导读:本文包含了增绿色荧光蛋白论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:鸡痘病毒载体,GFP基因,重组病毒包装
增绿色荧光蛋白论文文献综述
郑阳臣,尹丽娟,刘大才[1]（2019）在《表达绿色荧光蛋白的重组鸡痘病毒的构建》一文中研究指出[目的]旨在构建表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组鸡痘病毒。[方法]使用overlap PCR进行表达载体质粒的构建,使用菌液PCR和测序技术进行了鉴定;使用鸡胚成纤维细胞作为重组鸡痘病毒同源重组的介质,尝试了可能影响重组鸡痘病毒构建的不同条件;最后使用PCR和Western Blot方法对重组病毒进行了鉴定。[结果]将人工合成的痘苗病毒早晚期启动子SP与绿色荧光蛋白基因一同插入到鸡痘病毒载体质粒的多克隆位点,挑取LA平板上的重组子,菌液PCR及测序验证鉴定结果为阳性;利用重组质粒转染被野生鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞制备重组病毒,利用倒置荧光显微镜观察到含有重组病毒的在激发光下呈绿色的细胞;改进重组质粒转染的条件以达到更好的重组病毒包装成效,研究得出被野生痘病毒感染的细胞进行重组质粒传染制备重组病毒的效率是用野生痘病毒感染已转染重组质粒的细胞的6倍,且感染用野生病毒滴度高时重组病毒的制备效果更好;最后,用PCR方法和Western Blot方法对重组病毒进行鉴定,鉴定结果为阳性。[结论]成功构建了表达GFP的重组鸡痘病毒。(本文来源于《生物技术》期刊2019年05期）
张瑶瑶,吴国民,张潇毅,王琳,肖艳菊[2]（2019）在《慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白基因标记大鼠脂肪干细胞及体内示踪研究》一文中研究指出目的探讨慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)标记大鼠脂肪干细胞(ADSCs)最适感染复数,检测EGFP-ADSCs干细胞特性及体内活性。方法提取培养大鼠脂肪干细胞,流式细胞仪表型鉴定及成骨、成脂、成软骨多向诱导分化。采用携带增强型绿色荧光蛋白基因的慢病毒载体(Lentivirus-EGFP)以不同的感染复数MOI=0、1、5、10、25、50转染ADSCs,流式细胞仪测转染率,筛选合适MOI。CCK8测转染后ADSCs的增殖能力。EGFP-ADSCs成骨、成脂、成软骨诱导后分别行碱性磷酸酶、油红O及阿尔新蓝染色检测。将标记后的细胞注射到大鼠皮下,术后1,2,4w取材行冰冻切片荧光观察及免疫组织化学染色,观察EGFP-ADSCs在体内的表达情况。结果 CD90阳性表达,CD34阴性表达,脂肪干细胞向成骨、成脂、成软骨分化。MOI=0、1、5、10、25、50的转染率分别是0.12%、3.62%、42.4%、66.6%、90.4%、98.0%。CCK8法测转染组(MOI=25)与未转染组(MOI=0)细胞增殖能力无明显差别。EGFP-ADSCs经诱导后仍向成骨、成脂、成软骨分化。1w,2w,4w见细胞于移植部位。结论慢病毒介导的EGFP基因标记大鼠脂肪干细胞最适感染复数为25,且不影响干细胞活性及多向分化潜能,可以成为标记脂肪干细胞的理想方法。(本文来源于《现代口腔医学杂志》期刊2019年05期）
李伟伟,衣启君,赵国光[3]（2019）在《高压氧促进了绿色荧光蛋白标记神经干细胞在局灶性脑缺血大鼠脑组织中迁移》一文中研究指出目的探讨高压氧(HBO)对绿色荧光蛋白(GFP)标记神经干细胞(NSCs)在局灶性脑缺血大鼠脑组织迁移的影响。方法清洁级雄性SD大鼠39只,体重250～300 g,随机分为3组(n=13):神经干细胞移植组(NSCs组)、高压氧+神经干细胞移植组(HBO+NSCs组)、常压氧+神经干细胞移植组(Cyy+NSCs组)。各组按改进的Longa法制作大脑中动脉阻塞模型,各组均缺血1.5 h后再灌注。再灌注24 h后,各组经侧脑室注射GFP标记的NSCs悬液(浓度1×10~6/μL)。侧脑室注射后2 h,HBO+NSCs组开始每天1 h的高压氧(HBO)治疗,Cyy+NSCs组则常压下吸95%的氧气,NSCs组仅吸空气,各组治疗连续7天。第9天,处死大鼠。收集海马标本,检测各组大鼠海马caspase-3及脑源性神经营养因子(BDNF)与血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达量,并行脑组织冰冻切片,荧光显微镜下观察细胞的迁移情况。结果与NSCs组相比,HBO+NSCs组和Cyy+NSCs组海马caspase-3含量减少(P<0.05),但与Cyy+NSCs组相比,HBO+NSCs组海马caspase-3含量明显降低(P<0.05)。与NSCs组相比,HBO+NSCs组和Cyy+NSCs组海马BDNF和VEGF的表达量升高,但与HBO+NSCs组相比,Cyy+NSCs组海马BDNF和VEGF的表达量明显降低(P<0.05)。与NSCs组相比,HBO+NSCs组和Cyy+NSCs组缺血区GFP-阳性细胞数升高;但与HBO+NSCs组相比,Cyy+NSCs组缺血区GFP-阳性细胞数明显下降(P<0.05)。结论 HBO可以更好的促进GFP-标记的NSCs在MCAO模型大鼠脑组织内的迁移,其促迁移机制可能与HBO可以促进BDNF和VEGF的分泌、抑制新生细胞的凋亡有关。(本文来源于《泰山医学院学报》期刊2019年09期）
熊建英,陈阳阳,赵卫[4]（2019）在《表达绿色荧光蛋白的登革病毒感染性克隆的构建》一文中研究指出目的建立带有绿色荧光蛋白基因的登革病毒感染性克隆株,利用绿色荧光的示踪作用,为进一步开展登革病毒动物模型、细胞毒性以及致病机理研究奠定基础。方法通过重迭延伸PCR技术将登革病毒全长序列中插入位点上游片段、绿色荧光蛋白基因片段、下游片段连接成一个片段,并插入目的质粒中,利用菌落PCR筛选阳性克隆,并通过双酶切和测序鉴定。结果利用重迭延伸PCR技术成功将插入位点上游片段、绿色荧光蛋白基因片段、下游片段连接成一个片段,并连接登革病毒全长基因克隆载体,双酶切和基因测序结果确定已将绿色荧光蛋白基因EGFP插入登革病毒质粒TB62中。结论成功获得了带有绿色荧光蛋白EGFP基因的登革病毒感染性克隆。(本文来源于《新发与再发传染病研究论坛论文集》期刊2019-09-24）
雍婕,杨辉,肖红仕,田云,周海燕[5]（2019）在《绿色荧光蛋白在枯草芽孢杆菌WB600中的表达》一文中研究指出根据绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的特性,将GFP作为目的基因,与穿梭载体p HY300PLK结合,构建一个芽孢杆菌WB600的蛋白表达体系,为在枯草芽孢杆菌中表达其他蛋白提供了一定的技术和理论支持。本文结合p HY300PLK的克隆位点,设计gfp基因的引物,PCR扩增后回收的gfp基因片段进行双酶切,与相同双酶切的pHY300PLK连接获得pHY300PLK-GFP,通过电转化将pHY300PLK-GFP转化至芽孢杆菌WB600中并检测。获得转化子WB1,检测到转化子在荧光显微镜下显示绿色荧光,且后续测序检测表明重组质粒构建成功。(本文来源于《生物产业技术》期刊2019年05期）
朱慧,朱文侠,黄广智,马小娜[6]（2019）在《携载增强型绿色荧光蛋白基因慢病毒标记小鼠脐带间充质干细胞示踪方法》一文中研究指出目的探讨慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorecent protein,eGFP)转染小鼠脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UCMSCs)的最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)。方法通过组织贴壁法得到mUCMSCs;用生长增殖曲线、成骨、成软骨及成脂分化进行鉴定;以MOI为50、100、150、200携载eGFP的慢病毒载体介导转染mUCMSC,倒置显微镜下观察荧光表达,确定荧光表达率最高的MOI组。结果 eGFP慢病毒以MOI=150转染mUCMSC,效率较高,可直接用于体内示踪。结论用小鼠脐带可以分离出mUCMSCs,MOI=150时携载eGFP的慢病毒传染mUCMSCs效果最好。(本文来源于《延安大学学报(医学科学版)》期刊2019年03期）
陈彩玲,毛丙永,崔树茂,赵建新[7]（2019）在《绿色荧光蛋白标记植物乳杆菌及其生物学特性分析》一文中研究指出为探究绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记对植物乳杆菌生物学特性的影响,采用GFP对4株植物乳杆菌进行标记,并比较标记前后菌株的生物学特性。结果显示,标记前后菌株生长情况基本相同,其中P2和P4被GFP标记后生长略有滞后;标记前后的菌株对胃酸和胆盐的耐受趋势基本一致,无显着差别;在-80℃冻存2周内,标记前后所有菌株的活菌数无显着变化;对低聚果糖利用能力无变化;标记后所有菌株对氯霉素有抗性,标记前菌株对氯霉素敏感,对其他13种抗生素的敏感性无变化。说明GFP标记不影响植物乳杆菌的生物学特性,为可视化研究植物乳杆菌在小鼠肠道内的定植和分布提供了理论依据。(本文来源于《食品与发酵工业》期刊2019年20期）
马玲玲,马臣杰,史客松,曾瑾[8]（2019）在《绿色荧光蛋白示踪产气荚膜梭菌Beta1毒素重组表达菌株的构建》一文中研究指出采用PCR技术分别扩增出增强型绿色荧光蛋白基因(egfp)以及产气荚膜梭菌Beta1毒素基因(cpb1),并将egfp融合至cpb1基因的3'端,构建CPB1-EGFP重组质粒。为保证绿色荧光蛋白以及Betal毒素两个蛋白各自的功能,两者之间以柔性蛋白linker (Gly4Ser1)相连。结果表明,携带CPB1-EGFP重组载体的BL21(DE3)大肠杆菌具有绿色荧光,同时SDS-PAGE显示CPB1-EGFP蛋白是以可溶性蛋白形式存在的,分子量约为63KD,与理论值大小一致。本实验为利用绿色荧光蛋白示踪技术对Beta1毒素的组织嗜性以及亚细胞定位研究提供实验材料,为深入理解Beta1毒素对动物细胞以及机体的毒性机理奠定研究基础。(本文来源于《第十四届生物毒素毒理学术大会暨第一届生物毒素——从生存适应到转化医学专题学术会议会刊》期刊2019-08-16）
孙洪宝,吕桂云,许勇,郭绍贵,张海英[9]（2019）在《绿色荧光蛋白（GFP）标记的尖孢镰刀菌在西瓜抗、感寄主根系中侵染和定殖》一文中研究指出目的与意义:西瓜枯萎病是由半知菌亚门镰孢属尖孢镰刀菌寄生引起的一种真菌土传病害,是世界范围内导致西瓜产量和品质降低的最严重病害。明确枯萎病菌与寄主植物之间的互作机制,揭示其相互作用的分子机制,可为西瓜抗枯萎病育种和病害防治奠定理论基础。利用绿色荧光蛋白(GFP)作为标记,研究枯萎病菌在西瓜抗、感寄主根系(本文来源于《中国瓜菜》期刊2019年08期）
黄彩云,赵志荀,朱学亮,王战红,吴香草[10]（2019）在《表达绿色荧光蛋白的MVA重组毒株的构建及筛选》一文中研究指出为了构建及筛选表达绿色荧光蛋白(GFP)的改良型痘苗病毒安卡拉(MVA)重组毒株,并对其进行鉴定,本研究基于同源重组原理设计引物,通过PCR扩增获取含有MVA两侧同源臂的外源基因GFP片段,将GFP基因片段转染到感染了MVA的CEF细胞中使之同源重组到MVA ORF086-087位点(基因组中70303-70304 bp之间),利用倒置荧光显微镜观察并标记表达GFP的单个噬斑,筛选获取重组毒株,应用倒置荧光技术、PCR及Western blotting对该重组毒株进行鉴定。结果显示,经过3轮噬斑筛选,在倒置荧光显微镜下可观察到大量表达GFP的单个噬斑,PCR扩增检测结果表明目的基因已成功整合到重组毒株MVA-GFP中。Western blotting结果表明,GFP在感染的细胞内成功表达。本研究利用基因工程技术成功获得表达GFP的重组毒株MVA-GFP,可为进一步将其他抗原基因插入GFP位点中筛选无标记的重组毒株及疫苗研究提供材料。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2019年07期）
增绿色荧光蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)标记大鼠脂肪干细胞(ADSCs)最适感染复数,检测EGFP-ADSCs干细胞特性及体内活性。方法提取培养大鼠脂肪干细胞,流式细胞仪表型鉴定及成骨、成脂、成软骨多向诱导分化。采用携带增强型绿色荧光蛋白基因的慢病毒载体(Lentivirus-EGFP)以不同的感染复数MOI=0、1、5、10、25、50转染ADSCs,流式细胞仪测转染率,筛选合适MOI。CCK8测转染后ADSCs的增殖能力。EGFP-ADSCs成骨、成脂、成软骨诱导后分别行碱性磷酸酶、油红O及阿尔新蓝染色检测。将标记后的细胞注射到大鼠皮下,术后1,2,4w取材行冰冻切片荧光观察及免疫组织化学染色,观察EGFP-ADSCs在体内的表达情况。结果 CD90阳性表达,CD34阴性表达,脂肪干细胞向成骨、成脂、成软骨分化。MOI=0、1、5、10、25、50的转染率分别是0.12%、3.62%、42.4%、66.6%、90.4%、98.0%。CCK8法测转染组(MOI=25)与未转染组(MOI=0)细胞增殖能力无明显差别。EGFP-ADSCs经诱导后仍向成骨、成脂、成软骨分化。1w,2w,4w见细胞于移植部位。结论慢病毒介导的EGFP基因标记大鼠脂肪干细胞最适感染复数为25,且不影响干细胞活性及多向分化潜能,可以成为标记脂肪干细胞的理想方法。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
增绿色荧光蛋白论文参考文献
[1].郑阳臣,尹丽娟,刘大才.表达绿色荧光蛋白的重组鸡痘病毒的构建[J].生物技术.2019
[2].张瑶瑶,吴国民,张潇毅,王琳,肖艳菊.慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白基因标记大鼠脂肪干细胞及体内示踪研究[J].现代口腔医学杂志.2019
[3].李伟伟,衣启君,赵国光.高压氧促进了绿色荧光蛋白标记神经干细胞在局灶性脑缺血大鼠脑组织中迁移[J].泰山医学院学报.2019
[4].熊建英,陈阳阳,赵卫.表达绿色荧光蛋白的登革病毒感染性克隆的构建[C].新发与再发传染病研究论坛论文集.2019
[5].雍婕,杨辉,肖红仕,田云,周海燕.绿色荧光蛋白在枯草芽孢杆菌WB600中的表达[J].生物产业技术.2019
[6].朱慧,朱文侠,黄广智,马小娜.携载增强型绿色荧光蛋白基因慢病毒标记小鼠脐带间充质干细胞示踪方法[J].延安大学学报(医学科学版).2019
[7].陈彩玲,毛丙永,崔树茂,赵建新.绿色荧光蛋白标记植物乳杆菌及其生物学特性分析[J].食品与发酵工业.2019
[8].马玲玲,马臣杰,史客松,曾瑾.绿色荧光蛋白示踪产气荚膜梭菌Beta1毒素重组表达菌株的构建[C].第十四届生物毒素毒理学术大会暨第一届生物毒素——从生存适应到转化医学专题学术会议会刊.2019
[9].孙洪宝,吕桂云,许勇,郭绍贵,张海英.绿色荧光蛋白（GFP）标记的尖孢镰刀菌在西瓜抗、感寄主根系中侵染和定殖[J].中国瓜菜.2019
[10].黄彩云,赵志荀,朱学亮,王战红,吴香草.表达绿色荧光蛋白的MVA重组毒株的构建及筛选[J].中国畜牧兽医.2019