导读:本文包含了组织工程多肽论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:骨髓间充质干细胞(BMSCs),细胞膜片,自组装多肽,组织工程
组织工程多肽论文文献综述
李豆豆,周维维,王蕾,刘露,李春绒[1]（2019）在《联合细胞膜片和自组装多肽技术构建一种新型BMSCs膜片-RADA16组织工程复合体的研究》一文中研究指出目的:联合细胞膜片和自组装多肽技术构建一种新型BMSCs膜片-RADA16组织工程复合体。方法:利用BMSCs膜片包裹自组装多肽RADA16支架材料构建BMSCs膜片-RADA16组织工程复合体。用扫描电镜和激光共聚焦显微镜观察复合体形貌及细胞形态、CCK-8测定细胞增殖情况、RT-PCR技术检测自组装多肽支架对细胞成骨分化相关基因表达的影响。结果:与BMSCs膜片相比,复合体的BMSCs在第3～8天细胞迅速增长,数量超过BMSCs膜片组(P <0. 05); RT-PCR结果显示,复合体的成骨相关基因表达水平高于BMSCs膜片组(P <0. 05)。结论:BMSCs膜片-RADA16组织工程复合体能够促进BMSCs的增殖和成骨分化。(本文来源于《实用口腔医学杂志》期刊2019年01期）
李澍源[2]（2017）在《利用E7多肽修饰的聚己内酯/纳米羟基磷灰石支架构建组织工程骨的实验研究》一文中研究指出背景:组织工程技术的出现,解决了骨缺损传统治疗方式所存在的不足。组织工程支架的研究是组织工程与再生医学研究的重要组成部分。聚己内酯(Polycaprolactone,PCL)与纳米羟基磷灰石(Nano-hydroxyapatite,nHA)均具有良好的生物相容性和力学性能,PCL由于其本身性质的原因,对细胞的亲和力不够。研究发现,一种氨基酸排列顺序为EPLQLKM的多肽序列(E7)能够特异性的吸引人骨髓间充质干细胞(human Bone Mesenchymal Stem Cells,hBMSCs)。我们希望能用其对 PCL/nHA 支架表面进行修饰,为组织工程骨的构建提供一种新的支架材料。目的:1、借助3D打印技术制备多孔PCL/nHA支架,并研究其力学性质;使用E7多肽对PCL/nHA支架进行修饰,研究其降解性。2、研究E7-PCL/nHA支架对hBMSCs的生物学影响。3、研究E7-PCL/nHA支架复合hBMSCs体内的成骨能力。方法:1、水热法合成nHA,借助3D打印技术制备多孔PCL/nHA支架,扫描电镜下观察其基本形态。通过压缩与弯曲测试,比较nHA不同含量(10%,20%,30%)的PCL/nHA支架生物力学性能。使用被异硫氰酸荧光素(fluorescein-5-isothiocyanate,FITC)标记的E7多肽修饰PCL/nHA支架,置于荧光显微镜下观察修饰情况。E7-PCL/nHA支架植入大耳白兔皮下,研究其降解情况。2、使用密度梯度离心法获取hBMSCs,体外培养后进行成骨、成脂诱导,并分别使用茜素红染色、油红O染色进行鉴定。流式细胞技术检测其表面标志物。成骨诱导后检测细胞成骨相关基因的表达。3、在E7-PCL/nHA支架与PCL/nHA支架上接种hBMSCs,扫描电镜下观察细胞生长情况,激光共聚焦显微镜下观察hBMSCs的空间分布情况,以及hBMSCs在两种支架上的贴附速度。加入β-磷酸叁钙(β-TCP)、珊瑚羟基磷灰石(CHA)作为对照,研究hBMSCs在四种支架上的粘附、增殖和成骨基因的表达情况。4、将hBMSCs与E7-PCL/nHA支架、PCL/nHA支架复合后,体外成骨诱导2周,植入裸鼠皮下,3个月后取材,标本HE染色后进行组织学观察,及成骨定量检测。结果:1、使用水热法可成功合成结构规则的nHA,混入PCL后借助3D打印的模具可成功制成多孔的PCL/nHA支架,孔隙均匀;在生物力学检测实验中,随着支架内nHA含量的升高,支架的弹性模量等指标增大。在荧光显微镜下观察使用FITC-E7修饰的PCL/nHA支架,支架发出均匀绿色荧光。降解曲线显示随时间的延长,支架缓慢降解。2、使用密度梯度离心法可获取hBMSCs,hBMSCs能向成骨与成脂方向分化,成骨诱导后成骨相关基因表达。3、hBMSCs在E7-PCL/nHA支架与PCL/nHA支架上生长状态良好,电镜下可见大量细胞基质;激光共聚焦显微镜下观察hBMSCs在E7-PCL/nHA支架与PCL/nHA支架上的空间分布情况,E7-PCL/nHA+hBMSCs复合物上的细胞密度要略大于PCL/nHA+hBMSCs复合物上的细胞密度;激光共聚焦显微镜下观察接种hBMSCs 3h后的细胞贴附情况,E7-PCL/nHA上的细胞贴附速度更快。hBMSCs在β-TCP、CHA、E7-PCL/nHA、PCL/nHA四组支架上的粘附情况,PCL/nHA组要低于其他叁组;增殖情况也是如此。而对于诱导14d后成骨基因的表达,RUNX2与ALP在四组支架上的表达无统计学差异;OCN、OPN在β-TCP组表达要高于其他叁组。4、hBMSCs与E7-PCL/nHA支架、PCL/nHA支架复合后植入裸鼠皮下可成骨,成功构建率分别为80%和70%,成骨面积分析两组间无统计学差异。结论:1、借助3D打印技术,我们可以成功制备出PCL/nHA多孔支架;PCL/nHA多孔支架的机械强度随nHA含量的增加而加大;利用sulfo-SMCC作为交联剂可以成功将E7多肽修饰于PCL/nHA多孔支架表面上;E7-PCL/nHA可在生物体内被降解,降解速度缓慢。2、通过密度梯度离心法可有效分离出具有成骨成脂分化潜能的hBMSCs。3、可以成功在体外构建E7-PCL/nHA+hBMSCs复合物;相比于PCL/nHA支架,E7-PCL/nHA支架更具细胞亲和力;E7-PCL/nHA支架的生物相容性不劣于CHA支架和β-TCP支架。4、E7-PCL/nHA+hBMSCs复合物异位成骨性能良好;与PCL/nHA+hBMSCs复合物异位成骨能力无差别。(本文来源于《北京协和医学院》期刊2017-04-10）
伍卫刚,吴琼华[3]（2015）在《自组装纳米多肽凝胶构建椎间盘组织工程化移植物的实验研究》一文中研究指出目的探讨KLD-12改良后的自组装多肽的理化特性,构建以自组装纳米多肽凝胶为细胞支架材料的椎间盘组织工程化移植物的可行性。方法固相自动多肽合成仪修饰改良合成KLD-12多肽分子,在自组装临界状态加入不同的促发剂,筛选出最佳自组装临界浓度,在此条件下自组装凝胶的粘弹性与椎间盘组织相仿。取新生SD大鼠,分离培养椎间盘髓核细胞,与多肽溶液复合,加入促发剂诱导自组装形成髓核细胞/多肽复合物的叁维立体椎间盘组织工程化移植物。同时检测不同细胞悬液与多肽溶液配比对自组装形成的椎间盘组织工程化移植物的理化特性影响和对细胞活性的影响,并检测细胞在不同多肽凝胶内部的粘附、增殖和生物功能情况。结果中性PBS溶液对多肽溶液具有较好的诱导作用,能快速自组装成多肽凝胶,结构完整,表面有足够的弹性维持凝胶外形,与椎间盘髓核组织相仿。髓核细胞在自组装多肽凝胶组织工程化移植物内分布均匀,中央部分髓核细胞呈圆形,而在边缘部位的髓核细胞则呈梭形及纺锤形。MTT试验结果显示,多肽凝胶与细胞复合后,髓核细胞随着培养时间的延长迅速生长,并且分化良好,紧密黏附与多肽凝胶的多孔结构中。结论多肽分子能够在中性PBS溶液的诱发下迅速自组装成具有良好理化性能的多肽凝胶结构,并且能为髓核细胞生长及增殖提供良好的微环境,构成理想的椎间盘组织工程化移植物。(本文来源于《2015年浙江省骨科学学术年会论文汇编——基础与骨病学组专题》期刊2015-09-10）
邵辉[4]（2015）在《组织工程材料KLD-12多肽/TGF-β1纳米纤维凝胶复合BMSCs治疗椎间盘退变效果的实验研究》一文中研究指出目的:探讨组织工程材料KLD-12多肽/TGF-β1纳米纤维凝胶复合BMSCs治疗椎间盘退变的效果。方法:选取健康新西兰大白兔40只,随机平均分为A、B、C、D、E五组,其中A、B、C、D四组兔行纤维环穿刺髓核抽吸法建立兔椎间盘退变模型(L3-4、L4-5、L5-6),术后两周将KLD-12多肽/TGF-β/BMSCs凝胶、生理盐水、KLD-12多肽/BMSCs凝胶、KLD-12多肽/TGF-β1凝胶40μl分别原位植入退变椎间盘,E组不做任何处理。移植术后4周,8周,12周,24周每组随机抽取2只兔行X线及MRI影像学检查,之后收集兔椎间盘标本经行大体观察、HE染色、半定量RT-PCR检测椎间盘CollagenⅡ及Aggrecan m RNA表达,观察各组之间椎间盘变化。结果:X线片检查,各个时间点%DHI与A组相比:B、C、D组4周、8周、12周、24周均降低,差异具有统计学意义(P﹤0.05)。MRI检查T2加权信号强度,与A组相比,C、D组略降低,B组明显降低,E组明显最高。与A组相比:B、C、D、E组4周、8周、12周、24周差异具有统计学意义(P﹤0.05)。大体标本观察,A组可见新生髓核样组织;B组中央髓核组织缺失,可见灰黄色的纤维样增生组织;C组椎间隙稍狭窄,中央髓核区可见白色纤维样增生组织,质地较韧,外周纤维环结构稍紊乱;D组可见少量新生髓核样组织。HE染色,据椎间盘退变组织学分级:A组1~2级,B组4~5级,C组3~4级,D组2~3级,E组~0级。甲苯胺蓝染色,A组髓核组织甲苯胺蓝深度染色,B组髓核组织甲苯胺蓝染色部分髓核组织缺失,不着色,局部淡染;C组和D组髓核组织甲苯胺蓝中度染色;E组:髓核组织甲苯胺蓝深度染色。Aggrecan m RNA,A组~E组均有表达,A组与分别B、C、D组比较,各个时间点表达显着升高,差异具有统计学意义(P﹤0.05);A组与E组比较,表达显着降低,差异具有统计学意义(P﹤0.05)。CollagenⅡm RNA,A组~E组均有表达,A组与分别B、C、D组比较,各个时间点表达显着升高,差异具有统计学意义(P﹤0.05);A组与E组比较,表达显着降低,差异具有统计学意义(P﹤0.05)。结论:KLD-12多肽/TGF-β1复合BMSCs移植对退变椎间盘具有一定的修复和再生作用。(本文来源于《石河子大学》期刊2015-05-01）
李景峰,郑启新,陈廖斌,郭晓东,邹枕玮[5]（2014）在《表面矿化修饰煅烧骨/BMP_2活性多肽复合MC3T3-E1细胞构建组织工程骨》一文中研究指出探讨表面矿化修饰煅烧骨/BMP2活性多肽复合材料、表面矿化修饰煅烧骨和单纯煅烧骨复合MC3T3-E1细胞构建的组织工程骨在体内的成骨能力。实验分3组,A组:表面矿化修饰煅烧骨/BMP2活性多肽复合材料,B组:表面矿化修饰煅烧骨,C组:单纯煅烧骨。诱导培养MC3T3-E1细胞,将其分别接种于3组材料,倒置相差显微镜和环境扫描电镜分别观察细胞生长情况。将18只新西兰大白兔随机分成3组,每只大白兔作两侧骶棘肌肌袋模型,然后将3组材料分别植入大白兔骶棘肌内,分别于术后第4、8周各组处死大白兔3只,行组织学观察及新生骨面积测定。通过观察发现MC3T3-E1细胞在3组材料表面生长良好,表面矿化修饰煅烧骨/BMP2活性多肽复合材料能促进MC3T3-E1细胞在其表面粘附与增殖并能较好地保持细胞的形态。术后第4、8周组织学观察A组材料新生骨明显多于B组,B组多于C组。术后4周和8周新生骨面积测定值A、B、C组分别为(19 712.524±3 782.126)μm2、(28 227.617±2 455.375)μm2,(11 648.507±1 047.221)μm2、(14 592.892±899.532)μm2,(7 986.655±903.487)μm2,(11 254.822±669.508)μm2。表面矿化修饰煅烧骨/BMP-2活性多肽复合材料是一种较理想的骨组织工程复合材料,有望应用于临床。(本文来源于《中国生物医学工程学报》期刊2014年03期）
王聪,袁文,吴晓东,敖海勇[6]（2013）在《骨组织工程材料多肽修饰涂层在骨质疏松中的应用》一文中研究指出背景:将具有特定功能的蛋白质、酶、多肽等生物活性物质固定于种植体表面,可促进骨潜能细胞及成骨细胞的增殖、分化,达到良好的成骨作用。目的:介绍生物活性多肽精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸的生物学特性,及其在骨质疏松状态下对细胞生物学行为和种植体骨整合的影响。方法:计算机检索PubMed数据库(1984年1月至2013年1月)、万方数据(2002年1月至2012年12月)、CHKD期刊全文数据库(2002年1月至2012年12月)中,有关生物活性多肽精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸的生物学特性,以及其在骨质疏松状态下对细胞生物学行为和种植体骨整合影响的文献。结果与结论:在种植体表面接种生物活性物质可进一步改善种植体与骨组织的整合速度。通过在生物材料表面固定精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸多肽的方法进行仿生态化学修饰,模拟体内细胞外基质环境,促进细胞黏附和生长,是早期改善内植物骨整合的有效途径,也是近年组织工程领域研究的重要方向。今后研究的重点在于设计特异高效的多肽和简单有效的固定方法,同时将对这类物质长期应用的安全性做进一步深入的研究。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2013年42期）
仝健,高平,张澜君,李怀芬,牛惠生[7]（2011）在《RGD多肽耦联活化小牛松质骨骨组织工程材料的研究》一文中研究指出目的:利用肽羧合剂EDC[1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳二亚胺盐酸盐]将粘附蛋白类八肽(谷氨酸-脯氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-天冬酰胺-酪氨酸-精氨酸)耦联到经紫外线辐照活化的小牛松质骨片上,制备出用于骨缺损性疾病的骨修复与重建的组织工程新方法,为口腔医学中牙齿和颌骨缺损性疾病的治疗提供骨移植的新型材料。方法:采用125I-RGD放射性示踪技术、碳二亚胺羧合、紫外线辐照活化的小牛松质骨的羧基及蛋白质染色技术。结果:牢固地将RGD耦联到小牛松质骨上。结论:随着骨组织工程研究的发展和这一新材料的深入研究,将改变骨缺损临床采用羟基磷灰石或骨水泥等材料将缺损部位封闭,从而使其丧失功能的治疗方法,引领骨移植临床应用的到来。(本文来源于《临床口腔医学杂志》期刊2011年08期）
孙建华[8]（2010）在《椎间盘组织工程支架材料KLD-12自组装多肽的构建及复合MSCs治疗椎间盘退变的实验研究》一文中研究指出目的合成带有AcN-KLDLKLDLKLDL-CNH2片段的KLD-12多肽分子,研究其自组装及生物相容性。方法多肽合成仪合成KLD-12自组装多肽分子,高效液相色谱法及质谱法分析纯化。中性PBS液触发0.5%、0.25%、0.1%KLD-12多肽溶液自组装,观察自组装凝胶外形。原子力显微镜(Atomic Force Microscope,AFM)检测多肽自组装纳米纤维。抽取兔新鲜骨髓,密度梯度法分离骨髓间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells, MSCs),体外培养增殖,流式细胞仪检测MSCs (P3) CD34、CD90、CD44和CD45抗原表达。完全培养基调整KLD-12多肽溶液浓度,最终浓度分别为0.01%、0.03%、0.05%,完全培养基作为对照组,体外培养MSCs 24h、48h,MTT法检测细胞生物活性。溶血试验检测KLD-12多肽溶液(0.01%)溶血率。皮肤刺激试验及皮肤植入试验检测KLD-12多肽凝胶对局部皮肤刺激反应。结果KLD-12多肽纯度为95.36%。相对分子量为1467.83。0.5%KLD-12多肽溶液在PBS液触发下,能快速自组装成水凝胶,水凝胶均质透明,结构完整,表面有足够的弹性维持凝胶外形。而0.1%和0.25%多肽溶液自组装形成的凝胶结构不完整,只在局部形成凝胶颗粒。AFM显示KLD-12多肽可自组装成纳米纤维,直径10-30nm(平均：13.7±4.7nm),纤维长度为数百纳米,纤维相互交织形成多孔网状结构。体外培养的MSCs贴壁生长,呈纺锤形及梭形,流式细胞术检测细胞高表达CD90、CD44,不表达CD34和CD45。多肽溶液(0.01%、0.03%、0.05%)培养的MSCs贴壁生长良好,与对照组相比,试验组24h及48h吸光度(A值)无统计学差异(P>0.05)。溶血试验结果显示,KLD-12多肽溶液的溶血率为0.112%。皮肤刺激试验结果显示,试验组皮肤无明显肿胀、红斑及焦痂形成,皮肤刺激试验评分为0分。HE染色结果显示,多肽溶液植入部位皮肤层次清晰,结构正常,无明显中性粒细胞及淋巴细胞浸润。结论KLD-12多肽合成成功,能自组装为结构完整的水凝胶及纳米纤维。KLD-12自组装多肽与MSCs和宿主具有良好生物相容性。目的KLD-12自组装多肽复合髓核细胞体外叁维培养,检测多肽凝胶内髓核细胞生物活性及细胞表型,探讨KLD-12自组装多肽作为椎间盘组织工程细胞支架材料的可行性。方法KLD-12多肽复合髓核细胞(P1)体外叁维培养二周。倒置显微镜观察细胞在凝胶内分布。培养第1天、第3天、第7天、第14天,CCK-8法检测髓核细胞增殖。培养第7天、第14天,钙黄绿素(Calcein-AM)及碘化丙啶(PI)荧光染色检测凝胶内活细胞和死细胞,并计算活细胞比率。培养第14天,逆转录聚合酶链反应(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测凝胶内髓核细胞Ⅱ型胶原及Aggrecan mRNA表达。免疫荧光染色检测凝胶内髓核细胞Ⅱ胶原及Ⅰ型胶原表达。收集第1、4、7、10、13天培养基,检测培养基内GAG含量。结果体外培养的髓核细胞贴壁生长,呈梭形及纺锤形。凝胶内髓核细胞分布均匀,呈圆形细胞形态,凝胶边缘的髓核细胞呈梭形及纺锤形。细胞增殖试验结果显示,凝胶/髓核细胞吸光度(A值)随着培养时间的延长而逐渐增高。Calcein-AM/PI荧光染色显示：培养第7天,凝胶内细胞生长良好,大量活细胞存在,维持圆形的细胞形态,凝胶边缘细胞呈梭形及纺锤形,部分细胞出现增殖,呈现“哑铃形”。与第7天相比,培养14天的髓核形态无明显改变,细胞生长良好,但增殖的“哑铃形”细胞稍有增多。细胞存活率显示,第7天及第14天细胞存活率均为92.6%。RT-PCR结果显示,凝胶内髓核细胞表达Ⅱ型胶原mRNA及Aggrecan mRNA。免疫荧光染色结果显示,凝胶内大量髓核细胞表达Ⅱ型胶原,细胞外基质Ⅱ型胶原中度阳性染色,仅少量细胞表达Ⅰ型胶原。GAG检测结果显示,试验组培养基GAG含量随着培养时间延长而呈非直线性增加。结论KLD-12多肽凝胶能为髓核细胞生长及增殖提供良好的微环境。凝胶内髓核细胞表型稳定,在基因及分子水平上功能正常。KLD-12自组装多肽可作为良好的椎间盘组织工程细胞支架材料。目的KLD-12自组装多肽复合MSCs培养2周,构建以KLD-12多肽为支架材料的椎间盘组织工程化移植物。将构建的组织工程化KLD-12多肽/MSCs原位植入退变椎间盘,探讨KLD-12多肽/MSCs治疗椎间盘退变效果。方法体外部分：KLD-12自组装多肽复合MSCs (P3)体外叁维培养二周。倒置显微镜下观察细胞分布。培养第1天、第3天、第7天、第14天,检测凝胶内MSCs生物活性。培养第7天、第14天,钙黄绿素(Calcein-AM)及碘化丙啶(PI)荧光染色检测凝胶内活细胞和死细胞,并计算活细胞比率。体内部分：诱导兔椎间盘退变。将构建的组织工程化KLD-12多肽/MSCs原位植入退变椎间盘。术后12周,腰椎正侧位X光片测量椎体高度及椎间盘高度,计算椎间盘高度指标DIH,%DIH表示术后椎间盘高度变化(%DIH=术后DIH/术前DIH×100%)。腰椎MRI测量椎间盘T2加权相信号强度。大体观察、HE染色观察椎间盘退变程度并分级。甲苯胺蓝染色法观察髓核组织内蛋白多糖含量。逆转录聚合酶链反应(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction, RT-PCR)检测椎间盘Ⅱ型胶原及Aggrecan基因表达。Hochest标记MSCs与KLD-12多肽复合,原位植入兔椎间盘退变模型,术后4周取出椎间盘标本,倒置荧光显微镜下观察MSCs在椎间盘组织内的分布。结果体外部分：倒置显微镜下观察,凝胶内MSCs分布均匀,呈圆形细胞形态,凝胶边缘细胞呈梭形。细胞增殖试验结果显示,凝胶/MSCs吸光度(A值)随着培养时间延长而逐渐增高。Calcein-AM/PI荧光染色结果显示：培养第7天,凝胶内大量活细胞存在,MSCs生长良好,细胞形态呈圆形,凝胶边缘细胞呈梭形及纺锤形,部分细胞增殖,呈“哑铃形”。培养至第14天,MSCs生长良好,与第7天相比,MSCs形态无明显改变,但增殖的“哑铃形”细胞稍有增多。细胞存活率显示,第7天细胞存活率为92.15%,第14天为91.81%,两组相比,统计学差异无显着性(P>0.05)。体内部分：移植的MSCs主要集中于髓核组织内,细胞分布基本均匀,少部分细胞向纤维环迁移。放射学检查结果显示：移植组椎间隙轻度狭窄,%DHI为90.21%,假移植组明显狭窄,%DHI为60.56%,两组相比,差异具有显着性(P<0.05)。MRI结果显示,与移植组MRI信号强度相比,假移植组信号强度明显下降,两组相比,差异具有统计学显着性,(P<0.05)。大体观察结果显示,假移植组椎间盘结构明显退变,髓核组织缺失。移植组纤维环结构基本正常,髓核组织再生,结构欠完整。组织学检查结果显示,假移植组纤维环层状结构明显紊乱,髓核组织及髓核细胞消失。移植组椎间盘组织结构基本正常,纤维环组织层状结构稍有紊乱,可见再生髓核组织和髓核细胞。退变评级：移植组1-2级,假移植组4-5级。甲苯胺蓝染色结果显示：移植组髓核组织甲苯胺蓝中度染色,假移植组髓核缺失,内层纤维环组织淡染。RT-PCR结果显示：叁组椎间盘组织均表达Ⅱ型胶原mRNA及Aggrecan mRNA。叁组相比,Ⅱ型胶原mRNA表达水平无统计学差异(P>0.05)。移植组Aggrecan mRNA表达与正常组相同,明显高于假移植,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论KLD-12多肽凝胶为MSCs生长、增殖提供良好的微环境。组织工程化KLD-12多肽/MSC移植能恢复退变椎间盘高度,增加蛋白多糖含量及水含量,对恢复椎间盘退变具有良好治疗效果。(本文来源于《华中科技大学》期刊2010-04-01）
王佰川,邵增务[9]（2009）在《自组装多肽纳米纤维材料在神经组织工程中的应用》一文中研究指出目的综述自组装多肽纳米纤维材料(self-assembling peptide nanofiber scaffold,SAPNS)的基础研究及其在神经组织工程中的研究现状。方法广泛查阅近期国内外SAPNS研究的相关文献,并进行回顾和综合分析。结果SAPNS可促进神经干细胞的黏附、增殖和分化以及神经元轴突向外生长和延伸,促进ECM的合成并能抑制神经胶质细胞的黏附和分化,很好地模拟了细胞在体内的生长环境。结论SAPNS是一种理想的基质材料,为损伤神经组织的修复提供了新的方法。(本文来源于《中国修复重建外科杂志》期刊2009年07期）
万俊明[10]（2009）在《新型多肽神经组织工程支架材料及神经干细胞在其表面生长分化的实验研究》一文中研究指出第一部分神经干细胞的体外分离、培养及鉴定目的:(1)建立小鼠乳鼠大脑皮质神经干细胞的分离、培养方法。(2)鉴定神经干细胞及分化后的细胞,为神经干细胞的体内移植研究奠定基础。方法:体外分离出新生SD小鼠(出生1-3天内)的大脑皮质,机械吹打,采用无血清悬浮培养法,采用DMEM/F12培养基,添加B27, bFGF和EGF等生长因子,调整细胞密度至1×107/L,1×108/L,1×109/L,1×1010/L进行体外培养,倒置相差显微镜观察细胞形态,取得具有自我复制、增殖能力的细胞,并将细胞贴壁培养检测其分化能力,应用多克隆兔抗鼠巢蛋白(Nestin)、多克隆兔抗鼠神经元特异性烯醇化酶(Neuron Specific Enolase NSE)、多克隆兔抗鼠胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)抗体,免疫组化鉴定细胞。结果:(1)从新生小鼠大脑皮层组织分离出的细胞,在添加B27和EGF、bFGF的DMEM/F12的无血清培养基中,可持续增殖,聚集成神经球。细胞经过贴壁后分化为神经元及神经胶质细胞,此法较简单,为进行NSCs体内移植奠定了基础。(2)MTT实验显示按1×109/L密度培养细胞增殖最快,细胞数量从第3天起迅速增殖,于第7天达高峰。(3)免疫细胞化学法呈现:抗Nestin阳性、抗NSE阳性,抗GFAP阳性。结论:按上述方法分离、培养出的细胞具有自我复制、增殖及分化为神经元和胶质细胞的特性,属于神经干细胞(NSCs)。第二部分新型组织工程多肽的设计合成及自组装成凝胶目的:设计合成含IKVAV的新型组织工程多肽序列,研究其在不同条件下自组装为多孔凝胶及生物力学特性。方法:用传统的固相法合成多肽(上海波泰生物科技有限公司),使用高效液相色谱仪(High performance liquid chromatograph, HPLC)测定纯度,质谱仪(Mass spectrometer, MS)测定分子量;将合成的多肽粉末溶于0.1mol/LNaOH溶液中,配成10,2,1,0.5%wt肽溶液,各取200ul肽溶液,加入等体积的DMEM/F12,涂于盖玻片或置于10mol/L盐酸蒸汽中,置入37℃干燥箱。使用扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)及透射电镜(transmission electron microscope,TEM)检测自组装凝胶的结构,凝胶的流变学特性则使用血流计来测定。结果:MS示肽的分子量为1351.72,HPLC示其纯度为95%。多肽在DMEM/F12触发下,数秒内形成凝胶;于10mol/L HCL蒸气中,2小时后形成凝胶薄膜;在37℃恒温干燥箱中,仅见白色肽粉末,未见凝胶;SEM检测10%wt多肽自组装凝胶由许多纳米纤维构成,呈现多孔厚壁结构,TEM示:2,1,0.5%wt多肽自组装凝胶是由相互交叉的编织状纳米纤维构成。1%wt多肽凝胶纤维直径有3.5～5nm,长度95nm～1500nm;2%wt多肽凝胶纳米纤维十分密集;0.5%wt肽凝胶纳米纤维十分细,纤维间有较大的空隙;时间扫描流变学示:损耗模量呈线性比存储模量小,证实自组装凝胶有一定生物力学强度,可支撑接种的细胞。结论:本实验设计合成了新型组织工程多肽,在DMEM/F12中可自组装成多孔凝胶,成功合成了一种含IKVAV等活性区域的新型脊髓组织工程支架材料。第叁部分神经干细胞在肽自组装凝胶表面生长、分化的实验研究目的:体外分离培养出NSCS,接种于组织工程多肽自组装多孔凝胶的表面,观察NSCS在二维凝胶表面及其血清,联合因子等条件下生长、分化情况。方法:取小鼠乳鼠的大脑皮质,机械分离,无血清悬浮培养出NSCS,用免疫细胞化学法,链霉亲和素-生物素-过氧化物酶(Streptavidin biotin peroxidase Complex,SABC)检测试剂盒鉴定细胞。多肽溶于NaOH溶液中,浓度为1%wt,PH=9.0,加DMEM/F12在盖玻片上触发多肽自组装为凝胶,TEM检测,实验组:NSCS接种于二维凝胶的表面;对照组:NSCS接种于预先涂有多聚赖氨酸的盖玻片表面;倒置相差显微镜观察NSCS生长及分化情况,免疫细胞化学染色,激光共焦显微镜观察。将NSCS球接种于用预先涂有多聚赖氨酸的盖玻片上,在NSCS球贴壁后,按以下分组进行诱导分化:(1) 5μmol/ml Forskolin、20ng/ml bFGF、20ng/ml EGF 200 ng/ml神经基因调节剂(HRG),联合因子组;(2)10%血清,血清组;(3)20 ng/ml bFGF, bFGF组。各组的培养基均为为DMEM/F12+B27添加剂。用MAP2阳性细胞计数分化的神经元,Hoechst33342阳性标记数来计数细胞总数。NSCs的神经元分化率=MAP2+细胞数/Hoechst33342标记细胞数。用图像分析软件对采集图像中MAP2阳性的神经元的胞体面积、周长及细胞最长突起长度进行分析。结果:免疫组化鉴定:无血清悬浮培养的细胞为NSCs,抗Nestin阳性。TEM示:凝胶为相互交织成网状的纳米纤维。实验组:7天后,IPCM观察到NSCS长出细长突起,对照组仅见未分化状态的NSCs球。LCM观察:实验组,NSCs发生分化,见神经元及星形胶质细胞,NF阳性,为较强红色荧光,GFAP阳性,为弱绿色荧光;对照组:只见NSCs球,Nestin阳性,为绿色荧光。联合因子组:免疫荧光显示:MAP2阳性细胞沿着S100阳性细胞的突起向外周移行,生长,分化,到诱导10d后,MAP2阳性细胞也出现许多突起,有部分呈现TH免疫阳性。血清组:免疫荧光细胞化学染色见细胞呈S1O0强阳性,Hoechst33342染色见细胞核较大,MAP2阳性细胞数量较少,胞体饱满。bFGF组:免疫荧光检测:诱导3～5d后逐渐呈S100阳性,突起粗短。结论:本课题采用机械分离,无血清悬浮培养出NSCS。TEM证实凝胶为网状纳米纤维。使用免疫细胞化学法进行细胞鉴定:凝胶对NSCS有较好的细胞相容性,NSCS在其表面可被诱导分化为神经元及神经胶质细胞。证实多肽自组装二维凝胶可作为一种神经组织工程支架材料。NSCS在联合因子和血清,bFGF条件下,生长分化存在显着差异.(本文来源于《南昌大学》期刊2009-06-01）
组织工程多肽论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景:组织工程技术的出现,解决了骨缺损传统治疗方式所存在的不足。组织工程支架的研究是组织工程与再生医学研究的重要组成部分。聚己内酯(Polycaprolactone,PCL)与纳米羟基磷灰石(Nano-hydroxyapatite,nHA)均具有良好的生物相容性和力学性能,PCL由于其本身性质的原因,对细胞的亲和力不够。研究发现,一种氨基酸排列顺序为EPLQLKM的多肽序列(E7)能够特异性的吸引人骨髓间充质干细胞(human Bone Mesenchymal Stem Cells,hBMSCs)。我们希望能用其对 PCL/nHA 支架表面进行修饰,为组织工程骨的构建提供一种新的支架材料。目的:1、借助3D打印技术制备多孔PCL/nHA支架,并研究其力学性质;使用E7多肽对PCL/nHA支架进行修饰,研究其降解性。2、研究E7-PCL/nHA支架对hBMSCs的生物学影响。3、研究E7-PCL/nHA支架复合hBMSCs体内的成骨能力。方法:1、水热法合成nHA,借助3D打印技术制备多孔PCL/nHA支架,扫描电镜下观察其基本形态。通过压缩与弯曲测试,比较nHA不同含量(10%,20%,30%)的PCL/nHA支架生物力学性能。使用被异硫氰酸荧光素(fluorescein-5-isothiocyanate,FITC)标记的E7多肽修饰PCL/nHA支架,置于荧光显微镜下观察修饰情况。E7-PCL/nHA支架植入大耳白兔皮下,研究其降解情况。2、使用密度梯度离心法获取hBMSCs,体外培养后进行成骨、成脂诱导,并分别使用茜素红染色、油红O染色进行鉴定。流式细胞技术检测其表面标志物。成骨诱导后检测细胞成骨相关基因的表达。3、在E7-PCL/nHA支架与PCL/nHA支架上接种hBMSCs,扫描电镜下观察细胞生长情况,激光共聚焦显微镜下观察hBMSCs的空间分布情况,以及hBMSCs在两种支架上的贴附速度。加入β-磷酸叁钙(β-TCP)、珊瑚羟基磷灰石(CHA)作为对照,研究hBMSCs在四种支架上的粘附、增殖和成骨基因的表达情况。4、将hBMSCs与E7-PCL/nHA支架、PCL/nHA支架复合后,体外成骨诱导2周,植入裸鼠皮下,3个月后取材,标本HE染色后进行组织学观察,及成骨定量检测。结果:1、使用水热法可成功合成结构规则的nHA,混入PCL后借助3D打印的模具可成功制成多孔的PCL/nHA支架,孔隙均匀;在生物力学检测实验中,随着支架内nHA含量的升高,支架的弹性模量等指标增大。在荧光显微镜下观察使用FITC-E7修饰的PCL/nHA支架,支架发出均匀绿色荧光。降解曲线显示随时间的延长,支架缓慢降解。2、使用密度梯度离心法可获取hBMSCs,hBMSCs能向成骨与成脂方向分化,成骨诱导后成骨相关基因表达。3、hBMSCs在E7-PCL/nHA支架与PCL/nHA支架上生长状态良好,电镜下可见大量细胞基质;激光共聚焦显微镜下观察hBMSCs在E7-PCL/nHA支架与PCL/nHA支架上的空间分布情况,E7-PCL/nHA+hBMSCs复合物上的细胞密度要略大于PCL/nHA+hBMSCs复合物上的细胞密度;激光共聚焦显微镜下观察接种hBMSCs 3h后的细胞贴附情况,E7-PCL/nHA上的细胞贴附速度更快。hBMSCs在β-TCP、CHA、E7-PCL/nHA、PCL/nHA四组支架上的粘附情况,PCL/nHA组要低于其他叁组;增殖情况也是如此。而对于诱导14d后成骨基因的表达,RUNX2与ALP在四组支架上的表达无统计学差异;OCN、OPN在β-TCP组表达要高于其他叁组。4、hBMSCs与E7-PCL/nHA支架、PCL/nHA支架复合后植入裸鼠皮下可成骨,成功构建率分别为80%和70%,成骨面积分析两组间无统计学差异。结论:1、借助3D打印技术,我们可以成功制备出PCL/nHA多孔支架;PCL/nHA多孔支架的机械强度随nHA含量的增加而加大;利用sulfo-SMCC作为交联剂可以成功将E7多肽修饰于PCL/nHA多孔支架表面上;E7-PCL/nHA可在生物体内被降解,降解速度缓慢。2、通过密度梯度离心法可有效分离出具有成骨成脂分化潜能的hBMSCs。3、可以成功在体外构建E7-PCL/nHA+hBMSCs复合物;相比于PCL/nHA支架,E7-PCL/nHA支架更具细胞亲和力;E7-PCL/nHA支架的生物相容性不劣于CHA支架和β-TCP支架。4、E7-PCL/nHA+hBMSCs复合物异位成骨性能良好;与PCL/nHA+hBMSCs复合物异位成骨能力无差别。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
组织工程多肽论文参考文献
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[10].万俊明.新型多肽神经组织工程支架材料及神经干细胞在其表面生长分化的实验研究[D].南昌大学.2009
标签：骨髓间充质干细胞(BMSCs); 细胞膜片; 自组装多肽; 组织工程;