导读:本文包含了熊牛体细胞克隆胚胎论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:小分子信号通路抑制剂,体细胞克隆,胚胎发育,牛
熊牛体细胞克隆胚胎论文文献综述
吴新颖,桑元坤,王勇胜,张涌,华松[1]（2015）在《PD0325901和CHIR99021促进牛体细胞克隆胚胎体外发育的研究》一文中研究指出【目的】选取MAP2K和GSK3的抑制剂PD0325901、CHIR99021(简称2i)对牛体细胞核移植(SCNT)胚胎进行处理,研究这2种小分子物质对胚胎发育及其多能性基因(OCT4、SOX2、KLF4、DPPA3、CDX2、GATA4、NANOG)表达的影响。【方法】以牛皮肤成纤维细胞为供体,牛MⅡ期卵母细胞为受体,构建牛SCNT胚胎,采用添加2i(PD0325901 0.4μmol/L,CHIR99021 3μmol/L)的胚胎培养液体外培养SCNT胚胎72h,以mSOF+DMSO培养液处理的SCNT胚胎及体外受精(IVF)胚胎为对照,统计核移植胚胎体外发育率,并对胚胎多能性相关基因的表达进行实时定量PCR检测。【结果】与对照相比,2i处理能使SCNT胚胎囊胚率和囊胚细胞总数显着增加,凋亡细胞率显着下降,多能性相关基因NANOG和SOX2表达量上调,而细胞分化相关基因GATA4的表达量下调,其他基因表达量变化不显着,从而使SCNT胚胎的发育状态更接近于IVF胚胎。【结论】2i共处理72h可优化SCNT胚胎发育状态。(本文来源于《西北农林科技大学学报(自然科学版)》期刊2015年09期）
杜卫华,郝海生,赵学明,秦彤,刘岩[2]（2012）在《和牛体细胞克隆胚胎制备与胚胎移植》一文中研究指出引言随着体细胞克隆技术进步,体细胞克隆动物可为人类提供肉和奶的来源。日本和牛肌纤维间脂肪沉积好,是生产高档牛肉的理想肉牛品种。利用克隆技术生产和牛胚胎是并移植是扩繁和牛的有效途径,Shina K.等研究了日本和牛体细胞克隆方法和克隆后代公牛的繁殖性能。(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十六届学术研讨会论文集》期刊2012-08-01）
刘佳丽[3]（2010）在《黑熊体细胞培养及熊—牛体细胞克隆胚胎融合条件初探》一文中研究指出熊的胆、肉、骨、皮等均可入药。因此黑熊除具有观赏价值外,还有较高的经济价值,也正是因为它具有较高的经济价值,导致种群数量急剧下降。已经被列为国家重点保护的二类野生动物。亚洲黑熊(Ursus thibetanus),别名狗熊、黑瞎子,东北地区分布在黑龙江、沈阳、吉林的长白山,分类地位动物界→脊索动物门→哺乳纲→真兽亚纲→食肉目→熊科→黑熊。近年来乱砍滥伐日益严重,曾经分布很广的熊类栖息地变成孤立的小区,导致种群的分离,尤其长白山地区栖息地消失最严重,亚洲黑熊基因和种质保种迫在眉睫。本研究分为两个部分：第一部分为组织块法和酶法结合建立黑熊耳部成纤维细胞系。包括原代培养,细胞纯化,传代培养液的选择,生长曲线的绘制等。第二部分为以亚洲黑熊成纤维细胞作为供核细胞,以延边黄牛MⅡ期去核的卵母细胞作为受体,以挤压法去核,注入体细胞到卵黄周隙中,采用不同的融合电场强度、脉冲次数、脉冲时程对熊-牛克隆胚胎进行融合,复合化学方法激活。结果以融合率、卵裂率、4-细胞发育率、8-细胞发育率、16-细胞发育率和囊胚发育率计。结果如下：1.通过组织块法+酶法培养,成功获得亚洲黑熊成纤维细胞系。2.对纯化后的第叁代成纤维细胞进行群体倍增实验,根据前后细胞密度的变化,通过计算,结果确定适合黑熊成纤维细胞系传代的培养液血清浓度为10%.3.通过绘制生长曲线研究了黑熊耳皮肤成纤维细胞的增殖规律,用DMEM培养黑熊耳部成纤维细胞,传代后滞留期较短,约有一天左右,活细胞逐渐贴壁生长。此后进入对数生长期,延续六天左右。第八天细胞发生接触抑制而开始死亡,细胞数量进入平台期,维持叁天左右,细胞逐渐脱落死亡,细胞数量有所下降；4.使用1100 v/cm的融合电场后,16-细胞发育率为34.89%显着高于其他叁组(P<0.05)。5.使用2次融合脉冲后,8-细胞发育率61.31%显着高于其他两组(P<0.05)。6.脉冲时程为40μs时,4-细胞发育率75%显着高于10μs时(P<0.05)；8-细胞发育率53.89%显着高于20μs(P<0.05)使用SPSS14.0软件对结果进行方差分析多重比较后,综合考虑实验结果和方便操作时间与过程,得出以下结论：适宜熊-牛克隆胚胎融合的电场强度为1100 v/cm,脉冲次数为2次,脉冲时程为40μs。(本文来源于《延边大学》期刊2010-03-20）
赵磊文,伏静,管鹏飞,李华,黄淑帧[4]（2008）在《胚胎移植时机对牛体细胞克隆胚胎妊娠率的影响》一文中研究指出以活体取卵OUP来源的牛卵母细胞为受体胞质,以Holstein奶牛的牛耳成纤维细胞作为供核细胞进行体细胞克隆,并将发育7 d的克隆囊胚和体内胚分别及体外胚进行移植,观察移植时机对受孕率的影响。依据代孕牛排卵后天数的不同分为3个实验组,组1:排卵后5～6 d(不含6 d);组2:排卵后6～7d;组3:排卵后7～8 d(不含7 d)。结果显示:对于体外胚胎而言,第2组的受孕率高于第1组(P>0.05),第3组的受孕率最低(P<0.05),且120 d的受孕率为0。与此相反,对于体内胚胎,第3组的受孕率高于其他2组。通过实验可以证明对于7 d的体外胚胎选择在代孕牛排卵后6—7 d移植可以得到较高的受孕率:而对于体内胚胎而言则应选择在受体牛排卵后7～8 d移植,可得到较高的妊娠率。(本文来源于《上海交通大学学报(农业科学版)》期刊2008年02期）
孙伟[5]（2007）在《化学诱导去核和全细胞胞质注射法生产牛体细胞克隆胚胎的研究》一文中研究指出在体细胞核移植研究中，受体卵母细胞去核和克隆胚胎的构建是两个影响核移植效率的重要环节。传统的去核方法由于其机械损伤大、耗时、设备和技术要求高、去除的胞质量多、去核效率低，所以严重的影响了核移植的整体效率。最近，化学诱导去核具有成批处理、操作简单、物理损伤小、胞质丢失少等特性，因此适合于大规模的卵母细胞去核和克隆动物的生产；本试验利用Demecolcine(下文简称Deme)进行牛MII卵母细胞诱导去核条件的优化和筛选，然后以输卵管上皮全细胞为核供体材料，将供体全细胞胞质注射和Deme化学诱导去核相结合，初步建立一种简化的牛体细胞核移植方法，探讨在大家畜体细胞核移植中的可行性。最终目的是简化体细胞核移植步骤，提高整体效率。主要试验结果如下：1．脱羧秋水仙素诱导牛MII卵母细胞去核效果研究利用不同浓度Deme和不同处理时间对牛MII卵母细胞进行诱导去核结果表明，在对照组中，不同处理时间对卵母细胞去核效率无显着影响(P＞0.05)；在0.4ug/mL处理浓度下，各处理组去核效率均显着高于0min处理组(P＜0.05)；处理30min组与60min、90min处理组间差异显着(P＜0.05)，但后两组之间无显着差异(P＞0.05)；在0.5ug／mL和0.6ug／mL浓度条件下，0min、30min、60min、90min处理组也获得相似的结果，叁个处理组的去核效率都显着高于对照组(P＜0.05)；而0.4ug／mL处理组与0.6ug／mL处理组之间差异显着(P＜0.05)，而0.5ug／mL处理组与另外两个处理组间都无显着差异(P＞0.05)。低剂量和短时间处理负作用小，所以，0.4ug／mL处理60min组的去核率最理想；采用两种不同的处理方法M_1和M_2法，去核率分别为84.97％和78.93％。虽然前者高于后者，但是两者之间无显着差异(P＞0.05)，M_2法的优势是对卵母细胞的损伤小，利用率高：利用0.4ug/mL Deme+0.05MSucrose(蔗糖)和0.4ug／mL Deme+5ug/mL CB(细胞松弛素B)配伍，诱导处理1h后去核，去核率分别为70.63％、61.80％，实验组间差异不显着(P＞0.05)，但5ug／mL CB组与对照组之间差异显着(P＜0.05)；经Deme诱导后78个凸起和细胞膜相连的卵母细胞，置于Deme-free培养液后在5个时间点0h、2h、4h、6h和8h，观察凸起回复的卵数分别为0、15、33、52和62(回复率分别为0％、19.23％、42.30％、66.67％和79.49％)。这意味着诱导后的卵母细胞应该在2h内进行机械辅助去核，以防染色质回复。2．供体输卵管上皮细胞分离纯化及其相关特性研究利用实验设计的五步纯化法，对上皮细胞进行纯化，经广谱角蛋白(PCK)免疫组化鉴定(SABC法)，上皮细胞纯度高达95％以上；通过对生长特性的观察和生长曲线的测定，细胞长势良好，说明培养条件合适；第4代上皮细胞分别添加了0ng／mL(对照组)、25ng／mL、50ng／mL和75ng/mL的EGF，加入EGF后第5d，对照组S期细胞所占的比例为36.70％，G_2-M期细胞为11.50％，而25ng／mL、50ng／mL和75ng／mL实验组S期细胞分别为30.30％、26.90％和29.40％，G_2-M期细胞所占的比例分别为10.80％、11.90％和10.90％，和对照组相比，各期细胞分布发生明显变化，S期的比例呈下降趋势。从凋亡情况来看，对照组高达3.40％，而50ng／mL组最低，仅为0.86％，这表明50ng／mLEGF有利于上皮的生长。3．化学诱导去核联合全细胞胞质注射进行牛重构胚胎构建，比较其发育情况。Deme诱导后经机械辅助去核，利用全细胞胞质注射共构建重构胚胎40枚，卵裂率为62.50％(25／40)，囊胚率10.00％(4／40)；诱导后选择凸起明显的卵母细胞，直接进行全细胞胞质注射，共构建胚胎71枚，卵裂率为52.11％(37／71)，囊胚率8.45％(6／71)，两组之间卵裂率和囊胚率均差异不显着(P＞0.05)。但是在发育过程中两组均出现不同程度的碎裂，卵裂球大小不均，有小球样结构，发育受阻等现象。上述结果表明，化学诱导去核联合全细胞胞质注射进行牛重构胚胎的构建是可行的，相关的机制还有待进一步的研究。(本文来源于《华中农业大学》期刊2007-06-01）
张弛[6]（2007）在《热应激对牛体细胞克隆胚胎早期发育的影响》一文中研究指出选取西安本地屠宰场牛卵母细胞,通过对成熟前卵母细胞进行不同温度热应激处理(对照组38.5℃,组2 39.5℃,组3 40.5℃,组4, 41.5℃,组5 42.5℃),比较重构胚的卵裂率,囊胚率,并对不同供体细胞形成的克隆胚囊胚细胞数目进行比较,研究短时间(30min)热应激对核移植后重构胚发育的影响。对未采取热应激措施卵母细胞形成的克隆胚分别在单细胞阶段和桑椹胚阶段:(1)以温度高低为标准(分组同上试验)进行30 min热应激处理,统计囊胚发育率;(2)以高于对照组温度2℃的温度热处理30min,1h,2h,统计囊胚发育率。研究热应激强度对胚胎的损伤影响。结果表明:1.卵母细胞41.5℃下30min的热应激,与对照组相比,卵裂率以及囊胚率都有显着提高(P<0.05)。但是42.5℃组,虽然卵裂率有所提高,囊胚率与对照组相比却显着降低(P<0.05)。2.用叁种不同供体细胞分别进行核移植。发现热应激卵母细胞形成的克隆胚与未热应激的卵母细胞形成的克隆胚相比,在囊胚细胞数上无显着差异(P>0.05)。说明热应激不会影响胚胎的质量,并且这一结果与供体细胞的种类无关。3.对单细胞克隆胚进行30min热应激发现,随着应激温度的升高,克隆胚胎的卵裂率与对照组相比没有明显负效应(P>0.05),而囊胚发育率确逐渐降低,相比对照组,从41.5℃组开始有显着负效应(P<0.05)。4.对桑椹克隆胚进行30min热应激发现,随着应激温度升高,囊胚发育率呈下降趋势,42.5℃组与对照组相比有明显负效应(P<0.05)。5.对单细胞克隆胚进行40.5℃热应激发现,随着热应激时间的延长,胚胎发育呈下降趋势。1h以上40.5℃的热应激会显着影响胚胎的发育能力(P<0.05)。6.对桑椹克隆胚进行40.5℃热应激发现,随着热应激时间的延长,胚胎发育能力逐渐降低,但相比单细胞克隆胚,抗应激能力增强,2h以上40.5℃的热应激会显着影响胚胎的发育能力(P<0.05)。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2007-05-01）
董雅娟,柏学进,李建栋,铃木达行[7]（2003）在《牛体细胞克隆胚胎类ES细胞集落的筛选及其核移植》一文中研究指出对第 7d的牛体细胞克隆囊胚进行体外增殖培养 ,分离筛选类ES细胞 ,并对其进行了传代培养。接种在饲养层上的体细胞克隆囊胚细胞 ,在传代的 2 4h内增殖形成小集落 ,2～ 3d有雀巢状的集落出现 ,筛选形态相同的细胞集落进行传代培养 ,4～ 5代后 ,皿底出现多个大小不等的多细胞单层集落。将传 4～ 5代的细胞集落接种到无饲养层的 4孔培养皿中培养 ,2 4h出现多细胞单层集落 ,4～ 7d长满皿底 ,并形成上皮样细胞 ,呈网状 ,将其作为核供体细胞进行核移植实验。结果有 80 % (40 5 0 )核 质融合的移核重构胚发生卵裂 ,5 % (2 4 0 )发育至桑椹胚期 ,2 5 % (1 4 0 )发育至囊胚期 ,92 5 % (37 4 0 )停止在 2～ 4细胞期。结果表明 :采用牛体细胞克隆胚胎的类ES细胞进行核移植 ,具发育形成早期胚胎的潜能(本文来源于《遗传学报》期刊2003年02期）
熊牛体细胞克隆胚胎论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
引言随着体细胞克隆技术进步,体细胞克隆动物可为人类提供肉和奶的来源。日本和牛肌纤维间脂肪沉积好,是生产高档牛肉的理想肉牛品种。利用克隆技术生产和牛胚胎是并移植是扩繁和牛的有效途径,Shina K.等研究了日本和牛体细胞克隆方法和克隆后代公牛的繁殖性能。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
熊牛体细胞克隆胚胎论文参考文献
[1].吴新颖,桑元坤,王勇胜,张涌,华松.PD0325901和CHIR99021促进牛体细胞克隆胚胎体外发育的研究[J].西北农林科技大学学报(自然科学版).2015
[2].杜卫华,郝海生,赵学明,秦彤,刘岩.和牛体细胞克隆胚胎制备与胚胎移植[C].中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十六届学术研讨会论文集.2012
[3].刘佳丽.黑熊体细胞培养及熊—牛体细胞克隆胚胎融合条件初探[D].延边大学.2010
[4].赵磊文,伏静,管鹏飞,李华,黄淑帧.胚胎移植时机对牛体细胞克隆胚胎妊娠率的影响[J].上海交通大学学报(农业科学版).2008
[5].孙伟.化学诱导去核和全细胞胞质注射法生产牛体细胞克隆胚胎的研究[D].华中农业大学.2007
[6].张弛.热应激对牛体细胞克隆胚胎早期发育的影响[D].西北农林科技大学.2007
[7].董雅娟,柏学进,李建栋,铃木达行.牛体细胞克隆胚胎类ES细胞集落的筛选及其核移植[J].遗传学报.2003
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