年来，用流式细胞术检测网织血小板的方法正在研究探讨中，其原理是荧光染料噻唑橙(Thiaroleorange，TO)透过血小板膜与血小板细胞质内RNA特异结合[4]，当它与RNA结合后，其发射荧光强度的能力可增大3000倍，血小板RNA含量与染色后荧光强度呈线性关系；含有RNA。可以被TO染色的网织血小板能够发出荧光，从而可以计数网织血小板占总血小板的百分比。
ITP称为特发性血小板减少性紫癜，是机体免疫系统失常，产生抗血小板自身抗体过度破坏所致的一种血小板减少性疾病。ITP的特点为血小板寿命减短，骨髓巨核细胞增多，80％——90％的病例可检测出血小板IgG抗体。血小板相关抗体与血小板结合，导致血小板破坏增加，寿命缩短，从而引起血小板减少[5-7]。而随着外周血血小板破坏增加，骨髓中巨核细胞产生血小板能力亦相应增强，血小板的更新速度明显加快，外周血中新生血小板相应增多，因而RPs(％)显著增加。本研究中我们选取了32例ITP患者，对其进行网织血小板的检测，其检测结果RP(％)值为21.13±6.27，明显高于健康体检组（P<0.01），差异有统计学意义。·
慢性再生障碍性贫血(CAA)是一组由于造血微环境缺陷引起骨髓造血功能衰竭的疾病，血小板生成障碍，骨髓中巨核细胞减少，新生血小板减少[8-9]。本研究中选取了15例CAA患者作为研究对象，统计学分析结果显示其RP(％)值明显低于健康体检组（P<0.05），这与临床诊断基本相似。统计学分析结果也显示，AML组及MDS患者组结果变化不明显，与健康体检组相比差异均无统计学意义(P>0．05)，分析原因可能与患者本身巨核细胞生成状态有关[10]。
总之，利用流式细胞仪检测网织血小板的方法，为网织血小板更准确的诊断各类血小板减少性疾病的应用创造了条件，以发现网织血小板的变化规律，网织血小板在血液病中的检测具有重要的应用价值，尤其在原发性血小板减少性紫癜患者，慢性再生障碍性贫血患者血小板减少原因分析上意义显著。
参考文献
[1]宋红蕾，冯萍，朱雪明．网织血小板与mpv、血小板数量的关系探讨[J]．临床输血与检验，2014，(2)：91—92．
[2]ClNESDB．BLANCHETTEVS．Immunethrombocytopenicpurpura[J]．NEnglJMed，2012，28(13)：995—1008．
[3]王贤，张葵．网织血小板检测在血小板减少症中的临床价值[J]．中华实用诊断与治疗杂志，2008，22(11)：126—132．
[4]杨惊，赵永强，吴卫，等．网织血小板检测在血小板减少症病因鉴别中的意义[J]．中国实验血液学杂志，2010，18(2)：15—21
[5]曹永献，肖淑欣，姚远，等，网织血小板对急性非淋巴细胞白血病化疗患者骨髓功能恢复的评价作用[J]．山东医药，2013，46(11)：6-7．