居海宁1，2陈昊3卞金陵1
（1第二军医大学长海医院预防保健科上海200433;
2上海第七人民医院心血管内科上海200137;
3上海第七人民医院急诊科上海200137）
基金项目：浦东新区卫生科技项目青年基金资助（PW2011B-4）【摘要】目的：研究血管紧张素II1型受体（AGTR1）基因多态性与ACEIS合并ARB疗效的关系。方法：入组卡托普利合并坎地沙坦组141人，随访8周后，分成有效组和无效组。抽血提DNA，分析AGTR1单核苷酸多态性（A1166C）基因型，比较两组差异。结果：141例卡托普利合并坎地沙坦治疗的心衰患者，随访8周后，有效患者102例，无效患者39例。有效组与无效组AGTR1位点A1166C基因型及等位基因频率存在显著性差异，但基因型频率为AA型的心力衰竭患者对于卡托普利合并坎地沙坦治疗疗效好，而携带C等位基因心衰患者合并治疗的疗效差于携带A等位基因心衰患者。结论：AGTR1基因单核苷酸多态性（A1166C）能影响卡托普利合并坎地沙坦治疗心力衰竭患者的疗效，该位点A突变成C后，卡托普利合并坎地沙坦治疗疗效差。
【关键词】心力衰竭；血管紧张素；单核苷酸多态性
【中图分类号】R5416+1【文献标识码】B【文章编号】1003-5028(2013)10-0141-02
心力衰竭发病率高，社会负担沉重。人血管紧张素II1（AT1）型受体（AGTR1）位于染色体3q21-25上，在基因的编码区及非编码区共有5个突变位点，其中只有位于3’末端非编码区1166位点上腺嘌呤（Adenine，A）突变为胞嘧啶（Cytosine，C）的变异与心血管疾病有关。已有研究发现表明，C等位基因与高血压、冠状动脉硬化、心肌肥厚和心力衰竭的发生相关［1-2］。然而关于该多态性（A1166C）与ACEIS合并坎地沙坦疗效的关系更是鲜有报道。故本研究探讨AGTR1单核苷酸多态性（A1166C）与卡托普利合并坎地沙坦治疗心力衰竭疗效之间的关系，为该方案的个体化治疗提供药物基因组学的可能理论依据。
1资料与方法
11一般资料：与第一部分相同，2010年9月~2011年9月于上海市第七人民医院门诊和住院的心力衰竭患者，予卡托普利合并坎地沙坦治疗。
入组标准：
①符合美国心脏病协会CHF诊断标准；
②心功能NYHA分级II～Ⅳ级；
③LVEF小于等于40％。
④获得入组对象的知情同意。
12研究方案及疗效评估：前瞻性队列研究，卡托普利合并坎地沙坦（卡托普利10毫克／日合并坎地沙坦8毫克／日），随访观察时间为8周。其他药物使用（包括BB类、硝酸酯类、洋地黄类和利尿剂等）两组视病情需要而决定是否应用。基线期对患者仔细地进行体格检查，并进行NYHA心功能分级，UCG评价左室射血分数（LVEF）、左室舒张末期内径（LVEDD）、左房内径（LAD）。
疗效判断心功能改善提高1级，LVEF较治疗前增加≥20％为有效；心功能改善<1级，LVEF无明显变化或心衰加重或死亡为无效。
13基因组DNA提取及AGTR1基因单核苷酸多态性（A1166C）：采集141例入组患者的外周静脉血1ml，采用天根DNA提取试剂盒提取DNA，采用聚合酶链反应（PolymeraseChainReaction，PCR），使用Primer5软件设计AGTR1基因的一个SNPs（A1166C）的PCR扩增引物（见表1），并由Invitrogen有限公司合成。
表1AGTR1（A1166C）的PCR扩增引物序列、
退火温度及扩增片断长度
反应条件：94℃预变性，5min94℃变性45s，55℃退火50s，72℃延伸1min，共进行35个循环，最后72℃延伸10min扩增产物4℃保存。
13数据处理及统计分析：使用MicrosoftExcel电子表格和SPSS170软件进行数据管理和各种基本统计，包括计算等位基因频率、基因型频率、年龄和性别分布，T检验、方差分析、χ2检验、Pearson相关等。治疗有效组与治疗无效组之间性别、年龄分别用卡方检验和t检验。
治疗有效组和治疗无效组的基因型频率和等位基因频率分别进行Hardy-Weinberg（H-W）平衡检验，计算采用Haploview41软件计算SNP基因型及等位基因频率分布是否符合Hardy-Weinberg（H-W）平衡。当χ2<384，即P＞005（df=1）时为符合H-W平衡。
3结果
31卡托普利合并坎地沙坦治疗后患者情况：共141例心力衰竭患者，经过8周的卡托普利合并坎地沙坦治疗后，有效患者102例，年龄621±104，其中男性63例，女性39例；无效患者39例，年龄（589±93），其中男性26例，女性13例。有效组患者和无效组患者基线期的一般资料和临床资料无统计学差异（表2）。表2有效组与无效组临床特征比较
组别性别
注：P>00532基因型频率与等位基因频率分布及HardyWeinberg平衡定律的吻合度检验:141例卡托普利合并坎地沙坦治疗心衰的患者中,AGTR1（A1166C）分布为：AA型104例，AC型32例，CC型5例，符合Hardy-Weinberg平衡定律（P＞005）。有效组患者102例：AA型84例，AC型16例，CC型2例，Hardy-Weinberg平衡检测为χ2=0007,df=1,P=094。无效组患者39例：AA型20例，AC型16例，CC型3例，Hardy-Weinberg平衡检测为χ2=130,df=1,p=025。有效组与无效组患者Hardy-Weinberg平衡检验均P＞005，表明本研究收集到的样本来自大的群体，个体间随机婚配。不存在明显自然选择、迁移等因素对遗传平衡的影响，具有代表性。
33AGTR1基因型与临床特征分布:不同AGTR1基因型频率之间患者的临床特征（年龄、性别、LVEF、LVEDD、LAD）无统计学差异（P＞005）。见表3。
表3各基因型频率患者的临床特征比较
注：P>005
34有效组与无效组AGTR1基因第1166位核苷酸多态性基因型和基因型频率的比较：141例卡托普利合并坎地沙坦治疗心衰的患者中有效组与无效组AGTR1（A1166C）分布无明显差异。基因型频率CC的患者对于卡托普利合并坎地沙坦治疗疗效差，χ2=1429，df=2，P=00008。等位基因中，携带等位基因A的心衰患者对于卡托普利合并坎地沙坦治疗疗效好，χ2=1507，df=1，P=00001，OR=028［95%CI：014-054］。
4讨论
心力衰竭是导致高致死率和高致残率的重要原因。目前为止，心力衰竭的发病率仍然很高，并有一半的患者再确诊后存活期不超过5年［3］。尽管心衰的病程是逐步恶化的过程，但它对不同个体的影响、病情的演变及患者对药理反应受到个人之间的异质性影响［4］。然而，已有研究发现人种之间的差异导致的生存预后不同，提示了遗传因素在心衰起着极为重要的作用。所以越来越多的研究者们聚焦于肾素-血管紧张素系统（RAAS）-在心衰患者中被激活的神经激素。RAAS在心力衰竭病理生理中起着非常重要作用，并且它的慢性刺激通过增加血管收缩，钠和水的潴留，心脏重构和心肌纤维化等作用，对本已经衰竭的心脏继续产生负性影响，加重心衰的进程。
然而国内外关于该基因多态性与心衰治疗的疗效研究报道却很少，尤其是该基因多态性与ACEIS合并坎地沙坦疗效的关系更是鲜有报道。我们的研究通过较大样本量，通过前瞻性队列研究，对于卡托普利合并坎地沙坦治疗的患者治疗随访8周，结果发现，AGTR1基因多态性A1166C突变与心力衰竭患者的临床特征没有相关性，但基因型频率为AA型的心力衰竭患者对于卡托普利合并坎地沙坦治疗疗效好，而携带C等位基因心衰患者合并治疗的疗效差于携带A等位基因心衰患者。
血管紧张素II1（AT1）型受体（AGTR1）基因单核苷酸多态性（A1166C）能影响卡托普利合并坎地沙坦治疗心力衰竭患者的疗效，该位点A突变成C后，卡托普利合并坎地沙坦治疗疗效差。
参考文献
［1］BonnardeauxA，DaviesE．AngiotensisnIItype1receptorgenepolymorphismsinhumanessentialhypertension［J］．Hypertension.1994,24:6369
［2］SandersonJE，YuCM．Influenceofgenepolymorphismsoftherennin-angiotensinsystemonclinicaloutcomeinheartfailureamongthechinese［J］．AmericanHeartJ.1999,137:653
［3］GivertzMM.Underlyingcausesandsurvivalinpatientswithheartfailure.NEnglJMed.2000,342:1120
［4］CohnJN,JohnsonG,ZiescheS,CarsonP,CintronG,ShabetaiR,HaakensonC.Acomparisonofenalaprilwithhydralazine-isosorbidedinitrateinthetreatmentofchroniccongestiveheartfailure.NEnglJMed.1991,325:303