导读:本文包含了无饲养层培养论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:饲养层细胞,多能干细胞,体外培养
无饲养层培养论文文献综述
张世强,李孟心,韩高链,郭丽荣,赵迪鹏[1]（2019）在《不同种类饲养层对体外培养诱导性多能干细胞的影响》一文中研究指出引言诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSC)最早是由Takahashi和Yamanaka将c-Myc、Klf4、OCT4和SOX2这四种多能性转录因子导入成纤维细胞诱导重编程而得到的一种多能干细胞,在人类医学和畜牧业领域具有重要的应用价值~([1])。在体外培养诱导性多能干细胞过程中,饲养层细胞起着不可或缺的作用~([2])。本研究以SNL饲养层细胞培养人iPSC (hiPSC)为对照,探讨绵羊胎儿成纤维细胞(Sheep embryo fibroblast,SEF)饲养层细胞用于体外培养多能干细胞的可行性,为建立一种新的基因修饰的干细胞饲养层细胞系奠定基础。(本文来源于《第叁届中国猪业科技大会暨中国畜牧兽医学会2019年学术年会论文集》期刊2019-09-19）
王亚丹,虎啸,丁雪粉,朱邯豫,赵玉玺[2]（2018）在《饲养层种类及密度对体外培养兔原始生殖细胞的影响》一文中研究指出该研究以14~18天胎兔为试验对象,体外分离培养扩增原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs),观察其形态变化及集落形成过程。用AKP染色(alkaline phosphatase staining)及分子生物学等方法鉴定兔PGCs,结果均为阳性,将兔PGCs分别接种于鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryo fibroblast,MEF)、兔胚胎成纤维细胞(rabbit embryo fibroblast,REF)制成的不同密度饲养层来确定种属跟密度对体外培养兔PGCs的影响。结果显示,兔PGCs接种于用同源胚胎成纤维细胞所制成的密度为6×104的饲养层上所得到的集落个数最多,集落形态最好,分化速度较慢。(本文来源于《中国细胞生物学学报》期刊2018年08期）
虎啸[3]（2018）在《兔原始生殖细胞（PGCs）无血清无饲养层培养的研究》一文中研究指出选择适宜的种子细胞是细胞工程学研究的重要前提,原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs)因其无限增殖和多向分化的能力而备受关注。传统的培养体系常常使用血清和饲养层为胚胎干细跑提供支持,但血清和饲养层含有大量成分复杂的异源蛋白和不利于细胞生长的抑制因子,具有潜在的细胞毒性,同时也给细胞产物的分离和细胞特化等调控机制的研究带来极大困难。本研究选用14-18 d胎龄的胎兔原始生殖细胞为研究对象,建立了一种无血清无饲养层培养兔原始生殖细胞的方法。1.本试验选取日本大耳白兔14-18 d胎龄胎兔无菌剥离生殖嵴,体外分离PGCs,使用KSR代替血清,在培养体系中添加细胞因子LIF制成无血清培养液对兔PGCs培养。采用酶组织化学检测碱性磷酸酶活性、RT-PCR检测转录因子Oct-4的表达等方法对PGCs进行鉴定,探究了细胞传代数与冻存30天后的复苏率之间的关系。结果表明:(1)AKP染色与RT-PCR检测结果均为阳性,说明使用添加了LIF的培养液可成功培养兔PGCs。(2)冻存30天后无血清培养方法的复苏率与常规培养无差别(P>0.05);2.本试验使用无血清培养体系下的兔PGCs,进行条件培养基的过渡培养,之后在添加LIF、b FGF、TGF-β1的无血清无饲养层培养条件下培养,通过RT-PCR检测不同代数和培养天数的PGCs转录因子Oct-4的表达,体外拟胚体的形成实验,冻存30天后的复苏培养探究了无血清无饲养层培养兔PGCs的方法,结果表明:(1)兔原始生殖细胞可通过条件培养基的过渡培养成功进行无血清无饲养层的培养;(2)在无饲养层无血清培养液中添加LIF、b FGF、TGF-β1叁种细胞因子可以使兔原始生殖细胞持续增殖并保持全能性;(3)冻存30天后无血清无饲养层培养的复苏率与常规培养并无差异(P>0.05)。(本文来源于《河南农业大学》期刊2018-06-01）
王欢,方煌,李潇,高书涛,周传坤[4]（2016）在《人诱导性多能干细胞的无饲养层培养及鉴定》一文中研究指出目的探索人诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,i PSCs)的无饲养层培养方法,并对此方法培养的i PSCs进行鉴定。方法将人i PSCs接种于玻璃粘连蛋白(Vitronectin XF)包被的培养皿上培养,采用EDTA消化传代。倒置显微镜下观察i PSCs的生长状态;碱性磷酸酶(ALP)染色鉴定;采用PCR和免疫荧光检测i PSCs多能性基因SSEA-1、Nanog、Sox2的表达情况。结果倒置显微镜下可见i PSCs呈典型的克隆状生长,克隆呈圆形或椭圆形,边界清晰、整齐;ALP染色结果阳性;PCR结果显示人i PSCs强表达多能性基因SSEA-1、Nanog、Sox2;免疫荧光结果显示多能干细胞特异性指标SSEA-1、Nanog、Sox2均呈阳性。结论无饲养层培养体系培养人i PSCs,细胞能稳定增殖,保持自我更新潜能及多能性。(本文来源于《骨科》期刊2016年01期）
刘进,席超[5]（2015）在《饲养层细胞培养》一文中研究指出饲养层细胞在胚胎干细胞培养过程中起重要作用。以原代小鼠成纤维细胞为例,介绍了饲养层细胞的分离培养和制备过程,并就饲养层细胞如何通过分泌LIF(leukemia inhibitory factor,白血病抑制因子)和BMP(bone morphogenetic proteins,骨形成蛋白家族)等细胞因子,维持胚胎干细胞的自我复制和未分化状态的分子机制作出概述。(本文来源于《生物学通报》期刊2015年10期）
王振,张斌,李明国,康印东,王施广[6]（2015）在《大鼠精原干细胞培养饲养层的制备》一文中研究指出目的通过分离和培养BALB/C小鼠胚胎成纤维细胞(MEF),制备用于大鼠精原干细胞(SSCs)培养的饲养层。方法从胎龄为12.5~14.5 d的胎鼠中分离MEF,经不同浓度(5、10、15 mg/L)丝裂霉素C处理不同时间(1.5、3、4.5 h),应用噻唑蓝(MTT)法测定其增殖活性。将大鼠SSCs接种到最佳饲养层上培养,观察细胞生长情况。结果从胎龄为12.5~14.5 d的胎鼠中分离培养的MEF数量多,增殖快。常温下,经0.25%胰酶(含0.04%EDTA)处理2~3 min细胞增殖状况良好。经10 mg/L丝裂霉素C处理3 h MEF增殖不明显,与0 d比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 12.5~14.5 d是分离培养小鼠MEF的最佳胎龄,10 mg/L丝裂霉素C作用3 h对MEF的增殖具有良好的抑制作用,有利于大鼠SSCs的培养。(本文来源于《解放军医药杂志》期刊2015年07期）
赵瑞媛,刘春霞,李慧鹏,王申元,周欢敏[7]（2015）在《饲养层细胞对绵羊胚胎干细胞体外培养的影响》一文中研究指出家畜胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)的研究进展缓慢,绵羊ES细胞的研究虽早有报道,但仍未建立可稳定传代的细胞系。在已建立的绵羊体外受精发育体系的基础上,摸索了饲养层(Feeder)细胞对绵羊ES细胞生长的影响,包括在一定的丝裂霉素浓度下处理Feeder的时间、细胞种类、代数、接种密度及新鲜制备和冷冻复苏后的Feeder细胞,通过试验比较研究,目的在于筛选合适的饲养层细胞,为建立绵羊ES细胞体外培养体系奠定基础。结果表明,10μg/ml丝裂霉素C处理2~2.5h获得的1~5代的SEF和1~3代的MEF及两者的1∶1混合细胞都能较好地支持绵羊ES细胞的生长。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2015年02期）
胡叁强,王妍妍,马永宾,胡嘉波[8]（2014）在《小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养及饲养层制备》一文中研究指出背景:建立一种既可以大量制备,又易于保存并保持较高活性的饲养层细胞是人胚胎干细胞培养研究的重要环节。目的:建立昆明小鼠胚胎成纤维细胞的最佳分离培养方法,评价其用于人胚胎干细胞饲养层研究的可行性。方法:用不同浓度胰蛋白酶分步消化法体外分离和培养昆明小鼠胚胎成纤维细胞,观察其生物学特性,制备胚胎成纤维细胞饲养层,检测人胚胎干细胞在饲养层上培养的生长状态。结果与结论:制备昆明小鼠胚胎成纤维细胞饲养层的最佳胎龄为13.5 d。不同浓度胰蛋白酶分步消化法制备的胚胎成纤维细胞生长状态好,获得的成纤维细胞纯度高,增殖活跃。冻存2周,1,3,6个月内复苏的细胞存活率差异无显着性意义。小鼠胚胎成纤维细胞在第2-4代增殖旺盛,第5代以后细胞增殖活力明显下降。人胚胎干细胞在小鼠胚胎成纤维细胞长期传代后呈典型的未分化形态,碱性磷酸酶和过碘酸-雪夫染色均为阳性。结果表明建立的昆明小鼠胚胎成纤维细胞饲养层分离培养法可为人胚胎干细胞扩增提供稳定、优质的饲养层细胞。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2014年45期）
邢超,孙养鹏,郑育亮,刘文静,张志光[9]（2014）在《C57/BL小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养及饲养层的制备》一文中研究指出目的建立稳定高效的C57/BL,小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)饲养层,用于培养人牙髓来源的诱导多能性干细胞。方法取12.5~14.5dC57/BL孕鼠,分离获得胎鼠原代成纤维细胞,取P3代细胞使用不同质量浓度的丝裂霉素C(5,10,15,20 mg/L)处理不同时间1,1.5,2,2.5,3 h后制备饲养层,MTT法检测细胞增殖情况,探索制备饲养层的最佳条件。结果胎鼠P3代成纤维细胞经质量浓度为15mg/L丝裂霉素C,处理3 h,效果最佳,既能显着抑制MEF增殖,也不会出现MEF的大量死亡,细胞仍保持分泌多种生长因子的能力,在7~10内能够很好的维持诱导多能干细胞的克隆生长。结论:该方法获得的饲养层细胞能很好的支持人牙髓来源的诱导多能性干细胞生长。(本文来源于《中华口腔医学会第四届颞下颌关节病学及（牙合）学专业委员会换届大会暨第十一次全国颞下颌关节病学及（牙合）学学术研讨会论文集》期刊2014-03-04）
陈博,赵云程,林嘉鹏,孙晓岩,陈雪梅[10]（2014）在《无血清无饲养层培养体系在绵羊胚胎干细胞分离中的应用》一文中研究指出目的:本文采用N2B27无血清无饲养层的完全已知成份的培养体系,通过机械分离法分离不同阶段的绵羊囊胚,观察不同阶段囊胚对分离绵羊类胚胎干细胞的影响。方法:本实验采用N2B27无血清无饲养层成份完全已知的培养体系,利用机械分离法对不同阶段的绵羊囊胚进行分离,观察其绵羊类胚胎干细胞的原代集落形成率,以及AKP染色,多潜能性候选基因Oct-4和Sox-2免疫荧光检测。结果:分离早期阶段绵羊囊胚获得的绵羊类胚胎干细胞的形成率显着低于扩张(孵化)阶段囊胚(19.6%(11/56)vs 36.9%(31/84))(P<0.05),同时早期和扩张(孵化)阶段绵羊囊胚的AKP染色和多潜能性候选基因Oct-4、Sox-2的表达呈阳性。结论:N2B27无血清无饲养层培养体系是一种有效分离绵羊类胚胎干细胞的培养基,同时分离绵羊扩张(孵化)阶段的囊胚可以显着的提高原代类胚胎干细胞的建系率,为提高绵羊类胚胎干细胞的建系奠定了基础。(本文来源于《现代生物医学进展》期刊2014年06期）
无饲养层培养论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
该研究以14~18天胎兔为试验对象,体外分离培养扩增原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs),观察其形态变化及集落形成过程。用AKP染色(alkaline phosphatase staining)及分子生物学等方法鉴定兔PGCs,结果均为阳性,将兔PGCs分别接种于鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryo fibroblast,MEF)、兔胚胎成纤维细胞(rabbit embryo fibroblast,REF)制成的不同密度饲养层来确定种属跟密度对体外培养兔PGCs的影响。结果显示,兔PGCs接种于用同源胚胎成纤维细胞所制成的密度为6×104的饲养层上所得到的集落个数最多,集落形态最好,分化速度较慢。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
无饲养层培养论文参考文献
[1].张世强,李孟心,韩高链,郭丽荣,赵迪鹏.不同种类饲养层对体外培养诱导性多能干细胞的影响[C].第叁届中国猪业科技大会暨中国畜牧兽医学会2019年学术年会论文集.2019
[2].王亚丹,虎啸,丁雪粉,朱邯豫,赵玉玺.饲养层种类及密度对体外培养兔原始生殖细胞的影响[J].中国细胞生物学学报.2018
[3].虎啸.兔原始生殖细胞（PGCs）无血清无饲养层培养的研究[D].河南农业大学.2018
[4].王欢,方煌,李潇,高书涛,周传坤.人诱导性多能干细胞的无饲养层培养及鉴定[J].骨科.2016
[5].刘进,席超.饲养层细胞培养[J].生物学通报.2015
[6].王振,张斌,李明国,康印东,王施广.大鼠精原干细胞培养饲养层的制备[J].解放军医药杂志.2015
[7].赵瑞媛,刘春霞,李慧鹏,王申元,周欢敏.饲养层细胞对绵羊胚胎干细胞体外培养的影响[J].中国生物工程杂志.2015
[8].胡叁强,王妍妍,马永宾,胡嘉波.小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养及饲养层制备[J].中国组织工程研究.2014
[9].邢超,孙养鹏,郑育亮,刘文静,张志光.C57/BL小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养及饲养层的制备[C].中华口腔医学会第四届颞下颌关节病学及（牙合）学专业委员会换届大会暨第十一次全国颞下颌关节病学及（牙合）学学术研讨会论文集.2014
[10].陈博,赵云程,林嘉鹏,孙晓岩,陈雪梅.无血清无饲养层培养体系在绵羊胚胎干细胞分离中的应用[J].现代生物医学进展.2014