导读:本文包含了稳定高表达论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:肝细胞癌,缝隙连接蛋白32,慢病毒,载体构建
稳定高表达论文文献综述
纪玉婷,杨燕,郑荣生,张吴琼,刘静[1]（2018）在《慢病毒介导稳定高表达Cx32的Huh7细胞系建立及其对细胞增殖的影响》一文中研究指出目的构建LV5-h Cx32慢病毒表达载体,获得稳定高表达人缝隙连接蛋白32(connexin32,Cx32)的Huh7人肝癌细胞系,并研究Cx32对Huh7细胞增殖的影响。方法采用全基因合成法并经PCR扩增得到Cx32基因序列,将所得目的片段克隆到LV5-GFP载体上,获得重组慢病毒质粒LV5-GFP-h Cx32,经酶切鉴定及DNA测序鉴定后,与慢病毒包装质粒系统共转染293T细胞中,包装成重组慢病毒颗粒,经荧光显微镜测定重组慢病毒滴度。将慢病毒载体LV5-h Cx32和LV5-NC感染Huh7细胞,嘌呤霉素筛选出细胞阳性克隆并扩大培养。qRT-PCR、Western blot和免疫荧光法分析Cx32的表达及定位;细胞接种荧光示踪法检测细胞缝隙连接(gap junction,GJ)功能;MTT法及克隆形成实验观察细胞增殖能力的变化。结果双酶切及测序结果表明LV5-GFPh Cx32慢病毒载体构建成功,经293T细胞包装后,成功获得病毒滴度为3×10~(11)TU·L~(-1)的重组慢病毒LV5-GFP-h Cx32,慢病毒瞬时感染后的Huh7细胞中Cx32 mRNA和蛋白表达水平明显增多,筛选后建立的稳定转染细胞系中Cx32也稳定高表达,并且部分表达于细胞膜,形成有功能性的GJ。过表达Cx32的Huh7细胞增殖能力减弱(P<0.05)。结论成功构建Cx32基因过表达慢病毒载体,该载体能够稳定感染Huh7细胞,使外源基因Cx32过表达并抑制细胞的增殖能力。(本文来源于《中国药理学通报》期刊2018年02期）
许淑文,李艳,李继强,戴雯[2]（2017）在《稳定高表达TGF-β_1的大鼠心肌细胞H9c2细胞株的构建及鉴定》一文中研究指出目的构建及鉴定稳定高表达TGF-β1的大鼠心肌细胞H9c2细胞株。方法利用RNA干扰技术提取p EGFP-TGF-β1质粒后采用ABI3130基因测序仪进行测序鉴定,将鉴定后的质粒转染到大鼠心肌细胞H9c2细胞株,利用G418筛选转染的H9c2细胞,通过RT-PCR和Western blot技术对转染后的H9c2细胞进行鉴定,本实验将转染了p EGFP-TGF-β1质粒和p EGFP对照质粒的细胞株分为p EGFP-TGF-β1质粒组和p EGFP对照质粒组。结果 p EGFP-TGF-β1质粒测序结果包含TGF-β1序列,筛选后的p EGFP-TGF-β1质粒组和p EGFP对照质粒组细胞转染效率分别为85%和93%。RT-PCR结果显示,p EGFP-TGF-β1质粒转染组的TGF-β1m RNA相对表达量为(2.563±0.198),与对照组(1.037±0.022)比较差异具有统计学意义(t=3.056,P=0.028);Western blot结果显示,p EGFPTGF-β1质粒转染组的TGF-β1蛋白相对表达量为(3.275±0.234),显着高于对照组的(1.011±0.015),差异具有统计学意义(t=4.372,P=0.015)。结论本研究所构建的大鼠心肌细胞H9c2细胞株能稳定高表达TGF-β1,可用于后续TGF-β1在大鼠心肌细胞的生物学作用及相关信号通路的研究。(本文来源于《海南医学》期刊2017年11期）
殷小凤,李月,李欣,李海侠,裘宇容[3]（2017）在《慢病毒载体介导的miR-126稳定高表达促进胃癌AGS细胞的迁移和侵袭》一文中研究指出目的:构建稳定高表达miR-126的胃癌AGS重组细胞系,并研究miR-126在体外对该胃癌细胞系增殖、转移能力的影响。方法:构建慢病毒Lv-has-miR-126感染AGS细胞系,经qRT-PCR检测miR-126表达差异,确认miR-126稳定高表达重组细胞系构建成功后,应用CCK-8和平板克隆形成实验检测细胞体外增殖能力变化;Transwell迁移及侵袭实验检测细胞在体外的迁移、侵袭能力。结果:重组细胞系构建成功,绿色荧光表达良好,qRT-PCR证实重组细胞miR-126的表达水平较对照细胞显着增高(P<0.05)。CCK-8增殖及克隆形成实验显示上调miR-126后胃癌细胞生长及克隆形成数无明显差异;而在迁移及侵袭实验中miR-126高表达组细胞迁移及侵袭能力显着高于对照组(P<0.05)。结论:成功构建了稳定高表达miR-126的AGS重组细胞系,初步证实了miR-126具有促进胃癌AGS细胞迁移与侵袭的作用,提示miR-126可能与胃癌的转移密切相关。(本文来源于《实用医学杂志》期刊2017年05期）
李琪,李华涛,丛霞,姜忠玲,曹荣峰[4]（2016）在《稳定转染高表达HSP72蛋白的奶牛乳腺上皮细胞系的建立》一文中研究指出为了建立稳定表达HSP72蛋白的奶牛乳腺上皮细胞系,本试验应用PCR法扩增HSP72基因,插入真核表达质粒EGFP-N2中构建EGFP-N2-HSP72重组质粒。以脂质体介导的方法将其转染于奶牛乳腺上皮细胞,经G418筛选后获得稳定表达HSP72蛋白的奶牛乳腺上皮细胞,并且转染的HSP72基因序列正确。阴性对照组EGFP-N2的奶牛乳腺上皮细胞在荧光显微镜下呈绿色荧光,且重组质粒组极显着(P<0.01)表达HSP72蛋白。表明成功构建了EGFP-N2-HSP72真核表达载体,并建立了高表达HSP72蛋白的奶牛乳腺上皮细胞系。(本文来源于《中国兽医杂志》期刊2016年07期）
万鹏飞,黄亚琴,王志,王欢欢,石家仲[5]（2016）在《稳定高表达miR-449c的5637膀胱癌细胞株的建立》一文中研究指出目的构建稳定表达miR-449c的人膀胱癌细胞株。方法以HEK293细胞基因组DNA作为模板,采用高保真酶进行扩增得到pre-miR-449c序列,将所得目的片段克隆到Ftet UGW-T载体上;经测序鉴定后,感染5637人膀胱癌细胞;经嘌呤霉素筛选后,利用倒置荧光显微镜观察筛选后的细胞增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达强度,采用荧光实时定量PCR检测miR-449c的表达,Western blot法检测其下游靶基因C-myc蛋白的水平。结果成功构建了Ftet UGW-T/miR-449c慢病毒载体,慢病毒包装后感染5637人膀胱癌细胞成功表达EGFP,感染后的细胞中高表达miR-449c,在稳定表达的膀胱癌细胞中C-myc蛋白表达较对照组显着降低。结论成功构建了稳定高表达miR-449c的5637膀胱癌细胞株。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2016年06期）
叶迎春,年四季,王栩,吴桐,徐文峰[6]（2016）在《全人源抗IL-33scFv-IgG1Fc融合蛋白在CHO k1细胞中稳定高表达》一文中研究指出目的利用两种不同真核表达载体构建全人源抗白细胞介素33单链抗体c片段(IL-33 sc Fv-Fc)重组载体,转染中国仓鼠卵巢(CHO)k1细胞,筛选稳定高表达单细胞株以提高融合蛋白产量。方法双酶切前期构建的重组质粒pc DNA3.1/SPsc Fv-Fc,回收SP-sc Fv-Fc片段,插入载体PMH3EN中,构建PMH3EN/SP-sc Fv-Fc重组载体并与重组质粒pc DNA3.1/SP-sc Fv-Fc分别转染CHO k1细胞;反转录PCR、Western blot法检测目的基因sc Fv-Fc的转录及表达;Dot blot法筛选稳定高表达细胞株;ELISA检测sc Fv-Fc的水平及生物学活性。结果重组质粒测序结果表明成功构建了真核表达载体PMH3EN/SP-sc Fv-Fc,插入目的基因SP-sc Fv-Fc大小为1560 bp左右。反转录PCR检测重组质粒表达情况显示两组重组质粒的目的基因在CHO k1细胞中均成功转录。sc Fv-Fc不仅可分泌到细胞培养基中,还可与人IL-33以及抗人Ig G1 Fc特异性结合。重组载体PMH3EN/SP-sc Fv-Fc组融合蛋白表达水平相对较高。经过4轮筛选,选出了稳定高表达细胞株,初步测其sc Fv-Fc表达产量为10 mg/L;竞争ELISA检测结果显示sc Fv-Fc可显着抑制IL-33与其受体ST2的结合。结论在CHO k1细胞成功高表达IL-33 sc Fv-Fc。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2016年05期）
熊永福[7]（2016）在《肝癌HepG2细胞CYP2E1基因稳定高表达系的构建》一文中研究指出研究背景:细胞色素P450E1(CYP2E1)不仅参与药物代谢,还可以催化多种外源性物质,形成最终的致癌活性物[1]。不仅如此,我们的研究[2-3]还发现CYP2E1可以通过代谢网络(如经典的CYP2E1-ROS/RNSM1HM/Nos2通路),即凭借其复杂代谢过程中的底物与产物参与基因表达的调控,从而更加深刻的影响细胞的各种功能。肿瘤发生前后,CYP2E1的差异性表达可能在肿瘤的维持、演进、转移中发挥作用。尤其是在CYP2E1高表达、易诱导的肝脏。对CYP2E1的研究有助于阐明其在肝癌的作用和寻找新的治疗靶点。本研究旨在通过慢病毒载体构建CYP2E1基因持续稳定高表达的HepG2细胞系,为下一步研究CYP2E1在肝癌发生发展中的作用及分子机制奠定基础。目的:获取完整CYP2E1基因,构建逆转录慢病毒Lenti-Cyp2e1-eG FP-Puro。通过感染HepG2细胞建立稳定高表达CYP2E1的肝癌细胞系。为深入研究CYP2E1在肝癌发生发展中的作用及分子机制提供理想的细胞模型。方法:通过PCR扩增,电泳分离后切胶回收,获取完整CYP2E1基因。经Invitrogen测序,比对UCSC中CYP2E1的编码序列,确保携带相应酶切位点的CYP2E1准确完整。构建载体质粒pLV(Exp)-Puro-CMVmCYP2E1。将载体质粒,包装质粒(pMDLg/pRRE、pRSV-REV)经E.col i DH5α扩增后,共同转染293T细胞制取慢病毒。利用携带CYP2E1基因的慢病毒(Lenti-Cyp2e1-eGFP-Puro)感染HepG2。采用嘌呤霉素抗性筛选方法分离高表达CYP2E1肝癌HepG2细胞。通过增强绿色荧光蛋白检测转染情况,q-PCR及Western blotting检测HepG2、空载及转染CYP2E1基因的HepG2细胞系中CYP2E1 mRNA和蛋白的表达情况。结果:经Invitrogen测序与UCSC序列配比率为100%。通过含慢病毒培养基转染,Hep G2细胞系可在12h后表达e GFP荧光蛋白。空载组与高表达组感染效率基本相同。eGFP荧光蛋白率在24h后快速升高,在第4d达到90%,第6d接近100%表达。液氮冻存3个月后复苏该细胞,HepG2-CYP2E1荧光强度有所减弱,但表达率仍接近100%。转染CYP2E1基因的HepG2细胞系高表达CYP2E1 mRNA,为正常HepG2表达量的682.70±6.11倍(P<0.05),正常HepG2与空载HepG2之间CYP2E1mRNA比较无统计学差异(0.22±0.06、0.36±0.05,P>0.05)。正常Hep G2、空载细胞CYP2E1蛋白表达量比较差异无统计学意义(1.26±0.02、1.29±0.01,P>0.05)。病毒转染的Hep G2细胞CYP2E1蛋白表达量(9.51±0.78)较空载及正常HepG2细胞系高(P均<0.01)。结论:1、成功构建了表达CYP2E1基因的载体质粒。2、通过慢病毒转染建立高表达CYP2E1基因的HepG2细胞系。(本文来源于《川北医学院》期刊2016-05-01）
赵晓红,向姝霖,刘芳,夏红,曾希[8]（2016）在《稳定高表达RORα基因的人胃癌MGC803细胞系的构建与鉴定》一文中研究指出目的构建维甲酸相关孤核受体α(RORα)基因的真核表达载体,并建立稳定高表达RORα的人胃癌MGC803细胞,为研究RORα的功能奠定基础。方法根据RORα基因的c DNA全序列,设计一对带有限制性酶切位点的引物。从人胃癌MGC803细胞中提取mRNA作为模板合成RORαc DNA第一链,并用上述引物扩增目的基因全序列,然后经双酶切插入到真核表达载体pc DNA3.1(+),转化大肠杆菌DH5α;用氨苄青霉素筛选pc DNA3.1(+)-RORα的阳性菌株,双酶切和测序进行鉴定。用经鉴定的重组质粒pc DNA3.1(+)-RORα转染MGC803细胞,G418筛选获得RORα/MGC803细胞株;Real-time PCR和Western blot检测该细胞株RORα的表达情况。结果经双酶切鉴定,构建的真核表达载体pc DNA3.1(+)-RORα包含有大约1 640 bp的插入片段,与预期大小一致;表达载体经测序鉴定,其插入片段碱基序列与RORα基因的c DNA序列完全一致。用构建的真核表达载体pc DNA3.1(+)-RORα转染MGC803细胞后,筛选到可稳定传代的RORα/MGC803细胞株。Real-time PCR与Western blot检测显示,RORα/MGC803细胞RORαmRNA和蛋白表达增高。结论成功构建真核表达载体pc DNA3.1(+)-RORα和建立高表达RORα基因的RORα/MGC803细胞。(本文来源于《中南医学科学杂志》期刊2016年01期）
唐玉婷,李霞,陆巍,魏晓东[9]（2015）在《高表达转C_4型PEPC基因水稻在低氮下诱导碳氮酶稳定光合作用》一文中研究指出为揭示高表达转玉米C4-PEPC基因水稻在低氮条件下的光合表现,采用高表达转玉米C4-PEPC基因水稻(PC)与原种Kitaake(WT)为试验材料,通过盆栽试验,分别测定不同的氮素条件下(中氮300 kg/hm2,低氮65 kg/hm2),开花后不同天数的SPAD值,光合参数以及碳氮关键酶活性。并在开花后50 d收获植株,记录产量因子。结果表明:低氮处理下的PC相对于WT来说,在开花后14,28 d,其净光合速率分别提高了13.10%(P<0.05)和29.29%(P<0.05)。同时,Rubisco羧化酶在开花后14,28 d时活性分别提高了67.86%和52.63%(P<0.05);硝酸还原酶在14,28 d时的活性分别提高79.49%(P<0.05)和17.96%;谷氨酰胺合成酶仅在开花后28 d时活性提高28.48%(P<0.05)。但是通过对产量进行分析,在低氮条件下,并未发现PC的产量与WT有明显差异。可见,PC通过诱导碳氮的关键酶活性的提高维持低氮条件下高净光合速率。(本文来源于《华北农学报》期刊2015年04期）
马文霞,贺莉,刘椿,张庆玲,丁彦青[10]（2015）在《应用重组慢病毒表达载体建立抑癌基因WTX稳定高表达结直肠癌SW620细胞系》一文中研究指出目的构建WTX CDS区全长重组慢病毒表达载体,感染结直肠癌SW620细胞,建立WTX稳定高表达结直肠癌SW620细胞株。方法将WTX基因全长CDS区插入GV287慢病毒质粒载体,重组载体与包装载体共转染人胚肾293T细胞,收集上清、浓缩得到表达WTX的重组慢病毒。慢病毒感染结直肠癌SW620细胞,荧光显微镜初步观察感染效率,G418进一步筛选得到稳定感染细胞株。QPCR及Western blotting检测WTX过表达效率。每部分均设立相应对照。结果载体片段测序结果示成功构建了WTX重组表达载体;包装病毒滴度检测适中,提示WTX表达慢病毒包装成功;慢病毒感染结直肠癌SW620细胞后,WTX基因m RNA以及蛋白表达水平明显增高,有统计学意义,提示SW620结直肠癌细胞WTX高表达稳定株构建成功。结论建立慢病毒感染方法的结直肠癌SW620细胞WTX过表达稳定细胞株,为进一步研究WTX对结直肠癌发生、发展的作用机制提供分子生物学工具。(本文来源于《南方医科大学学报》期刊2015年08期）
稳定高表达论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的构建及鉴定稳定高表达TGF-β1的大鼠心肌细胞H9c2细胞株。方法利用RNA干扰技术提取p EGFP-TGF-β1质粒后采用ABI3130基因测序仪进行测序鉴定,将鉴定后的质粒转染到大鼠心肌细胞H9c2细胞株,利用G418筛选转染的H9c2细胞,通过RT-PCR和Western blot技术对转染后的H9c2细胞进行鉴定,本实验将转染了p EGFP-TGF-β1质粒和p EGFP对照质粒的细胞株分为p EGFP-TGF-β1质粒组和p EGFP对照质粒组。结果 p EGFP-TGF-β1质粒测序结果包含TGF-β1序列,筛选后的p EGFP-TGF-β1质粒组和p EGFP对照质粒组细胞转染效率分别为85%和93%。RT-PCR结果显示,p EGFP-TGF-β1质粒转染组的TGF-β1m RNA相对表达量为(2.563±0.198),与对照组(1.037±0.022)比较差异具有统计学意义(t=3.056,P=0.028);Western blot结果显示,p EGFPTGF-β1质粒转染组的TGF-β1蛋白相对表达量为(3.275±0.234),显着高于对照组的(1.011±0.015),差异具有统计学意义(t=4.372,P=0.015)。结论本研究所构建的大鼠心肌细胞H9c2细胞株能稳定高表达TGF-β1,可用于后续TGF-β1在大鼠心肌细胞的生物学作用及相关信号通路的研究。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
稳定高表达论文参考文献
[1].纪玉婷,杨燕,郑荣生,张吴琼,刘静.慢病毒介导稳定高表达Cx32的Huh7细胞系建立及其对细胞增殖的影响[J].中国药理学通报.2018
[2].许淑文,李艳,李继强,戴雯.稳定高表达TGF-β_1的大鼠心肌细胞H9c2细胞株的构建及鉴定[J].海南医学.2017
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[4].李琪,李华涛,丛霞,姜忠玲,曹荣峰.稳定转染高表达HSP72蛋白的奶牛乳腺上皮细胞系的建立[J].中国兽医杂志.2016
[5].万鹏飞,黄亚琴,王志,王欢欢,石家仲.稳定高表达miR-449c的5637膀胱癌细胞株的建立[J].细胞与分子免疫学杂志.2016
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[8].赵晓红,向姝霖,刘芳,夏红,曾希.稳定高表达RORα基因的人胃癌MGC803细胞系的构建与鉴定[J].中南医学科学杂志.2016
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[10].马文霞,贺莉,刘椿,张庆玲,丁彦青.应用重组慢病毒表达载体建立抑癌基因WTX稳定高表达结直肠癌SW620细胞系[J].南方医科大学学报.2015