导读:本文包含了治疗性胚胎干细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:人胚胎干细胞,半月板损伤,康复医学科,同济医院,功能细胞,定向分化,干细胞库,间充质,膝关节损伤,关节镜下手术
治疗性胚胎干细胞论文文献综述
龙华,邓国欢[1]（2019）在《世界首例!人胚胎干细胞治疗半月板损伤》一文中研究指出1月9日，同济医院康复医学科成功为一名膝关节损伤的患者，实施了世界首例应用人胚胎干细胞分化的功能细胞针对半月板损伤的微创治疗，此方法未来还有望运用于糖尿病足、膝关节退行性病、子宫内膜重度粘连等病症的治疗。26岁的陈鹏数月前打球左膝盖受伤，1月4(本文来源于《湖北日报》期刊2019-01-19）
顾军[2]（2018）在《胚胎干细胞在细胞治疗中的发展前景》一文中研究指出胚胎干细胞具有不断增殖且分化成各类细胞的能力,临床中利用胚胎干细胞(embryonicstemcell,ESCs)具有多向分化潜能的特性而用于多种疾病的治疗,利用胚胎干细胞体外培养与定向分化还可以得到大量同种细胞以应用于细胞移植治疗等实用研究。在本综述主要对胚胎干细胞在细胞治疗中的应用前景及其存在的问题进行探讨。(本文来源于《现代医学与健康研究电子杂志》期刊2018年08期）
陈涵[3]（2018）在《胚胎干细胞衍生细胞治疗心肌梗死获重大进展》一文中研究指出尽管近几十年来介入技术和药物治疗的飞速发展挽救了大量心肌梗死患者的生命,但心肌梗死造成的心肌细胞坏死仍然对患者的心功能造成了显着影响,心肌梗死后心力衰竭的发病率依然居高不下。植入式心律转复除颤器(ICD)的应用降低了心肌梗死伴心功能不全患者的病死率,但由于其并不能真正改善心室重构的进程,患者的心力衰竭症状仍在逐步加重,生活质量极差。医学界一直没有放弃探索心肌梗死后心功能重建的方法。(本文来源于《心电与循环》期刊2018年02期）
邢宝恒[4]（2017）在《人胚胎干细胞源性胰内胚层细胞移植治疗妊娠期糖尿病小鼠的研究》一文中研究指出妊娠期糖尿病(Gestational diabetes mellitus,GDM)是指妊娠期间母体由于胰岛素分泌或者应答异常而造成的不同程度葡萄糖代谢异常。近年来,在中国妊娠期糖尿病发病率逐渐升高,已成为影响妊娠妇女的严重的代谢性疾病,临床上常表现为妊娠期间严重的糖代谢异常。现今对妊娠期糖尿病的治疗手段仍然以传统的治疗方式为主,即饮食指导、运动治疗、胰岛素治疗。然而,受患者依从性及教育程度不同的影响,传统治疗方式对妊娠期糖尿病的控制并不理想。而胰内胚层干细胞移植作为一种新兴的治疗方式,其治疗方法及其疗效越来越受到临床的重视。干细胞治疗相比于胰岛移植具有不受供体不足的限制、可长期供应胰岛β细胞以及减少免疫抑制剂使用等优点,其中人胚胎干细胞由于其全能性较高、分化能力强的优点,具有极大治疗妊娠期糖尿病的潜力。由于妊娠期的特殊性和伦理限制,很多有创研究无法开展,而动物模型是一种较好的研究媒介。本研究根据以往文献构建妊娠期糖尿病小鼠模型,通过Kroon E的四部分离法从人胚胎干细胞定向诱导分化出胰腺胚胎干细胞(hESC-PE),移植于小鼠体内,检测移植hESC-PE后对妊娠期糖尿病小鼠的治疗效果,疗效分析内容包括检测随机血糖、胰岛素水平、体重等糖尿病常用的监测指标。文献表明,妊娠期糖尿病患者表现出较多的胚胎停育并且在动物实验中妊娠期糖尿病小鼠产生胎儿的数目明显降低,同时在db/+妊娠期糖尿病模型的小鼠中,胎儿的体重增高了5-8%,本研究对其胎鼠体重、胎鼠活胎存活率、2周后胎鼠死亡率也进行观察统计。此外,前期实验还发现,治疗所需要移植的hESC-PE细胞数量较大,而这一现象推测可能与移植手术时容易产生氧化应激反应有关,从而导致疗效的降低。本研究利用柚皮素的的抗氧化作用,提高干细胞应用效率,观察胰内胚层干细胞移植妊娠期糖尿病小鼠联合应用柚皮素缓解妊娠期糖尿病的症状的疗效。第一部分:小鼠妊娠期糖尿病模型的建立和验证目的:建立妊娠期糖尿病GDM小鼠模型,并验证建模是否成功,为后续实验奠定研究平台。方法:1实验选用6-8周龄C57BL/KsJ~(+/+)(野生型,WT)雌性小鼠20只,雄性WT小鼠10只、6-8周龄C57BL/KsJ-Lep~(db/+)(杂合子,db/+)雌性小鼠20只,雄性db/+小鼠10只。db/+小鼠是由于瘦素受体(Ob R)突变,无法抑制进食行为,在妊娠的过程中,db/+雌性小鼠会表现出食欲过盛的进食行为,肥胖程度增加,进一步导致胰岛素抵抗的发生并出现妊娠期糖尿病症状,表现为轻微的葡萄糖耐受不良,因此,是模拟人类妊娠期糖尿病的最佳小鼠模型。给予小鼠自由饮用灭菌水以及自由进食正常普通饲料(Chow Diet,CD)。13周龄时交配,选取db/+健康雄鼠与db/+雌鼠按1:2比例进行配种,合笼时间为下午五点左右,次日清晨检测雌鼠是否有阴道栓,若有阴道栓记为妊娠第0天(GD0),配种时间控制在第13周内。同时,野生型WT雌性以及雄性WT小鼠也按上述方法进行交配,作为对照组。2在妊娠期间给予足够一定质量的饲料,让小鼠自由进食,每隔24小时分别记录WT组和db/+组妊娠小鼠的进食量。并在妊娠期第16天(GD16)用天平测定各组妊娠小鼠的体重。在GD 20时,将母鼠异氟烷麻醉后打开腹腔,从子宫中取出胎鼠,称量并记录各组胎鼠重量及胎盘重量。3通过外观行为学观察、GD10及GD18未禁食随机血糖水平测定、外周血胰岛素水平测定,鉴定GDM小鼠模型是否造模成功。4进一步通过糖耐量以及胰岛素激发实验的检测对GDM小鼠模型的糖代谢功能异常进行进一步验证是否造模成功。糖耐量实验具体方法为:两组小鼠先饥饿6小时,然后给予腹腔注射2g/kg体重的葡萄糖,并于注射后0 min、30 min、60 min通过剪尾采取小鼠尾静脉外周血,并立即用罗氏便携式血糖仪测定两组血糖水平。胰岛素激发实验具体方法为:两组小鼠先饥饿6小时,然后给予腹腔注射0.75 U/kg体重的胰岛素,并于注射后0 min、30 min、60 min采集小鼠尾静脉外周血,并立即用罗氏便携式血糖仪测定测定WT和db/+这两组母鼠外周血葡糖糖水平,结果以占胰岛素注射前血糖水平的百分比形式显示(初始值%)。结果:1由于不是所有雌性小鼠在交配后都能够妊娠,最终入组15只WT妊娠小鼠以及12只妊娠db/+小鼠进行实验。2在妊娠前,WT小鼠以及db/+小鼠的能量摄入并没有明显的差异(3.82±0.09克/天、3.98±0.11克/天;P>0.05),然而妊娠以后,相较于WT小鼠在妊娠期GD0-5、GD6-11、GD12-16的能量摄入量(3.76±0.07克/天、4.01±0.06克/天、4.82±0.08克/天),db/+小鼠均明显上升(4.08±0.09克/天、4.67±0.08克/天、5.93±0.09克/天;P<0.05)。在妊娠之后,相较于WT妊娠小鼠来说,db/+母鼠的体重明显增加(40.51±0.66vs 28.73±0.56克;P<0.05)。在妊娠期第20天(GD20),通过剖腹产获得胎鼠。与人类GDM相似,db/+母鼠的后代体重相比WT母鼠后代的体重明显增加(1.61±0.05 vs 1.39±0.06克;P<0.05),而胎盘重量没有明显差异。3通过观察小鼠外观行为变化发现,多数db/+妊娠小鼠表现出多饮、多尿、多食、搔痒、毛发失去光泽,部分动物出现“炸毛现象”、活动减少等现象。并且未禁食随机血糖测定结果显示,在妊娠前WT和db/+两组小鼠血糖水平几乎相似(161.8±2.3 vs165.7±4.7mg/dl,P>0.05),而妊娠之后,WT组孕鼠血糖仍维持稳定,而db/+妊娠小鼠的血糖水平却呈现出明显的上升,GD10随机血糖205.5±5.2 mg/dl,GD18随机血糖215.7±4.3mg/dl,符合Korec等报道的C57BL/Ks J-Lep~(db/+)小鼠妊娠期糖尿病的造模成功标准,以未禁食随机血糖大于200mg/ml并稳定一周为造模成功。在妊娠前WT和db/+两组小鼠未禁食随机外周血胰岛素水平几乎相似(0.71±0.05 vs 0.72±0.07ug/L;P>0.05),但在妊娠之后,WT组妊娠小鼠外周血胰岛素水平仍维持稳定,而db/+妊娠小鼠的外周血胰岛素水平却呈现出明显的上升,GD18胰岛素水平(0.75±0.03 vs 1.46±0.08ug/L;P<0.05),表现出类似妊娠期糖尿病典型的高胰岛素血症。4在妊娠前,db/+小鼠糖耐量实验外周血葡萄糖水平在0分钟、30分钟、60分钟与WT组小鼠相比并没有明显差异。而在GD17,再分别对WT和db/+两组妊娠小鼠进行糖耐量实验。结果显示,db/+妊娠小鼠与WT妊娠小鼠0分钟空腹血糖无统计学差异(127.8±5.3 vs120.7±4.6mg/dl,P>0.05),30分钟两组血糖明显上升,db/+妊娠小鼠上升幅度更大(313.5±6.2 vs 202.2±8.1mg/dl,P<0.05),60分钟db/+妊娠小鼠血糖仍高于WT妊娠小鼠(248.9±5.2 vs 167.7±5.3mg/dl,P<0.05)。在GD19时,我们在WT和db/+两组妊娠小鼠中进行了胰岛素激发实验。30分钟及60分钟db/+妊娠小鼠外周血葡萄糖水平分别下降5%和25%,而WT妊娠小鼠的外周血葡萄糖水平分别下降49%和56%,db/+小鼠表现出明显胰岛素抵抗。结论:本部分实验应用C57BL/KsJ-Lepdb/+(db/+)突变株小鼠,该小鼠在妊娠期表现出典型的妊娠期糖尿病症状,并对该小鼠模型的葡萄糖代谢功能进行进一步验证,表明妊娠期糖尿病GDM小鼠模型建立成功,将为后续实验的顺利开展奠定基础。第二部分:人胚胎干细胞源性胰内胚层细胞(hESC-PE)对db/+小鼠妊娠期糖尿病的疗效目的:探讨h ESC-PE治疗db/+妊娠小鼠妊娠期糖尿病的疗效方法:利用Kroon E的四步分离法诱导分化得到hESC-PE,将5×10~6个hESC-PE移植于8周龄db/+小鼠的左肾被膜下,13周龄时交配,若有阴道栓记为妊娠第0天(GD0),配种时间控制在第13周内。并设置了叁组,分别为野生型妊娠雌鼠组(WT组),db/+型妊娠雌鼠组(db/+组),hESC-PE移植db/+妊娠雌鼠组(db/+PE组),每组各15只。选取移植前一天作为第0天,分别检测了各组小鼠移植前第0天(Day0),妊娠第0天(GD0),妊娠第10天(GD10),妊娠第20天(GD20)的随机血糖含量、随机血浆胰岛素含量以及体重。本实验在GD 20时,将母鼠异氟烷麻醉后打开腹腔,从子宫中取出胎鼠,称量并记录各组胎鼠数目及重量。妊娠终止后处死孕鼠,肾包膜下移植细胞切片HE染色,观察移植细胞状况。结果:1对获得的h ESC-PE进行分析,实时定量PCR及免疫荧光染色结果表明细胞中OCT4表达消失,而PDX1、FOXA2和SOX9高表达,符合为hESC-PE的表达规律。2叁组实验鼠妊娠前随机血糖基本一致(152.1±2.6,163±1.8,157.2±1.4mg/dl;P>0.05)。妊娠开始之后对照组(WT组)的随机血糖变化较妊娠之前无明显变化。而db/+组妊娠小鼠随机血糖水平表现为妊娠期糖尿病特征性的高血糖现象,GD20随机血糖210.6±8.5mg/dl,与WT组GD20随机血糖160.5±1.8mg/dl比较有统计学意义(P<0.05)。db/+PE组则与WT组一样与妊娠前相比保持比较稳定状态,GD20随机血糖162.4±5.0pg/dl,与WT组GD20随机血糖相比无统计学差异(P>0.05)。这表明hESC-PE移植可以显着缓解GDM小鼠的血糖升高。3叁组实验鼠血液中的随机血浆胰岛素水平在妊娠前并未有明显的差异(0.78±0.02,0.75±0.05,0.81±0.01ug/L;P>0.05)。WT组妊娠前后胰岛素无明显变化(0.74±0.04 vs 0.78±0.01ug/L;P>0.05)。在妊娠之后db/+组GD20随机血浆胰岛素水平明显上升,与WT组比较有统计学差异(1.49±0.03 vs 0.74±0.04ug/L;P<0.05)。而db/+PE组妊娠后胰岛素比较稳定,GD20随机血浆胰岛素水平与WT组无统计学差异(0.81±0.08 vs0.74±0.04ug/L;P>0.05)。这表明hESC-PE移植能够缓解妊娠期间血液中高胰岛素的产生。4叁组实验鼠体重妊娠前无明显差异(P>0.05),WT组妊娠前体重16.6±0.12g,GD20体重升至28.3±1.24g。db/+组GD20体重38.3±1.10g,与WT组GD20体重比较有统计学意义(P<0.05)。db/+PE组GD20体重29.0±1.38g,与WT组GD20体重比较无统计学意义(P>0.05)。这表明hESC-PE移植能够有效的抑制GDM造成的体重异常增高。5 WT组雌鼠共分娩了110只胎鼠,db/+PE组雌鼠分娩了106只,而db/+组雌鼠分娩了80只,与其他两组比较有统计学意义(P<0.05)。这表明hESC-PE移植能够提高妊娠期糖尿病小鼠的胚胎存活率。6测量胎鼠的体重,db/+组胎鼠的体重(1.61±0.03 g)明显高于WT组胎鼠体重1.41±0.02 g(P<0.05),然而db/+PE组胎鼠体重1.39±0.02g与WT组胎鼠体重接近,这表明胰内胚层细胞移植能够缓解GDM雌鼠的胎鼠体重的异常增高。7各组胎鼠两周内的生存率进行统计,结果发现db/+组胎鼠的死亡率明显高于WT组(45%vs 25%;P<0.05),同时db/+PE组胎鼠死亡率25%,与WT组近似,这表明hESC-PE移植能够提高GDM胎鼠的生存率。8肾包膜下移植切片HE染色,移植分化细胞聚集于肾包膜下,HE染色呈现大块移植物,其周围淋巴细胞浸润较少,以移植物与肾实质交界处最明显,数量较多,形态像胰腺组织中的胰岛细胞团,界限清楚,细胞形态不一,可见到比较丰富的细胞外基质,血管已经生成。结论:1应用Kroon E的四步分离法能够成功分化得到hESC-PE。2移植h ESC-PE能够有效地缓解妊娠期糖尿病症状,且控制其糖代谢维持正常水平,降低了GDM小鼠血糖、胰岛素及体重。3移植hESC-PE能够改善GDM雌鼠的胚胎存活率,能缓解GDM雌鼠胎鼠体重的异常增高,能够提高GDM胎鼠的生存能力。第叁部分:柚皮素可提高hESC-PE对小鼠妊娠期糖尿病的疗效目的:探讨柚皮素抗氧化作用在hESC-PE对小鼠GDM的疗效的影响方法:1体外实验中,使用不同浓度柚皮素(Naringenin,NGN)对hESC-PE进行处理,在高氧的环境下(加H_2O_2),用MTT方法检测不同柚皮素浓度下hESC-PE的存活情况。2利用DCFH-DA染色检测细胞内相关ROS产物,进而分析柚皮素对细胞的抗氧化作用。3为验证柚皮素是否可增强h ESC-PE的疗效,本部分动物实验在移植前一天实验小鼠腹腔注射柚皮素50mg/kg,并在第二部分实验基础上,减少hESC-PE移植数目,将诱导分化出来的3×10~6个hESC-PE移植于8周龄db/+小鼠的左肾被膜下,13周龄时交配,若有阴道栓记为妊娠第0天(GD0),配种时间控制在第13周内。并设置了四组,分别为妊娠的野生型雌鼠组(WT组),单用柚皮素治疗妊娠的db/+小鼠组(db/+NGN组),h ESC-PE移植db/+雌鼠组(db/+PE组),hESC-PE移植到妊娠的db/+雌鼠组,同时加用柚皮素组(db/+PE+NGN)每组各12只。选取移植前一天作为第0天,分别检测了各组小鼠移植前第0天(Day0),妊娠第0天(GD0),妊娠第10天(GD10),妊娠第20天(GD20)的未禁食随机血糖、血浆胰岛素、孕鼠体重及胎鼠活胎分娩率、2周后存活数等指标。结果:1相较于空白对照组,H_2O_2组细胞内产生的活性氧簇(ROS)产物较多,平均高出37.9±8.3%。而相较于空白对照组,H_2O_2+柚皮素组降低细胞内产生的ROS,平均升幅为19.1±7.5%,其中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽、丙二醛等抗氧化应激分子并未降低,提示柚皮素可以降低细胞内ROS产物的数量并保护了细胞内的多种抗氧化系统。2在妊娠的WT组中,妊娠小鼠随机血糖浓度维持稳定(143.5±9.6vs 137.5±8.34mg/dL;P>0.05)。而db/+NGN组的妊娠小鼠随机血糖无改善207.6±7.9mg/dL,与WT组血糖143.5±9.6mg/dL比较,有统计学意义(P<0.01)。db/+PE+NGN组妊娠小鼠随机血糖151.2±8.07mg/dL与WT组的随机血糖143.5±9.6mg/dL比较无统计学意义(P>0.05),低于db/+PE组妊娠小鼠随机血糖182.4±7.6 mg/dL(P<0.05)。这提示柚皮素与hESC-PE移植联合应用后,更好控制妊娠小鼠血糖浓度。3单用柚皮素组妊娠小鼠体重明显高于WT组(32.12±0.93 vs 25.91±0.89g;P<0.01)。db/+PE+NGN组妊娠小鼠体重26.14±0.82g与WT组25.91±0.89g相近(P>0.05),低于db/+PE体重28.91±0.84g,有统计学差异(P<0.05)。这提示柚皮素与hESC-PE移植联合应用后,更好控制孕鼠体重。4单用柚皮素组妊娠小鼠随机血清胰岛素水平0.604±0.037ug/L,低于WT组妊娠小鼠胰岛素水平0.793±0.036ug/L(P<0.01)。db/+PE+NGN组妊娠小鼠胰岛素水平0.803±0.041ug/L,与WT组比较无差异(P>0.05),高于db/+PE组妊娠小鼠随机血清胰岛素水平0.697±0.04ug/L(P<0.05)。这提示柚皮素与hESC-PE移植联合应用后,可改善胰岛素水平。5测量胎鼠的体重,单用NGN组胎鼠的体重(1.48±0.03 g)明显高于WT组胎鼠体重1.30±0.02 g(P<0.05),然而db/+PE+NGN组胎鼠体重1.31±0.02g与wt组胎鼠接近(P>0.05),低于单hESC-PE组胎鼠体重1.36±0.02g(P<0.05)。这表明柚皮素与胰内胚层细胞移植联合应用能够缓解妊娠期糖尿病雌鼠的胎鼠体重的异常增高。结论:1体外实验表明柚皮素能够提高氧化应激环境中hESC-PE的活力,并降低细胞内的氧化应激反应,保持抗氧化分子的活力。2体外实验表明柚皮素可以降低细胞内ROS产物的数量并保护了细胞内的多种抗氧化系统。H_2O_2+柚皮素组降低细胞内产生的ROS;超氧化物歧化酶、谷胱甘肽、丙二醛等抗氧化应激分子得到保护。3在第二部分实验基础上,本部分研究减少hESC-PE移植数量将近一半,实验结果表明,hESC-PE移植联合应用柚皮素组较单hESC-PE移植组可进一步缓解妊娠期糖尿病高血糖、高胰岛素血症、高体重等现象,同时,提高了胎鼠活胎分娩率及2周后胎鼠生存率。虽然移植hESC-PE数目减少将近一半,但是联合柚皮素,GDM控制达到标准量干细胞移植的效果,说明柚皮素提高hESC-PE移植治疗GDM小鼠效率。(本文来源于《河北医科大学》期刊2017-10-01）
耿晓东[5]（2017）在《生物微胶接种胚胎干细胞治疗慢性肾衰竭》一文中研究指出背景：慢性肾脏病(chronic kidney disease, CKD)是肾脏病科常见的一种疾病,患者的发病率在不断的升高,并且CKD终末阶段的患者的数量也在不断的增多。目前,透析和肾移植仍是治疗终末期肾脏病的主要方式,肾脏病到最后终末期,肾移植是最为有效的治疗方式,但依然存在肾源严重短缺的问题,干细胞移植是一种理想的治疗方式。近年来,干细胞其最主要的特点是具有多向的分化能力,干细胞应用于组织修复和再生的治疗方法,已成为医学研究的焦点。胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)能够分化成多种细胞类型,因此,胚胎干细胞可以被看做是用于肾再生疗法的有效工具。我们利用生物微胶(Gelatin Microcryogels,GMs)载体,承载胚胎干细胞,同时借助腹腔大网膜的包裹作用,研究胚胎干细胞对大鼠5/6肾切除肾脏的保护作用,为ESCs在肾脏病方面的治疗提供一定的实验依据。目的:构建生物微胶—胚胎干细胞复合物,检测两者的生物相容性;构建大鼠5/6肾切除慢性肾衰模型;利用大网膜将生物微胶—胚胎干细胞复合物包裹在5/6肾切除大鼠的残肾表面来检测对大鼠CKD模型的肾脏保护作用。方法:(1)构建生物微胶-胚胎干细胞复合物,生物微胶与胚胎干细胞体外共培养96h后,行冰冻组织HE染色,观察细胞贴附及生存状况;将生物微胶与胚胎干细胞共培养,通过CCK8测试来检测细胞增殖能力;同时在光镜和双光子显微镜下观察两者的兼容性。(2)40只SD雄性大鼠随机分为假手术组(Sham组),5/6肾切除组(NPX组),5/6肾切除加大网膜包绕残肾组(NPX+OM组),5/6肾切除加大网膜包裹胚胎干细胞包绕残肾组(NPX+OM+ESCs组),5/6肾切除加大网膜包裹胚胎干细胞微胶复合物包绕残肾组(NPX+OM+GMs+ESCs组),每组8只。12周采集血样本和尿样,测定各组大鼠血清肌酐和24h尿蛋白定量情况,处死大鼠后留取大鼠肾组织标本,进行PAS和MASSON染色来评估肾脏病理及肾小管评分情况。同时行α-SMA,TGF-β,(COL-Ⅲ免疫组化染色和Western blot分析来评估肾脏损伤及修复情况。结果:(1)生物微胶-胚胎干细胞复合物HE染色显示胚胎干细胞能在生物微胶上良好的贴附及生长;双光子激光共聚焦显微镜的检测证实胚胎干细胞能在生物微胶上良好的生长:CCK8检测说明生物微胶对胚胎干细胞增殖生长能力无影响。(2)在第12周处死大鼠后,通过血生化检测发现大网膜包裹胚胎干细胞生物微胶复合物包绕残肾组能有效降低血浆肌酐水平;肾脏病理切片机免疫组化结果显示能够减少肾小球硬化和肾小管间质损伤。结论:生物微胶-胚胎干细胞有良好生物兼容性。在建立的大鼠5/6肾切除模型中,证明了大网膜包裹胚胎干细胞微胶复合物包绕残肾组相对于单纯5/6肾切除组能有效降低慢性肾脏病的进展和减少肾脏损伤,拮抗5/6肾切除大鼠的肾脏纤维化程度并显示出良好的治疗作用。(本文来源于《中国人民解放军医学院》期刊2017-05-24）
王昱凯,周琪,胡宝洋[6]（2016）在《人胚胎干细胞来源多巴胺前体细胞治疗帕金森病猴》一文中研究指出帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一种常见于中老年人的神经系统退行性疾病,由中脑腹侧的多巴胺能(dopaminergic,DA)神经元缺失造成。这类疾病可通过移植由人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,h ESC)或其他途径获得的多巴胺能神经元实现治疗。然而,在应用于临床之前,需要对这些多巴胺能神经元的安全性和有效性在合适的动物模型中进行充分、全面的评价。为评价由临床级人胚胎干细胞分化的多巴胺能神经元是否安全、有效,根据先导专项部署,我们建立了MPTP诱导的帕金森病猴模型,并将由人胚胎干细胞定向分化的多巴胺能神经元植入受损猴脑区。结果表明,在所有接受细胞移植的猴中,未发生移植细胞形成的肿瘤和继发肿瘤。移植细胞可分化为多巴胺能神经元并使局部多巴胺水平提高,带来不同程度的行为学改善。这些发现提示,多能干细胞分化的多巴胺能神经元移植治疗帕金森病安全、有效,可进一步应用于帕金森病的治疗。(本文来源于《生命科学》期刊2016年08期）
王振宇[7]（2016）在《胚胎干细胞来源的角膜上皮样细胞治疗角膜缘干细胞缺乏的实验研究》一文中研究指出目的:诱导人胚胎干细胞(human Embryonic Stem Cells,h ESCs)向角膜上皮样细胞分化,观察分化细胞的生物学特性及其治疗角膜缘干细胞缺乏的效果,并探讨分化细胞的免疫原性及其移植后的免疫排斥反应。方法:通过小分子化合物诱导h ESCs向角膜上皮细胞分化,免疫荧光染色、PCR检测其上皮细胞标志物的表达,同时培养成体角膜缘上皮细胞(Limbal Epithelial Cells,LECs),以羊膜为载体制备重组角膜上皮细胞膜片。建立新西兰兔和食蟹猴的角膜缘干细胞缺乏模型,行重组角膜上皮细胞膜片移植,术后通过裂隙灯和印迹细胞学观察其治疗效果。通过全基因组芯片筛选h ESCs分化细胞和LECs差异表达的基因,流式细胞检测二者免疫相关分子的表达,体外T细胞增殖实验和NK细胞杀伤实验验证其免疫原性,同时在体外模拟炎症微环境观察对细胞免疫原性的影响,重组角膜上皮细胞膜片移植后观察免疫排斥反应,并用免疫荧光染色观察免疫细胞。结果:h ESCs分化细胞的细胞形态与角膜缘干细胞相似,并表达角膜缘干细胞和角膜上皮细胞的标记物,其多能性标志物为阴性,并能在去上皮羊膜上形成复层的细胞结构,重组角膜上皮细胞膜片移植到角膜缘干细胞缺乏的新西兰兔和食蟹猴体内后,能够显着改善眼表情况并长时间保持稳定。相比于LECs,h ESCs分化细胞中免疫相关基因的表达显着下调,其MHC分子低表达,在体外不易引起T细胞增殖也不易被NK细胞杀伤,并且这些特性不受炎症微环境的影响,h ESCs分化细胞移植到体内后未见明显的免疫排斥反应,且移植后免疫细胞的浸润也较少。结论:通过小分子化合物诱导的方法可以成功将胚胎干细胞分化为具有一定增殖能力的角膜上皮样细胞,该细胞体内移植后能够有效治疗角膜缘干细胞缺乏,并且其免疫原性较小,不易引起免疫排斥反应。(本文来源于《青岛大学》期刊2016-04-01）
徐进,郑璟,曹玉华,刘韬,朱肖奇[8]（2015）在《胚胎干细胞治疗脊髓损伤的实验研究》一文中研究指出目的探讨未经诱导的胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)移植对SD大鼠脊髓损伤(Spinal cord injury,SCI)神经功能恢复的影响。方法取受孕昆明系小鼠的囊胚进行胚胎干细胞的提取、建系,以流式细胞仪测试阶段特异性胚胎干细胞表面抗原(stage-specific embryonic antigens 1,SSEA-1),进行干性鉴定并进行5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromodeoxyuridine,5-Brd U)染色示踪。将30只SD大鼠制备为T10脊髓损伤模型,将存活的26只大鼠随机分为对照组(A组,8只),只行脊髓损伤手术而不行特殊治疗;生理盐水治疗组(B组,9只),于损伤区域局部注射20μL生理盐水;细胞治疗组(C组,9只),于损伤区域局部注射20μL标记好的ESCs,总细胞数为2×106个。术后1、2、3、4、5、6周采用BBB后肢运动功能评分观察大鼠神经功能恢复情况,并在第6周取损伤脊髓行病理组织HE染色和免疫组织化学染色观察。结果 ESCs经体外培养,呈典型的"鸟巢"状生长,碱性磷酸酶(alkaline-phosphatase,AKP)染色阳性,SSEA-1表达阳性,并成功标记上5-Brd U。大鼠实验,BBB运动功能评分显示脊髓损伤开始0~1周内,叁组大鼠运动功能恢复情况差别无统计学意义(P>0.05)。第2~6周,C组与A、B组比较差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色观察:叁组皆有损伤区域内空洞形成及局部细胞坏死,但C组明显较A、B两组小。免疫组化染色观察C组在损伤区域表达双染的神经巢蛋白(Neural nest protein,Nestin)、神经元特异性蛋白(Neuron-specific nuclear protein,Neu N)及神经胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillaryacidic protein,GFAP)。结论将未分化的ESCs局部移植入SCI大鼠体内后,能够分化成神经元及神经胶质细胞,对肢体功能的改善有一定的促进作用。(本文来源于《中国热带医学》期刊2015年09期）
瞿虎,刘贵华,袁浩锋,汪中扬,杨轶[9]（2015）在《大鼠隐睾模型的建立及胚胎干细胞原位注射的治疗研究》一文中研究指出目的:探讨大鼠隐睾模型的建立和胚胎干细胞睾丸内原位注射对热损伤所致的睾丸生精功能损害的疗效。方法:Wistar大鼠20只,取右睾丸手术建立隐睾模型,于7、10、14、21及28 d后行隐睾下降固定术,下降后选取不同的时间点行附睾穿刺液及睾丸病理检查;另Wistar大鼠20只,随机分为A组(n=10)和B组(n=10)。A组左睾丸为干细胞组(ES),右睾丸为自身空白对照(NPBS);B组左睾丸为组间对照组(JPBS)。各组在隐睾建模2周后行隐睾下降固定术并同时行睾丸内原位注射处理,2周后比较生精小管的直径(d)、精小管百分率(r)和生精小管的Johnsen评分(z)。结果:隐睾建模后10、14、21、30 d及隐睾复降后2月的附睾穿刺液中均未能发现精子,睾丸复降的中后期,部分生精小管的生精细胞层数仍然存在不同程度的恢复,含有生精细胞的d继续增加(P<0.05);干细胞注射后各组附睾穿刺液内均未见精子,ES组与NPBS组生精小管z差异有统计学意义(P<0.05)。结论:短期的睾丸热损伤是可逆的,超过10 d则严重影响到睾丸的生精功能,原位注射胚胎干细胞在本实验中尚不能证实对睾丸损伤有修复作用,但此研究方向仍具有极高的可行性。(本文来源于《广州医科大学学报》期刊2015年03期）
黄阿妹[10]（2015）在《负载胚胎干细胞抗原的DC疫苗对肝癌小鼠皮下移植瘤的抗肿瘤免疫治疗作用研究》一文中研究指出研究背景和目的:以树突状细胞(dendritic cell,DC)为基础的抗肿瘤免疫疗法已成为研究热点。肿瘤组织表达多种胚胎期抗原,与胚胎干细胞之间存在共同的抗原或细胞表面分子。本研究通过制备胚胎干细胞抗原且用其致敏树突状细胞制备DC疫苗,旨在观察负载胚胎干细胞抗原的DC疫苗在小鼠肝癌皮下移植瘤模型中的抗肿瘤免疫治疗作用。研究方法:1.通过联合rm GM-CSF、rm IL-4,培养C57BL/6J小鼠骨髓来源的DC,胚胎干细胞抗原或肝癌细胞抗原诱导其成熟,制成DC疫苗;流式细胞术分析胚胎干细胞抗原致敏的DC疫苗、肝癌细胞抗原致敏的DC疫苗表面分子CD11c、CD80、CD86表达情况;2.小鼠肝癌细胞株(Hepa1-6)4×10^6/只接种于小鼠腹部皮下,建立小鼠肝癌皮下移植瘤模型。根据不同抗原致敏的DC疫苗,设ESC-DC疫苗组、Hepa1-6-DC疫苗组、DC疫苗组和对照组(PBS组),每组10只小鼠,每周1次接种疫苗(2×10^6/只)或PBS(0.1ml/只),共3个治疗周期。每5天观察并记录各组小鼠皮下肿瘤的横径、长径,在任意肿瘤直径≥15mm,或开始出现肿瘤溃疡时处死所有小鼠,称量并比较各组肿瘤的质量。在治疗结束后5天ELISA法检测小鼠外周血清Ig G含量;LDH法检测小鼠脾脏淋巴细胞对Hepa1-6的细胞毒性杀伤能力;流式细胞术检测小鼠脾脏淋巴细胞中CD4+CD25+Fox P3+T细胞含量。结果:1.成功培养小鼠骨髓来源的DC,经流式表型检测,DC表面分子CD11c约占78%,ESC-DC表面分子CD80、CD86表达率(53.81%±4.48%、52.63%±5.83%)高于Hepa1-6-DC(46.57%±5.93%、42.88%±3.90%)、DC(35.04%±9.91%、34.67%±5.10%),p<0.05;2.动态监测各治疗组和对照组小鼠皮下肿瘤的生长情况,结果显示:肿瘤平均生长速度ESC-DC组<Hepa1-6-DC组<DC组<PBS组;选择完成治疗周期后21天处死小鼠,称重并比较各组肿瘤的平均质量,ESC-DC组肿瘤重量低于Hepa1-6-DC组、DC组、PBS组,p<0.05,分别为0.1573克、0.2387克、0.2620克、0.3633克;3.于治疗结束后5天,对荷瘤小鼠进行免疫学指标检测,结果显示:ESC-DC组外周血Ig G分泌水平高于Hepa1-6-DC组、DC组、PBS组,差异有统计学意义,分别为77.99±6.43ng/ml、49.47±4.36ng/ml、40.61±5.17ng/ml、17.21±2.55ng/ml;ESC-DC组荷瘤小鼠脾脏淋巴细胞对Hepa1-6的细胞毒杀能力高于Hepa1-6-DC组、DC组、PBS组,在不同的效靶比例中差异均有统计学意义;流式检测脾脏CD4+CD25+Fox P3+T细胞占CD4+T细胞的比例,结果显示:ESC-DC组(5.94%±0.98%)明显低于Hepa1-6-DC组(8.39%±0.60%)、DC组(10.65%±1.06%)、PBS组(13.27%±0.96%),p<0.05。结论:1.胚胎干细胞抗原在体外能有效刺激小鼠骨髓来源的DC成熟,效果优于肝癌细胞(Hepa1-6)抗原;2.ESC-DC疫苗、Hepa1-6-DC疫苗能够诱导荷瘤小鼠产生抗肿瘤免疫反应,减缓肝癌小鼠皮下移植瘤的生长速度;3.ESC-DC疫苗对肝癌小鼠的抗肿瘤免疫保护作用优于Hepa1-6-DC疫苗及未经抗原致敏的DC疫苗,为ES C-DC疫苗的临床应用提供理论和实验基础。(本文来源于《福建医科大学》期刊2015-05-01）
治疗性胚胎干细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
胚胎干细胞具有不断增殖且分化成各类细胞的能力,临床中利用胚胎干细胞(embryonicstemcell,ESCs)具有多向分化潜能的特性而用于多种疾病的治疗,利用胚胎干细胞体外培养与定向分化还可以得到大量同种细胞以应用于细胞移植治疗等实用研究。在本综述主要对胚胎干细胞在细胞治疗中的应用前景及其存在的问题进行探讨。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
治疗性胚胎干细胞论文参考文献
[1].龙华,邓国欢.世界首例!人胚胎干细胞治疗半月板损伤[N].湖北日报.2019
[2].顾军.胚胎干细胞在细胞治疗中的发展前景[J].现代医学与健康研究电子杂志.2018
[3].陈涵.胚胎干细胞衍生细胞治疗心肌梗死获重大进展[J].心电与循环.2018
[4].邢宝恒.人胚胎干细胞源性胰内胚层细胞移植治疗妊娠期糖尿病小鼠的研究[D].河北医科大学.2017
[5].耿晓东.生物微胶接种胚胎干细胞治疗慢性肾衰竭[D].中国人民解放军医学院.2017
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[10].黄阿妹.负载胚胎干细胞抗原的DC疫苗对肝癌小鼠皮下移植瘤的抗肿瘤免疫治疗作用研究[D].福建医科大学.2015
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