导读:本文包含了双杂交实验论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:血管生成素样蛋白5,酵母双杂交,相互作用,SNAPIN
双杂交实验论文文献综述
陈寒蓓,李晓永,苏青[1]（2011）在《酵母双杂交筛选与ANGPTL5相互作用的蛋白实验研究》一文中研究指出目的采用Clontech公司酵母双杂交系统,筛选与血管生成素样蛋白5(ANGPTL5)相互作用的蛋白。方法将ANGPTL5基因克隆到诱饵载体pGBKT7,在证实ANGPTL5蛋白不具有自激活作用的前提下,在人HeLa细胞cDNA文库中,以酵母双杂交系统筛选与ANGPTL5相互作用的蛋白,并进行相互作用的验证。结果成功构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-ANGPTL5,筛选出2种蛋白与ANGPTL5相互作用,即SNARE相关蛋白(SNAPIN)和ZW10相互作用蛋白(ZWINT)。结论运用酵母双杂交技术,从人Hela细胞cDNA文库中成功获得2个与ANGpL5相互作用的蛋白质,为研究ANGPTL5的功能提供了新的线索。(本文来源于《同济大学学报(医学版)》期刊2011年06期）
罗阳,高维寅,张波,陈鸣,蒋天伦[2]（2011）在《量子点荧光双杂交技术检测铜绿假单胞菌的实验研究》一文中研究指出目的建立量子点荧光双杂交核酸检测平台,并实现铜绿假单胞菌(PAE)的快速、准确检测。方法采用巯基法固定铜绿假单胞菌的16S rDNA探针于石英晶体金膜上,加入检测样本进行首次杂交,清洗后加入量子点标记的第二探针进行第2次杂交,最终通过荧光强度以判断PAE是否存在。结果该量子点双杂交检测平台具有良好的性噪比,其荧光强度与扩增产物的稀释倍数成线性负相关,当PAE扩增产物的稀释倍数在<10 000倍时具有良好的线性曲线;特异性实验表明,该方法可以将PAE与同源的多种细菌相区分,证明了其高度特异性,方法学比较实验证明,双探针杂交方法的灵敏度和特异性均>90.0%,已能初步满足临床检测需要。结论该量子点荧光双杂交核酸检测平台,可有效将PAE与同源的多种细菌相区分,为临床微生物的快速检测提供了一种新的技术方案。(本文来源于《中华医院感染学杂志》期刊2011年10期）
方玉楷,许丽艳,麦瑞琴,韩溟,牛永东[3]（2005）在《酵母双杂交技术的影响因素及其实验策略》一文中研究指出目的 为了研究蛋白质分子间的相互作用 ,以大T抗原和P5 3为阳性对照 ,建立酵母双杂交实验系统。方法 通过比较共转化、顺序转化和交配实验叁种方法的优劣 ,分析了影响酵母转化效率的因素 ,与此同时还分析了酵母体内 β 半乳糖苷酶的活性。 结果 ①顺序转化比共转化转化效率高 ;②质粒纯度是影响酵母转化效率的一个主要因素 ,与经典碱裂解法提取质粒相比 ,试剂盒提取质粒的转化效率明显高 ;③PEG浓度对转化效率也有一定影响 ;④β 半乳糖苷酶定量分析能够区分蛋白质分子间的强相互作用与弱相互作用 ,实验结果更可靠。结论 在此基础上 ,我们提出了一种共转化与交配实验有机结合的有效的酵母双杂交新实验策略 ,并将之成功运用于筛选NGAL(neutrophilgelatinaseassociatedlipocalin ,NGAL)相互作用蛋白实验。(本文来源于《中国实验诊断学》期刊2005年01期）
高诗娟,田瑞,宋婀莉,高友鹤[4]（2005）在《酵母双杂交常用菌株AH109半乳糖苷酶检测实验呈阳性》一文中研究指出α 及 β galactosidase(半乳糖苷酶 )是酵母双杂交实验中用来确定阳性相互作用的重要筛选标记 .理论上来说 ,只有同时携带有BD及AD载体 ,且BD载体上的诱饵蛋白 (Bait)与AD载体上的靶蛋白有相互作用时 ,才能激活酵母报告基因表达半(本文来源于《中国生物化学与分子生物学报》期刊2005年01期）
肖自安,谢鼎华,房海燕,黄亮群,施小六[5]（2004）在《酵母双杂交技术分析耳聋基因功能的实验研究》一文中研究指出目的 在耳聋基因功能的蛋白质相互作用研究领域建立酵母双杂交实验技术 ,探讨第叁代酵母双杂交系统在该领域的应用价值。方法 利用第叁代MATCHMAKERGAL4酵母双杂交系统 ,以最常见的耳聋基因GJB2(Cx2 6 )为诱饵 ,以人胎脑cDNA文库为猎物 ,钓取Cx2 6的相互作用蛋白质的阳性克隆 ,DNA测序阳性克隆并行生物信息学分析。结果 从胎脑文库筛选到Cx2 6互作蛋白的 5 6个阳性克隆 ,对其中 2 6个克隆分析认定为 11个独立克隆 ,DNA测序发现 3个克隆是已克隆基因 ,8个克隆是新基因序列。结论 第叁代MATCHMAKERGAL4酵母双杂交系统是筛选Cx2 6相互作用蛋白质的一个可靠的实验手段 ,酵母双杂交技术可用于耳聋基因的蛋白质功能研究领域(本文来源于《听力学及言语疾病杂志》期刊2004年04期）
魏恩会[6]（2002）在《银杏内酯B和前胡丙素对动脉粥样硬化的防护机制及酵母双杂交实验体系筛选清道夫受体胞浆域结合蛋白》一文中研究指出动脉粥样硬化(As)是一个慢性病理过程，最近研究表明它的发展阶段始自胎儿期，一直延续到生命的终结，在这长达几十年的漫长发展过程中，多种因素参与了As的发生。正因如此，对于As的防治就需要常年、针对众多发病环节进行预防，寻找毒副作用少、价格便宜以及作用相对广泛的药物也就显得尤为重要。已知血小板活化因子(PAF)和细胞内游离钙离子水平与As的发生关系密切，而PAF受体拮抗剂银杏内酯B(GB)和钙离子内流阻断剂前胡丙素(pra-C)的原材料银杏叶与白花前胡的来源丰富，为了探索二者对As防治的药用价值，研究了GB和pra-C对牛主动脉平滑肌细胞(SMC)增殖和泡沫细胞形成的影响，并探讨了可能机制。 以~3H-胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)掺入试验确定细胞的增殖程度，应用流式细胞术测定细胞周期，用MTT法和LDH活性测定观察药物对细胞代谢的影响。结果可见,GB、银杏内酯A和B的混合物(GA:GB)在10~(-9)mol·L~(-1)～10~(-5)浓度下，可呈浓度依赖性地抑制血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的SMC增殖，其中GB和GA:GB对细胞DNA合成量的最大抑制率分别为54.6％和69.4％，相同浓度条件下，二者作用没有明显差别，10~(-7)mol·L~(-1)的GB和GA:GB可分别将AngⅡ诱导增殖的SMC的细胞增殖指数由45.0％降至40.5 南京医科大学博士学位论文％和41．9％。GB和GA：GB尚可呈浓度依赖性地抑制血清单独诱导的SMC’H1dR的掺入量，降低处于有丝分裂期侣期）细胞的比例，明显抑制细胞线粒体中琉拍酸脱氢酶活性，但细胞培养上清中的乳酸脱氢酶活性则不受影响。提示，GB可以有效地抑制动脉壁SMC的增殖，其机制主要与阻止细胞进入有丝分裂期p期）有关，而与细胞毒性无关，GB的作用除了桔抗PAF受体活性外尚可能有其他机制发挥作用。Pra－l二对血清以及血清和Aug 11共同诱导的SMC增殖均呈剂量依赖性地抑札其中，对SMC’H1dR掺入量的抑制最大抑制率分别为的刁％和59刀％，同时，pr个C可明显减少两种诱导 SMC增殖模型中 S期细胞所占的比例，但不改变细胞培养上清中的LDH活力，提示通过阻止钙离子的内流，pra－C能够阻止细胞进入S期从而抑制SMC的增殖。作为阳性对照，观察了血管紧张素转换酶抑制剂体CEI）enalaprilatona购作用，结果可见ha对 Aug 11诱导 SMC增殖的抑制作用强于 GB和Wa（，其最大抑制率为 74．9％，但是，应用 Ena后，SMC培养上清中 LDH活力有升高的趋势，提示尽管GB和pra（对抗血管SMC增殖的能力不如 Ena，但是，就安全性而言，GB和 pra（可能更有应用前景。 用 50 u g·ml”‘重度修饰氧化性下密度脂蛋白（。x－LDL）与小鼠腹腔巨噬细胞共孵育48小时后，细胞内总胆固醇厂q含量即增加一倍，表明泡沫细胞模型可靠。10”儿10”’mol·L”的 GB可呈浓度依赖性地抑制细胞内TC和胆固醇酯KE）含量的增多，而对CE占TC的比值基本没有影响，提示GB可阻止细胞内胆固醇的积聚，延缓泡沫细胞的形成，但对乙酞辅酶A胆固醇酞基转移酶（ACAT的活性无影响。 2 南京医科大学博士学位论文 GB可呈剂量依赖性地抑制 MPM对重度、中度和轻度修饰的‘HslOX工DL的摄取。利用非特异吞噬抑制剂细胞松弛素Dkyt小chalasin D）处理细胞，可见MPM对叁种不同程度修饰 ox工DL的摄取能力均明显降低，6 GB的应用则导致 MPM对 OX工DL的摄取量更低，提示 GB的作用可能是通过阻止细胞的受体途径。抗 CD3 6和抗CD68的抗体不能阻止MPM摄取重度OX工DL的能力，表明其不参与重度狐士DL的识别。30倍于”勺0DLDL量的多聚次黄噪吟OOly I）—一种SR－A特异性＠己基，只能部分阻断OX工DL的摄取，提示除了 SR－A以外，尚可能有其他类型的膜受体参与重度OX工DL的清除。与 MPM摄取重度 OX丁DL的特性不同，MPM摄取中度和轻度修饰‘乃IOX士DL的能力均可被p＊y、抗CD36或抗＊＊68的抗体抑札提示中度和轻度修饰的狐工＊L不仅可被＊＊A识别，亦可经＊＊36和＊＊68进入胞 内。＊B不能改变抗＊＊36抗体和抗CD68抗体抑制MPM摄取中度和轻度OX工DL的能力，提示 GB的作用靶点可能在 CD36和 CD68；然而 GB对 polyl抑制NpM摄取重度、中度修饰 OX工DL能力的促进作用，提示 GB的作用靶点尚可能有其他膜蛋白。为进一步GB的作用是否与SRA有关，利用 RT－PCR法观察了 GB对 SR－A IRNA水平的影响，结果见 GB可有效降低 SR－A的表达水平，提示 GB亦可通过阻止职－A的摄取而发挥作用。 Pra（也能有效地抑制毗工DL的摄取，不仅可以降低细胞内胆固醇和胆固醇酯的积聚，而且能降低 MPM对重度修饰“SI似－LDL的总摄取量，但对其降解能力无影响对轻度和中度修饰’‘’1．ox工DL的清除也无作用，提示pra（不能作用于非特异吞噬及 3(本文来源于《南京医科大学》期刊2002-02-01）
双杂交实验论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的建立量子点荧光双杂交核酸检测平台,并实现铜绿假单胞菌(PAE)的快速、准确检测。方法采用巯基法固定铜绿假单胞菌的16S rDNA探针于石英晶体金膜上,加入检测样本进行首次杂交,清洗后加入量子点标记的第二探针进行第2次杂交,最终通过荧光强度以判断PAE是否存在。结果该量子点双杂交检测平台具有良好的性噪比,其荧光强度与扩增产物的稀释倍数成线性负相关,当PAE扩增产物的稀释倍数在<10 000倍时具有良好的线性曲线;特异性实验表明,该方法可以将PAE与同源的多种细菌相区分,证明了其高度特异性,方法学比较实验证明,双探针杂交方法的灵敏度和特异性均>90.0%,已能初步满足临床检测需要。结论该量子点荧光双杂交核酸检测平台,可有效将PAE与同源的多种细菌相区分,为临床微生物的快速检测提供了一种新的技术方案。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
双杂交实验论文参考文献
[1].陈寒蓓,李晓永,苏青.酵母双杂交筛选与ANGPTL5相互作用的蛋白实验研究[J].同济大学学报(医学版).2011
[2].罗阳,高维寅,张波,陈鸣,蒋天伦.量子点荧光双杂交技术检测铜绿假单胞菌的实验研究[J].中华医院感染学杂志.2011
[3].方玉楷,许丽艳,麦瑞琴,韩溟,牛永东.酵母双杂交技术的影响因素及其实验策略[J].中国实验诊断学.2005
[4].高诗娟,田瑞,宋婀莉,高友鹤.酵母双杂交常用菌株AH109半乳糖苷酶检测实验呈阳性[J].中国生物化学与分子生物学报.2005
[5].肖自安,谢鼎华,房海燕,黄亮群,施小六.酵母双杂交技术分析耳聋基因功能的实验研究[J].听力学及言语疾病杂志.2004
[6].魏恩会.银杏内酯B和前胡丙素对动脉粥样硬化的防护机制及酵母双杂交实验体系筛选清道夫受体胞浆域结合蛋白[D].南京医科大学.2002